碘化丙啶PI染色液(50ugml)
PI染料（碘化丙啶,PropidiumIodide）
PI染料（碘化丙啶,PropidiumIodide）PI 染料(碘化丙啶, Propidium Iodide)PI 染料(碘化丙啶, Propidium Iodide)描述：PI (碘化丙啶, Propidium Iodide)是⼀种可对DNA染⾊的细胞核染⾊试剂，是⼀种溴化⼄啶的类似物，在嵌⼊双链DNA后释放红⾊荧光。
尽管PI不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜⽽对核染⾊。
PI经常被⽤来与Calcein-AM、Hoechst 33258或 Hoechst 33342等荧光探针⼀起使⽤，能同时对活细胞和死细胞染⾊。
常⽤于细胞凋亡(apoptosis)或细胞坏死(necrosis)的检测，常⽤于流式细胞仪分析。
性质中⽂名称：3,8-⼆氨基-5-[3-(⼆⼄基甲氨基)丙基]-6-苯基啡啶⼆碘；碘化丙啶英⽂名称：3,8-Diamino-5-[3-(diethylmethylammonio)propyl]-6-phenylphenanthridini-um diiodide；Propidium iodide；Propidium diiodide；PI分⼦式：C27H34I2N4分⼦量：668.39CAS：25535-16-4纯度：≥95%（HPLC）PI-DNA较⼤激发波长：535 nmPI-DNA较⼤发射波长：615 nmRNA酶;核糖核酸酶A（⽜胰）DMPA运输与保存⽅法：冰袋（wet ice）运输。
4 ºC避光保存。
使⽤⽅法1.⽤PBS或适当的缓冲液制备10～50µM的PI溶液。
2.将1/10培养基体积的PI溶液加⼊到细胞培养基中（也可以⽤1/10浓度的 PI缓冲液代替培养基）。
3.在37℃培养细胞10～20分钟。
⽤PBS或合适的缓冲液洗涤细胞两次。
4.⽤535nm激发波长，615nm发射波长的滤光器的荧光显微镜观察细胞。
苏丹⿊染⾊液琼斯亮绿染⾊液天狼星红染⾊液⿊⾊素染⾊液肥⼤细胞染⾊液Van Gieson染⾊液核固红染⾊液纤维素染⾊液⾼铁⼆胺-爱先蓝（HID-AB）染⾊液钙盐染⾊液酸性磷酸酶染⾊液幽门螺杆菌染⾊液铜盐染⾊液微⽣物染⾊液吉姆萨染⾊液瑞⽒-吉姆萨染⾊液抗酸染⾊液荚膜染⾊液异染颗粒染⾊液麦格⽒染⾊液⼄型肝炎病毒染⾊液(地⾐红型)鞭⽑染⾊液乳酸棉酚蓝染液芽孢染⾊液(Moeller型)细胞染⾊液上⽪组织染⾊液迪夫快速细胞染⾊液⽹织红细胞染⾊液组织固定液脱钙液脱蜡透明液浸腊脱蜡透明液瑞⽒吉姆萨染⾊试剂盒TIMM染⾊试剂盒甲苯胺蓝O (toluidine blue O)TBO染⾊液氯化⾦溶液Gomori ⽒改良醛复红阿尔⾟蓝染⾊试剂盒FAA固定液FAA固定液(原位杂交⽤）20⽚⿊⾊原位杂交湿盒防脱⽚载玻⽚⼩编：wyf 07.20。
流式细胞仪应用——利用PI检测细胞周期和细胞凋亡(Apoptosis)
流式细胞仪应用——利用PI检测细胞周期和细胞凋亡(Apoptosis) 本文主要讲述PI单染检测细胞周期和细胞凋亡(Apoptosis)PI（碘化丙啶）染色特点：一是能够与双链DNA/RNA螺旋的大沟部位结合，二是不能通过功能正常的完整细胞膜。
基于以上特性，目前主要有两大方面的应用，配方也不同：细胞周期和细胞凋亡(Apoptosis)一方面的应用是检测细胞周期，检测细胞周期时，为了保证所有的细胞都能染上PI，因此要将细胞用乙醇固定，并加入Triton X-100 ，以增加膜的通透性；同时由于DNA使细胞的粘附性增大，加入EDTA以降低细胞粘附性；为了消除RNA的干扰，要加RNAase。
由于要鉴定DNA含量，因此PI染料必须过饱和，所以PI终浓度很高，一般50ug/mL。
由于晚期凋亡细胞DNA断裂形成亚二倍体峰，因此可同时检测凋亡。
另一方面的应用是检测膜通透性（凋亡），由于PI不能进入完整的活细胞膜，因此一般认为PI染色阳性的细胞是死细胞。
Annexin V/PI 凋亡检测试剂盒中就是这种染液，它的作用是鉴定死细胞，从而与凋亡细胞区分开来。
它的配制就是将PI溶于PBS，终浓度较低，一般2.5ug/mL。
所需试剂：1、PI染液：用于检测细胞周期的PI配制如下：方法一：10×PI配制方法,用时用PBS稀释至工作液：5mg-----PI0.1ml---Triton X-1003.7mg--EDTA10ml----PBS2、RNaseA——2mg方法二,直接配制PI工作液：PI -----5mgRNaseA——2mg1.0%Trition X-100——0.25ml枸椽酸钠——100mg生理盐水——65ml调pH值至7.2-7.5加蒸馏水至100ml, 棕色瓶分装，保存在4℃操作步骤1.细胞培养铺细胞至6孔板或者35mm培养皿，约4－5*10e5 cells/well, 如果要加药物，在此时可以加以不同种或不同浓度的药物。
100PI染色液使用说明书
100×PI染色液使用说明书货号：SL7091规格：1ml保存条件：-20度保存，有效期1年。
产品内容：产品内容SL7091100×PI染色液（1mg/mL）SL7090-1ml说明书1份产品简介：碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）是一种常用的细胞核荧光染料，作为一种溴化乙锭（EB）的类似物，能够嵌入碱基之间实现与DNA结合。
这种结合没有或者几乎无序列倾向性，大约每4-5个DNA碱基对结合一个染料。
PI也能与RNA结合，需要用核酸酶处理来区分DNA和RNA染色。
水溶液中PI的最大激发/发射波长是493/636nm。
一旦与核酸结合，荧光信号明显增强20-30倍，最大激发波长向红色波段迁移~30-40nm，最大发射波长向蓝色波段迁移~15nm，从而使其最大激发/发射波长变为535/617nm。
PI的摩尔吸光系数相对比较低，但是其具有足够大的斯托克司频移来同时检测核酸DNA和荧光标记抗体，只需要使恰当的滤片。
PI适用于荧光显微镜，共聚焦显微镜，流式细胞仪以及荧光计分析。
PI不能穿透细胞膜而被排斥在活细胞外，但是可以穿过破损的细胞膜而对核染色。
利用这一特性，通常与Calcein-AM、Hoechst33258或Hoechst33342等活细胞荧光探针一起使用，同时对活细胞和死细胞染色和鉴定，用于细胞凋亡相关的研究。
也可以用作多重荧光染色的复染剂，兼容于各种细胞标记技术，包括直接或者间接的荧光抗体检测，mRNA原位杂交，细胞结构特异性的荧光探针检测法以及组织染色。
PI 的单独染色也可以进行细胞周期的检测。
使用说明：可以用PBS稀释到1×使用，或与细胞悬液按照1:100的比例使用。
PI染色操作步骤1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中，离心，1500rpm,5min，弃上清液。
2、加入PBS1ml离心洗涤1次，弃上清。
3、加入2ml预冷的70%酒精，4℃固定30min，或是-20℃固定过夜。
PI 细胞活性染色试剂对细胞进行检测 (1)
细胞损伤率的测定取培养至对数生长后期的待测菌液，加入2 MIC的大蒜提取物-茶多酚复合物，以蒸馏水代替提取物作为对照组。
37 ℃下150 r/min 摇床培养2 h，3000 r/min离心5 min弃上清，用生理盐水洗涤菌体两次并用生理盐水重新悬浮于同体积的碘化丙啶（propidine iodide，PI）染液中（PI 终浓度为50 μg/mL），置于4 ℃避光孵育30 min后，离心，PBS洗去多余的PI ，再用1 mL PBS重悬，过300目筛后上流式细胞仪检测PI 染色率。
设置未经PI 染色的菌悬液为阴性对照，以经过热处理（70 ℃，10 min）后染色的菌悬液为阳性对照。
原理：PI 细胞活性染色试剂对细胞进行检测。
PI是一种阳离子核酸染料，正常情况下不能进入具有完整细胞膜的活细胞，只有细菌在死亡或凋亡的情况下，生物膜的完整性被破坏后，PI才能掺入细胞的双链核苷酸中。
进入细胞内的PI增多，荧光强度就会增强，根据发出荧光的强弱即PI 染色率即可判断其细胞膜受损伤的程度，从而间接反映细胞的损伤状态。
（2013现代食品科技）脂肪酸组成的测定按照MIDI微生物快速鉴定系统说明书进行。
脂肪酸作为细菌细胞膜的重要组成成分对外界环境的变化十分敏感，常被用作评估微生物生存状态的指标[11]。
细胞膜的膜脂结构对于维持细胞膜的功能及对细胞的生长繁殖也有着十分重要的作用。
而细胞的膜脂结构与所含脂肪酸成分密切相关，脂肪酸组成的改变必然会影响相关膜蛋白活性和膜功能[12]。
通常细胞膜中的不饱和脂肪酸组分多少是与细胞膜的流动性相关的，饱和脂肪酸含量高，则会降低细胞膜的流动性。
细胞膜的流动性是膜结构的基本特征之一，其改变可严重影响细胞功能特性和凋亡通道的诱导效应[13]。
流式细胞术测定细胞周期
流式细胞术测定细胞周期一、实验原理碘化丙锭（PI）可以与细胞内DNA和RNA结合,采用RNA抑制剂将RNA 消化后,通过流式细胞术检测到的与DNA 结合的PI的荧光强度直接反映了细胞内DNA 含量的多少。
由于细胞周期各时相的DNA 含量不同,通常正常细胞的G1/G0期具有二倍体细胞的DNA含量(2N),而G2/M期具有四倍体细胞的DNA 含量(4N),而S期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间。
因此,通过流式细胞术PI染色法对细胞内DNA含量进行检测时,可以将细胞周期各时相区分为G1/G0期,S期和G2/M 期,并可通过Multicycle软件计算各时相的百分率。
值得注意的是, PI不能通过细胞膜完整的细胞(如活细胞和早期凋亡细胞) ,在标本制备时,必须先用乙醇或其他破膜剂增强细胞膜的通透性,才能使PI进入细胞内与细胞内的核酸结合。
乙醇通常为终浓度为70%的冷乙醇。
二、实验准备1、试剂胰酶、PBS、纯乙醇（4℃）、RNase A、Triton X-1002、主要器材300目尼龙过滤网三、实验步骤1、每个样品细胞数不得少于100万。
2、胰酶消化，收集细胞（贴壁细胞）或1000rpm离心5分钟直接收集细胞（悬浮细胞）。
3、4℃ PBS洗一次，将细胞重悬于0.3ml 4℃ PBS，加入0.7ml 4℃的纯乙醇，将枪头伸入液面下，轻轻打入乙醇，轻柔混匀两次，4℃固定过夜。
4、1000rpm离心5分钟，去上清，加入染色缓冲液PI染色缓冲液：50 μg/ml PI0.1 mg/ml RNase A0.05% Triton X-100总体积1ml/样品，37℃孵育40分钟。
5、1000rpm 离心5分钟，小心去除上清，加入1ml PBS，轻柔混匀，300目过滤，上机检测。
细胞周期的流式检测方式技巧
细胞周期的流式检测方法细胞周期（cell cycle）是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程，分为G0/G1期、S期、G2/M期。
在科研实践中，很多实验具有对细胞群体的周期分布进行检测的需求。
细胞群体周期测定的方法有很多种，最常用的是PI（碘化丙啶）渗入DNA进行染色，然后通过流式细胞仪检测PI从而测定细胞群体的周期分布。
因此，下面笔者主要通过BD（Becton＆Dickinson）公司生产的BD FACSCalibur流式细胞仪测定PI标记的细胞群体为例，对细胞周期的流式检测方法进行阐述。
一、PI染色步骤概略1、单细胞悬液离心，1500rpm , 5min，弃上清。
2、PBS 1ml离心，弃上清。
3、70%酒精2ml，4℃，30min，离心，弃上清液。
4、PBS 1ml离心，弃上清。
5、RNase A的PBS溶液(20ug/ml)，500ul，37℃，30min，离心弃上清。
6、PBS 1ml离心，弃上清。
7、PI的PBS溶液(50ug/ml)，500ul，室温避光孵育30min。
8、吹打混匀，300目筛网过滤至流式管中，4℃保存，待测。
二、Calibur仪器设置及数据收集1、依次打开Calibur机器电源、电脑开关和CellQuest Pro软件，按快捷键Command+B连机，按快捷键Command+1、2、3、4调出Detectors/Amps面板、Threshold面板、Compensation 面板和Status面板，软件的操作界面如图1所示。
图1. Cell Quest Pro软件操作界面2、建立实验模板，包括FSC/SSC散点图、FL2-W/FL2-A散点图和FL2-A直方图。
因为PI 在Calibur上是由488nm的激光器激发，530/30滤光片收集信号，所以选择FL2通道进行检测。
细胞周期是2N和4N的循环，所以FL2通道的Mode参数应设置为Lin模式，同时阈值（Threshold）的Primary Param参数设置为FL2-H，Four Color DDM Param参数设置为FL2，如图2、图3所示。
整理)流式细胞检测细胞周期
流式细胞检测细胞周期一、所需试剂1、细胞周期检测试剂盒（1）PI：Propidium Iodide，碘化丙啶，是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，它是一种溴化乙啶的类似物，在嵌入双链DNA后释放红色荧光，如果自己买，那就10mg用200mlPBS 溶解，4℃避光保存（0.05mg/ml）（2）RNAase：PI既能与DNA结合，又能与RNA结合，所以要用RNase降解，如果自己买，那就100mg用20mlPBS溶解，200μl分装-20℃避光保存（5mg/ml）2、预冷70%-75%酒精：可用无水乙醇和纯水配制3、预冷PBS4、流式管：可以去医研中心拿二、实验步骤<一>、细胞处理1、种板处理等同功能实验（保证细胞有2-5×10*5个）2、消化细胞，离心(1000r/300g 5min)收集细胞沉淀。
3、用预冷的PBS清洗细胞1-2次。
4、离心(1000r/300g 5min)收集细胞沉淀5、固定细胞：用0.2ml预冷的PBS重悬细胞沉淀，使细胞充分悬浮成单细胞，再将重悬细胞加入2ml预冷70-75%酒精，震荡，4℃固定过夜。
（直接向细胞加入酒精容易使细胞成团，震荡不要过猛，容易使细胞破碎）<二>、细胞染色和检测1、离心（1000r/300g 5min）收集固定的细胞2、2mL的预冷PBS洗细胞一次，离心再次获取细胞沉淀3、染色：加入50μlRNA酶和250μl-450μl PI染色剂（用量根据试剂盒说明书），避光染色5-10min（一般加300μl，保证适当细胞浓度，浓度太高检测速度太快，结果不准；浓度太低检测速度太慢，时间太长）4、上机检测三、注意事项1、流式细胞仪原理看ppt非荧光信号（1）前向角散射光（FSC Forward scatter）细胞相对大小及其表面积（2）侧向角散射光（SSC side scatter）细胞颗粒度及细胞内细胞器的相对复杂性2、PI(碘化丙啶)不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。
Calcein PI细胞活性与细胞毒性检测试剂盒说明书
Calcein/PI 细胞活性与细胞毒性检测试剂盒产品简介：碧云天生产的Calcein/PI 细胞活性与细胞毒性检测试剂盒(Calcein/PI Cell Viability/Cytotoxicity Assay Kit ，或Calcein/PI Live/Dead Viability/Cytotoxicity Assay Kit)是一种非常便捷的基于Calcein-AM (钙黄绿素)和PI (碘化丙啶)双荧光染色法检测动物细胞死活的试剂盒。
本试剂盒使用便捷，荧光染色和检测仅需约30分钟。
本试剂盒染色30分钟后，就可进行后续的荧光显微镜拍照、流式分析或者荧光酶标仪定量等荧光检测和分析。
本试剂盒的原理是两种探针可分别检测细胞内酯酶活性和细胞膜完整性，从而反映细胞活性与细胞毒性。
其中Calcein AM 染色活细胞，呈现绿色荧光；而碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)染色死细胞，呈现红色荧光。
本试剂盒用于检测动物细胞活性与细胞毒性效果参考图1。
图1. Calcein/PI 细胞活性与细胞毒性检测试剂盒用于HT-29(人结肠癌细胞)细胞活性与细胞毒性检测的效果图。
HT-29细胞(C6410)在明场视野下仔细观察可以看到有明显的坏死细胞(图A)；绿色荧光标记的即为Calcein 染色的活细胞(图B)，红色荧光标记的即为PI 染色的死细胞(图C)；Calcein和PI 双染叠加(merge)后可以非常清晰地观察到活细胞和死细胞的荧光染色差别(图D)。
在本实验中，HT-29细胞经TSZ 处理4小时。
TSZ 为TNFα、SM-164和Z-V AD-FMK 组成的细胞程序性坏死诱导试剂(C1058)。
实测数据会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
Calcein AM (Calcein Acetoxymethyl Ester ，中文名称为钙黄绿素AM或钙黄绿素乙酰氧基甲酯)，是一种可以对活细胞进行荧光染色的细胞染色试剂，Calcein AM 是在Calcein (钙黄绿素)的基础上增加了乙酰氧基甲酯(AM)基团，加强了疏水性，因此能够很容易穿透细胞膜。
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碘化丙啶PI 染色液(50μg/ml)
简介：
碘化丙啶染色(PI stain)可以对细胞周期与细胞凋亡进行分析。
碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种可以嵌合到双链DNA 和RNA 的碱基对中并与之结合的荧光染料，无碱基特异性。
细胞凋亡时，流式细胞检测可呈现亚二倍体核型的特征，根据光散射的特点，PI 染色可以区分细胞凋亡和细胞坏死的细胞峰型。
细胞凋亡时，出现凋亡细胞皱缩、染色质浓缩、核碎裂，产生凋亡小体，使细胞的前向光散射低于正常。
在细胞凋亡的早期，细胞对前向角光散射的能力显著降低，对侧向光散射的能力增加或没有变化。
在细胞凋亡的晚期，前向和侧向光散射的信号均降低。
细胞坏死时细胞多表现为细胞肿胀，因此前向光散射高于正常，对侧向光散射高于正常。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、细胞样品的制备：
⑴贴壁细胞：
① 离心使细胞沉到管底。
小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl 培养液，以免吸走细胞。
② 加入约1ml 提前预冷的PBS ，重悬细胞，并转移至1.5ml 无菌离心管。
③ 离心使细胞沉到管底。
⑵悬浮细胞：
① 离心使细胞沉到管底。
② 小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl 培养液，以免吸走细胞。
③ 加入约1ml 提前预冷的PBS ，重悬细胞，并转移至1.5ml 无菌离心管。
④ 离心使细胞沉到管底。
⑤ 小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl PBS ，以免吸走细胞。
2、细胞的固定：加入1ml 冰浴预冷70%乙醇中，轻轻吹打混匀，4℃条件下固定2h 或更长时间。
4℃固定12～24h 可能效果更佳。
3、细胞的清洗：
① 离心使细胞沉到管底。
② 小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl 溶液，以免吸走细胞。
编号 名称 DA0022 Storage PI Stain(50μg/ml) 10ml -20℃ 避光 使用说明书 1份
③加入约1ml提前预冷的PBS，重悬细胞，并转移至1.5ml无菌离心管。
④离心使细胞沉到管底。
⑤小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl PBS，以免吸走细胞。
⑥轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。
4、PI染色：在每个待检细胞样品中加入500μl配制好的PI染色工作液，轻轻重悬细胞沉
淀，置于避光水浴。
5、检测与分析：用流式细胞仪在激发波长488nm波长处检测红色荧光，同时检测光散射情况。
采用适当分析软件进行细胞DNA或RNA含量分析和光散射分析。
染色结果：凋亡细胞G1峰左侧出现亚二倍体细胞群的峰型，在光散射谱上，前向光散射低于正常，侧向光散射高于正常。
注意事项：
1、荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽快检测。
2、为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。
3、在为了获得细胞沉淀的离心的过程中，对于特殊细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当
提高离心力或延长离心时间。
4、PI对人体有一定刺激性，请注意适当防护。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。