Hieff TransTM脂质体核酸转染试剂(亲手整理)
转化,转染,转导,感染,中英双字幕解释
转染和转化转染的定义是“将具生物功能的核酸转移或运送到细胞内并使核酸在细胞内维持其生物功能”。
其中，核酸包括DNA（质粒和线性双链DNA），反义寡核苷酸及RNAi（RNA interference）。
基因转染技术已广泛应用于基因组功能研究（基因表达调控，基因功能，信号转导和药物筛选研究）和基因治疗研究。
基因转染需要一定的转染试剂将带有目的基因的载体运送到细胞内。
早期的磷酸钙转染法转染效率很低，且对很多细胞株无效，因此不能满足很多科研工作的需要。
目前，最常用的转染试剂是阳离子脂质体和阳离子聚合物，它们在克服细胞屏障方面跟病毒有很相象的特征，容易透过细胞膜。
其中，阳离子脂质体在体外基因转染中有很高的效率，然而在体内，它迅速被血清清除，在肺组织内累积，诱发强烈的抗炎反应，这将导致高水平的毒性，因此，在很大程度上限制了其应用。
由于阳离子脂质体的局限性，阳离子聚合物转染试剂日益受到重视。
转化特指将质粒DNA或以其为载体构建的重组DNA导入细菌体内，使之获得新的遗传特性的一种方法。
它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术之一。
受体细胞经过一些特殊方法（如：电击法，CaCl2等化学试剂法）处理后，使细胞膜的通透性发生变化，成为能容许外源DNA分子通过的感受态细胞。
进入细胞的DNA分子通过复制、表达实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。
由外来DNA引起生物体遗传性状改变的过程称为转化(transformation)。
噬菌体常常可感染细菌并将其DNA注入细菌体内，也可引起细菌遗传性状的改变。
通过感染方式将外来DNA 引入宿主细胞，并导致宿主细胞遗传性状改变的过程称为转染(transfection)。
转染是转化的一种特殊形式。
基因工程:有目的的通过分子克隆技术，人为的操作改造基因，改变生物遗传性状的系列过程。
载体:能在连接酶的作用下和外源DNA片段连接并运送DNA分子进入受体细胞的DNA分子。
脂质体转染原理及操作步骤
脂质体转染原理及操作步骤脂质体转染是一种常用的基因传递技术，用于将外源的核酸（例如DNA、RNA）转入细胞内。
脂质体是由人工合成的类似于细胞膜的双层脂质膜组成，具有较好的生物相容性和可降解性，因此可以用来包裹并传递外源核酸进入目标细胞内。
本文将详细介绍脂质体转染的原理和操作步骤。
脂质体由两个疏水性脂质尾部和一个亲水性脂质头部组成，形成类似生物细胞膜的双层结构。
这种双层结构使得脂质体可以包裹水溶性的外源核酸，并形成脂质体-核酸复合物。
当复合物与细胞膜接触时，由于脂质体的类似性，这些复合物可以与细胞膜融合，并释放外源核酸进入细胞。
然而，简单地将脂质体-核酸复合物添加到细胞培养基中并不能有效地将外源核酸转入细胞内。
为了提高转染效率，常常需要使用电穿孔或钙磷共沉淀等方法，以增加细胞膜的通透性。
操作步骤：1.准备工作：-完整的脂质体转染试剂盒。
-DNA或RNA溶液。
-靶细胞。
-无菌操作条件下的实验室。
2.重组脂质体的合成：-按照试剂盒说明将脂质体复合物合成。
-使用无菌的工具和试剂。
3.核酸引物的制备：-将外源DNA或RNA与引物混合，使其形成核酸复合物。
4.细胞处理：-将培养皿中的细胞进行冲洗，去除培养基。
-将适量的细胞培养基添加到培养皿中，以保证细胞的正常生长。
5.导入核酸：-将所制备的核酸复合物滴加到细胞培养基中。
-将细胞培养皿置于无菌环境中，以便细胞吸收和利用核酸。
6.细胞培养：-按照细胞类型和所使用的培养基，将细胞置于恰当的培养条件下，并进行培养。
-根据需求添加所需要的生长因子和抗生素。
7.观察和分析：-在一定的培养时间后，观察细胞是否发生了显著的变化。
- 使用适当的实验方法（如PCR、Western blot等）检测外源基因的表达。
-观察并记录实验结果。
以上是脂质体转染的原理和操作步骤。
脂质体转染是目前常用的基因传递技术之一，可以用于研究基因功能、疾病治疗等领域。
随着技术的不断发展，转染效率和特异性将逐渐提高，为研究和治疗带来更多的机会和挑战。
Hieff TransTM脂质体核酸转染试剂说明书
Hieff Trans TM脂质体核酸转染试剂说明书产品描述Hieff Trans TM脂质体核酸转染试剂是一种多用途的脂质体转染试剂，适用于DNA、RNA 和寡核苷酸的转染，对大多数真核细胞具有很高的转染效率。
其独特的配方使其可直接加入培养基中，血清的存在不会影响转染效率，这样可以减少去除血清对细胞的损伤。
转染后不需要除去核酸-Hieff Trans TM复合物或更换新鲜培养基，也可在4～6小时后除去。
Hieff Trans TM以无菌的液体形式提供。
通常情况下对于 24 孔板转染，每次用1.5μl左右，则1ml Hieff Trans TM约可做660次转染；对于6孔板，每次用6μl左右，则1ml Hieff Trans TM约可做160 次转染；运输与保存方法冰袋（wet ice）运输。
产品4ºC保存，一年有效。
不可冷冻！注意事项1）Hieff Trans TM脂质体核酸转染试剂要求细胞铺板密度较高，以90%-95%为佳，这有助于减少阳离子脂质体细胞毒性造成的影响；如果你研究的基因要求比较长的表达时间，比如细胞周期相关基因，或者细胞表面蛋白，最好选择细胞铺板密度要求较低的转染试剂，不适合用脂质体核酸转染试剂。
2）Hieff Trans TM脂质体核酸转染试剂可用于有血清培养基的转染，并且转染前后不需要换培养基。
但是，制备转染复合物时要求用无血清培养基稀释DNA和转染试剂，因为血清会影响复合物的形成。
另外，要检测所用的无血清培养基与脂质体核酸转染试剂的相容性，已知CD293, SFMII, VP-SFM 就不相容。
3）转染的时候培养基中不能添加抗生素。
4）使用高纯度的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率，质粒中的内毒素是转染的大敌。
5）阳离子脂质体应该在4度保存，要注意避免多次反复长时间开盖，因为可能会导致脂质体氧化而影响转染效率。
6）初次使用应优化DNA浓度和阳离子脂质体试剂量以得到最大的转染效率。
转染试剂的转染过程及特点
转染是将核酸导入真核细胞中的过程。
相关实验方案和技术包括转染试剂（脂质体转染、阳离子聚合物转染等）、以及化学法（DEAE-葡聚糖法、磷酸钙法等）或物理方法（如电穿孔、基因枪粒子轰击法、显微注射等）。
其中，转染试剂已然成为实验室细胞转染主流方法。
转染试剂是新一代的阳离子聚合物基因转染试剂，已被广泛应用于体外细胞转染和动物体内转染、众多原代细胞和转化细胞株转染、瞬时转染和稳定转染、贴壁细胞和悬浮细胞转染等。
具有高效转染、细胞毒性很低，不被血清清除、操作简便易行，高重复性等特点。
特点
● 转染效率高
对原代培养细胞HUV-EC有较高的转染效率，而大多数阳离子脂质体对此细胞的转染效率很低。
● 细胞毒性低
在正确的转染方法及条件下，常用的细胞存活率高于90%。
● 试剂不被血清清除，转染操作简单
新型转染试剂不被血清清除，转染时可直接将转染试剂/DNA复合物直接加到细胞培养基中，无需更换培养基质和清洗细胞，整个操作过程可在半小时内完成。
图1.与传统转染实验程序比较
● 适应于体外细胞转染和动物体内转染、众多原代细胞和转化细胞株转染、瞬时转染和稳定转染、贴壁细胞和悬浮细胞转染等。
●新型转染试剂成功转染的部分细胞株：。
英格恩entranster转染试剂说明书
英格恩entranster转染试剂说明书一、产品概述英格恩 Entanster 转染试剂是一种用于转染外源 DNA/RNA 到细胞内的试剂。
它是经过优化的化学试剂组合，可以将外源 DNA/RNA 高效地传递到各种细胞中，并促进其定向表达。
本试剂适用于体外转染实验和基因工程研究，具有高转染效率、低细胞毒性、简单易用等优点。
二、试剂成分英格恩 Entanster 转染试剂主要成分包括转染缓冲液和转染增强剂。
转染缓冲液中包含有机溶剂、非离子表面活性剂等，用于稳定 DNA/RNA与转染剂的结合。
转染增强剂含有具有阴离子表面活性剂、脂质、蛋白质等物质，可以提高细胞膜通透性和转染效率。
三、使用说明1.储存和稀释：试剂应储存于-20℃的冰箱中，保持干燥和避光。
使用前需要将试剂溶解在适当体积的转染缓冲液中，最佳稀释比例为1：9、溶液需充分混匀，离心并去除任何沉淀物。
2.样品准备：在转染前，将目标DNA/RNA溶解在适当的缓冲液中，浓度通常在0.1-1μg/μL最佳。
确保样品充分溶解并无明显沉淀。
3.转染操作：对于已经培养至适当倍数的细胞，将细胞用预先暖和的转染缓冲液洗涤一次，并去除缓冲液。
将转染缓冲液和溶解好的目标DNA/RNA混合，稍微搅拌均匀。
与此同时，将适量的转染增强剂加入到混合物中，充分混合。
然后将混合物直接滴加到细胞上，并轻轻摇晃培养板以确保混合物均匀分布。
4.培养和检测：将含有转染混合物的培养板放回恒温培养箱中，保持恒定的温度和CO2浓度。
培养时间和温度根据需要进行调整，通常在24-48小时后可以进行下一步实验或观察。
四、注意事项1.试剂需保存在干燥、阴凉、避光的环境中，避免结冰或暴露在高温环境中。
2.操作中需佩戴手套并遵循生物安全实验操作规范。
3.使用前需充分摇匀试剂瓶，确保所有试剂成分充分混合均匀。
4.转染缓冲液中的有机溶剂可能对一些细胞有毒性，因此在选择试剂时应参考相关文献或尝试不同的浓度和时间，以确定最佳条件。
转染试剂的作用原理
转染试剂的作用原理一、转染试剂的基本概念转染试剂是一种用于将外源基因或其他生物分子转移到目标细胞中的化学物质。
转染试剂可以通过物理或化学方法改变细胞的通透性，使外源物质能够进入细胞内，并达到转染的目的。
转染试剂在基因治疗、基因表达研究和细胞工程等领域广泛应用。
二、转染试剂的分类转染试剂按照机理和性质的不同可分为多种类型，常见的转染试剂包括：1.脂质体（Liposome）：脂质体是由磷脂双分子层构成的微小囊泡，可与细胞膜融合，将目标物质转移到细胞中。
2.内源蛋白介导的转染：通过利用特定的蛋白质，如病毒衣壳蛋白或细胞内运输蛋白，将目标物质转移到目标细胞中。
3.阳离子聚合物：阳离子聚合物具有正电荷，能够与负电荷的DNA或RNA结合形成复合物，进而转染入细胞。
4.高分子基质：高分子材料如凝胶、纤维或微球等可用于载体，将目标物质与细胞接触，实现转染。
5.电穿孔：利用电场或离子流导致细胞膜破裂，使目标物质通过细胞膜进入细胞质。
三、脂质体转染试剂的作用原理脂质体是一种常用的转染试剂，其作用原理主要包括以下几个步骤：1.与DNA结合：脂质体通过与目标DNA相互作用，形成脂质体-DNA复合物。
脂质体由于其亲油性能与DNA中的疏水部分相互作用，同时脂质体表面带有正电荷，可以与DNA的负电荷相吸引。
2.细胞摄取：脂质体-DNA复合物与细胞膜结合后，脂质体会在细胞膜上形成微囊泡。
随后，微囊泡与细胞膜融合，释放出脂质体-DNA复合物进入细胞质。
3.脱脂质体：脂质体在细胞质中逐渐失去其亲油性，释放出DNA。
由于脂质体-DNA复合物在细胞膜上的微囊泡中形成的电位差，使得DNA被吸引到细胞核附近。
4.核入：DNA由细胞质进入细胞核，最终与染色体结合或进入细胞核内的胞浆，实现转基因。
四、脂质体转染试剂的优缺点脂质体转染试剂具有一些优点和缺点，需要根据实际应用情况选择使用：优点：1.安全性：脂质体转染试剂大多采用合成非病毒载体，通常比病毒载体更安全，不会引起病毒感染及遗传毒性。
TransLipidHLTran...
TransLipid®HL Transfection Reagent目录号：FT111保存：2-8℃保存一年(避免冷冻)。
产品说明TransLipid® HL Transfection Reagent是一种新型的阳离子脂质体转染试剂，适用于将核酸(DNA和RNA)转染入真核细胞，在保证高转染效率的同时具有极低的细胞毒性。
本产品适用细胞类型广，转染时血清和抗生素的存在不影响转染效率，并且转染后无需更换培养基。
适用范围：贴壁细胞和悬浮细胞(哺乳动物细胞系)的转染。
特点·转染效率高·细胞毒性极低(细胞存活率>90%)·操作简便，转染后无需更换培养基质粒DNA的转染:以24孔板为例，步骤如下细胞接种：每孔接种0.5-2×105个细胞，使转染时细胞达到70-90%汇合度细胞培养12-24小时质粒稀释：将0.8 μg质粒稀释于50 μl Opti-MEM培养基TransLipid® HL稀释：将2 μl TransLipid® HL稀释于50 μlOpti-MEM培养基室温静置5分钟将质粒和TransLipid® HL轻柔混合室温静置20分钟将质粒-TransLipid® HL混合物加入细胞，于37℃ CO2培养箱培养转染4-6小时后更换培养基(可选)，继续培养18-72小时本产品仅供研究，不用于临床诊断。
siRNA 的转染以24孔板为例，转染时细胞汇合度为30-50%，转染所需的siRNA 和TransLipid ® HL 的量分别为20 pmol 和1 μl ，步骤同DNA 转染。
质粒DNA 和siRNA 转染的优化为达到高转染效率和低细胞毒性的最佳结合，可以对DNA 或siRNA 和 TransLipid ® HL 的比例及转染初始细胞密度进行优化，DNA 转染可以在1: 2-1: 5的范围内优化比例，siRNA 转染可以试用10-50 pmol siRNA 和0.5-1.5 μl TransLipid ® HL 的用量。
Entranster-RNA转染试剂，高效转染
Entranster-RNA转染试剂，⾼效转染EntransterTM-R4000（⽤于将RNA转染⼊动物细胞）使⽤⼿册⼀产品介绍本品推荐⽤于将siRNA、microRNA(miRNA)、mimic、inhibitor等⼩⽚断RNA转染⼊动物细胞（包括各种细胞系、原代细胞、悬浮细胞、昆⾍细胞等）。
本品在多种细胞系的验证中均表现了很好的RNA转染效率，并有很低的细胞毒性，⽽较低的细胞毒性对RNAi实验尤其重要。
⼆重要提⽰1.由于本品细胞毒性很低，所以采⽤本品进⾏转染的细胞数量相对较少，这有助于提⾼转染效率。
2.采⽤本品进⾏转染，RNA⽤质量(ug)进⾏计量，对21nt双链的siRNA来说，1OD=3.0nmol=40ug。
3.siRNA等较短RNA请参照表1中siRNA⽤量，mRNA、shRNA等较长RNA请参照表1中mRNA⽤量。
4.如转染后需要⽤Trizol提取RNA，建议转染后6⼩时换液。
三实验过程（以24孔板siRNA转染为例）1.提前1天细胞种植贴壁细胞：提前⼀天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。
悬浮细胞：采⽤对数⽣长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进⾏转染实验。
如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那么就⽤2×105的细胞进⾏转染。
2.转染过程⑴取0.67ug(50pmol)的siRNA，加⼊⼀定量⽆⾎清稀释液，充分混匀，制成RNA稀释液，终体积为25µl。
注意：⽆⾎清稀释液建议采⽤OPTI-MEM、⽆⾎清DMEM或1640。
⑵取1ul的EntransterTM-R4000，然后加⼊24ul⽆⾎清稀释液体，充分混匀，制成EntransterTM-R4000稀释液，终体积为25µl。
室温静置5分钟。
⑶将EntransterTM-R4000稀释液和RNA稀释液充分混合（可⽤振荡器振荡或⽤加样器吹吸10次以上）混合，室温静置15分钟。
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Hieff TransTM 脂质体核酸转染试剂
产品描述
Hieff Trans TM 脂质体核酸转染试剂是一种多用途的脂质体转染试剂，适用于DNA 、RNA 和寡核苷酸的转染，对大多数真核细胞具有很高的转染效率。
其独特的配方使其可直接加入培养基中，血清的存在不会影响转染效率，这样可以减少去除血清对细胞的损伤。
转染后不需要除去核酸-Hieff Trans TM 复合物或更换新鲜培养基，也可在4～6小时后除去。
Hieff Trans TM 以无菌的液体形式提供。
通常情况下对于 24 孔板转染，每次用1.5μl 左右，则1ml Hieff Trans TM 约可做660次转染；对于6孔板，每次用6μl 左右，则1ml Hieff Trans TM 约可做160 次转染； 运输与保存方法
冰袋（wet ice ）运输。
产品4ºC 保存，一年有效。
不可冷冻！ 注意事项
1）Hieff Trans TM 脂质体核酸转染试剂要求细胞铺板密度较高，以90%-95%为佳，这有助于减少阳离子脂质体细胞毒性造成的影响；如果你研究的基因要求比较长的表达时间，比如细胞周期相关基因，或者细胞表面蛋白，最好选择细胞铺板密度要求较低的转染试剂，不适合用脂质体核酸转染试剂。
2）Hieff Trans TM 脂质体核酸转染试剂可用于有血清培养基的转染，并且转染前后不需要换培养基。
但是，制备转染复合物时要求用无血清培养基稀释DNA 和转染试剂，因为血清会影响复合物的形成。
另外，要检测所用的无血清培养基与脂质体核酸转染试剂的相容性，已知CD293, SFMII, VP-SFM 就不相容。
3）转染的时候培养基中不能添加抗生素。
4）使用高纯度的DNA 或RNA 有助于获得较高的转染效率，质粒中的内毒素是转染的大敌。
5）阳离子脂质体应该在4度保存，要注意避免多次反复长时间开盖，因为可能会导致脂质体氧化而影响转染效率。
6）初次使用应优化DNA 浓度和阳离子脂质体试剂量以得到最大的转染效率。
DNA 和转染试剂的比例，通常推荐是1:2-1:3，比如24孔板内接种0.5-2×105个细胞，使用0.5 µg DNA 和1-1.5 µl 转染试剂。
通过调整DNA/Hieff Trans TM 脂质体核酸转染试剂比例优化转染效率，保证细胞密度大于90%，DNA （μg ）: Hieff Trans TM （μl ）比值在1：0.5-1：5。
操作流程（以24孔板为例，其他培养板加样体积请参考表一）
【注】：转染试剂使用量受细胞类型及其他实验条件影响，建议初次使用时设置梯度进行优化最佳使用量。
贴壁细胞：转染前一天（20-24小时），胰酶消化细胞并计数，细胞铺板（不含抗生素），使其在转染时密度为90-95%（0.5-2 × 105 cells/well for a 24-well plate ）。
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整
理
悬浮细胞：转染当天，配制DNA 复合物之前，24孔板中细胞铺板，每500µl 生长培养基（不含抗生素）中加入4-8×105 cells 。
1. 按照以下体系配制DNA-Hieff Trans TM 脂质体核酸转染试剂复合物：
1）对于每孔细胞，使用50μl 无血清培养基（如OPTI-MEM Ⅰ培养基）稀释0.5μg DNA 。
混匀。
2）对于每孔细胞，使用50μl 无血清培养基（如OPTI-MEM Ⅰ培养基）稀释0.6-2.5 μl Hieff Trans TM 脂质体核酸转染试剂。
Hieff Trans TM 脂质体核酸转染试剂稀释后室温孵育5min （在30min 内同稀释的DNA 混合，保温时间过长会降低活性）。
【注意】：即使脂质体核酸转染试剂使用OPTI-MEM Ⅰ稀释，细胞也可以使用DMEM 培养。
如果DMEM 作为脂质体核酸转染试剂的稀释液，必须在5min 内同稀释的DNA 混合。
2. 混合稀释的DNA 和稀释的脂质体核酸转染试剂（总体积100µl ），轻轻混匀，并在室温（15-25℃）孵育
20min ，使得DNA-脂质体复合物形成。
此时溶液可能会混浊，但不会影响转染。
【注意】：DNA-脂质体复合物室温至少稳定保存5h 。
3. 直接将100µl DNA-Hieff Trans TM 复合物加入到细胞培养板每个孔中，摇动培养板，轻轻混匀。
【注意】：如果在无血清条件下转染，使用含血清的正常生长培养基进行细胞铺板。
在加入复合物前移去生长培养基，替换为500µl 无血清培养基。
4. 37℃，5% CO 2培养箱培养24-48h ，直至进行转基因表达分析，无需去掉复合物或更换培养基。
然而，可
能有必要在4-6h 后更换生长培养基，不会降低转染活性。
稳转细胞株：转染24h 后，按照1：10或更高比例在细胞中加入新鲜生长培养基，转染48h 后加入筛选培养基。
悬浮细胞株：在细胞中加入DNA-Hieff Trans TM 复合物后，如果需要可以4h 后加入PMA 和/或PHA 。
对于Jurkat 细胞，PHA 和PMA 的终浓度分别为1µg/ml 和50ng/ml ，可以提高CMV 启动子活性和基因表达。
对于K562细胞，只加入PMA 足以提高启动子活性。
转染体系的调整
对于不同的细胞培养板，Hieff Trans TM 脂质体核酸转染试剂、DNA 、细胞和培养基的使用量会有所不同，具体请参考下表（表一）。
对于96 孔板培养，不需要提前一天进行细胞铺板，可以直接在平板中制备复合物，然后将细胞悬浮液加入到复合物就可以了，这样进一步减少了转染时间。
这种改进步骤已经过293-H ，293-F ，COS-7L 和CHO 细胞的试验，同传统方法相比活性稍低。
快捷的步骤和蛋白表达细胞系的高效转染使得脂质体核酸转染试剂非常适用于96 孔板的高通量转染，比如cDNA 文库的筛选和蛋白瞬时表达。
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整
理
表一 在不同的培养容器中转染，脂质体核酸转染试剂，核酸，细胞和培养基的用量
Culture vessel Surf. area per well 1 Shared reagents DNA transfection
RNAi transfection
Vol. of plating medium Vol. of dilution medium 2 DNA
脂质体核酸转染试剂 RNA 脂质体核酸转染试剂 96-well 0.3 cm 2 100 μl 2×25 μl 0.1 μg 0.2-0.5 μl 5 pmol 0.25 μl 24-well 2 cm 2 500 μl 2×50 μl 0.5 μg 0.6-2.5 μl 20 pmol 1.0 μl 12-well 4 cm 2 1 ml 2×100 μl 1 μg 2-4.5 μl 40 pmol 2.0 μl 6-well 10 cm 2 2 ml 2×250 μl 2-4 μg 5-10 μl 100 pmol 5 μl 60-mm 20 cm 2 5 ml 2×0.5 ml 4-8 μg 10-20 μl 200 pmol 10 μl 10-cm
60 cm 2
15 ml
2×1.5 ml
12-24μg 30-60 μl
600 pmol 30 μl
1 不同厂商提供的细胞培养板表面积可能有所不同；
2 稀释DNA 或RNAi 所用的培养基体积。
【注】：该表使用量仅供参考，具体使用量还需根据细胞类型及其他实验条件进行优化。
使用时DNA （μg ）: Hieff Trans TM （μl ）比值保持在1:0.5-1:5。
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整
理。