益气活血祛痰方对非酒精性脂肪肝模型小鼠血脂、动脉粥样硬化指数和冠心指数的影响

益气活血祛痰方对非酒精性脂肪肝模型小鼠血脂、动脉粥样硬化指数和冠心指数的影响
作者：陶丽宇高月求王建茹
来源：《中国中医药信息杂志》2019年第01期
中图分类号：R285.5 ;;;文献标识码：A ;;;文章编号：1005-5304（2019）01-0068-04
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2019.01.016
非酒精性脂肪肝（nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD）是除外酒精和其他明确的损肝因素所导致的以肝实质细胞脂肪堆积为主要特征的一系列疾病。

研究显示，NAFLD是动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）的一个危险标志，参与多种心血管病的形成和发展[1-2]。

气虚、痰凝、血瘀是AS的主要中医病机，益气活血祛痰中药具有延缓AS病理过程的作用[3-4]。

本研究采用高脂饲料喂养LDLR-/-小鼠构建NAFLD和AS的复合性病变动物模型，观察益气活血祛痰方对NAFLD模型小鼠血脂、动脉粥样硬化指数（AI1、AI2）和冠心指数（R-CHR）的影响，探讨其作用机制，为临床应用益气活血祛痰中药治疗NAFLD、AS等脂质代谢相关性疾病提供依据。

1 ;实验材料
1.1 ;动物
SPF级雄性LDLR-/-小鼠15只（遗传背景为C57BL/6J小鼠），6周龄，源自南京生物医药研究院，动物许可证号SCXK（苏）2015-0001;雄性C57BL/6J小鼠5只，6周龄，购于上海西普尔-必凯实验动物有限公司，动物许可证号SCXK（沪）2013-0016。

实验动物饲养于复旦大学实验动物部SPF级动物房。

1.2 ;药物与试剂
益气活血祛痰方（黄芪30 g，全瓜蒌15 g，薤白12 g，制半夏12 g，益母草30 g，丹参12 g），饮片由上海中医药大学附属龙华医院中药房提供，常规方法水煎，制成2 g原药材/mL 药液。

辛伐他汀片，杭州默沙东制药有限公司，批号M035400，用一级超纯水溶解，配成0.4 mg/mL溶液。

1.3 ;主要试剂与仪器
4%多聚甲醛（上海威奥生物科技有限公司），中性树胶、二甲苯（中国国药集团上海化学试剂公司），HE染色试剂盒（碧云天生物技术研究所）。

日立7600-020型全自动生化分析仪（Thermo Fisher公司），倒置式显微镜（Nikon公司），高速冷冻离心机（Eppendorf公
司），组织包埋机（德国Leica公司），全自动组织脱水机（德国Leica公司），手动石蜡切片机（德国Leica公司），载玻片、盖玻片（江苏世泰公司），电子分析天平（德国Sartorius 公司）。

2 ;实验方法
2.1 ;分组
LDLR-/-小鼠给予普通饲料适应性饲养1周后，改为高脂饲料（主要配方为脂肪21%，胆固醇0.15%）干预。

12周后依据随机原则分为模型组、中药组和西药组，每组5只，另取健康C57BL/6J小鼠5只為正常组，给予普通膳食饲料。

2.2 ;药物干预及取材
参照《药理实验方法学》[5]中成人（70 kg）和小鼠（0.02 kg）药物剂量等效换算系数（9.1），计算各组动物相对给药剂量。

中药组按14.43 g/（kg·d）给药，西药组按2.6 mg/（kg·d）给药，每周称取所有小鼠体质量并据此调整各组小鼠相应的药物干预剂量（约0.3 mL）。

正常组和模型组给予生理盐水灌胃，中药组给予益气活血祛痰方灌胃，西药组给予辛伐他汀灌胃，每日1次，连续12周。

药物干预结束后，称取各组小鼠体质量，摘除小鼠眼球收集血液，37 ℃放置约1 h，3000 r/min离心10 min，获得血清，-80 ℃保存;分离肝脏并称重，4%多聚甲醛进行固定。

2.3 ;血脂检测
取各组待测血清样品，4 ℃冰箱放置30 min，待样品充分溶解后，全自动生化分析仪检测小鼠血脂水平，采用酶法检测总胆固醇（TC），采用去游离甘油法检测三酰甘油（TG），采用直接法检测高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C），计算AI1、AI2和R-CHR[6]。

AI1=（TC-HDL-C）÷HDL-C，AI2=LDL-C÷HDL-C，R-CHR=TC÷HDL-C。

2.4 ;病理观察
肝组织经4%多聚甲醛固定，过夜，自动脱水机脱水，石蜡包埋，切片（厚度4 μm），脱蜡、水化后进行常规HE染色，中性树胶封片，倒置显微镜观察并拍照。

3 ;统计学方法
采用SPSS21.0统计软件进行分析。

实验数据以x（—）±s表示，组间比较用方差分析，组间两两比较用LSD法。

P
4 ;结果
4.1 ;益气活血祛痰方对模型小鼠体质量、肝脏质量和肝脏指数的影响
与正常组比较，模型组小鼠体质量、肝脏质量和肝脏指数明显增加，差异有统计学意义（PP
4.2 ;益气活血祛痰方对模型小鼠血脂水平的影响
与正常组比较，模型组小鼠TG、TC和LDL-C含量明显增加，HDL-C含量明显减少，差异有统计学意义（PP
4.3 ;益气活血祛痰方对模型小鼠动脉粥样硬化指数和冠心指数的影响
与正常组比较，模型组小鼠AI1、AI2和R-CHR明显升高，差异有统计学意义（PPP
4.4 ;益气活血祛痰方对模型小鼠肝组织病理形态的影响
HE染色结果显示，正常组小鼠肝脏组织染色正常肝细胞排列致密，无脂肪滴形成;模型组小鼠肝脏组织有不同程度的脂肪滴形成，肝细胞略肿大，出现脂肪变性;中药组和西药组肝组织脂肪滴较少，程度明显减轻。

结果见图1。

5 ;讨论
NAFLD与肥胖、代谢综合征等疾病密切相关。

Zheng等[7]研究显示，NAFLD与亚临床AS 有显著的相关性，因此，提出干预NAFLD可作为预防心血管疾病发生率的潜在治疗目标。

临床研究显示，NAFLD患者较无NAFLD患者有更多的低密度AS斑块、不稳定斑块、参差不齐的钙化斑块和高危斑块[8]。

NAFLD属中医学“胁痛”“肝着”“积证”等范畴。

胸痹病位在心，与肝、脾、肾密切相关，气虚、痰凝、血瘀是其主要中医病机[3-4];肝着病位在肝，与脾、肾有关，其病机为脾肾气虚，湿痰瘀痹阻于肝[9-10]。

胸痹合并肝着为虚实夹杂之证，病机为本虚标实，气虚、脾虚导致痰浊、瘀血内生，闭阻心脉则发胸痹，沉积于肝则为肝着，故而气虚痰瘀互结是冠心病合并脂肪肝的主要中医病机[11-12]。

本研究依据益气活血祛痰中医治法，以《金匮要略》瓜蒌薤白半夏汤为基础方组成益气活血祛痰方，方中黄芪补气虚以治本，瓜蒌、薤白、半夏祛痰，丹参、益母草活血，诸药并举，共奏益气健脾、活血祛痰功效。

饮食失调诱导的NAFLD模型是目前最为常见的动物模型，其主要原理就是通过摄入过多脂类，导致其在肝脏大量囤积，从而引发肝细胞脂肪变性[13]。

本研究通过高脂饲料喂养LDLR-/-小鼠构建NAFLD和AS复合性病变动物模型，并用益气活血祛痰方干预。

结果显示，与正常组比较，模型组小鼠體质量、肝脏质量和肝脏指数明显增加;血清TG、TC和LDL-C含量增加，HDL-C含量降低，AI1、AI2和R-CHR均明显升高，说明LDLR-/-小鼠经高脂饮食干预后，出现明显的血脂异常。

与模型组比较，中药组和西药组小鼠体质量、肝脏质量和肝脏指
数均下降;血清TG、TC和LDL-C含量减少，HDL-C含量升高，AI1、AI2和R-CHR均明显降低，表明益气活血祛痰方和辛伐他汀能纠正LDLR-/-小鼠AS病理过程中异常的脂质代谢。

肝脏脂肪变性是脂肪肝形成的病理性特征。

本研究通过HE染色发现，模型组小鼠肝脏组织形成脂肪滴，出现脂肪变性，中药组和西药组较模型组小鼠肝脏组织病变程度明显减轻，表明益气活血祛痰方和辛伐他汀能减少高脂饮食诱导的LDLR-/-小鼠肝脏的脂肪变性。

综上，益气活血祛痰方具有调节脂质代谢紊乱和改善NAFLD的作用，这可能是其抗AS 的作用机制之一。

參考文献：
（收稿日期：2018-08-08）
（修回日期：2018-08-28;编辑：华强）。