李金明 个体化医学检测质量保证指南 简
李金明-临床分子诊断质量保证
实验室仪器设备及管理
加样器：维护、校准 扩增仪：维护、校准 杂交仪：维护、校准 测序仪：维护、校准 芯片扫描仪：维护、校准 恒温干浴仪或水浴箱：维护、校准 离心机：维护 生物安全柜：维护 冰箱：维护
理想的试剂
试剂方法的性能验证及每批试剂的质检 性能指标：
重复性 准确性（定量：回收率、标准物质等；定性：方法学比较等） 线性范围（定量） 分析特异性 测定下限 抗干扰能力
CLIA uses the term “verification”： specifically to relate to confirmation that the laboratory using a test can replicate the manufacturer’s performance claims when the test is used according to the package insert. （CLIA 性能验证术语特指使用某特定检测试剂或系统的实验室按 照所提供的试剂盒或检测系统说明书使用时，能复现生产 厂家所宣称的检测性能。）
自建方法和自配试剂
有严格的试剂制备SOP 建立相应的性能指标：重复性、准确性、特异
性、测定下限和抗干扰能力等 应做成一个试剂盒的样子：名称、方法、制备
日期、制备人、有效期等 有使用说明书
实验室质量管理的“灵魂”
标准操作程序（SOP）是实验室的“最高标准”！
SOP等于试剂盒说明书吗？
源于一些标准文件（如仪器试剂说明书、国际国内标准文件） 和实验室实际工作经验积累。 因此高于相关标准文件！！！
[Luminex]）
PCR-Sanger测序
PCR-焦磷酸测序
PCR-新一代测序？
PCR-SSCP、RFLP、dHPLC等
李金明
技 术 委 员 会 委 员 ，中 国输 血 协 会 专 家 委员 会 成
员 ，中 国 医 院管 理 协 会 临 床 检 验 专 业 管理 委员 会 委 员 ，卫 生 部 临床 检 验 标 准 化 委 员 会 委 员 ， 国家认 可委 标准 物质 ／ 准样 品委员会 委员 ，中 标 南 大学湘 雅 医学 院兼 职教 授等 学术 职务 。 李 金 明研究 员 率 先在 国内开 展 Ｉ 核 酸检 验 的质 量控 制 和标 准 化工 作 ，长 期从 事 临床 分 子诊 断 方法 临床
都 医学 发展科 研基 金课 题 １ ；作 为分课 题负 责人 承担 欧盟第 六框 架计 划 （Ｐ ） 项 Ｆ ６ 国际合 作研 究项 目、科技
重大专项、 “ 十五”攻关 、国家科技基础条件平 台建设项 目等多项课题。主持和主要参与项 目分获 ２０ ０１ 年 、２０ 年和 ２ ０ 年北京市科技奖和中华医学科技奖三等奖。以第一作者 、通讯作者发表论文 １０ ０３ ０８ ０ 余
・
专 家风 采 ・
李金明
李金 明， 《 分子诊 断与治疗杂志 》第 一届
编辑委 员会 副主 编 。
１６ 年 ２ ９３ 月出生。１９ 年毕业于中国协和 ９３
医科大 学 ，获博 士学位 。
中 国 医学 科 学 院北 京 协 和 医 学 院博 士 生 导
师 ，享受 国务 院政府 特殊津贴 。现任卫生部临 床检验 中心临床免疫室主任 ，研究员 ，兼 任国 际临床化学协会 （Ｆ Ｃ） ＩＣ 分子诊断委员会委员 ，
及标准化研究 ，负责全国医院和血站实验室感染性疾病临床免疫学和 Ｐ Ｒ检验 ，以及 自身抗体免疫检验 Ｃ
临床免疫测定的质量控制及结果的可比性-李金明
AF-CDC
AF-CDC AF-CDC
抗PM/Scl 抗体
抗SSA/Ro抗体
ANA#11（2310）
Lot#C103BG 滴度1:4~1:32
AF-CDC
CAP
乙型肝炎表面抗原国家标准物质
项目 研制者 发布年 编 号 浓 度 （IU/ml)
临床免疫测定的质量控制 及结果的可比性
李金明 卫生部临床检验中心
《卫生部办公厅关于医疗机构间医学检验、医学 影像检查互认有关问题的通知》（卫办医发 〔2006〕32号）
•
•
对于参加国家级质量控制和省级质量控制的、 稳定性好、质量比较容易控制和费用较高的检 查项目，应当组织辖区内有条件的医院间逐步 开展检查互认工作。 对于参加国家级质量控制的检查项目，有条件 的省、自治区、直辖市之间可以探索开展检查 互认；参加省级质量控制的检查项目，可以在 本省、自治区、直辖市范围内实行检查互认。
实验室设施、仪器设备及管理
实验室空间及工作流程的设计 实验室环境条件的控制：温湿度控制设 备、稳压或不间断电源 仪器设备及管理：酶标仪、洗板机、全 自动免疫分析仪、加样器等应建立技术 档案，并定期维护和校准
实验室环境条件的控制和监控
实验室温度和湿度的记录及其意义 温度和湿度计的放置
实验台（仪器设 备）
定量测定的标准物质
项目
人血清补体C1q, C4, C5, B因子，和总功能补体 CH50 人血清免疫球蛋白G，A和M(IgG, IgA and IgM) 人血清免疫球蛋白E 甲胎蛋白（AFP）
/pr oducts
编 号
高通量测序技术临床应用的质量管理与标准化(李金明)
高通量测序技术临床应用的质量管理与标准化李金明国家卫生计生委临床检验中心全国cfDNA检测标准化高峰论坛2016.11.23-24 长沙基因测序技术的发展●1953年：DNA双股螺旋的发现（英国剑桥大学James Watson 和Francis Crick ）●1965年：酵母tRNA测序（美国Comell大学Rober Holley，小片段重叠法）●1971年：λ噬菌体两个粘性末端的完整序列（吴瑞博士，华裔分子生物学专家，引物延伸测序）●1975年：加减法DNA测序（英国剑桥大学Fred ）●1977年：Sanger测序（英国剑桥大学Fred Sanger）和Maxam-Gillbert DNA化学降解法测序(美国哈佛Alan Maxam &Walter Gilbert）●1996年：焦磷酸测序（瑞典皇家技术研究所Ronaghi M等）●2005年:Genome Sequencer20新一代测序仪(大规模并行焦磷酸合成测序法，454life Science公司的创始人Jonathan Rothberg)●2007年:454、Solexa公司和Agencourt（SoliD测序仪）公司分别被Roche、illumina和ABI公司收购。
新一代测序技术（next-generation sequencing）2007年被Nature Methods评为生物领域影响力最大的技术精准医学不等于高通量测序高通量测序是目前精准医学实践最为成熟的支撑技术高通量测序技术的临床应用●染色体非整倍体无创产前筛查（NIPT）●胚胎植入前遗传学筛查（Preimplantation GeneticScreening，PGS）和胚胎植入前基因诊断（Preimplantation Genetic Dignosis，PGD）●肿瘤靶向治疗基因突变检测●单基因遗传病检测●病原微生物检测：如HPV基因分型、宏基因组（Metagenomics）测序●┈┈高通量测序技术临床应用的质量管理与标准化●国家卫生计生委医政医管局高通量测序临床应用试点实验室：评审标准、评审、试点实验室基本要求、管理试点实验室●2015年增加质评调查：全国肿瘤诊断与治疗高通量测序检测●2016年新增质评计划：染色体非整倍体（21、13、18）无创产筛●2016年质评调查：肿瘤游离DNA（ctDNA）检测●2017年正式开展：全国肿瘤基因突变高通量测序（组织样本）检测质评计划批准的第一批四个专业的试点单位全面质量管理？●写你所应做的●做你所写的●记录你已做的●分析你已做的以ISO的标准如ISO15189为标志的！标准化？标准化是对实际与潜在的问题作出统一规定，供共同和反复使用，以在预定的领域内获取最佳秩序和效益的活动。
临床PCR实验室的设计及质量管理体系的建立 李金明
临床PCＲ实验室得设计及质量管理体系得建立卫生部临床检验中心李金明核酸（DＮA与ＲNA）就是生命现象得基础。
小到病毒、细菌等微生物,大到动植物与人类，都无一例外.因为主导生命活动得受体、细胞因子、酶、激素等均不过就是核酸发挥功能作用得表型,均由核酸决定，在核苷酸序列上哪怕就是单个碱基得变异，都会引起表型得完全改变,并进而影响生命功能得发挥，导致疾病得发生。
因此,在核酸或称为基因水平上检测,对临床疾病本质得揭示就要更深一步。
也正因为核酸就是生物体生命活动之源,对于感染性病原体得检测,从核酸着手,最能反映病原体在机体内得出现与消长．自从美国Ceｔｕs公司Mullis博士在19８3年发明聚合酶链反应（PＣR)这种核酸扩增技术以来，由于其极高得检测灵敏度与特异性，因而在临床感染性疾病、遗传病、肿瘤等得诊断与疗效观察上得到了广泛得应用,在器官移植得基因配型上也就是难以替代得技术。
其应用大大提高了上述疾病诊断得准确性与快速性.但临床PＣR检验必须按规范要求进行,并有严格得实验室质量管理,否则,因其极高得检测灵敏度,实验室稍有以前扩增产物得污染，或在标本核酸提取过程中标本间得交叉污染,均可导致假阳性结果得出现。
同时，也会因为试剂与实验消耗品得质量不过关、仪器设备得维护校准不到位，或操作得不规范等,也很容易出现假阴性结果．第一节临床PCR实验室得分区规划设计如何规划设计一个合格得实验室就是每一个临床PCR实验室首先要遇到得问题，因为一个实验室一旦经过设计并完成装修,如不符合要求,则会出现很大得麻烦，甚至不得不拆了重来。
那么怎样才能设计一个合格得实验室呢？简单地说,就就是十六个字,“各区独立、注意风向、因地制宜、方便工作"．同时要注意临床标本得接收问题。
对于临床ＰCR实验室得分区及其设备配置,卫生部颁发得《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》(卫医发[20０２］10号）中作了明确规定,并且卫生临床检验中心发出得配套文件《临床基因扩增检验实验室工作规范》（卫检字[20０２]８号）又对各区得功能及注意事项作了阐述。
1. 李金明-个体化医学检测实验室规范化管理(简)
HLA-B*5701 PML/RARα
抗病毒 TPMT
风湿病
肌肉骨骼疾病 精神类疾病 神经系统疾病
卡利普多
西酞普兰、安定 氯巴占 克拉匹多、普拉格雷、替格瑞洛 右兰索拉唑、艾美拉唑、奥美拉唑、泮托拉唑、雷贝拉唑 曲螺酮、乙炔雌二醇 伏立康唑 塞来昔布
CYP2C19
诊断医学
70%以上信息 来自实验室 分子诊断对 检验医学的 划时代意义！
个体化医疗 （personalized medicine) 精准医疗 （precision medicine） 移动医疗 数字医疗
预测
诊断
监测
预后
目前国内的临床分子诊断现状
绝大部分用于病原体核酸检测
较少部分用于遗传病的产前诊断
相关药物
波西普韦、聚乙二醇化干扰素α-2b、特拉匹韦 Brentuximab vedotin(SGN-35) 卡培他滨 卡马西平、苯妥英 阿巴卡韦 依维莫司、拉帕替尼、帕尼珠单抗、曲妥珠单抗 伊马替尼、舒尼替尼 白消安、达沙替尼、伊马替尼、尼罗替尼 克罗米芬 可唑替尼 地尼白介素 右兰索拉唑 伊马替尼 茚达特罗 伊立替康 异山梨醇、肼屈嗪 利福平、异烟肼、吡嗪酰胺 秦铭泽 来那度胺 马拉韦罗 霉酚酸 普伐他汀 苯乙酸钠、苯甲酸钠、苯丁酸钠
HER2/NEU
C-Kit Ph染色体 Rh基因型 ALK CD25 CYP1A2 PDGFR UGT1A1
结肠癌
心血管系统疾病 抗感染 肺部疾病 脊髓增生异常综合征 AIDS 移植 代谢及内分泌系统疾病 胃肠道疾病
分子诊断的概念
采用分子生物学方法（基因扩增、测序、杂交
、蛋白质组分析、代谢组学分析等）检测患者
体内特定遗传物质的结构或表达水平的变化而 做出的诊断。分子诊断的靶标包括DNA、 RNA、蛋白质和小分子代谢物。
精准“分”晓“质”证疑难浅析分子诊断的质量管理与性能验证
精准“分”晓“质”证疑难浅析分子诊断的质量管理与性能验证文章整理自国家卫健委临床检验中心李金明教授的专题讲座自1953年Watson与Crick发现DNA双螺旋结构以来，一系列分子生物学新技术相继出现，如:Sanger测序、放射性核素和非放射性核素标记技术、电泳、层析、核酸纯化、核酸液相和固相杂交、基因工程技术、限制性酶切、毛细管电泳、PCR、基因芯片、质谱、新一代测序等。
这些技术为临床分子诊断发展,提供了源源不断的动力和无限的想象空间，并在应用中不断成熟，使得分子诊断技术成为检验医学中最具活力一个的领域。
随着分子诊断技术的快速发展，其在诸多疾病诊疗中也正发挥着越来越重要的作用，逐步迈入个体化医学时代。
目前，临床分子诊断相关的方法流程中几乎都存在基因扩增环节，尽管相关主管部门从2002年开始就对临床基因扩增检验实验室进行规范化管理，提出质量保证要求，但仍存在SOP可操作性差、仪器维护校准不到位、室内质控开展过程的形式化等质量问题。
分子诊断的质量管理核心及方法检验医学为疾病的诊断、治疗、康复和预防提供实验室依据，临床检验质量对于检验医学的重要性不言而喻。
那么，分子诊断的质量管如何从“难”变“易”？现阶段，临床分子诊断具备快、多、广、高四大特点。
“快”意为“发展快”，从单个基因或单个DNA、RNA分子检测的1.0时代，现在已发展到多基因检测的2.0时代、多组学分析（基因组、转录组、蛋白质组等）的3.0时代；“多”意为“方法多”，包括了荧光PCR、PCR-杂交法、PCR-测序、PCR-SSCP、质谱、微流控芯片等；“广”意为“应用广”，分子诊断目前已经应用与病原微生物、药物基因组学、肿瘤靶向和免疫治疗、产前筛查和诊断、遗传病、罕见病等领域；“高”意为“要求高”，技术的快速发展，自然对人员、质量管理、实验室环境及仪器设备等均提出了更高要求。
质量管理的本质即为过程的管理。
通常将过程控制划分为分析前质量控制（申请单、患者准备、采血标本、标本存放和运送等）、分析中质量控制（标本测定、结果计算等）、分析后质量控制（检验结果的发出至临床应用）。
感染性疾病相关个体化医学分子检测技术指南
感染性疾病相关个体化医学分子检测技术指南前言感染性疾病是当今世界严重威胁人类健康的重大疾病，快速、准确的诊断是有效治疗、病情监测和控制疾病蔓延的重要前提。
随着分子检测技术的不断发展和完善，分子检测在病原微生物感染诊断及治疗监测上的临床应用日益广泛，已成为一些重要的感染性疾病的诊断和疗效评价中不可缺少的重要工具。
为使我国的感染性疾病分子检测临床应用健康有序发展，更好的为医患提供高质量的服务，有必要制订感染性疾病相关的分子检测技术指南，规范临床实验室相关分子检测操作程序，指导从事感染性疾病分子诊断的医务人员正确开展工作。
本指南以大量、丰富的临床实践为基础，同时消化吸取了大量国内外文献的精华，广泛征求相关学科专家的意见，遵循科学性、实用性、可行性的原则，反复修改而成。
我们衷心希望《感染性疾病相关个体化医学分子检测技术指南》能够对广大检验人员起到很好的帮助和指导作用，从而为提高感染性疾病临床诊治水平发挥积极的作用本指南起草单位：中国医科大学附属第一医院、国家卫生计生委临床检验中心本指南起草人：尚红、李金明、郭晓临、代娣、程仕彤目录1. 本指南适用范围 (3)2. 标准术语 (3)3. 感染性疾病相关的个体化医学分子检测概述 (9)4. 感染性疾病相关的个体化医学分子检测分析前质量控制 (12)4.1 标本采集 (13)4.2 标本的转运 (16)4.3 标本的接收 (17)4.4 标本的保存 (18)4.5 检验项目的选择 (19)5. 感染性疾病相关的个体化医学分子检测分析中质量控制 (20)5.1 实验室的设计要求 (20)5.2常用的分子检测方法 (21)5.3 试剂和方法的选择 (29)5.4 设备维护和校准 (36)5.5 人员培训 (36)5.6 试剂性能验证 (37)6. 感染性疾病相关的个体化医学分子检测分析后质量控制 (40)6.1 结果报告 (40)6.2 结果的解释及医患的沟通 (41)6.3 检测后标本的保存及处理 (42)7. 质量保证 (42)7.1 标准操作程序 (42)7.2 质控品 (42)7.3 室内质量控制 (43)7.4 室间质量评价 (47)8. 感染性疾病相关的个体化医学分子检测应用 (48)8.1 乙型肝炎病毒感染诊疗的个体化分子检测 (48)8.2 丙型肝炎病毒感染诊疗的个体化分子检测 (52)8.3 结核分枝杆菌感染诊疗的个体化分子检测 (56)8.4 人获得性免疫缺陷病毒感染诊疗的个体化分子检测 (57)附录 (65)参考文献 (66)1.本指南适用范围本指南由国家卫生计生委个体化医学检测技术专家委员会编订，是国家卫生计生委个体化医学检测技术系列指南之一，旨为临床实验室进行感染性疾病相关的个体化医学分子检测提供参考和指导。
定性测定的性能验证--李金明
分布)
直接概率计算方法（不呈正态分布）
室内质量控制的评价
IQC是一个集体活动，不光是对实验室一次测 定的有效性的判断，也反应了实验室测定趋势 的变化。 IQC的失控不能做为处罚的依据，应建设性的 找出失控的原因，针对其采取措施加以改进。 对IQC应定期进行评价。
50
94,050
9500/[9500+4500]=67.9% 85500/[85500+500]=99.4%
950/[950+4950]=16% 94050/[94050+50]=99.9%
样本的准备
质控品：使用商品化质控物进行，包括阴性和 阳性。
样本的采集和保存：采集时间、保存方式等必 须保证一致性。
Grayzone
5% Lower 95% Interval Cutoff
5% Upper 95% Interval
结论
临界浓度如果准确，样品重复检测应获得50%的阳性和50%的阴性结 果。 如果+20%的样本获得阳性结果的次数≥95%，并且-20%的样本获得 阴性结果的次数≥95%，那么这个范围位于或超出这种方法的95%区 间。因而，距离临界浓度≥20%的样本可用此种方法获得一致的结果。
‚批（RUN）‛的概念
在相同的条件下（地点、仪器、试剂、人员、 时间）所进行的一组测定。
定性免疫测定质控物浓度的选择
可选择S/CO值减去精密度测定中得到的三倍 批间CV（通常的ELISA测定批间变异（CV%） 在15%左右）与该S/CO值的乘积（意即三倍 SD）仍大于1的质控血清作监测重复性的室内 质控用 计算公式：S/CO（1-3CV%）=S/CO-3SD S/CO比值可在1.5~4之间。 同时选择S/CO处于1.0~1.5左右的质控血清以 判断每次测定时试剂盒测定下限的有效性。
卫生部临床检验中心李金明教授解读《精准医学与临床实验室规范化》
卫生部临床检验中心李金明教授解读《精准医学与临床实验室规范化》近日，卫生部临床检验中心临床免疫室李金明主任，为大家讲述关于精准医学与临床实验室规范化的相关内容。
近年来，精准医学是一个特别热点的话题，尤其是2015年初奥巴马提出了“精准医学计划”，希望精准医学可以引领一个医学新时代。
而在此之前我们也经常听到一个概念叫“个体化治疗”，请问您认为这两个概念有哪些区别呢？李金明：这个问题其实提的非常好。
其实在我们讲精准医学之前，有一个概念叫个体化医学，英文叫“Personalized Medicine”，精准医学叫“Precision medicine”。
其实，这两个概念是一脉相承的，并且这两个概念在内容上是完全一致的。
在2008年美国总统科学与技术顾问委员会对“Personalized Medicine”这个概念有一个专门的定义，其核心含义是根据病人的遗传背景，也就是基因检测把病人分为两类。
分类是为了药物治疗，一类可以用这个药物，而另一类不适合这个药物，减少药物副作用（安全性），节省医疗资源（经济性）。
其实在2015年1月美国总统奥巴马提出了“Precision medicine”这个概念之前的5-6年，很多杂志上已经出现过这个概念。
这个概念的核心含义是根据患者的遗传背景、生活方式、环境因素等来量体裁衣的对患者用药，也是保证有效性、安全性和经济性。
所以“Precision medicine” 和“Personalized Medicine” 这两个概念是一脉相承的。
那么为什么后来欧美的学者要推动用“Precision medicine”替代“Personalized Medicine”，一个核心的原因就是怕民众造成误解。
因为“Personalized Medicine”的前身叫“Individual medicine”，说容易让民众理解为会为每一个人准备一种药物。
那么其实不是的，是把病人分类。
用“精准医学”能够更好的阐述，不容易造成误解，这是最主要的原因。
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（4）样本运送和保存中的生物安全。
样本的采集、运送和保存（2）
（5）样本运送温度和时间的要求。DNA检测样本，可室温下运送， 建议8h内送至实验室。靶核酸为RNA时，10 min可室温运送，如所需 运送时间较长，则应将样本置于冰上，必须保证样本与冰屑充分接触， 且冰屑应达到样本的高度，建议采集后4h内送到。 冰冻组织样本最好 保证其在运送过程中不发生融化，石蜡包埋组织则可在室温下运送。
基因扩增仪器设备的质控
仪器设备
扩增仪
加样器 水浴箱 酶标仪
质控方法
频度
仪器校验实验 当仪器移动时
热电偶监测温度 每月一次
扩增功能检测 每 4 个月一次
程序打印
校准
温度检测
预防性维护 及校准
每次测定时 每年 2 次 每次实验 每年 2 次
失控标准
实验失败 如靶温度或温度 差异超出允许范 围
待测孔未出现扩 增，检测温度
（通过检查和提供客观证据证明，对一特 定预期用途的要求始终能得到满足）
The FDA and ISO terms for verification and are similar, with the distinction having to do with intended use. （性能验证和性能确认 FDA和ISO术语相似，差异在后者的“预期 用途”）
实验室应根据自己的检验项目、所采用的检测技术平台和工作量来决定分区的多 少及各区域的空间大小。
至少具体需要多少个区，同样是“个体化”的，以“工作有序、互不干扰、防 止污染、报告及时“作为基本原则。
缓冲间的功能是“控制空气的流向”。 生物安全柜可考虑“A2”。
产前筛查与产前诊断（全基因组低拷贝测序技术）
validation定义为，证明所使用的一个程序、过程、系统设备 或方法能按预期进行工作以及取得预期结果的活动（或过 程））
“validation” 通俗一点的定义
the term “validation” will be used to refer to the analytic performance characteristics that need to be initially established at the time of assay
测序区空气流向 缓冲间扩增 与检测区 空气流向缓冲间
标本与文 库制备区 空气流向
缓冲间
试剂准备区
空气流向 缓冲间
专用走廊工作流向标本与制备区 扩增与检测区测序区
植入前胚胎遗传学诊断(全基因组低拷贝测序)
电泳区 空气流向 缓冲间增一区 空气流向 缓冲间
检测
每个浓度2~3个重复检测，进行多项回归分析
分析敏感性，测定下限 CLIA不要求，但CAP要求对定量进行LOD验证， 60个数据点（例如在预计的检测下限范围内5个样本，12次重复），研究时间5天，
（LOD）研究
使用在5天内收集的20个数据点
development. （指在测定方法研发时，最 早建立的分析性能特征）
性能验证与性能确认的实际操作区别
性能指标及所建议的 研究
可报告范围, 线性范围研 究(定量检测)
要求
FDA批准的检测
实验室自建方法或自配试剂（LDT）
覆盖所述线性范围内5~7个浓度，每个浓度双份 覆盖预计测定范围内（或超出所确定的最宽的可能范围的20〜30%）7~9个浓度，
“intended use”预期用途
The term “intended use” in these documents is established by the manufacturer or developing laboratory at the time of assay development and has to do with the purpose and population for which the test was intended (e.g., diagnosis, following treatment, etc.). Relevant performance characteristics are then determined based on the intended use of the test.
使用某特定检测试剂或系统的实验室按照所提供的试
剂盒或检测系统说明书使用时，能复现生产厂家
所宣称的检测性能。）
如果不按商品 试剂盒说明书 操作或改变商 品试剂盒组份 是否可以？
可以
但属于实验室自 配试剂或自建方 法，亦即 Laboratorydeveloped tests, LDTs)
“性能确认”（“validation” ）定义
3. 所申请的检验项目； 4. 患者的相关临床资料，包括初步诊断结果； 5. 样本采集日期和采集时间； 6. 实验室接受样本的日期和时间； 7. 与检验有关的既往史等； 8. 样本是否合格：有无癌变组织、血液样本有无溶血、容
器有无破损等。 9. 医生的签名。
患者的正确识别
样本的采集、运送和保存（1）
1. 基本原则 （1）应按照CFDA批准的检测试剂说明书制订的标准操作程序
（SOP）进行。如为实验室自制试剂，则实验室应当建立样本的采集、 运送和保存的SOP，并严格执行。
（2）样本采集和运送容器：密闭的、一次性、无菌、无核酸酶及其 他扩增抑制物。血液和骨髓穿刺样本通常需要先抗凝，抗凝剂一般应 EDTA和枸橼酸盐，避免使用肝素。如检测的靶核酸为胞内RNA，试 管内应含有一定量的RNA稳定剂。
用于肿瘤组织基因突变检测的样本，在分子检 测须由病理医师进行镜下肿瘤细胞评估，然后 富集肿瘤肿瘤细胞用于核酸提取。肿瘤细胞所 占比例应达到所用扩增检测方法的要求
纯化后的DNA和RNA的保存
DNA：如果纯化后的DNA无DNA酶的污染，则可 在TE缓冲液中室温保存26周；2-8℃保存一年；20℃保存7年；-70℃保存7年以上。怀疑可能存在 DNA酶污染的样本，则保存在-20℃以下。
Some people interpret “intended use” as referring to the relevant clinical laboratory in which the test is performed, rather than the manufacturer or developing laboratory, thus causing confusion. The World Health Organization (WHO) defines validation as “the action (or process) of proving that a procedure, process, system equipment or method used works as expected and achieves the intended result” . （WHO将
涉及实验室人 员和临床医生
质量 保证
室内质控 （分析中）
涉及实验室
室间质评 （分析中）
涉及实验室
分析前质量保证
申请单应包括的内容
1. 患者的惟一标识：患者的姓名、出生日期、性别、民族、 住院号、就诊科室、床号，有条件的医院尽量使用条码标 志或其他唯一标示；
2. 样本的类型：血液、其他体液、活检组织、手术切除样 本等；
常见标本的类型
血液 分泌物 胸腹水 痰 粪便 尿 脑脊液 胚胎样本 骨髓穿刺样本/细针穿刺细胞 组织（新鲜组织、活检组织、手术切除样本、甲醛固定的石蜡包埋组
织（FFPET） ）
临床分子诊断样本的接收
样本拒收标准：容器破损、量不够、时间不符 合要求、重度溶血、重度脂血、重度黄胆、无 靶细胞？
打印程序不对
不符合要求
不符合要求
不符合要求
理想的试剂
试剂方法的性能验证及每批试剂的质检 性能指标：
精密度（重复性） 准确性（定量：回收率、标准物质等；定性：方法学比较等） 线性范围（定量） 分析特异性 测定下限 抗干扰能力
“性能验证”（“verification”）定义
“verification”： broadly as “confirmation through the provision of objective evidence, that specified requirements have been fulfilled” . （广义为通过提供客观证据证明特定 的要求得到满足）
CLIA uses the term “verification”： specifically to relate to confirmation that the laboratory using a test can replicate the manufacturer’s performance claims when the test is used according to the package insert. （CLIA性能验证术语特指
DNA打断区
空气流向
空空气气流流向向
空气流向
缓冲间
缓冲准备区
空气流向
空气流向
缓冲间
缓冲间
专用走廊
实验室仪器设备及管理
加样器：维护、校准 扩增仪：维护、校准 恒温干浴仪或水浴箱：维护、校准 离心机：维护 生物安全柜：维护 冰箱：维护
（6）样本保存温度和时间的要求。用于DNA检测时，样本可在2~8℃ 保存72h。用于RNA检测时，样本一旦采集送达实验室后，如不能立 即提取，应冻存于-70℃。临床体液样本的长期保存（>2周）在保存 于-70℃。已提取纯化的RNA最好在乙醇沉淀后保存在-70℃。如果样 本中含有红细胞，应尽可能去除红细胞后，再进行冻存。石蜡包埋组 织则可在2-8℃长期保存。