3、核酸的提取及含量测定
核酸的提取与鉴定实验报告
核酸的提取与鉴定实验报告核酸的提取与鉴定实验报告引言：核酸是生命的基础，它存在于细胞的核内，承载着遗传信息的传递和表达。
在现代生物学研究中，核酸的提取与鉴定是非常重要的实验步骤。
本实验旨在探究核酸提取的方法以及鉴定核酸的质量和纯度。
一、核酸提取方法核酸的提取方法有多种，本实验采用了常用的酚-氯仿法。
首先，将待提取的细胞或组织样品加入细胞裂解液中，通过离心将细胞碎片沉淀下来。
然后，使用酚和氯仿进行提取，酚层中含有核酸和脂质，氯仿层中含有蛋白质。
通过离心将酚层和氯仿层分离，进一步提取纯净的核酸。
二、核酸的鉴定1. 纯度检测核酸的纯度是指核酸溶液中核酸与其他杂质的比例。
常用的纯度检测方法有比色法和光谱法。
本实验中使用了光谱法，即通过测量核酸溶液的吸光度来评估其纯度。
纯度越高，吸光度比值（A260/A280）越接近1.8。
实验结果显示，所提取的核酸样品的纯度在可接受范围内。
2. 浓度测定核酸的浓度是指单位体积核酸溶液中核酸的含量。
浓度测定常用的方法有比色法和荧光法。
本实验中采用了比色法，即通过比较核酸溶液的吸光度与标准曲线的关系来确定核酸的浓度。
实验结果显示，所提取的核酸样品的浓度为Xμg/μl。
3. 碱基组成分析核酸的碱基组成是指核酸中腺嘌呤（A）、胸腺嘧啶（T）、鸟嘌呤（G）、胞嘧啶（C）的相对含量。
碱基组成分析可以通过核酸测序技术来完成。
本实验中使用了Sanger测序技术，通过测序结果可以确定所提取核酸的碱基组成。
4. 凝胶电泳分析凝胶电泳是一种常用的核酸分析方法，可以根据核酸的大小和电荷来分离核酸。
本实验中使用琼脂糖凝胶电泳，将提取的核酸样品与DNA分子量标准品一同加载到琼脂糖凝胶槽中，通电分离。
通过观察凝胶上的DNA条带，可以初步判断核酸的大小和纯度。
结论：通过本实验，我们成功提取了核酸样品，并进行了一系列的鉴定实验。
通过纯度检测、浓度测定、碱基组成分析和凝胶电泳分析，我们确定了所提取核酸的质量和纯度。
核酸成分实验报告
一、实验目的1. 学习核酸的提取方法。
2. 鉴定核酸的组成成分，包括戊糖、磷酸和碱基。
3. 掌握比色法测定核酸含量的原理和方法。
二、实验原理核酸是生物体内的重要生物大分子，包括核糖核酸（RNA）和脱氧核糖核酸（DNA）。
核酸的组成成分主要包括戊糖、磷酸和碱基。
本实验通过提取动物组织中的核酸，鉴定其组成成分，并测定核酸含量。
1. 核酸提取：利用组织匀浆和酚-氯仿法提取动物组织中的核酸。
2. 组成成分鉴定：通过酸水解法使核酸水解，然后利用比色法分别测定戊糖、磷酸和碱基的含量。
3. 核酸含量测定：利用定磷法测定核酸中的磷含量，进而推算出核酸含量。
三、实验器材与试剂1. 实验器材：组织匀浆器、离心机、分光光度计、电炉、水浴锅、试管、吸管、刻度管、容量瓶等。
2. 实验试剂：动物组织匀浆剂、酚、氯仿、异丙醇、NaCl、NaOH、HCl、磷酸二氢钾、钼酸铵、硫酸等。
四、实验步骤1. 核酸提取：（1）取动物组织匀浆剂，加入动物组织匀浆，匀浆后加入酚-氯仿混合液（1:1），充分振荡，静置分层。
（2）将上层含核酸的酚相转移至新试管中，加入等体积的氯仿，充分振荡，静置分层。
（3）将上层含核酸的氯仿相转移至新试管中，加入等体积的异丙醇，充分振荡，静置沉淀。
（4）弃去上清液，将沉淀用少量70%乙醇洗涤，弃去洗涤液，真空干燥，得到核酸粗制品。
2. 组成成分鉴定：（1）戊糖鉴定：将核酸粗制品溶解于水中，加入浓HCl，沸水浴水解30分钟，加入苯酚-硫酸试剂，观察颜色变化。
（2）磷酸鉴定：将核酸粗制品溶解于水中，加入浓HCl，沸水浴水解30分钟，加入钼酸铵试剂，观察颜色变化。
（3）碱基鉴定：将核酸粗制品溶解于水中，加入浓HCl，沸水浴水解30分钟，加入硝酸钠试剂，观察颜色变化。
3. 核酸含量测定：（1）标准曲线绘制：配制一系列不同浓度的标准磷溶液，测定其在特定波长下的吸光度，绘制标准曲线。
（2）样品测定：将核酸粗制品溶解于水中，加入浓HCl，沸水浴水解30分钟，加入钼酸铵试剂，测定其在特定波长下的吸光度，从标准曲线上查得磷含量，进而推算出核酸含量。
核酸的提取及其组成成分的鉴定3
钼兰（兰色）Байду номын сангаас钼兰（兰色）
ω-羟基 酮基戊醛 + 二苯胺 羟基γ-酮基戊醛 羟基
操作】 【操作】
1.分离抽提 1.分离抽提 4ml肝匀浆倒入刻度离心管 4ml肝匀浆倒入刻度离心管 肝匀浆倒入 立即加入2%三氯醋酸4ml, 立即加入2%三氯醋酸4ml, 2%三氯醋酸 搅匀 离心（3000转 分钟） 离心（3000转/分，3分钟） 倾去上清液 沉淀物中加入10%NaCl溶液4ml, 10%NaCl溶液 沉淀物中加入10%NaCl溶液4ml, 搅匀 置于沸水浴中加热 分钟， 加热5 置于沸水浴中加热5分钟，用玻棒不断搅拌
测定 4滴 滴 —— 6滴 滴 对照 —— 4滴 滴 6滴 滴
水解液 5% H2SO4 3，5二羟甲苯 ， 二羟甲苯 沸水浴加热数分钟后观察现象 沸水浴加热数分钟后观察现象
(p36） 离心机的使用(p36）
注意事项： 注意事项：
1、离心管必须先平衡后对称放入离心机； 离心管必须先平衡后对称放入离心机； 平衡 离心机 避免液体洒在离心机上；记住位置编号； 避免液体洒在离心机上；记住位置编号； 开机前，检查有无空套管； 2、开机前，检查有无空套管；开机后逐级 加速；如有异常，立即切断电源，排除故障； 加速；如有异常，立即切断电源，排除故障； 3、停机后，旋钮还原。应让离心机自然停 停机后，旋钮还原。 严禁未停转或开机运转时打开机盖。 转；严禁未停转或开机运转时打开机盖。
（1）磷酸的鉴定： 磷酸的鉴定： 取试管2 分别作为测定与对照。 取试管2支，分别作为测定与对照。
测定 水解液 5% H2SO4 钼酸胺试剂 氨基萘酚磺酸 静置数分钟后观察现象 10滴 滴 —— 5滴 滴 20滴 滴 对照 —— 10滴 滴 5滴 滴 20滴 滴
生物化学实验实训报告总结
一、实验背景与目的生物化学实验是生物学与化学交叉的一门实验科学，旨在通过实验手段探究生物体内化学反应的规律和机制。
本次实训报告旨在总结生物化学实验实训过程中的经验与收获，提升对生物化学实验原理和方法的理解，以及实验操作技能。
二、实验内容与过程本次实训涵盖了多个实验项目，包括但不限于以下内容：1. 蛋白质的制备与鉴定- 实验原理：利用硫酸铵盐析法从鸡蛋清中提取蛋白质，并通过比色法测定蛋白质含量。
- 实验步骤：取鸡蛋清，加入硫酸铵溶液，搅拌，离心，取上清液，加入考马斯亮蓝G-250染料，比色测定蛋白质含量。
2. 酶的活性测定- 实验原理：利用底物-酶反应动力学原理，通过测定在一定时间内底物的消耗量或产物的生成量来反映酶的活性。
- 实验步骤：配制底物溶液，加入酶样品，记录反应时间，测定底物消耗量或产物生成量。
3. 核酸的提取与鉴定- 实验原理：利用酚-氯仿法从细胞中提取DNA，通过紫外分光光度法测定DNA 含量。
- 实验步骤：取细胞样品，加入酚-氯仿溶液，振荡，离心，取上清液，测定DNA含量。
4. 生物大分子的电泳分离- 实验原理：利用生物大分子在电场中的迁移速率差异，通过电泳技术实现分离。
- 实验步骤：配制凝胶，加入样品，施加电压，观察电泳结果。
三、实验结果与分析1. 蛋白质的制备与鉴定- 通过硫酸铵盐析法成功提取蛋白质，比色法测定蛋白质含量为1.2mg/mL。
- 结果分析：实验结果表明，硫酸铵盐析法是一种有效的蛋白质提取方法，比色法可以准确测定蛋白质含量。
2. 酶的活性测定- 实验结果表明，在一定时间内，底物的消耗量与酶的活性呈正相关。
- 结果分析：实验结果表明，酶的活性可以通过底物消耗量来反映，为酶活性的研究提供了可靠的方法。
3. 核酸的提取与鉴定- 通过酚-氯仿法成功提取DNA，紫外分光光度法测定DNA含量为50ng/μL。
- 结果分析：实验结果表明，酚-氯仿法是一种有效的DNA提取方法，紫外分光光度法可以准确测定DNA含量。
实验三酵母核糖核酸的提取及测定
实验三酵母核糖核酸的提取及测定实验三酵母核糖核酸的提取及测定⽣物111 杨明轩1102040128⼀、研究背景及⽬的⽣物⼤分⼦通常指的是动物、植物和微⽣物进⾏新陈代谢是所产⽣的蛋⽩质、核酸等有机化合物。
它们不仅是⽣物科学⼯作者研究的重要对象，⽽且与化学、医学和⾷品等⼯业部门有着密切的关系。
核酸作为⽣命体常见⽽重要的⼤分⼦物质，它通过酶解或化学法⽔解可得到4个核苷酸，再经脱磷酸可得4种相应的核苷。
核酸构成遗传物质、传递遗传信息、构成核糖体和酶等⼤分⼦、合成多糖，与正常的⽣命活动密不可分。
医学家、诺贝尔奖得主富兰克研究认为，⼈体的⽼化是因其体内的核酸变质减少所致，可见核酸在⽣物正常发育中的重要性。
由于核酸在⽣命体中的物质构成、功能⽅⾯的作⽤，近100年来核糖核酸（RNA）被⼴泛应⽤与⾷品⼯业、医药⼯业和农业⽣产上。
在⾷品⼯业⽅⾯，RNA是开发新型⾷品调味品、保健品必不可少的原料；在医药⼯业上，RNA是⽣产治疗冠⼼病、肿瘤、⼼肌梗塞等疾病药物的原料；在农业上，RNA及其衍⽣物⼴泛⽤作农作物的⽣长促进物质。
⽽在这些领域，所需要的是并不是结构完整的RNA，⽽是其单体核苷酸。
因此，我们需要获得能够在⾷品医药卫⽣领域应⽤的核苷酸。
⽽核酸制品⽆⾮是利⽤其核苷酸或衍⽣物，因⽽⼯业上⽣产核酸的⽬的在于获得纯品核苷酸，以作为⽣产各种药物或测序分析等的原料。
在⼯业⽣产中，还常常考虑到利润和成本的问题。
因⽽实验室⾥提取核酸和将其放到⼯业⼤⽣产中是不同的。
⼯业⽣产对核酸制品的完整性要求不⾼，⽽注重其产率和成本。
考虑核苷酸分⼦的复杂结构，直接化学合成是⼗分困难的。
所以⽬前⼈们主要采取从⽣物体系中分离纯化RNA，将其⽔解并通过其他分离⼿段获得⼩分⼦核苷酸的⽅法。
本实验在于模拟⼯业⽣产的流程，探究提取酵母核糖核酸的⼯艺，掌握提取和测定酵母核糖核酸的⽅法，明确从⽣物体中提取RNA的思路和具体操作⽅法，了解产业开发的思路，体会⼯业化⽣产与实验室科研之间的不同。
动物组织和细胞中核酸的提取和测定_
实验九动物组织和细胞中核酸的提取和测定第一部分动物组织和细胞中DNA和RNA的提取【实验目的】学习从组织和细胞中提取DNA和RNA的方法【实验原理】1.从动物组织和细胞中提取DNADNA存在于细胞核中。
提取DNA的方法首先需要温和裂解细胞及溶解DNA的技术，接着需采用化学和酶学方法，除去杂蛋白、RNA及其他的大分子。
本实验在EDTA（螯合二价阳离子以抑制Dnase）存在的情况下，用蛋白酶K消化真核细胞和组织，用去垢剂（如SDS，十二烷基磺酸钠）溶解细胞膜并使蛋白质变性。
核酸通过有机溶剂抽提得以纯化，污染的RNA通过RNase消化清除。
这个方法可产生十微克至数百微克的DNA，适用于标准琼脂糖凝胶上的Southern分析，可用作PCR反应的模板，以及用于构建基因组DNA文库。
2.从动物组织和细胞中提取RNARNA存在于细胞质及核中，是一种极易降解的核酸分子。
为了快速从细胞中分离完整的RNA，许多方法都用到了高浓度的强变性剂硫氰酸胍使细胞破裂。
高浓度的硫氰酸胍还使细胞内的各种RNA 酶失活，使释放出的RNA不被降解。
细胞裂解后存在于裂解溶液内的有RNA，核DNA，蛋白质和细胞残片，通过酚，氯仿等有机溶剂处理，离心，使RNA最终与其它细胞组分分离开来。
【实验材料】1.实验器材研钵和研棒，匀浆机，橡胶刮棒，低温冷冻离心机，恒温水浴，宽口移液管，锤子，塑料袋，涡旋。
2.实验试剂(1)裂解缓冲液：10mmol/L Tris-Cl(PH8.0)，0.1mol/L EDTA(PH8.0)，0.5%(m/V)SDS，20µg/mg无Dnase 的胰RNase，裂解缓冲液的前三种成分可预先混合并于室温保存。
RNase在用前适量加入。
(2)溶液D(变性液)：4mol/L硫氰酸胍，25mmol/L柠檬酸钠.2H20，0.5%(m/V)月桂基肌酸钠，0.1mol/L β-巯基乙醇，将250g硫氰酸胍、0.75mol/L(PH7.0)柠檬酸钠17.6ml和26.4ml10%(m/V)月桂基肌酸钠溶于293ml水中.加入搅拌子于磁力搅拌器上65℃混匀,直至完全溶解。
核酸含量测定 - 定磷法
核酸含量测定 - 定磷法
核酸含量测定是指通过一种叫做定磷法的方法来确定样品中
核酸的含量。
定磷法是一种常用的生化分析方法，通过测定
样品中含有的无机磷的量，来间接推测核酸的含量。
具体操作步骤如下：
1. 取少量待测样品。
2. 将样品加入到酸性溶液中，使细胞壁和膜完全破裂。
3. 加入含有机溶液的磷试剂，使形成可溶性的金黄色磷酸铵
铬(VI)盐。
4. 根据反应生成的黄色物质的吸收特性，在特定波长下用分
光光度计测量吸光度。
5. 根据构建的标准曲线，确定吸光度与磷含量之间的关系，
从而推测样品中核酸的含量。
需要注意的是，定磷法只能测定样品中的总核酸含量，无法
区分DNA和RNA的含量。
如果需要分别测定DNA和RNA，需要采用其他特异性方法，比如荧光比色法或者核磁共振法等。
核酸的提取及含量的测定
地依酚试剂
RNA含量
2.0
40
2.0
80
2.0
2.0
2.0
2.0
0
2.0
120 160 200
各管混匀，置沸水浴25min，冷却，670nm空白管调零，测 各管吸光度
⒉ 计算
标准曲线测得的 × 15/0.5×匀浆总体积/4 × 1/肝重(g) RNA的μ g数
= 1.0g肝组织中含RNA的μ g数
⒋ 纯化RNA
核酸不溶于乙醇等有机溶剂，加2倍体积95%冰乙 醇沉淀RNA，使其与其他杂质分开，再加 1mL0.10mol/LNaOH溶解RNA，得到纯化的 RNA提取液
㈡ 实验操作
新鲜肝组织用冰生理盐水洗去表面的血液， 加0.14mol/LNaCl溶液制成20%匀浆
取匀浆4mL,3500rom离心 15min, 沉淀 上清液,倒入另一离心管,记录体积 加入等体积氯仿-异戊醇混 合液,剧烈震荡10min (用 吸管反复吹打至发白为 止),3500rpm,15min
㈠ 测糖法
核糖
浓HCl,FeCl3
△ 3H2O
糠醛+3,5-二羟甲苯→绿色化合物 （地依酚） 670nm比色
㈡ 实验操作
⒈ 标准曲线的绘制及样品测定
标 1 RNA标准 液 蒸馏水 0.4 1.6 2 0.8 1.2 准 3 1.2 0.8 管 4 1.6 0.4 5 2.0 0 0 2.0 0.5 1.5 空白管 测定管
核酸的提取及含量测定
• 核酸是具有重要生物化学功能的生物大分子， 根据其分子所含糖的种类不同，核酸分为两 大类，含核糖的称为核糖核酸(RNA)，含脱 氧核糖核酸的称为脱氧核糖核酸(DNA)， DNA是遗传信息的携带者，与生物的生长、 繁殖、遗传和变异有密切关系，RNA参与蛋 白质的生物过程，由于核酸具有如此重要的 生物学功能，对核酸的结果与功能的研究已 成为当前生物科学的重要课题之一。
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一、核酸提取
㈠ 原理 ⒈ 破碎细胞：
匀浆、超声震荡、酶解等，因动物组织含有核 酸酶，在一定温度下，该酶可被Ca2+,Mg2+等激活， 为避免核酸酶对核酸的水解，与核酸提取液中加入 适量螯合剂（如EDTA，柠檬酸等），除去这些离子， 整个过程在低温下进行。
⒉ 提取核糖核蛋白(RNP)
在生物体内核酸多以核蛋白的形式存在于组 织中，根据核糖核蛋白(RNP)和脱氧核糖核蛋白 (DNP)在不同浓度电解质溶液中溶解度明显差别进 行分离。故用0.14mol/LNaCl溶解提取核糖核蛋白。 核蛋白 0.14mol/LNaCl 1.0mol/LNaCl
㈡ 实验操作
⒈ 标准曲线的绘制及样品测定
标 1 RNA标准液 蒸馏水 0.4 1.6 2 0.8 1.2 准 3 1.2 0.8 管 4 1.6 0.4 5 2.0 0 0 2.0 0.5 1.5 空白管 测定管
地依酚试剂 2.0
RNA含量 40
2.0
80
2.0
120
2.0
160
2.0
200
2.0
鉴定或定量测定 沉淀(RNA),先用1mL0.1MNaOH溶解， 后用蒸馏水定容至15mL
二、RNA定量测定
RNA
水解
强酸
含氮碱基+戊糖+磷酸
测定三者中的任何一种成分即可计算核酸的含量， 有三种方法：测糖法、测磷法、紫外吸收法
㈠ 测糖法
核糖
浓HCl,FeCl3
△ 3H2O
糠醛+3,5-二羟甲苯→绿色化合物 （地依酚） 670nm比色
沉淀
上清液,倒入另一离心管,记录体积 加入等体积氯仿-异戊醇混 合液,剧烈震荡10min (用 吸管反复吹打至发白为 止),3500rpm,15min
上清液,倒入另一离心管中,记录体积
加2倍体积95%冰乙醇玻璃 棒搅拌，3500rpm15min 鉴定或定量测定 沉淀(RNA),先用1mL0.1MNaOH溶解， 后用蒸馏水定容至15mL
0
2.0
各管混匀，置沸水浴25min，冷却，670nm空白管调零，测各 管吸光度
⒉ 计算
标准曲线测得的 × 15/0.5×匀浆总体积/4 × 1/肝重(g) RNA的μ g数
= 1.0g肝组织中含RNA的μ g数
新鲜肝组织用冰生理盐水洗去表面的血液， 加0.14mol/LNaCl溶液制成20%匀浆
取匀浆4mL,3500rom离心15min,
沉淀
上清液 加入等体积氯仿-异戊醇混 合液,剧烈震荡10min (用 吸管反复吹打至发白为 止),3500rpm,15min
上清液 加2倍体积95%冰乙醇玻璃 棒搅拌，3500rpm15min
⒋ 纯化RNA
核酸不溶于乙醇等有机溶剂，加2倍体积95%冰乙 醇沉淀RNA，使其与其他杂质分开，再加 1mL0.10mol/LNaOH溶解RNA，得到纯化的RNA提取 液
㈡ 实验操作
新鲜肝组织用冰生理盐水洗去表面的血液， 加0.14mol/om离心15min,
核酸的提取及含量测定
• 核酸是具有重要生物化学功能的生物大分子， 根据其分子所含糖的种类不同，核酸分为两 大类，含核糖的称为核糖核酸(RNA)，含脱 氧核糖核酸的称为脱氧核糖核酸(DNA)，DNA 是遗传信息的携带者，与生物的生长、繁殖、 遗传和变异有密切关系，RNA参与蛋白质的 生物过程，由于核酸具有如此重要的生物学 功能，对核酸的结果与功能的研究已成为当 前生物科学的重要课题之一。
RNP
DNP
溶解度大
溶解度小 （仅为水中1%）
溶解度小
溶解度大 (比在水中大2倍)
• 此外，两种核蛋白溶解度与pH值有关 RNP：pH2.0-2.5时最低 DNP：pH4.2时溶解度最低 故调节溶液pH也可促使两者分离，将 0.14mol/LNaCl的pH为4，使两者分开。
⒊ 去除蛋白质
用蛋白质变性剂或水解使RNA与蛋白质分离，故加 入蛋白质变性剂如氯仿、异戊醇、SDS、热酸等， 使蛋白质变性沉淀，从而核酸和蛋白质分离，经离 心后溶液分为三层：上中下分别是核酸溶液、变性 蛋白质凝胶和氯仿