两种方法检测胚胎小鼠内皮型一氧化氮合酶结果的相关性分析
一氧化氮及内皮型一氧化氮合酶基因G894T多态性与抑郁症及抗抑郁疗效相关分析
一氧化氮及内皮型一氧化氮合酶基因G894T多态性与抑郁症及抗抑郁疗效相关分析张洪燕;张志珺;史家波;郝贵峰【期刊名称】《中华行为医学与脑科学杂志》【年(卷),期】2007(016)001【摘要】目的测定抑郁症患者血浆一氧化氮(NO)浓度并分析内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因G894T功能多态性与NO浓度、抑郁症及抗抑郁剂疗效相关性.方法采用分光光度计法测定抑郁症患者疗前及正常对照组血浆NO浓度;运用汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评估抑郁症患者治疗前后症状严重程度;根据eNOS基因G894T 多态性PCR-RFLP分析结果进行基因分型.结果患者组疗前血浆NO浓度(76.8±30.3)μmoL/L显著高于对照组(64.2±33.3)μmol/L,差异有显著性(P=0.009);患者组疗前血浆NO浓度(76.8±30.3)μmol/L与疗前HAMD分值[(23.9±4.6)]分呈显著正相关(r=0.262,P=0.008);患者组与对照组等位基因及基因型分布频率均差异无显著性(均P＞0.05);患者组与对照组携带不同等位基因或基因型者之间血浆NO浓度差异无显著性(均P＞0.05);携带不同等位基因或基因型患者疗前HAMD 评分和治疗后HAMD减分率差异均无显著性(均P＞0.05).结论血浆NO浓度增高可能是抑郁症发病的影响因素,并影响抑郁症患者急性期病情严重程度;eNOS基因G894T功能多态性可能不影响血浆NO浓度、抗抑郁剂治疗疗效,也不是抑郁症发病的主要基因因素.【总页数】3页(P18-20)【作者】张洪燕;张志珺;史家波;郝贵峰【作者单位】210029,南京,南京医科大学第二临床医学院;东南大学附属中大医院神经内科;南京医科大学附属脑科医院精神科;东南大学附属中大医院神经内科【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.内皮型一氧化氮合酶基因G894T的多态性与厄贝沙坦降压疗效的关系 [J], 孟祥雁2.东乡族内皮型一氧化氮合酶基因G894T多态性与替米沙坦降压疗效及糖脂代谢相关性研究 [J], 张永正;王玉;闵海;马丽雅3.神经源型一氧化氮合酶C276T基因多态性与抗抑郁疗效相关分析 [J], 张洪燕;陆蓉;瞿秋霜4.内皮型一氧化氮合酶基因G894T多态性与ACEI降压疗效相关性研究 [J], 陈改玲;党爱民;刘国仗5.新疆汉族和哈萨克族人群内皮型一氧化氮合酶基因T786C和G894T多态性与原发性高血压的相关分析 [J], 张强;邓峰美;何芳;王树人;卢贤贵;王刚;邹放君;钟华;唐斌因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
3种微核检测方法的比较
ep ithelial cancer and its signal transduction pathway [ J ]. Chinese M ed ical Jou rnal, 2003, 83 ( 11) : 9762980. [ 4 ] 徐叔云 ,卞如濂 ,陈 修. 药理实验方法学 [M ]. 北京 : 人民卫 生出版社 , 2005: 123521238. [ 5 ] 陈 雄 ,程学文 ,徐美荣. 山楂叶总黄酮对大鼠肾缺血 /再灌注损伤 的保护作用 [J ]. 实用儿科临床杂志 , 2007, 22 (5) : 3592360. [ 6 ] 李 宓 ,杜 艺 ,陈家湄 ,等. hHGF基因肾脏电转染对大鼠肾 缺血再灌注损伤的保护作用 [ J ]. 第四军医大学学报 , 2007, 28 ( 1) : 9912994. [ 7 ] 赵 浦 ,孙玲娣. 缺血再灌注大鼠肾脏诱导型一氧化氮合酶表 达的意义 [ J ]. 实用儿科临床杂志 , 2006, 21 (17) : 113721138. [ 8 ] 王新良 ,李洪娟 ,谢 菲 ,等. 离体灌流技术检测缺血再灌注对 大鼠肾功能和肾血管反应性的影响 [ J ]. 新乡医学院学报 , 2005, 22 ( 5) : 4412443. [ 9 ] 徐 勇 ,陈珊珊. 白细胞介素 24 / 210对大鼠肾缺血再灌注损伤 细胞凋亡的抑制作用 [ J ]. 实用儿科临床杂志 , 2007, 22 ( 5 ) : 375 2376. [ 10 ] Mariano RH, JesusM S,Manuel R, et a l. 1HNMR structural char2
内皮型一氧化氮合酶在胚胎小鼠肾脏发育中的表达
第 １ ７卷第 ２ 期 ２０ ０ ８年 ４月
中 国 组 织 化 学 与 细 胞 化 学 杂 志
ＣＨ ＩＩ Ｅ ＯＵＲＮＡＬ ＥＳ Ｊ ＯＦ 删 Ｈ ｍ Ｍ１ ＡＮＤ Ｙ
Ｖ０ ． ７ Ｎｏ ２ １１ ． ． Ａｐ ． ０ ８ ｒ２ ０
胚胎小 鼠肾脏早期发育 中的意义 。方法
新生组 （ ｏ Ｐ ）小 鼠各 １ ，共 ６组 。分别用免 疫组化及 免疫 印迹 方法 对小鼠肾脏 内 ｅ Ｏ只 ＮＯＳ 达进 行定 性 、定量分析 。结果 表 （）免疫组化结果显示 ：Ｅ ４ １ ｌ 、Ｅｌ 组 ｅ ＯＳ在生 肾区呈 阳性表 达 ；Ｅ ６组 生 肾区表达 减弱 ，肾近 端小管呈 强 阳性 表达 ， ５ Ｎ ｌ 同时远端小管及 肾脏小动脉 内皮也有 阳性表达 ；Ｅ ８组 、Ｐ ｌ ｏ组近端小管呈强 阳性表 达 ，远端 小管呈 阳性表 达 ，髓 质 中的集 合管 ｅ ＯＳ表达弱阳性 ，而致密斑呈阴性表达 。（）免疫 印迹结果显示 ：Ｅｌ 组 肾脏 ｅ ＯＳ含量较少 ，随后逐 渐增多 ，Ｐ Ｎ ２ ４ Ｎ Ｄ０ 组 ｅ Ｓ含量最多 。结论 ＮＯ （） ｅ １ ＮＯＳ在 小 鼠肾脏第 １ｄ开 始呈 阳性表 达 ，以后 含量 逐渐 升 高，出生时 含量 最 高。 （ ） ４ ２ ｅ Ｓ表达部位从生肾 区开始 ，以后其表达逐 渐减弱甚 至消失 ，而 肾近端小 管 、远 端小管 的表达 晚于生 肾区 ，且呈逐 渐增 ＮＯ
ｍａ ｕ ｕ ｅａ ６ ｔｔ ｅｓ ｍｅｔｍｅ ， ｔ ｅｅｗａ ａｎ ｘ ｒ ｓ ｉｎ ｉ ｈ ｉｔｌｔ ｂ ｌ ｎ ａ ｃ ｌｒａ ｌｔ ｂ ｌ ｔＥ１ ；ａ ｈ ａ ｉ ｈ ｒ ｓａｆ ｉｔｅ ｐ ｅ ｓｏ ｎ ｔ ｅｄｓａ ｕ ｕｅａ ｄ ｖ ｓｕ ａ ｎ ｔ ｅｉｌ ｅ１ ＡｔＥ１ ｈｌ ｌ ａｃ ． ８，ｅ ＯＳ ｗａ ｌａ ｌ ｘ ｒ ｓ ｅ ｎ ｐ ｏ ｉ ｌ ｎ ｉｔｌｔ ｂ ｌｓ Ａ ａ ｘ ｒ ｓ ｉｎ ｏ Ｎ ｓ ｃｅ ｒｙ ｅ ｐ ｅ ｓ ｄ ｉ ｒ ｘｍａ ，ａ ｄ ｄｓａ ｕ ｕ ｅ ． ｗｅ ｋ ｅ ｐ ｅ ｓｏ ｆ
RFLP 检测内皮一氧化氮合酶基因多态性
RFLP检测内皮一氧化氮合酶基因多态性一、实验背景PCR-RFPLDNA分子水平上的多态性检测技术是进行基因组研究的基础。
RFLP（限制片段长度多态性）已被广泛基因组遗传图谱构建、基因定位以及生物进化和分类的研究。
RFLP是根据不同个体基因组的限制性内切酶的酶切位点发生改变，或酶切位点之间发生碱基的插入、缺失，导致酶切片段大小发生变化，这种变化也可以通过特定探针杂交进行检测，从而可以比较不同个体DNA水平的差异（即多态性）。
内皮一氧化氮合酶基因多态性与高血压一氧化氮合酶（NOS）是一种催化小分子信息化合物，一氧化氮生成的酶广泛参与免疫调节、神经传递、血压生理调控和血小板凝聚的抑制等多种生理功能。
与高血压、糖尿病、肾病等多种疾病的发生密切相关。
NOS可以分为三型：神经元型、诱导型、内皮型。
内皮型一氧化氮合酶（NOS3，又称eNOS）基因在人类染色体上定位于7q35~7q36区域，跨度约21kb，含有26个外显子和25个内含子，相应的信使核糖核酸（mRNA）约4.1kb，翻译成含1203个氨基酸的蛋白产物。
近年来已知的NOS3的3个基因多态性位点与原发性高血压的关系。
1、位于第4内含子上的27bp数目可变的串联重复序列（VNTR），根据重复次数不同有两种等位基因，重复4次为a等位基因，重复5次为b等位基因。
2、位于第8外显子上，由于894位碱基G突变成T（G894T，即rs57135373），导致相应蛋白产物第298位上的谷氨酸被替换成天冬氨酸（Glu298Asp），突变前后的等位基因分别成为G、T等位基因。
3、位于5端侧翼区上786位碱基T突变成C（T786C），突变前后的等位基因分别为T、C等位基因。
G894T多态性1.与血管痉挛的关系:最近的研究显示带有G894T的NOS3基因转染细胞后可以分裂成100Kda和35Kda的两个片段，影响NOS3的功能导致NOS3合成减少或功能下降，NO减少，冠状动脉紧张性升高诱发冠状动脉痉挛。
PubMed收录内皮型一氧化氮合酶相关文献的计量学分析
PubMed收录内皮型一氧化氮合酶相关文献的计量学分析对PubMed收录的内皮型一氧化氮合酶近5年相关文献的年份、国别、期刊来源、多产作者、主要主题词进行统计，并对有关数据进行分析，以明确内皮型一氧化氮合酶相关文献分布特点和研究现状。
标签：PubMed；内皮型一氧化氮合酶；文献计量学本文运用文献计量学方法对美国国立医学图书馆提供的PubMed数据库收录的内皮型一氧化氮合酶近5年相关文献进行分析，旨在明确内皮型一氧化氮合酶文献分布特点和研究现状，为科研人员指明方向。
1材料与方法以PubMed数据库为数据源，统计近5年PubMed收录的内皮型一氧化氮合酶相关文献，检索式：”Nitric Oxide Synthase Type III”[Mesh] AND （”2009/06/13”[PDat] ：“2014/06/13”[PDat]）。
检索时间为2014年6月14日。
将获得的3428篇文献按发表时间、国别、来源期刊、多产作者及主要主题词进行统计分析。
2结果与分析2.1年代分布（表1）从表1可以看出，近5年内皮型一氧化氮合酶文献量约在672～805篇/年之间，这是因为1991年由For-stermann和Pollock在内皮细胞中首次发现内皮型一氧化氮合酶[1]，广大的医药工作者纷纷投入到对该酶的研究中。
2.2国别分布（表2）3428篇文献分散在40个国家中，表2为发表25篇以上内皮型一氧化氮合酶相关文献的国家。
表2所列的10个国家共发表内皮型一氧化氮合酶相关文献3186篇，占总文献量的92.94%，说明该领域的研究主要集中在少数国家，其中美国发表的内皮型一氧化氮合酶文献（约50.00%）远多于其他国家，表明美国在该领域的研究比其他国家先进。
值得注意的是中国发表75篇文献。
2.3来源期刊分布（表3）内皮型一氧化氮合酶相关文献共发表在854种期刊上，刊载36篇及以上内皮型一氧化氮合酶文献的杂志共10种，见表3，他们可以作为内皮型一氧化氮合酶研究的核心期刊，特别是American journal of physiology. Heart and circulatory physiology作为生理学领域的专业期刊，刊载的内皮型一氧化氮合酶相关文献最多（124，3.62%），远远超过排在第二位的PloS one （104，3.03%），可以作为内皮型一氧化氮合酶研究参考的最重要文献来源。
几种微血管形态学观测方法间的比较分析
・技术方法・几种微血管形态学观测方法间的比较分析张卫光1, 冯凤芝2, 夏家骝1, 田 珑1, 严宗毅1(1.北京大学医学部解剖学与组织胚胎学系,北京100083; 2.中国医学科学院北京协和医科大学北京协和医院,北京100730) 【摘要】目的:通过对6种微血管形态学观测方法的比较,使研究者能够选择出最适宜的实验方法。
方法:针对每一种方法,进行实验方法的简介和分析。
结果:6种方法间各有所长。
结论:研究者应根据实验的要求和条件,选择出一种方法或几种方法相结合,以达到研究的目的。
【关键词】微血管; 形态学; 方法学【中图分类号】R322 【文献标识码】A 【文章编号】1001-165X(2003)04-0408-03The comparison and analysis among a few methods on microvascular observation and measureZHA N G Wei2guang3,FEN G Feng2z hi,XIA Jia2liu,et al.3Depart ment of A natomy and histoembrology,Peking U niversity Health Science Center,Beijing100083,China【Abstract】Objective:To select a optimal method on microvascular observation and measure via comparisonand analysis among6kinds of morphological methods.Methods:Each of methods was briefly introduced and an2alyzed.R esults:Each of methods has its own advantages and disadvantages.Conclusion:According to differentexperimental need and condition,researchers should select a suitable method or integrate several methods.【K ey w ords】microvessel; morphology; methodology 微血管通常是指管径小于300μm的血管,主要包括微动脉、微静脉和毛细血管等,是研究组织和器官微循环的基础。
小鼠一氧化氮合成酶(NOS)说明书
小鼠小鼠一氧化氮合成酶一氧化氮合成酶一氧化氮合成酶(NOS)(NOS)(NOS)酶联免疫酶联免疫酶联免疫分析分析分析试剂试剂盒使用说明书盒使用说明书盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围检测范围：： 96T1µmol/L - 32µmol/L使用目的使用目的：：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中一氧化氮合成酶(NOS)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠一氧化氮合成酶(NOS)水平。
用纯化的小鼠一氧化氮合成酶(NOS)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入一氧化氮合成酶(NOS)，再与HRP 标记的一氧化氮合成酶(NOS)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。
TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的一氧化氮合成酶(NOS)呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中小鼠一氧化氮合成酶(NOS)浓度。
试剂盒组成 1 30倍浓缩洗涤液 20ml ×1瓶 7 终止液 6ml ×1瓶 2 酶标试剂 6ml ×1瓶 8 标准品（64µmol/L ） 0.5ml ×1瓶3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml ×1瓶4 样品稀释液 6ml ×1瓶 10 说明书 1份5 显色剂A 液 6ml ×1瓶 11 封板膜 2张 6显色剂B 液6ml ×1/瓶12密封袋1个标本标本要求要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP ）活性。
操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
内皮型一氧化氮合酶来源的
陈
晶 4"
尹序德 4"
喻璟瑞
=>>1’$ +> -2$%2’ +?2.1 .1%231. >%+@ 1-.+$5172&7 -2$%2’ +?2.1 #:-$5 +- $,@+% &-*2+*1-1#2#
f)% H&% &S g%)+J>+-< O)% &S E&% R# &\ h)-JX)-< O(&- &\ I(#)-< >#)-< &S i%-< O(&- &S g#JR& h%- &S j(%Jg#)- j()-< &S g%- j()+ &S O(&-<Jh) j(+#S )-1 i%-<JY#% h#S
%LSP % 来 源 的 一 氧 化 氮 $ $#>*#/ (E#/,% & LS % 广 泛 表 达 于 肿 瘤 组 织 & 调 节 着 肿 瘤 血 管
的 生 长 & 但 研 究 结 果 并 不 一 致 ( 本 研 究 中 探 讨 LS 对 肿 瘤 血 管 形 成 的 作 用 及 其 机 制 ( 方 法 ! 将 .C7TU V 9 小 鼠 随 机 分 为 5 组 # LS 组 小 鼠 右 胁 下 接 种 %LSP 基 因 转 染 的 U%W#& 肺 癌 细 胞 ’ %LSP 拮 抗 组 小 鼠 接 种 U%W#& 肺 癌 细 胞 后 腹 腔 注 射 %LSP 拮 抗 剂 UGLX@F ’ 对 照 组 接 种 U%W#& 肺 癌 细 胞 后 注 射 同 等 体 积 的 生 理 盐 水 ( 处 理 5 周
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
白含 量进行 检 测 ， 旨在探 讨两 种 方法 检测 结果 之间 是否 有相关 性 。
两 种 方 法 检 测 胚 胎 小 鼠 内皮 型 一 氧 化 氮 合 酶 结 果 的 相 关 性 分 析
包 翠 芬 刘 霞 王 晓 梅 穆 长 征
（ 辽宁 医学 院科学 实验中心 ， 组织胚胎学教研室 ， 第一 临床学 院，锦州 １ １Ｏ ） ２ Ｏ １
（ 关键词］ 小 鼠； 肾 ； 内皮型一氧化氮合酶 ； 流式细胞仪
材料 和 方法
裂解 液 加 入 电泳 胶 样 品槽 ，１０ 电压 下 电泳 ，待 ０Ｖ 样 品 到达合 适 位置 ，停 止 电泳 ，将 胶板 取 下 ，转膜 液 洗 涤 １－０ ｎ ０３ｍｉ。将 胶 与 ０４ ／ Ｐ ＤＦ膜 （ ． ５ ｍ Ｖ ￣ 用前 置于 甲醇 内浸 透 ５ ｎ左 右 ，再 放 人转 膜 液 中至少 ｍｉ ５ ｎ ｍｉ）置 于 厚 滤 纸 （ 已用 转 膜 液 浸 泡 ） 之 间 ，赶 尽 气 泡 ，常 温 下 半 干 转 印 ，转 印完 成 后 将 Ｐ ＶＤＦ 膜用 ＴＢ Ｔ （ Ｓ１ Ｔｕｅ２ Ｓ ＴＢ －％ ｅｎ ０溶 液 ） 冲 洗 ，５ ％ 脱脂 奶 粉 溶 液 室 温封 闭 １２ 。与 一 抗 （ 抗 小 鼠 —ｈ 兔 ｅ ＮＯＳ抗 体 ，稀 释 度 为 １：４ ０ ４ 孵 育 过 夜 ， ０） ℃ ＴＢ Ｔ洗 脱 ３次 ，每次 至少 ５ ｎ 再 与 二抗 （ 性 Ｓ ｍｉ； 碱 磷 酸酶标 记 的羊 抗兔 ＩＧ 抗体 ，稀 释 度 为 １：２０ ｇ ０） 室 温 孵 育 ｌ ，ＴＢ Ｔ 溶 液 洗 脱 ３次 ，每 次 至 少 ｈ Ｓ ５ ｎ ｍｉ；ＮＢ ／ Ｃ Ｐ显色 ；扫 描 电泳 条 带 输 入 电脑 ， ＴＢＩ
３ ．免疫 印迹检 测 步骤 分别 取胚 龄 １ 、１ 、 １ｄ及 新 生 鼠 肾脏 称 重 ， ４ ６ ８ Ｐ Ｓ冲洗 ，迅速 置 于 液 氮冷 冻 ， 一７ ℃冰 箱 保 存 。 Ｂ ０ 取冷 冻 肾组 织 ，加 入 ３倍 体 积 的 细胞 裂 解 液 ，０Ｃ ＂
基 中。于烧杯上用 ２０目不锈钢网和注射器内管磨 ０
维普资讯
第 １ 卷第 ２ ７ 期
２０ ０ ８年 ４月
中 国 组 织 化 学 与 细 胞 化 学 杂 志
ＣＨＩ ＮＫ￣ Ｊ Ｅ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＳＩ 舶哐 Ｍ Ｉ ＴＲＹ ＨＩ ． ｏＣ Ｓ ＡＮＤ Ｙ
Ｖｏ ． ７ Ｎｏ ２ １１ ． ． Ａｐ ． ０ ８ ｒ２０
搓 组 织 （ 断用 Ｐ Ｓ冲洗 ） 不 Ｂ ，制 备 单悬 细胞 于烧 杯 中。静 止 １ｍｉ，吸取 上层 混 浊液 。将 其 ２０ ｒｍ ０ ｎ ００ｐ 离心 ５ ｎ ｍｉ，倒 去 上 清 。 加 ｌ Ｂ 洗 一 次 ， ｍｌＰ Ｓ ２０ ｒｍ 离 心 ５ ｎ ０ ０ｐ ｍｉ，倒 去 上 清 。加 ｌ Ｂ ｍｌ Ｓ洗 一 Ｐ
学在读博士研究生 ，组织 化学 实验师 。
＊通 讯 作 者 （ ｏ ｃｒｅｐ ｎ ｅ ｃ ｏ ｌ ｅａｄｅｓｄ Ｔｏｗｈ ｍ ｏｒｓｏ ｄｎ ｅｓ ｕｄｂ ｄ ｒｓｅ ） ｈ
上 清 。加 ０ ２ Ｔ ｉ ｏ－０ １０ １和 兔 抗 小 鼠 ． ｒｓ ｎ１ ０ ０￣ ｔ ｅ ＮＯＳ抗 体工 作 液 ５＞，悬 起 细胞 ，室 温避 光 孵 育 ０１ ２ ｎ ００ｐ 离 心 ５ ｎ ０ｍｉ。２ ０ｒｍ ｍｉ，倒 去 上 清 ；加 ｌ ｍｌ Ｐ Ｓ洗 一 次 ，２０ｒｍ 离 心 ５ ｎ Ｂ ００ｐ ｍｉ，倒 去 上 清 。加 荧光 二抗 工作 液 ４ ，悬 起 细 胞 ，室 温 避 光 孵 育 ０ｌ
细胞 裂 解 液 、Ｐ ｗｅＰ ｃ３ ０ ｏ ｒ ａ ０ ０电 泳 仪 、Ｔｒｎ －ｌｔ ａ ｓｂｏ Ｓ Ｄ半 干转 膜仪 （ 国 ＢｏＲ ｄ公 司 ） 美 ｉ－ ａ ，流 式 细胞 仪 （ 国 Ｂ 美 Ｄ公 司）
用光密度分析软件分析电泳条带光密度［ ］ ２ 。
４ ．流式 细胞 仪检 测步 骤 新 鲜 组织 （ 少 ０５ 至 ．ｍｍａ ）保 存 在 １４ ６０培 养
（０ １ ３ｇ）肾 组 织 蛋 白 细 胞 裂 解 上 清 液 ，加 入 １＞ ０１ Ｓ ＤＳ样 品缓 冲液 ， １０ ０ ℃加 热 ３ ｎ ｍｉ，离 心 。取上 述
（ 收稿 日期］２ ０－７０ （ 回日期］２ ０ —１０ ０ ７０ －２ 修 ０ ７１ －２ （ 基金项 目］辽宁省教育厅资助项 目 （０ ７ １ １ ２０ １ ７ ） ［ 作者简介］包翠芬 ，女 （ ９ ２年） １７ ，汉族 ，辽宁 中医药 大
次 ，大 约 １ ０ｅ ｅ ｔ ０ ０ ｐ 离 心 ５ ｎ ×１ ｖ ｎ ，２ ０ ｒｍ ｍｉ ，倒 去
下剪碎 、匀浆 ，将组 织 匀浆 液静 置 ３ｍ ｎ ＂ ０ ｉ，４ Ｃ， １ ０ ０ ｐ 离 心 １ｍｉ ，留取 上 清 液 。用 Ｂ ａ ｆｒ ２０ｒｍ ０ ｎ ｒｄ０ｄ 法测 定蛋 白含量 ，分 装成 每离心 管 中含 ｌ 蛋 ０ｇ 白，－２ ℃冰箱保 存 。 － ０ 配 制 １ 分 离 胶 和 ５ 浓 缩 胶 ， 取 ｌ ０ ％ ０ｇ
１ ．实验 动物 与分 组 取 成年 昆明小 鼠 （ 宁医学 院 实验 动物 中心提 辽 供） 。按 小 鼠孕 期 随机 分 为 Ｅ ４ Ｅ ６ １ １ 、 １ 、Ｅ ８及 Ｐ ０
组 ［ 。每组 １ １ ］ ０只 ，共 ４ ０只 。
２ ．主要试 剂及仪 器 兔 抗小 鼠 ｅ ＮＯＳ单克 隆抗体 （ ＡＮＴＡ公 司） Ｓ ，