5.消毒灭菌试验
无菌室消毒灭菌操作规程
无菌室消毒灭菌操作规程无菌室是医疗和实验环境中非常重要的空间，其内部必须保持无菌状态以确保实验的准确性和研究的可靠性。
为了维护无菌室的洁净环境，以下是一份无菌室的消毒灭菌操作规程。
一、概述无菌室是为了保证实验的可靠性和研究的准确性而建立的，其主要功能是提供无菌环境、防止交叉污染。
无菌室的消毒灭菌操作规程是对无菌室内环境进行灭菌和消毒的操作流程进行规范化，以达到无菌室工作区域的最佳无菌状态。
二、消毒灭菌操作规程1. 打开无菌室的门前，请先用肥皂和流动水洗手，重点清洁指甲，并用75%酒精消毒。
2. 确保无菌室内部及工作台面干燥，座椅、工作台等物品无明显污染。
3. 使用具有高效消毒性能的消毒剂进行表面消毒。
消毒剂可选用过氧乙酸或乙酸烯丙酯等高效消毒剂，按照说明书的要求使用。
4. 消毒操作时，应准备好必要的防护措施，包括穿戴无菌手套、口罩和帽子等个人防护装备。
5. 将所需器具和试剂放在经过消毒处理的无菌室桌面上。
6. 操作前应将试验所需的器械、试剂等进行高温湿热灭菌处理，或使用已经灭菌的无菌装置进行操作。
7. 在操作过程中，不能将无菌室内的工作区域长时间暴露在外界空气中，以防止污染。
8. 消毒和灭菌操作结束后，及时清理无菌室内的废弃物，并用适当的消毒剂对工作区域进行再次消毒。
9. 定期对无菌室内和周围环境进行清洁和消毒，保持无菌室的干净整洁。
10. 若无菌室内出现明显污染或破损，请及时更换或修理，以确保无菌室的正确使用。
三、注意事项1. 消毒操作应严格按照规程进行，不得擅自增减或改动。
2. 涉及到的消毒剂和灭菌器材应符合相关行业标准。
3. 操作人员应经过相关培训，了解相关操作要求和流程。
4. 消毒剂应储存在干燥、通风的地方，避免阳光直射。
5. 操作过程中，应注意个人防护，避免操作失误导致交叉感染。
6. 定期检查无菌室内的设备设施是否正常工作，如有问题及时进行维修或更换。
7. 检查无菌室的温湿度和过滤装置的工作情况，保持合适的无菌室环境。
微生物实验常用的灭菌、消毒方法及效果监测
微生物实验常用的灭菌、消毒方法及效果监测因为微生物广泛存在于环境中，从预防交错污染的角度动身，微生物试验必需遵循无菌操作的原则，采纳多种物理、化学或是生物的办法，确保全部的物品和工作环境符合用法要求。
常用以下术语表示杀灭微生物的程度。
消毒：杀灭或(和)清除致病微生物，使其数量削减到不再能引起人发病。
用于消毒的化学药品称为消毒剂。
灭菌：将全部微生物所有杀灭或(和)清除掉，包括细菌芽孢和非致病微生物。
灭菌比消毒更彻底。
无菌：不含活菌，是灭菌的结果。
防止细菌进入人体或其他物品的操作技术称为无菌操作。
(一)常用的灭菌、消毒办法常用的灭菌或消毒办法分为4类：热力灭菌法、化学消毒法、辐射法和过滤除菌法。
普通按照物品的种类和污染后的危害程度来挑选消毒、灭菌办法。
消毒首选物理办法，不能用物理办法消毒的方可选化学办法。
1.热力灭菌法高温对微生物具有显然的杀伤作用，这是因为热能可变性蛋白质、核酸及破坏细胞膜等。
热力灭菌法按照有无水蒸气的参加分为干热灭菌法和湿热灭菌法两种。
热力灭菌法的种类及用法范围详见表4-4。
表4-4 热力灭菌法的种类及用法范围 2.化学消毒法无数化学药物能够影响微生物的物理结构和生理活动，从而达到消毒的作用。
化学消毒剂普通都对人体组织有害，因此，只能外用或用于环境的消毒，常用化学消毒剂的种类、作用机理及用法范围见表4-5。
表4-5 化学消毒剂及用法范围 3.辐射法辐射法中紫外线杀菌最为常用。
紫外线的穿透能力很弱，简单被固形物汲取，不能透过一般玻璃，因此，它只适用于空气、水及物体表面的杀菌。
无菌室、超净工作台、生物平安柜内都装有紫外灯，用来举行空气消毒，消毒时光普通为30min。
应用紫外线杀菌时，必需防止紫外线对人体的挺直照耀，以免损害眼睛和灼伤皮肤。
4.过滤除菌法指将含菌的液体或气体通过一个称作细菌滤器的装置，使细菌受到机械的阻力而留在滤器或滤板上，从而达到除菌的目的。
此法常用于不宜加热灭菌的液体物质，如培养基添加剂、抗生素、血清等。
灭菌测定方法和步骤
1. 准备一定数量的微生物样本，确保它们对辐射敏感且易于计数。2. 将样本暴露于预定剂量的辐射下。3. 辐射后，将样本在适宜条件下培养。4. 计算并比较辐射前后的微生物存活率，以评估灭菌效果。5. 根据需要，调整辐射剂量并重复测试以优化灭菌条件。
灭菌测定方法和步骤
灭菌方法
测定方法
步骤
热灭菌（如蒸汽剂（如耐热的细菌孢子）。2. 将生物指示剂放置在待灭菌物品中或附近。3. 进行灭菌处理（如蒸汽灭菌）。4. 灭菌后，将生物指示剂取出，在适宜条件下培养。5. 观察并记录培养结果，评估灭菌效果。
化学灭菌（如使用消毒剂）
中和试验法
1. 准备测试样本和对照样本。2. 将消毒剂应用于测试样本，同时确保对照样本不受影响。3. 使用适当的中和剂来停止消毒剂的活性，同时不破坏潜在的微生物。4. 将处理后的样本在适宜条件下培养。5. 观察并记录培养结果，比较测试样本和对照样本的微生物生长情况，评估灭菌效果。
辐射灭菌（如紫外线、γ射线）
实验16-消毒灭菌
实验16 消毒灭菌、微生物生长的控制实验16 消毒灭菌、微生物生长的控制一、抗生素对微生物生长的控制（一）目的要求掌握滤纸片的抑菌试验方法。
理解抗生素的抑菌谱。
（二）基本原理抗生素是微生物产生的一类具很高活性的次生代谢产物，敏感微生物以低浓度的抗生素处理后，其生长、繁殖就会受到抑制或死亡。
微生物对不同抗生素的敏感性差异极大，对有的抗生素极敏感，而对别的抗生素没有任何反应。
一种抗生素能够作用的微生物种类的范围也是有限的，抗生素能作用的微生物种类称为该抗生素的抗菌谱。
对多种微生物有作用的抗生素称为广谱抗生素，对种类数量少的抗生素称为窄谱抗生素。
抗生素接触或进入微生物细胞内能使微生物死亡的最低剂量，称为致死剂量。
敏感微生物若在琼脂培养基平板培养过程中接触或进入微生物细胞内的抗生素达到或超过致死剂量的区域内，因微生物不能生长平板呈透明状态，否则因微生物生长平板表面不透明，并在表面形成菌苔。
在敏感微生物细胞或孢子制成的平板上，放置滤纸园片、再在纸片上滴加抗生素溶液后，抗生系将呈园形向外扩散，而且抗生素在培养基内形成浓度梯度，纸片处抗生素的浓度，纸片以外抗生素的浓度逐渐减小。
因而，在恒温培养中的过程中，将在纸片附近出现透明的抗菌圈。
抑菌圈的大小与抗生素的浓度、滴加的体积、抗生系的扩散性、微生物的敏感度、微生物细胞的浓度等有关。
（三）器材1、培养基肉汤蛋白胨平板。
2、器材培养箱、移液品、打孔器、滤纸、镊子、无菌试管、无菌吸管、无菌水、洗尔球等。
3、菌种大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌4、抗生素青霉素（四）操作步骤l、滤纸片准备用打孔器打取滤纸片.放入培养皿内灭菌后备用。
2、抗生素溶液配制称取注射用青霉素粉，以无菌水配成溶液。
3、带菌平板制作将牛肉膏--蛋白胨—琼脂培养基沸水浴溶化后，于45℃恒温水浴保温。
以无菌水将斜面菌种细胞洗下制成悬浮液，以血球计数板测孢子浓度，再加入无菌水将悬浮液浓度调为108-9个细菌/ml。
消毒灭菌实验报告
消毒灭菌实验报告实验目的：通过进行消毒灭菌实验，以验证不同消毒方法对细菌的杀灭效果。
实验原理：细菌在适宜的环境下，可以进行繁殖和生长，但在一定条件下，可以被有效地杀灭。
常见的消毒方法包括物理方法（如高温、辐射）和化学方法（如消毒液、酒精等）。
本实验主要通过浸泡法和擦拭法两种方法进行消毒，并通过培养基接种实验观察不同消毒方法的杀菌效果。
实验材料和仪器：1. 细菌溶液：包含细菌培养物的液体。
2. 培养基：含有适宜条件供细菌生长的培养基。
3. 消毒液：本实验选择常见的消毒液进行测试。
4. 培养皿：用于接种细菌和培养细菌的平底无菌培养皿。
5. 具备质量衡量的工具6. 不同消毒方法所需的器械：例如棉签、细菌滴管等。
实验步骤：1. 将培养基均匀地倒在培养皿中，使其均匀铺满整个培养皿底部，然后静置凝固。
2. 使用棉球蘸取制备好的不同消毒液，在不同的培养皿上分别进行擦拭消毒。
可选择同一种消毒液进行不同时间段的擦拭试验。
3. 使用细菌滴管将细菌溶液滴在培养皿中，同时设置对照组（未进行消毒的培养皿）。
4. 用标签标记好各个培养皿的信息，并放置在恒温箱中进行培养。
培养箱温度设置在适宜菌株生长的条件下。
5. 观察培养皿上是否出现细菌生长，记录所需时间。
6. 分别计算不同消毒方法的杀菌率或杀菌时间，并绘制图表进行比较。
实验结果和讨论：根据实验结果，我们可以比较不同消毒方法对细菌的杀菌效果。
通常，消毒液能够有效杀灭细菌，且杀菌时间较短。
而擦拭方法相对于浸泡法，能够更好地达到细菌灭菌效果。
在实验过程中，要注意避免细菌的外部污染，并保持实验环境的清洁与无菌操作。
结论：消毒液的浸泡方法和擦拭方法都能够有效地杀灭细菌。
其中擦拭方法的效果更佳，能够更好地达到细菌的灭菌效果。
在日常生活中，我们应根据实际情况选择适宜的消毒方法，以达到最好的消毒效果。
5种化学灭菌的方法
5种化学灭菌的方法化学灭菌是一种常用的灭菌方法，通过使用化学物质杀灭或抑制微生物的生长繁殖，以达到灭菌的目的。
下面将介绍5种常见的化学灭菌方法。
1. 高温蒸汽灭菌法高温蒸汽灭菌法是一种常用的化学灭菌方法。
在高温高压条件下，水蒸气能够快速渗透到微生物的细胞内部，破坏细胞膜结构和酶系统，从而达到灭菌的效果。
蒸汽灭菌广泛应用于医疗器械、药品生产等领域。
2. 氧化剂灭菌法氧化剂灭菌法利用强氧化剂（如过氧化氢、臭氧等）对微生物进行氧化作用，破坏其细胞结构和代谢功能，从而达到灭菌的目的。
这种方法操作简单，广泛应用于水处理、食品加工等领域。
3. 消毒剂灭菌法消毒剂灭菌法是利用化学消毒剂对微生物进行灭菌。
常用的消毒剂包括酒精、氯化物、酚类化合物等。
这些消毒剂能够破坏微生物的细胞膜、蛋白质和核酸等结构，从而杀死微生物。
消毒剂灭菌法广泛应用于医疗卫生、食品加工等领域。
4. 辐射灭菌法辐射灭菌法利用辐射能对微生物进行灭菌。
常用的辐射源包括紫外线、γ射线和电子束。
辐射能能够破坏微生物的遗传物质，从而杀死微生物。
辐射灭菌法被广泛应用于医疗器械、食品保鲜等领域。
5. 膜过滤灭菌法膜过滤灭菌法是利用微孔膜对微生物进行灭菌。
微孔膜可以过滤掉微生物，从而达到灭菌的效果。
这种方法操作简单、快速，广泛应用于制药、饮料等领域。
总结起来，化学灭菌是一种常用的灭菌方法，能够有效地杀灭或抑制微生物的生长繁殖。
高温蒸汽灭菌、氧化剂灭菌、消毒剂灭菌、辐射灭菌和膜过滤灭菌是常见的化学灭菌方法。
不同的方法适用于不同的场合，选择合适的化学灭菌方法可以确保杀灭微生物，保障人们的健康和安全。
细菌的生理、消毒、灭菌实验
1、消毒灭菌（录像）
a.掌握下述基本概念：消毒、灭菌 、抑菌 、防腐 、无菌；
b.掌握以下几种消毒方法所 需的时间及温度；
煮沸、间隙灭菌、干烤、 巴氏消毒法、 高压蒸气灭菌
c.为什么湿热灭菌效果比干热灭菌效果好?
d.掌握紫外线灭菌原理、特点及用途？
e.选择下列物品最佳消毒灭菌方法
牛奶、手术器械、体温表、血 清、手术室空气、玻璃器皿、 普通培养基 。
H2S Fe2+ Pb2+
黑色沉淀 变形杆菌 十 乙型副伤寒沙门 氏菌 十 大肠杆菌 一
实验报告： 1.细菌生长现象观察
液体培养基：三种生长现象绘图。 固体培养基：三种菌落特征列表描述。 2.细菌生化反应 三种生化反应绘图
THANKS
固体培养基：菌落（单个细菌生长繁殖后形成的 肉眼可见的细胞集团）
菌落 特征
大小：大、中、小 性状：形态，表面，边缘，干湿，色素。 溶血环：α溶血环、β溶血环
菌落特征 金黄色葡萄球菌 枯草芽胞杆菌 乙型溶血性链球菌
大小
性状…… 溶血环
4.细菌的生化ห้องสมุดไป่ตู้应
1) 糖发酵试验: 利用细菌是否分解单糖产酸和/或产气
2.细菌的培养基类型和人工培养方法
a. 细菌培养基的类型
培养基的类型
用途
液体培养基 半固体培养基
增菌 动力实验、保存菌种
固体培养基（琼脂平板、斜面培养基）
细菌的分离与纯培养
b.人工培养方法介绍
3.细菌生长现象观察
液体培养基（不摇动） ：生长方式
混浊生长 表面生长 沉淀生长 （菌膜生长）
半固体培养基： 动力实验
来区分和鉴别细菌的实验
倒立小试管
五种消毒剂杀菌效果实验
Poultry Science李燕，赵玮，石海春，张孝兰(山东益生畜牧兽医科学研究院，山东 烟台 264000)摘 要：本实验选择5种消毒剂分别对5种细菌杀菌效果进行评估，结果表明，卫可稀释至 1600倍、聚醇瞇碘稀释至200倍、苯扎渙鞍稀释至5000倍、过氧乙酸稀释至3000倍、戊二醛稀释至100倍，作用10 min,可完全杀灭肠炎沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、变形杆菌和绿脓杆菌。
关键词：消毒剂；细菌；杀菌效果中图分类号:S859.7991 文献标识码:B 养鸡场利用化学消毒剂对鸡舍及其周围环境 进行消毒是做好生物安全措施的关键环节叫化学 消毒剂根据其作用机制和化学结构，可以分为碱类、氯类、碘类、漠类、醛类、醇类、过氧化物类、酚 类、季钱盐类、双脈类等，其作用机理主要是改变 微生物结构，干扰细胞代谢，导致微生物死亡-31。
为反映不同种类消毒剂对不同致病菌的杀灭效果，本实验采用细菌悬液定量法，选取生产中常 用的5种消毒剂作为研究对象，分别就其对沙门 氏菌、大肠杆菌、葡萄球菌、变形杆菌、绿脓杆菌等5种常见致病菌的杀菌效果和有效灭菌浓度进行 研究，为生产场区选择有效消毒液提供参考。
1材料1.1菌株肠炎沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、变形杆菌和绿脓杆菌，均为从鸡场环境和 孵化场毛蛋中分离到的菌株，用鉴别培养基纯化，再用营养肉汤培养后冻存备用。
收稿 EI 期：2020-07-29文章编号.1673-1085(2020)9-0051-031.2消毒剂卫可、聚醇醛碘、苯扎漠钱、过氧乙 酸和戊二醛。
1.3其它试剂和实验材料营养肉汤、生理盐水、18 mmxl80 mm 带塞试管、棉签、100 |1L 吸头、1 mL吸头,10-100 »L 单道移液器,100-1000咽单道 移液器、5 mL 单道移液器、超净工作台、37 T 恒温培养箱、麦氏比浊管、分光光度计、高压灭菌锅等。
2方法2.1制备菌液将纯化的细菌用灭菌棉签涂布到琼脂板上，24 h 后用灭菌生理盐水把菌苔洗下 来，用麦氏比浊管法和分光光度计法调整细菌浓度为 2xl08 CFU/mL 02.2 消毒剂溶液的配制每种消毒剂按厂家提 供的浓度，适当扩大或缩小稀释倍数，用无菌纯水 对消毒液进行稀释。
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结果： 结论：
计数菌落数 ？？？
3. 紫外线灭菌试验(操作,1块/4人,小平板,大肠杆菌) p61 原理： 材料： 普通琼脂平板 大肠杆菌、紫外线
方法：
紫外线×30分钟
37℃×18~24h
结果：
结论：
？？？
紫外线（ ultraviolet ray，UV） ：260~266nm（最佳杀菌波长）
一、细菌的分布检查 1. 空气中细菌的检查（操作） p-55 2. 皮肤、日常物品细菌的检查（操作） p-56
二、消毒灭菌试验
1. 紫外线灭菌试验（操作） p-61 2. 化学消毒剂的消毒灭菌试验（操作） p-61 3. 煮沸与高压灭菌试验（操作） p-60
1. 空气中细菌的检查(操作,3块/班,小平板) p55
灭菌
灭菌
热
160~170º C×2h
电磁波热效应 100º C×5~10 分 钟，沸水
高压蒸气灭菌器
品
灭菌 消毒( 芽胞杀不 死） 灭菌（芽胞杀 死） 医疗器械 饮水和食具
高压蒸 103.4Kpa(15 磅 / 吋 气灭菌 热 法
2/1.05Kg/cm2)
耐高温、耐湿物品
（基础培养基、生理盐
水、手术辅料等）
方法：
氯 青 紫 氯 碘 碘 青
37℃×18~24h 药敏试验 --纸片法
碘 紫 紫
大肠杆菌
金葡菌
抑菌圈 结果：
（直径mm） 氯霉素 大肠杆菌 金葡菌
青霉素
碘酒
结晶紫
特别观察： 青霉素对两种细菌的杀菌结果，为什么？ 结论： ？？？
5. 煮沸与高压灭菌试验(操作,2块/4人,小平板, 大肠杆菌,枯草芽胞杆菌) p60 原理：
材料：
普通琼脂平板 大肠杆菌，枯草芽胞杆菌
方法：
对照 100 ℃ 10′ 对照 100 ℃ 10′ 121 ℃ 20′ 121 ℃ 20′
大肠杆菌
枯草芽胞杆菌
37℃×18~24h
种类 焚烧 干 烧灼 干烤 红外线 煮沸法 湿
方法 用焚烧炉燃烧 火焰烧灼 干烤箱，热空气
效果 灭菌
用途
废弃污物、尸体
接种环，试管口 玻璃器皿等耐高温的物
第四次实验报告问题：
1. 金葡萄菌×，金葡菌√ 2. 结果：观察到两种菌落：一种？？，另一种？？ 结论： 3.结果：大肠杆菌沿穿刺线向周围扩散生长 痢疾杆菌：？？？ 结论：大肠杆菌 动力+ 痢疾杆菌 动力4.结果：观察到针尖样草绿色溶血环菌落 结论：？？？
原因：大肠杆菌抑制金葡菌
实验五 细菌的分布检查、消毒灭菌试验
121.3º C×15~20分钟
结果： 菌名 大肠杆菌 枯草杆菌 对照 煮沸 高压
注：+有细菌生长
-无细菌生长
结论：
？？？
高压蒸汽灭菌法的使用：p58
加水→装锅→加盖→排气→灭菌→起锅
高压蒸汽灭菌锅使用步骤及注意事项：
①先将筒内注水，然后把要灭菌的物品装入内筒，再把盖拧
紧，打开排气阀门，开始加热。 ②水沸腾后，排气阀门开始排出气体，待筒内气体全部排出 后，关闭排气阀门。（见书表2-6） ③筒内压力维持103.4kPa，121℃，15~30min，即可达到灭 菌的目的。 ④关闭热源，自然放凉，待压力表指针下降到零时，方可开 盖取物。
杀菌原理：使DNA上相邻的T碱基通过共价键结合成
二聚体，干扰DNA复制与转录，导致细菌死亡。 特点：穿透力弱，对皮肤、眼有损伤。 适用范围：适用于空气和物体表面消毒。
4. 化学消毒剂的消毒灭菌试验和药敏试验 (操作,2块/4人,大平板,大肠杆菌,金葡菌) p61
材料：
普通琼脂平板 大肠杆菌、金葡菌 氯霉素、青霉素、碘酒、结晶紫
实验报告：
1. 空气中细菌的检查
2. 皮肤、日常物品细菌的检查
3. 紫外线灭菌试验 4. 化学消毒剂的消毒灭菌试验 5. 煮沸与高压灭菌试验
明天中午12:30来实验室看实验结果!!!
材料： 外20min
普通琼脂平板
结果： 结论：
计数菌落数，观察菌落数的差异。
？？？
菌落计数方法
2. 皮肤、日常物品细菌的检查(操作,1块/4人,大平板) p56 材料： 普通琼脂平板 皮肤、头发、衣服、钞票
皮肤 衣服 头发
方法：
37℃×18~24h