HPLC流动相的选择
简述高效液相色谱法中流动相的要求
简述高效液相色谱法中流动相的要求高效液相色谱法（HPLC）是一种广泛应用于分离、定量和分析化合物的分析技术。
其中流动相是HPLC中至关重要的组成部分，它对于保证分离效果和分析准确性起着重要的作用。
在使用HPLC进行分析时，流动相的要求有以下几个方面：1.纯度高：流动相的纯度是保证实验准确性的重要因素。
纯度高的流动相可以减少背景噪音和干扰，提高信号峰的清晰度和分辨率。
纯度要求也有助于减少一些物质的附着和积聚，保护HPLC设备的寿命。
2.溶解性好：流动相要有足够的溶解性，以溶解待分离样品中的化合物。
能够完全溶解的样品可以均匀地分布在流动相中，利于成分的迁移和分离。
如果溶解性不好，可能会导致分离效果不佳、峰形不对称和信号峰低。
3.无气泡：气泡在流动相中会造成流动相的剧烈波动，影响分离效果和信号峰的清晰度。
在流动相中可以通过采取适当措施来去除气泡，包括使用真空除泡器、在流动相中添加脱气剂或在流动相上施加超声波。
4.恒定性好：在HPLC分析过程中，流动相的流动速率和成分应该是恒定不变的，以确保分离的稳定性和重复性。
流速的变化可能会导致信号峰的宽度不一致和峰形变形，从而降低分离效果。
5.选择性好：流动相的选择性是指其与待分离样品之间的相互作用程度。
流动相选择性的好坏会直接影响分离效果和峰形。
根据样品的性质和需求，可以选择不同的流动相，如有机溶剂、水或缓冲盐溶液等。
6.可适应性广：流动相可以根据待分离样品的性质和需求进行选择和调整。
不同的样品可能需要不同的流动相组合和浓度梯度，以达到最佳的分离效果。
综上所述，高效液相色谱法中流动相的要求包括：纯度高、溶解性好、无气泡、恒定性好、选择性好和可适应性广。
这些要求的满足将有助于提高分析结果的准确性和可靠性，同时也可以保护HPLC设备的寿命。
简述高效液相色谱法中流动相的要求
简述高效液相色谱法中流动相的要求高效液相色谱法（High-performance liquid chromatography，HPLC）是一种用于分离和分析化学、生物和制药样品的色谱技术。
在高效液相色谱过程中，流动相的选择和性能对分析的准确性和分离效果有着重要的影响。
下面将详细介绍高效液相色谱法中流动相的要求。
1.基础流动相特性：流动相应具有一定的极性和溶解性能。
常用的流动相包括水和有机溶剂，如甲醇、乙醇和乙腈等。
流动相的选择应考虑到待分离组分的性质和分析目的，要保证样品能够溶解并很好的分离。
常用的流动相配比为水/有机溶剂（如乙腈）的比例，比如常见的70:30、50:50等。
2.pH值调节：根据待分离物和色谱柱的性质，适当调节流动相的pH值可以改变待分离物的电离状态，从而影响它们在色谱柱上的分配行为。
比如，对于具有酸性基团的分析物，可以通过酸或碱的加入来调节流动相的pH值，以影响它们与色谱固定相之间的相互作用。
3.离子强度调节：有些样品中可能存在电解质，其离子强度会对分离产生影响。
在这种情况下，可以通过添加相应的盐来调节流动相的离子强度，以改变分析物与色谱固定相的相互作用。
常用的盐有甲酸铵、硫酸铵、三氟乙酸等。
4.流速控制：流动相的流速也对色谱分离的效果有着重要的影响。
流速过快可能导致分离不充分，流速过慢则会增加分析时间。
流速的选择需根据待分离物的性质、色谱柱的尺寸和色谱仪的性能等因素综合考虑。
5.除气和过滤：流动相中的气泡和杂质会影响液相的流动性和检测信号的稳定性。
因此，在使用前应对流动相进行除气处理，以减小气泡对色谱分离的干扰。
同时，对流动相进行过滤处理，可以去除其中的固体颗粒和微生物等。
通常使用0.45μm的滤膜进行过滤。
6.流动相稳定性：流动相应具有良好的稳定性，以保证分析结果的准确性和重复性。
一般来说，流动相中的溶液成分要充分溶解，不发生相分离和析出现象。
所以，流动相的配制要求严格，要遵循相应的配方和混合方法，并在使用前进行充分的搅拌和均匀。
液相色谱流动相的选择依据及使用注意事项
液相色谱（Liquid Chromatography, LC）是一种常用的分离和分析方法，它使用液体作为流动相，在不同组分之间进行分配和分离。
在液相色谱分析中，流动相是至关重要的，它直接影响分离效果、分析速度和结果准确度。
合理选择液相色谱流动相并注意使用时的一些问题是非常重要的。
一、液相色谱流动相的选择依据1. 样品的性质液相色谱中流动相的选择应考虑样品的性质，包括溶解性、稳定性、挥发性等。
对于极性样品，常使用极性溶剂作为流动相；对于不容易溶解的非极性样品，可以选择非极性溶剂作为流动相。
2. 柱子的选择不同的柱子需要选择不同的流动相，以保证分离效果。
对于反相色谱柱，一般使用的是乙腈或甲醇和水的混合物作为流动相；对于正相色谱柱，则需要选用不同的极性溶剂作为流动相。
3. 分离效果流动相的选择应考虑到所需的分离效果。
对于需要高分离效果的分析，流动相的组成和流速需要进行精细调控；对于一些不需要高分离效果的分析，可以适当简化流动相的组成，提高分析效率。
4. 色谱柱的保护对于某些对色谱柱有损害的物质，可以考虑在流动相中添加一些保护剂，以延长柱子的使用寿命。
二、使用注意事项1. 流动相的配制在使用液相色谱分析时，需要注意流动相的配制。
流动相的配制应准确、稳定，避免在实验中因流动相的质量问题导致结果失真。
2. 流速的控制流速的控制对于分析结果的准确性和重现性有着重要影响。
在选择流速时，需要根据分离效果的要求以及柱子的性能来进行合理的设定。
3. 流动相的贮存流动相在储存和使用过程中需要注意避免受到污染和氧化。
定期更换和清洗流动相的储存容器，保持流动相的纯净度和稳定性。
4. 流动相的回收在实验结束后，应注意对流动相进行回收和处理，避免对环境造成污染。
总结回顾：液相色谱分析中流动相的选择和使用是至关重要的。
合理选择流动相，可以提高分析的准确性和重现性；注意使用时的一些问题，可以延长柱子的使用寿命并保护环境。
需要根据样品的性质、柱子的选择以及分离效果来综合考虑流动相的配制和使用。
高效液相色谱流动相
高效液相色谱流动相高效液相色谱的流动相(Mobile Phase)液相色谱流动相通常是各种低沸点溶剂和水溶液。
与气相色谱相比较，液相色谱流动相不仅可选择范围比较大，而且它是影响分离的一个非常重要的可调节因素。
在实际工作中，流动相的选择和优化是确定色谱分析的主要工作。
一、流动相溶剂的选择高效液相色谱中所选用的流动相溶剂必须能保证该色谱系统的分离过程可重复进行:溶剂的纯度和化学特性必须满足色谱过程的稳定性和重复性的要求;溶剂应当不干扰检测器的工作;在制备分离中, 溶剂应当易于除去, 不干扰对分离组分的回收。
从实用角度考虑，溶剂应当价格低廉，容易购得，使用安全，纯度要高。
对液相色谱溶剂的要求: 1)溶剂要有一定的化学稳定性, 不与固定相和样品组分起反应。
2)溶剂应与检测器匹配，不影响检测器正常工作。
3)溶剂对样品要有足够的溶解能力，以提高检测灵敏度。
4) 溶剂的粘度要小，保证合适的柱压降。
5) 溶剂的沸点低，有利于制备色谱的样品回收。
液相色谱流动相溶剂的选择步骤选择具有合适物理性质的溶剂，如沸点、粘度、紫外截止波长等选择合适洗脱强度的溶剂:简单样品，2 ? k'? 5;复杂样品，0.5 ? k'? 20 改变溶剂的选择性，使被分离组分具有较高的α值二、表征溶剂特性的重要参数 1)溶剂沸点、分子量、相对密度、介电常数、偶极距、折射指数、紫外吸收截止波长、与液相色谱分离密切相关的最重要的溶剂特性参数是溶剂强度参数?? ，溶解度参数?? ，极性参数P'和粘度η。
2) 溶剂洗脱强度溶剂洗脱强度指流动相中溶剂的洗脱能力。
在吸附色谱中, "溶剂洗脱强度"与溶剂极性成正比;而在反相色谱中，溶剂极性越大, 洗脱能力越小。
在液相色谱常用混合溶剂作流动相。
混合溶剂的P'具有加和性: P'ab= ??aP'a，?? bP'b , ??为某一溶剂的体积分数。
关于高效液相色谱仪流动相的选择如何呢
关于高效液相色谱仪流动相的选择如何呢高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于生命科学、化学、医药、环境等多个领域。
其中，流动相的选择对于色谱分离性能和分析结果的准确性有着重要的影响。
一、流动相的组成流动相是指用于在高效液相色谱仪中运载样品溶液，推动样品通过固定相柱的溶剂体系。
一般情况下，流动相由溶剂和缓冲剂组成。
溶剂用于将样品带入色谱柱，而缓冲剂则用于调整流动相的pH值。
在选择流动相的溶剂时，主要要考虑以下因素：1.溶剂极性：色谱柱的固定相特性和待分析的样品特性决定了所需的溶剂极性。
一般来说，溶剂可以选择非极性溶剂、极性溶剂或者两者的混合物，以适应不同的分析要求。
2.溶剂选择：常用的溶剂包括甲醇、乙醇、丙酮、乙腈等有机溶剂，以及水。
甲醇和乙腈是最常用的有机溶剂，由于它们的极性较低，因此溶解性广泛。
水是最常用的极性溶剂，可以提供更好的分离效果。
3.透过性：一些样品需要在其中一种溶剂中分离，因此选择适当的溶剂对于分析结果的准确性至关重要。
在选择缓冲剂时，需要考虑以下因素：1.pH值的调整：一些分析需要在特定的pH值下进行，需选择合适的缓冲剂，以维持所需的pH值。
2.缓冲能力：缓冲剂应具有良好的缓冲能力，以维持流动相的pH值的稳定性，避免pH值对分离效果的干扰。
3.溶解度：缓冲剂应具有较高的溶解度，以便在高浓度下使用，从而提供稳定的pH值。
二、常用的流动相系统1.等相流动相系统（Isocratic elution）：等相流动相系统是指流动相组成在整个分析过程中保持不变。
这种系统适用于分离度较差的样品，具有简单、稳定、易操作的特点。
2. 梯度流动相系统（Gradient elution）：梯度流动相系统是指在分析过程中，通过改变流动相组成来实现样品的分离。
这种系统适用于需要分离程度较高的样品，提供了更好的分离效果。
hplc流动相选择
1. 色谱柱的平衡 反相色谱柱由工厂测试后是保存在乙腈/水中的。 新柱应先使用 10－20 倍柱体积的甲醇 或乙腈冲洗色谱柱。请一定确保您分析样品所使用的流动相和乙腈/水互溶。 每天用足够的 时间以流动相来平衡色谱柱，您就会在处理问题方面获得最大的"补偿"，而且您的色谱柱的 寿命也会变得更长！操作步骤： a. 平衡开始时将流速缓慢地提高，用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线（缓冲盐 或离子对试剂流速如果较低，则需要较长的时间来平衡） b. 如果使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水"过渡"即每天分析开始前必须先用 纯水冲洗 30 分钟以上再用缓冲盐流动相平衡； 分析结束后必须先用纯水冲洗 30 分钟以上 除去缓冲盐之后再用甲醇冲洗 30 分钟保护柱子。
在化学键合相色谱法中，溶剂的洗脱能力直接与它的极性相关。在正相色谱中，溶剂的强度 随极性的增强而增加；在反相色谱中，溶剂的强度婕缘脑銮慷跞酢?BR>正相色谱的流 动相通常采用烷烃加适量极性调整剂。 反相色谱的流动相通常以水作基础溶剂， 再加入一定量的能与水互溶的极性调整剂， 如 甲醇、乙腈、四氢呋喃等。极性调整剂的性质及其所占比例对溶质的保留值和分离选择性有 显著影响。一般情况下，甲醇-水系统已能满足多数样品的分离要求，且流动相粘度小、价 格低，是反相色谱最常用的流动相。但 Snyder 则推荐采用乙腈-水系统做初始实验，因为与 甲醇相比，乙腈的溶剂强度较高且粘度较小，并可满足在紫外 185~205nm 处检测的要求， 因此，综合来看，乙腈-水系统要优于甲醇-水系统。 在分离含极性差别较大的多组分样品时， 为了使各组分均有合适的 k 值并分离良好， 也 需采用梯度洗脱技术。 反相色谱中，如果要在相同的时间内分离同一组样品，甲醇/水作为冲洗剂时其冲洗强 度配比与乙腈/水或四氢呋喃/水的冲洗强度配比有如下关系： C 乙腈＝0.32C 2 甲醇＋0.57C 甲醇 C 四氢呋喃＝0.66C 甲醇 C 为不同有机溶剂与水混合的体积百分含量。 100%甲醇的冲洗强度相当于 89%的乙腈/水或 66%的四氢呋喃/水的冲洗强度。
HPLC流动相溶剂的选择和缓冲液的配置
HPLC流动相溶剂的选择和缓冲液的配置请参阅张玉奎翻译L.R.森德尔[LloydR.Snyder]的《实用高效液相色谱法的建立》等专著。
一、HPLC流动相溶剂选择的一般原则：1. 溶剂要与使用的检测器匹配对UV－Vis，主要考虑本底吸收，下面是常用溶剂在不同波长下的吸收值：波长200 205 210 215 220 230 240 250乙腈0.05 0.03 0.02 0.01 0.01 <0.01甲醇 2.06 1.00 0.53 0.37 0.24 0.11 0.05 0.02THF 2.44 2.57 2.31 1.80 1.54 0.94 0.42 0.21醋酸1% 2.61 2.63 2.61 2.43 2.17 0.87 0.14 0.01磷酸0.1%<0.01三氟乙酸 1.20 0.78 0.54 0.34 0.20 0.06 <0.01三乙胺1% 2.33 2.42 2.50 2.45 2.37 1.96 0.50 0.12 研究表明，当流动相的A>0.7的时候，基线噪声会显著增加，一般选择的吸收值<0.5。
当A>1.0时，基本就不能用使了。
对于示差折光检测器，主要考虑样品和流动相的折光率，这里不再赘述。
2. 选用的溶剂粘度要低、沸点适中使用低粘度溶剂，可减小溶质的传质阻力，降低柱压，利于提高柱效。
从分离制备和色质连用考虑，沸点要适中，低沸点的溶剂有它的优点；但仅仅用于分析，沸点太低，反而由于溶剂的挥发，造成保留时间的变化。
3. 尽量不用高毒性的溶剂不只是环境，单从我们自身的安全考虑，当然用低毒溶剂最好。
4. 溶剂对样品有足够的溶解力样品如果不能溶解在选用的溶剂里，还怎么分析？不屑多解释。
但如果样品在流动相里溶剂仍然不大，可以用样品的最佳溶剂先溶解，再用流动相稀释，就可以了。
知道了上面选择溶剂的一般原则，就不难理解为什么不同乙醇、丙醇做流动相的原因了，因为它们的粘度大。
hplc用磷酸盐缓冲液流动相
hplc用磷酸盐缓冲液流动相
HPLC（高效液相色谱）是一种分离和分析化合物的技术，是现代化学分析中的重要方法之一。
在HPLC中，流动相是非常重要的组成部分，它决定了分离效果和灵敏度。
磷酸盐缓冲液是HPLC中常用的一种流动相。
磷酸盐缓冲液是一种适用于中性和碱性物质的缓冲液。
它可以调节溶液的pH值，使其保持在稳定的范围内。
在HPLC中，磷酸盐缓冲液通常用于分离中性和碱性物质。
磷酸盐缓冲液的制备方法如下：
1. 准备0.1M的磷酸二氢钾（KH2PO4）和0.1M的磷酸氢二钠（Na2HPO4）溶液。
2. 将KH2PO4和Na2HPO4溶液混合，用NaOH或HCl调节pH值至所需范围内。
3. 最后用纯水调节溶液的体积至所需的浓度。
在使用磷酸盐缓冲液作为HPLC流动相时，需要注意以下几点：
1. pH值的选择：磷酸盐缓冲液可以在不同的pH范围内使用。
在选择pH值时，需要考虑待分离物质的性质和分离效果。
2. 流速的选择：流速对分离效果和灵敏度有着很大的影响。
一般来说，流速越慢，分离效果越好，但灵敏度会降低。
3. 溶剂的选择：通常情况下，磷酸盐缓冲液需要与有机溶剂混合使用。
常用的有机溶剂包括甲醇、乙腈等。
4. 温度的控制：温度对于分离效果和灵敏度也有很大的影响。
一般来说，温度越高，流动相的粘度越低，流速越快，但分离效果会降低。
总之，磷酸盐缓冲液是一种常用的HPLC流动相，在HPLC
分析中起到了重要的作用。
在使用时需要注意上述几点，以获得最佳的分离效果和灵敏度。
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题目：HPLC流动相的选择
来源：中国化学化工论坛
主要内容：主要讲了在进行HPLC时，对流动相的选择及各流动相对样品处理的要求。
液相色谱的柱子通常分为正相柱和反相柱。
正相柱以硅胶为柱，或是在硅胶表面键合-CN,-NH3等官能团的键合相硅胶柱；反相柱填料主要以硅胶为基质，在其表面键合非极性的十八烷基官能团（ODS）称为C18柱，其它常用的反相柱还有C8,C4,C2和苯基柱等。
另外还有离子交换柱，GPC柱，聚合物填料柱等。
一、反相色谱柱的选择
1．柱子的pH值使用范围
反相柱优点是固定相稳定，应用广泛，可使用多种溶剂。
但硅胶为基质的填料，使用时一定要注意流动相的pH范围。
一般的C18柱pH值范围都在2-8，流动相的pH值小于2时，会导致键合相的水解；当pH值大于7时硅胶易溶解；经常使用缓冲液固定相要降解。
一旦发生上述情况，色谱柱入口处会塌陷。
同样填料各种不同牌号的色谱柱不尽相同。
如果流动相pH较高或经常使用缓冲液时，建议选择pH范围大的柱子，例如戴安公司的Acclaim柱pH 2-9或Zorbax的pH 2-11. 5的柱子。
2．填料的端基封尾（或称封口）
把填料的残余硅羟基采用封口技术进行端基封尾，可改善对极性化合物的吸附或拖尾；含碳量增高了，有利于不易保留化合物的分离；填料稳定性好了，组分的保留时间重现性就好。
如果待分析的样品属酸性或碱性的化合物，最好选用填料经端基封尾的色谱柱。
3．戴安公司Acclaim柱子介绍—极性封尾C16固定相柱
戴安公司有28种类型的柱子，Acclaim反相柱填料高纯，金属含量极低，完全封尾。
PH 2-9范围内兼容，低流失，高柱效。
尤其是2003年推出的Acclaim 极性封尾C16柱，是最先商品化的磺酰氨-O链接键的色谱柱，具极低的硅羟基活性，能在极性溶剂甚至100%水的条件下长期使用。
对酸性和碱性化合物有极为尖锐的好的色谱峰形，与现有的一流色谱柱相比有好的立体选择性。
二、液相色谱柱的使用
色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。
在做柱性能测试时要按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有样，测得的结果才有可比性。
但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而
有所不同。
1、样品的前处理
a、最好使用流动相溶解样品。
b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。
c、使用0.45μm的过滤膜过滤除去微粒杂质。
2、流动相的配制
液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：
a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)；
b、流动相与样品不产生化学反应；
c、流动相的黏度要尽量小，以便得到好的分离效果；降低柱压降，延长泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。
d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。
如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。
f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。
除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
3、流动相流速的选择
因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流速可得到不同的柱效。
对于一根特定的色谱柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。
对内径为4.6mm 的色谱柱，流速一般选择1ml／min，对于内径为4.0mm柱，流速0.8ml／min 为佳。
当选用最佳流速时，分析时间可能延长。
可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量)。
注意：
a．含水流动相最好在实验前配制，尤其是夏天使用缓冲溶液作为流动相不要过夜。
最好加入叠氮化钠，防止细菌生长。
b．流动相要求使用0.45μm滤膜过滤，除去微粒杂质。
c．使用HPLC级溶剂配制流动相，使用合适的流动相可延长色谱柱的使用寿命，提高柱性能。
三．色谱柱的维护
1. 色谱柱的平衡
反相色谱柱由工厂测试后是保存在乙腈/水中的。
新柱应先使用10－20倍柱体积的甲醇或乙腈冲洗色谱柱。
请一定确保您分析样品所使用的流动相和乙腈
/水互溶。
每天用足够的时间以流动相来平衡色谱柱，您就会在处理问题方面获得最大的"补偿"，而且您的色谱柱的寿命也会变得更长！操作步骤：
a. 平衡开始时将流速缓慢地提高，用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线（缓冲盐或离子对试剂流速如果较低，则需要较长的时间来平衡）；
b. 如果使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水"过渡"即每天分析开始前必须先用纯水冲洗30分钟以上再用缓冲盐流动相平衡；分析结束后必须先用纯水冲洗30分钟以上除去缓冲盐之后再用甲醇冲洗30分钟保护柱子。
2．色谱柱的再生
长期使用的色谱柱，往往柱效会下降（柱子的理论塔板数减低）。
可以对色谱柱进行再生，在有条件的实验室应使用一廉价的泵进行柱子的再生。
建议用来冲洗柱子的溶剂体积
色谱柱尺寸柱体积所用溶剂的体积
125-4mm 1.6ml 30ml
250-4 mm 3.2ml 60ml
250-10mm 20ml 400ml
选择再生方法：
极性固定相（如Si，NH2* ，DIOL基色谱填料）的再生：
正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**
非极性固定相（如反相色谱填料RP－18，RP－8，CN等）的再生：水→乙腈→氯仿（或异丙醇）→乙腈→水
注意：
a. 在对NH2改性的色谱柱进行再生时，由于NH2可能以铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。
b. 0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱，如果简单的用有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，在水洗后加用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。
3. 色谱柱的维护
a．使用预柱保护分析柱（硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度）b．大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2－7.5，尽量不超过该色谱柱的pH范围c．避免流动相组成及极性的剧烈变化
d．流动相使用前必须经脱气和过滤处理
e．如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕柱子冲洗干净，并保存于甲醇或乙腈中
f．氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性，故使用时要注意，柱及连接管内不能长
时间存留此类溶剂，以避免腐蚀。
反相色谱的流动相通常以水作基础溶剂，再加入一定量的能与水互溶的极性调整剂，如甲醇、乙腈、四氢呋喃等。
极性调整剂的性质及其所占比例对溶质的保留值和分离选择性有显著影响。
一般情况下，甲醇-水系统已能满足多数样品的分离要求，且流动相粘度小、价格低，是反相色谱最常用的流动相。
但Snyder 则推荐采用乙腈-水系统做初始实验，因为与甲醇相比，乙腈的溶剂强度较高且粘度较小，并可满足在紫外185~205nm处检测的要求，因此，综合来看，乙腈-水系统要优于甲醇-水系统。
在分离含极性差别较大的多组分样品时，为了使各组分均有合适的k值并分离良好，也需采用梯度洗脱技术。
反相色谱中，如果要在相同的时间内分离同一组样品，甲醇/水作为冲洗剂时其冲洗强度配比与乙腈/水或四氢呋喃/水的冲洗强度配比有如下关系：
C乙腈＝0.32C 2甲醇＋0.57C甲醇
C四氢呋喃＝0.66C甲醇
C为不同有机溶剂与水混合的体积百分含量。
100%甲醇的冲洗强度相当于89%的乙腈/水或66%的四氢呋喃/水的冲洗强度。
个人感受：这篇帖子很系统的讲了在做HPLC时的一些注意事项，特别是对流动相选择上讲的很细，还有具体的例子。
对以后做HPLC时有很大的帮助，在甲醇和乙腈的换算上可以进行选择，尽量选择合适恰当的试剂，做好实验。