药物遗传毒性研究技术指导原则
药物遗传毒性研究技术指导原则
03
行比较，以评估其对人类的安全性。
研究不足和改进方向
当前药物遗传毒性研究存在实验设计、实验方 法、数据分析等方面的不足，需要进一步完善 和规范。
应加强实验数据的审核和监督，确保数据的真 实性和完整性。
应进一步开展人类遗传毒性研究，以更好地评 估药物对人类的安全性。
对未来研究的建议和展望
应加强药物遗传毒性研究的规范化，提高实验设计 、实验方法、数据分析等方面的水平。
应用
本指导原则适用于药品注册申请、药物安全性评估、新药研 发等过程中涉及到的遗传毒性研究。同时，也适用于对现有 药物的遗传毒性评估及风险管理。
02
药物遗传毒性研究技术概述
定义和分类
1
药物遗传毒性研究是指评估药物对人类或动物 遗传物质的潜在损害作用的研究。
Байду номын сангаас
2
遗传毒性药物可以分类为致癌物和非致癌物。
结论总结
根据实验结果和数据分 析结果，得出结论，并 撰写研究报告或论文。
03
药物遗传毒性研究的实验设计
实验目的和要求
明确研究目的
药物遗传毒性研究的目的是检测药物对人类或动物的遗传毒性，评估药物在 特定条件下的致突变和致畸作用，为药物安全性评价提供依据。
确定实验要求
根据研究目的，确定实验条件、受试物、实验动物、染毒方式、剂量选择、 采样时间等实验要求。
生物标志物
选择与药物代谢、细胞增殖、DNA修复等相关的 生物标志物进行检测。
生物标志物数据的分析和解读
数据分析
01
采用统计方法对生物标志物数据进行处理和分析，以获得有意
义的结果。
剂量-反应关系
02
分析不同药物剂量与生物标志物变化之间的关系，以评估药物
药物遗传毒性研究技术指导原则_201704(征求意见稿)
药物遗传毒性研究技术指导原则（征求意见稿）药物遗传毒性研究技术指导原则、概述遗传毒性研究(Genotoxicity Study)是药物非临床安全性评价的重要内容，它与其他研究尤其是致癌性、生殖毒性等研究有着密切的联系，是药物进入临床试验及上市的重要环节。
拟用于人体的药物，应根据受试物拟用适应症和作用特点等因素考虑进行遗传毒性试验。
遗传毒性试验是指用于检测通过不同机制直接或间接诱导遗传学损伤的受试物的体外和体内试验，这些试验能检出DNA 损伤及其损伤的固定。
以基因突变、较大范围染色体损伤或重组形式出现的DNA 损伤的固定，通常被认为是可遗传效应的基础，并且是恶性肿瘤多阶段发展过程的重要因素(恶性肿瘤发展变化是一个复杂过程，遗传学改变可能仅在其中起部分作用) ，染色体数目的改变也与肿瘤发生有关，并可提示生殖细胞出现非整倍体的可能性。
在遗传毒性试验中呈阳性的化合物为潜在人类致癌剂和/或致突变剂。
由于在人体中已建立了某些致突变/遗传毒性化合物的暴露和致癌性之间的关系，而对于遗传性疾病尚难以证明有类似的关系，故遗传毒性试验主要用于致癌性预测。
但是，因为生殖细胞突变与人类疾病具有明确的相关性，所以也因同样重视化合物引起潜在可遗传性效应的风险。
此外，遗传毒性试验结果可能对致癌性试验的结果分析有重要作用。
因此，在药物开发的过程中，遗传毒性试验的目的是通过一系列试验来预测受试物是否有遗传毒性，在降低临床试验受试者和药品上市后使用人群的用药风险方面发挥重要作用。
本指导原则重点阐述遗传毒性试验的基本原则，介绍标准试验组合方案，阐述体内外试验的基本原则，以及对试验结果的分析评价与追加研究策略。
本指导原则适用于中药、天然药物和化学药物。
二、基本原则一）实验管理要求药物的遗传毒性试验属于安全性评价研究，必须执行《药物非临床研究质量管理规范》（GLP）,并在通过GLP认证的实验室进行。
二）具体问题具体分析遗传毒性试验的设计，应该在对受试物认知的基础上，遵循“具体问题具体分析”的原则。
OECD遗传毒性最新修订指导原则的解析
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药物遗传毒性研究技术指导原则
附件四药物遗传毒性研究技术指导原则药物遗传毒性研究技术指导原则一、概述遗传毒性研究（Genotoxicity Study）是药物非临床安全性评价的重要内容，它与其他毒理学研究尤其是致癌性研究、生殖毒性研究有着密切的联系，是药物进入临床试验及上市的重要环节。
拟用于人体的药物，应根据受试物拟用适应症和作用特点等因素考虑进行遗传毒性试验。
遗传毒性试验是指用于检测通过不同机制直接或间接诱导遗传学损伤的受试物的体外和体内试验，这些试验能检出DNA损伤及其损伤的固定。
以基因突变、较大范围染色体损伤、重组和染色体数目改变形式出现的DNA损伤的固定，一般被认为是可遗传效应的基础，并且是恶性肿瘤发展过程的环节之一（这种遗传学改变仅在复杂的恶性肿瘤发展变化过程中起了部分作用）。
在检测此类损伤的试验中呈阳性的化合物为潜在致癌剂和/或致突变剂，即可能诱导癌和/或遗传性疾病。
由于在人体中已建立了某些化合物的暴露和致癌性之间的关系，而对于遗传性疾病尚难以证明有类似的关系，故遗传毒性试验主要用于致癌性预测。
但是，因为已经确定生殖细胞突变与人类疾病有关，所以对可能引起可遗传效应的化合物与可能引起癌症的化合物应引起同样的关注；此外，这些试验的结果可能还有助于解释致癌性的机制和试验结果。
因此，在药物开发的过程中，遗传毒性试验的目的是通过一系列试验来预测受试物是否有遗传毒性，在降低临床试验受试者和药品上市后使用人群的用药风险方面发挥重要作用。
本指导原则重点阐述遗传毒性试验体内外试验的基本原则，并介绍标准试验组合方案，以及对试验结果的综合分析及评价。
本指导原则适用于中药、天然药物和化学药物的遗传毒性试验研究。
二、基本原则（一）实验管理药物的遗传毒性试验属于安全性评价研究，根据《中华人民共和国药品管理法》的规定，必须执行《药物非临床研究质量管理规范》。
（二）具体问题具体分析遗传毒性试验的设计，应该在对受试物认知的基础上，遵循“具体问题具体分析”的原则。
CH药物遗传毒性研究指导原则的最新进展介绍
CH药物遗传毒性研究指导原则的最新进展介绍黄芳华王庆利审评二部黄芳华审评四部王庆利ICH的指导原则在药品的研究与开发中有较好的参考意义。
从2006年9月开始，ICH提出对遗传毒性指导原则进行修订改版，ICH专家组对遗传毒性试验一系列问题进行了讨论修订，但目前尚未达成一致意见，预期需2年的时间完成该指导原则的修订。
鉴于目前我们起草的指导原则参考的是已有的ICH指导原则的基本原则，及时跟踪国际上，包括ICH遗传毒性研究指导原则在内的相关领域的进展情况，对我们进行药物的研发和评价有借鉴作用。
因此，本文拟对ICH关于遗传毒性研究指导原则的相关进展进行简介。
针对遗传毒性研究，ICH分别于1995年和1997年发布了两个指导原则，即ICH S2A：Guidance on Specific Aspects of Regulatory Genotoxicity Tests for Pharmaceuticals（药物遗传毒性试验的特殊性指导原则）和ICH S2B：Genotoxicity：a Standard Battery for Genotoxicity Testing of Pharmaceuticals（遗传毒性：药物遗传毒性试验标准组合）。
由于遗传毒性试验大部分是短期试验，新技术发展迅速，且对于涉及基因突变过程的不同类型遗传损伤和不同作用方式的性质和相关性的科学认识也在不断发展，使得对遗传毒性试验有了新的认识。
在这种情况下，ICH于2006年启动了遗传毒性指导原则的修订工作，并于2006年9月和2007年5月的ICH会议上进行了讨论，最近的会议在2007年10月底至11月初召开。
ICH修订指导原则的起因主要源于两方面：其一是现有遗传毒性试验的进展与原指导原则推荐的试验方法存在着一些问题。
这些年来，一系列的体内和体外遗传毒性试验有了新发展并积累了大量的数据使得具有加入到原指导原则中的价值，如体外微核试验、体内彗星试验、转基因模型等。
ICH关于遗传毒性结果评价和追加试验策略指导原则--人用药物遗传毒性试验和结果分析指导原则介绍(三)
发布日期20080729栏目化药药物评价>>综合评价ICH关于遗传毒性结果评价和追加试验策略指导原则--ICHS2（R1）人用药物遗传标题毒性试验和结果分析指导原则介绍（三）作者黄芳华部门正文内容审评二部黄芳华遗传毒性试验能检出DNA损伤及其损伤的固定。
以基因突变、较大范围染色体损伤、重组和染色体数目改变形式出现的DNA损伤的固定，一般被认为是可遗传效应的基础，并且是恶性肿瘤发展过程的环节之一（这种遗传学改变仅在复杂的恶性肿瘤发展变化过程中起了部分作用）。
染色体数目的改变还与肿瘤发生有关和可提示生殖细胞发生非整倍体的潜在性。
在检测这些类别损伤的试验中呈阳性的化合物为潜在人类致癌剂和/或致突变剂。
由于在人体中已建立了某些化合物的暴露和致癌性之间的关系，而对于遗传性疾病尚难以证明有类似的关系，故遗传毒性试验主要用于致癌性预测。
但是，因为已经确定生殖细胞突变与人类疾病有关，所以对可能引起可遗传效应的化合物与可能引起癌症的化合物应引起同样的关注；此外，这些试验的结果可能还有助于致癌性试验分析。
遗传毒性研究在药物研发中处于比较的重要位置，尤其是在药物筛选阶段，在很大程度上遗传毒性试验结果将影响到药物开发的进程。
但是遗传毒性的假阳性和假阴性结果难以避免，尤其是近年来体外哺乳动物细胞试验系统阳性结果（该结果与人用危险不相关）过高的问题已引起的广泛关注。
因此对结果进行综合分析尤为重要。
FDA于2006年出台了推荐的遗传毒性试验结果综合分析法指导原则（Guidance for industy and review staff: Recommended approaches to integrationof genetic toxicology study results），对遗传毒性试验出现阳性结果如何评价和处理进行了讨论。
现介绍ICH S2（R1）中的遗传毒性结果评价和追加试验策略。
对比试验已明确显示，在预测药物对啮齿类动物致癌性时每种体外检测系统均可产生假阴性和假阳性结果。
EMEA《遗传毒性杂质限度指导原则》介绍
发布日期 20070820栏目化药药物评价>>化药质量控制标题EMEA《遗传毒性杂质限度指导原则》介绍作者史继峰部门正文内容审评四部审评七室史继峰摘要：《遗传毒性杂质限度指导原则》对遗传毒性杂质进行了分类，并介绍了相关的遗传毒性杂质限度确定的原则和方法。
关键词：遗传毒性杂质毒理学担忧阈值（TTC）1. 介绍在原料药（Q3A）和药物制剂（Q3B）的杂质指导原则中，杂质限度确定的依据包括各个杂质的生物安全性数据或杂质在某特定含量水平的研究概况。
而对于遗传毒性杂质限度的确定，通常都认为是特别关键的问题，但目前尚无相关的指导原则。
2. 适用范围本指导原则阐述了如何处理新原料药中遗传毒性杂质的一般框架和实际方法。
该指导原则也适用于已有原料药的新申请，如果其合成路线、过程控制和杂质研究尚无法确保不会产生新的或更高含量的遗传毒性杂质（与EU目前批准的相同原料药相比）。
该指导原则同样适用于已上市原料药有关合成方面的补充申请。
除非有特殊原因，本指导原则不适用于已上市的产品。
3. 毒理学背景根据目前的研究实践，具有（体内）遗传毒性的化合物在任何暴露量下都有可能对DNA产生损伤，而这种损伤可能会引发肿瘤。
因此，对于遗传毒性致癌物质，应谨慎认为不存在明确的阈值，任何暴露量下都存在风险。
然而，对于一些遗传毒性事件，其产生生物学意义的阈值效应的机理正越来越为人所了解。
对于非DNA靶点的化合物和潜在致突变剂更是如此，因为它们在与关键靶点接触前就已经去毒化了。
对于这些化合物，研究的基础可以是确定关键的未观察到影响的剂量（NOEL）和采用不确定因子。
即使对能与DNA分子发生反应的化合物，由于低剂量时有多种有效的保护机制存在，而不能将高剂量下的影响以线性方式外推到很低的（人）暴露水平。
不过，目前要用实验方法证明某诱变剂的遗传毒性阈值仍然非常困难。
所以，在缺乏恰当的证据支持遗传毒性阈值存在的情况下，确定安全剂量很困难，因此非常有必要采用一个可接受风险的暴露水平概念。
ICH关于遗传毒性体外、体内试验的建议--ICHS2(R1)人用药物遗传毒性试验和结果分析指导原则介绍(二)
发布日期20080729栏目化药药物评价>>综合评价ICH关于遗传毒性体外、体内试验的建议--ICHS2（R1）人用药物遗传毒性标题试验和结果分析指导原则介绍（二）作者黄芳华部门正文内容审评二部黄芳华前文已介绍了ICH关于遗传毒性标准试验组合的要求，以下介绍ICHS2（R1）Guidance on Genotoxicity Testing and Data Interpretation forPharmaceuticals Intended for Human Use（人用药物遗传毒性试验和结果分析指导原则）中关于体外、体内试验的建议。
一、对体外试验的建议1、试验重复和分析实验结果的重现性是涉及新方法或意外发现的研究的基本组成部分。
但是，用标准的、已广泛应用的遗传毒性试验进行常规试验时往往不需要完全重复。
这些试验都经过很好的充分验证且有有效的内部控制，对明确的阳性或阴性结果试验通常不需要重复。
理想状态是可明确宣称试验结果是明确的阳性或明确的阴性。
但是，试验结果有时达不到阳性或阴性称谓的预先设定的标准，因此被定为“可疑”。
统计学方法的应用有助于数据分析；但是，充足的生物学分析是至关重要的。
可疑试验的重复可致(i) 一个明确的阳性结果，因此作为整体阳性结果；(ii) 一个阴性结果，所以结果不需要重复和总体结果为阴性；或(iii)另一个可疑的结果，最后结论仍维持可疑。
2、对细菌突变试验的推荐方案OECE指导原则（1997）和IWGT报告(Gatehouse et al, 1994) 给出了对方案的建议。
2.1 高剂量水平的选择最高剂量水平当不受溶解度或细胞毒性限制时，推荐最高浓度为5000µg/皿。
溶解度的限制对于细菌培养，如果沉淀不干扰评分应对沉淀量进行评分，毒性不限制，最高剂量不超过5000µg/皿。
有证据表明在用细菌遗传毒性试验检测某些受试物时，在不溶解的浓度范围内也能检测出剂量相关性的遗传毒性。
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附件四则药物遗传毒性研究技术指导原则一、概述遗传毒性研究（Genotoxicity Study）就是药物非临床安全性评价得重要内容，它与其她毒理学研究尤其就是致癌性研究、生殖毒性研究有着密切得联系，就是药物进入临床试验及上市得重要环节。
拟用于人体得药物，应根据受试物拟用适应症与作用特点等因素考虑进行遗传毒性试验。
遗传毒性试验就是指用于检测通过不同机制直接或间接诱导遗传学损伤得受试物得体外与体内试验，这些试验能检出DNA损伤及其损伤得固定。
以基因突变、较大范围染色体损伤、重组与染色体数目改变形式出现得DNA损伤得固定，一般被认为就是可遗传效应得基础，并且就是恶性肿瘤发展过程得环节之一（这种遗传学改变仅在复杂得恶性肿瘤发展变化过程中起了部分作用）。
在检测此类损伤得试验中呈阳性得化合物为潜在致癌剂与/或致突变剂，即可能诱导癌与/或遗传性疾病。
由于在人体中已建立了某些化合物得暴露与致癌性之间得关系，而对于遗传性疾病尚难以证明有类似得关系，故遗传毒性试验主要用于致癌性预测。
但就是，因为已经确定生殖细胞突变与人类疾病有关，所以对可能引起可遗传效应得化合物与可能引起癌症得化合物应引起同样得关注；此外，这些试验得结果可能还有助于解释致癌性得机制与试验结果。
因此，在药物开发得过程中，遗传毒性试验得目得就是通过一系列试验来预测受试物就是否有遗传毒性，在降低临床试验受试者与药品上市后使用人群得用药风险方面发挥重要作用。
本指导原则重点阐述遗传毒性试验体内外试验得基本原则，并介绍标准试验组合方案，以及对试验结果得综合分析及评价。
本指导原则适用于中药、天然药物与化学药物得遗传毒性试验研究。
二、基本原则（一）实验管理药物得遗传毒性试验属于安全性评价研究，根据《中华人民共与国药品管理法》得规定，必须执行《药物非临床研究质量管理规范》。
（二）具体问题具体分析遗传毒性试验得设计，应该在对受试物认知得基础上，遵循“具体问题具体分析”得原则。
应根据受试物得结构特点、理化性质、已有得药理毒理研究信息、适应症与适用人群特点、临床用药方案选择合理得试验方法，设计适宜得试验方案，并综合上述信息对试验结果进行全面得分析评价。
（三）随机、对照、重复遗传毒性试验应符合毒理学试验得基本原则，即随机、对照与重复得原则。
三、基本内容（一）受试物1、中药、天然药物受试物应能充分代表临床研究受试物或上市药品，因此受试物应采用制备工艺稳定、符合临床研究质量标准规定得样品，一般用中试样品，并注明受试物得名称、来源、批号、含量（或规格）、保存条件及配制方法等。
如不采用中试样品，应有充分得理由。
如果由于给药容量或给药方法限制，可采用原料药进行试验。
试验中所用溶媒与/或辅料应标明批号、规格及生产厂家。
2、化学药物受试物应采用制备工艺稳定、符合临床研究用质量标准规定得样品，并注明受试物得名称、来源、批号、含量（或规格）、保存条件及配制方法等，并附有研制单位得自检报告。
所用辅料、溶媒等应标明批号、规格与生产厂家，并符合试验要求。
（二）试验设计得总体考虑对药物而言，需对潜在得遗传毒性进行全面评价，遗传毒性试验可用作鉴定体细胞诱变剂、生殖细胞诱变剂与潜在得致癌物。
目前，遗传毒性试验方法较多，所使用得生物材料多种多样，可以利用原核细胞到真核细胞直至高等哺乳动物细胞在体外进行添加或不添加代谢活化物得试验，也可在整体动物上进行体内试验；根据试验检测得遗传终点可将检测方法分为三大类，即基因突变、染色体畸变、DNA损伤与修复；从试验系统来分，遗传毒性试验可分为体内试验与体外试验。
因体内与体外试验差异较大，以下分别讨论体外试验与体内试验得基本要求。
由于体内外得试验方法均较多，本指导原则仅讨论常用方法及需要重点关注得问题，具体试验时需根据具体情况具体分析。
1、体外试验基本要求1、1 细菌回复突变试验中采用得基本菌株在细菌回复突变试验中至少应采用5种菌株，包括用于检测组氨酸靶基因中鸟嘌呤-胞嘧啶（G-C）位点碱基置换或移码突变得4种组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌（TA1535；TA1537/TA97/ TA97a （注释1）；TA98；TA100），以及用于检测组氨酸或色氨酸基因中腺嘌呤-胸腺嘧啶（A-T）位点碱基置换或移码突变得鼠伤寒沙门氏菌TA102或埃希氏大肠杆菌WP2 uvrA或埃希氏大肠杆菌WP2 uvrA（pKM101）（注释2）。
由于检测G-C位点突变得4种菌株无法检测交联剂，因此检测交联剂时最好采用TA102菌株或增加一种修复准确型大肠杆菌（如埃希氏大肠杆菌WP2 uvrA （pKM101））。
1、2 体外试验中最高浓度得确定（注释3）体外试验中受试物得最高浓度主要取决于受试物对细菌/细胞得毒性与溶解度。
1、2、1 无毒化合物得高浓度对易溶解得无毒化合物，细菌试验应达到得最高浓度为5mg/皿，哺乳动物细胞试验为5mg/ml或10mM（选用较低者）。
1、2、2 要求达到得细胞毒性水平在遗传毒性体外试验中，某些遗传毒性致癌剂只有在检测浓度高达可产生一定程度得细胞毒性时才可检出，但毒性过高又可影响对相应得遗传终点进行恰当得评价。
当哺乳类动物细胞存活率很低时，一些遗传毒性以外得作用机制如细胞毒性（如与细胞凋亡、溶酶体释放核酸内切酶等有关得结果）会导致遗传毒性得假阳性结果，这种情况常发生于受试物浓度达到毒性阈浓度时。
鉴于以上情况，在体外细菌与哺乳类动物细胞试验中，目前可接受以下得细胞毒性水平（浓度不应超过1、2、1中得规定）：（1）在细菌回复突变试验中，最高浓度应能显示明显得毒性，如回复突变数减少、背景菌斑减少或消失。
（2）哺乳动物细胞体外遗传毒性试验中，毒性水平应高于50%细胞抑制率或细胞融合率，对培养得淋巴细胞，有丝分裂指数抑制率应高于50%。
（3）哺乳动物细胞体外基因突变试验中，理想得最高浓度应能产生至少80%毒性（即存活率不大于20%）。
可通过评价平板接种效率或相对总生长率测定毒性。
对于细胞存活率低于10%时获得得阳性结果，应谨慎对待。
1、2、3 难溶受试物得检测在用细菌与哺乳动物细胞遗传毒性试验检测某些受试物时，在不溶解得浓度范围内也能检测出剂量相关性得遗传毒性（注释4）。
建议采用以下策略检测相对不溶得受试物，该建议仅针对培养基中得受试物。
（1）若未观察到细胞毒性，应以产生沉淀得最低浓度作为最高浓度，但细菌试验不超过5mg/皿，哺乳动物细胞不超过5mg/ml或10mM。
（2）若观察到剂量相关性得细胞毒性或诱变性，则不管溶解度如何，应按上述1、2、2要求得毒性水平来确定最高浓度，这需要检测多个产生沉淀得浓度。
但当沉淀量影响到结果观察时，则无法达到所要求得细胞毒性得剂量水平。
在给药处理开始前与结束时，均应用肉眼评价沉淀量。
1、3 体外试验得重现性体外试验应关注重现性。
体外试验通常应进行重复试验。
但就是，当采用标准得、已广泛应用得常规体外试验方法时，若这些试验经过了充分验证且进行了有效得内部质量控制，可不必进行重复试验，例如：对哺乳动物细胞基因突变试验，进行了规范得范围确定试验，其可提供足够得数据以保证试验方法得正确性；对体外染色体损伤得细胞遗传学试验与小鼠淋巴瘤tk试验，采用了合适得、规范得方法，如包括有阳性与阴性对照、加与不加代谢活化得试验、处理时间及采样时间合适等。
在进行这些试验后，若得到明确得阳性或阴性结果，一般可不需要进行其她确证性试验；但若得到可疑结果，则需要进一步试验。
2、体内试验基本要求2、1 体内试验得给药途径一般情况下，给药途径应与临床拟用途径一致。
若不一致，应说明理由。
2、2 体内检测染色体断裂剂得骨髓试验啮齿类动物骨髓有核细胞得染色体畸变试验可以检测多种染色体完整性方面得改变，该类变化几乎均来源于原发性得单个或多个染色单体断裂。
如果产生了一个无着丝点片段，染色单体或染色体断裂就导致微核形成，因而检测染色体畸变或微核得方法可用于检测断裂剂（注释5）。
由于细胞分裂后期得一个或多个染色体相对滞后也能形成微核，因而微核检测方法也能检测一些非整倍体诱导剂（注释6）。
总之，体内骨髓细胞染色体畸变试验或骨髓嗜多染红细胞微核试验均可用于检测断裂剂。
此外也可以通过测定小鼠外周血中未成熟（嗜多染）红细胞得微核率来检测断裂剂，除小鼠外，也可采用其她脾脏无法清除带微核得红细胞或对断裂剂或非整倍体诱导剂有足够灵敏度得动物。
2、3 骨髓微核试验中啮齿类动物性别得选择对小鼠微核试验检测已知断裂剂得许多研究表明，通常雄性小鼠比雌性小鼠对诱导微核更敏感，二者之间仅有量得差异而无质得差异，但若性别间存在显著得量得差别则会导致性别间得毒性不同。
若性别间代谢产物有明显得质得差别，则应采用二种性别得动物。
类似得原则同样适用于其她体内试验方法（注释7）。
骨髓微核试验可采用小鼠或大鼠。
总之，在微核试验中，除非性别间在毒性或代谢方面有明显差异，一般单用雄性动物即可。
如果受试物专用于一种性别，则通常选用相应性别得动物进行试验。
（三）标准试验组合遗传毒性试验方法有多种，但没有任何单一试验方法能检测出所有得遗传毒性物质，因此，通常采用体外与体内遗传毒性试验组合得方法，以减少遗传毒性物质得假阴性结果。
这些试验相互补充，对结果得判断应综合考虑。
1、标准试验组合应具备得特征标准试验组合应反映不同遗传终点，包括体内与体外试验，从原核到真核细胞，因此应包含以下内容：（1）应包含细菌回复突变试验，因为该试验已被证明能检出相关得遗传学改变与大部分啮齿类动物遗传毒性致癌剂。
（2）因细菌不能完全检测DNA损伤，应采用哺乳动物细胞进行评价。
目前使用得几种哺乳动物细胞系有：检测染色体损伤得细胞系（染色体结构与数目畸变得体外试验）；主要检测基因突变得细胞系（注释8）；检测基因突变与染色体断裂作用得细胞系（小鼠淋巴瘤tk试验）（注释9）。
现有研究表明，对于检测具有遗传毒性但在细菌回复突变试验中结果为阴性得化合物，在采用合适得试验方案条件下，检测染色体损伤得各种体外试验与小鼠淋巴瘤tk试验结果高度一致。
因此，在标准试验组合中，上述试验系统可互相替换。
（3）应包含一项遗传损伤体内试验，以提供一个包括影响受试物遗传毒性作用得其她相关因素（吸收、分布、代谢、排泄）得试验模型。
体内试验可另外检出某些遗传毒性物质（注释10）。
可采用啮齿类动物造血细胞染色体损伤体内试验或其她合适得体内试验。
啮齿类动物染色体损伤体内试验包括骨髓细胞染色体畸变试验与骨髓细胞或外周血红细胞微核试验。
2、推荐得标准试验组合（1）一项体外细菌基因突变试验；（2）一项采用哺乳动物细胞进行得体外染色体损伤评估试验，或体外小鼠淋巴瘤tk试验；（3）一项采用啮齿类动物造血细胞进行得体内染色体损伤试验。
对于结果为阴性得受试物，完成上述三项试验组合通常可提示其无遗传毒性。