(完整版)院感采样方法

空气、物体表面、医务人员手的监测

采样及检查原则：采样应具有一定数量和代表性，采样后必须尽快对样品按要求指标进行检测，送检时间不得﹥6小时，若样品保存在冰箱内送检时间不﹥24小时。

一、空气监测：

1、采样时间：消毒处理后，操作前

2、采样方法：平板沉降法

（1）布点方法：室内面积≤30ｍ²，设内、中、外对角线3点，两端距墙1米；室内面积＞30ｍ²，设东、西、南、北4角及中央5点，其中东、西、南、北均距墙1米。洁净手术室9个点。

（2）采样方法：将直径为9cm普通营养琼脂平板在室内各采样点处，采样高度为距地面0.8--1.5米，采样时将平板盖打开，扣放于平板旁，暴露5-15-30分钟，盖好立即送检。( 3)注意事项：采样前，关好门、窗，在无人走动的情况下，静止10min 进行采样。

表4：洁净手术室静态（空态）时空气采样方法（沉降法）

等级空气洁净度级别

布点要求

细菌最大平均浓度手术区周边区手术

区

周边区

100级1000级0.2 0.4

Ⅱ1000

级10000

级

0.75 1.5

Ⅲ10000

级100000

级

2 4

辅Ⅲ100000级 5

(5)质控标准：

Ⅰ类区域（洁净手术室）：细菌总数≤4cfu/m3(30分钟9cm平皿)，新风机组2d清洁一次，初效过滤器1-2月更换，中效每周检查3个月更换，高效每年更换，末端高效每年检查3年更换。回风口每周清洁一次、每年更换一次。

Ⅱ类区域：细菌总数≤4cfu/m3(15min9cm平皿)，

Ⅲ类区域：细菌总数≤4cfu/m3(5min9cm平皿)，

二、医务人员手的监测：

1、采样时间：在接触病人和从事医疗活动前进行采样或消毒后立即采样。

2、采样面积及方法：放被检人（五指并拢），用浸有无菌盐水的棉拭子在双手指屈面从指根到指端往返涂擦各2 次(双手涂擦面积约60平方厘米），并随之转动采样棉拭子，剪去操作者手接触部位，将棉拭子投入5ml 无菌盐水试管内，立即送检。

3、质控标准：

工作人员手卫生：细菌总数≤10cfu/cm2。

外科手卫生：细菌总数≤5cfu/cm2，。

三、物体表面监测

1、.采样时间：在消毒处理后4小时内进行采样。

2、.采样方法：用5cm×5cm的标准灭菌规格板，放在被检物体表面，用浸有无菌盐水的棉拭子1支，在规格板内横竖往返均匀涂擦各5次，并随之转棉拭子，连续采样4个，采样面积100cm2剪去手接触部位后，将棉拭子投入5ml含无菌盐水试管内，立即送检。门把手等不规则物体表面用棉拭子直接涂擦采样

3. .结果判定：

Ⅰ、Ⅱ类区域：细菌总数≤5cfu/cm2，

Ⅲ类区域细菌：总数≤10cfu/cm2，

4.注意事项：

采集样本要有足够的数量且具有代表性，如层流洁净手术室，选择具有代表性采样地点（如手术台、治疗车、无影灯把手等）；

采样时，棉拭子处于湿润状态，如处于饱和状态可将多余的采样液在采样管壁上挤压去除。禁止使用干棉拭子采样。

四、消毒液的监测

1、常用消毒液有效成分含量测定

2、使用中消毒液细菌监测：1ml使用中消毒液+9ml中和剂

3、结果判定：使用中的灭菌用消毒液、无细菌生长。使用中皮肤粘膜消毒液≤10cfu/ml 其他使用中的消毒液细菌总数≤100cfu/m

五、压力蒸汽灭菌效果监测方法：

压力蒸汽灭菌效果监测是一组综合措施，包括工艺监测、化学监测、生物监测，各个环节缺一不可。

1、物理监测（又称程序监测）

每锅进行，并详细记录，包括灭菌设备故障检查，灭菌温度（波动+3度内）、压力、时间（最低要求）等灭菌参数。灭菌物品包装、大小摆放正确等。

2、化学监测法：

（1）包内化学指示卡监测：

1）化学指示卡(管)监测方法: 将既能指示蒸汽温度，又能指示温度持续时间的化学指示管(卡) 放入大包和难以消毒部位的物品包中央，经一个灭菌周期后，取出指示管(卡)，根据其颜色及性状的改变判断是否达到灭菌条件。

2）结果判定: 检测时，所放置的指示管(卡) 性状或颜色均变至规定的条件，判为灭菌合格；若其中之一未达到规定的条件，则灭菌过程不合格。

（2）包外化学指示胶带监测

1）监测方法: 将化学指示胶带粘贴于每一待灭菌物品包外，经一个灭菌周期后，观察其颜色的改变，以指示是否经过灭菌处理，而不能作为灭菌效果判定指标。

2）结果判定: 检测时，所放置的指示管(卡)、胶带的性状或颜色均变至规定的条件，判为灭菌合格；若其中之一未达到规定的条件，则灭菌过程不合格。

（3）B-D试验：用于预真空（包括脉动真空）压力蒸汽灭菌器冷空气排放效果的检测，冷空气是造成预真空（包括脉动真空）压力蒸汽灭菌失败的主要因素之一。对预真空和脉动真空压力蒸汽灭菌，每日进行一次B-D试验。新安装、移位后连续三次生物监测、B-D试验。1）检测方法：B-D试验要求做前预热、空载监测每天一次，将B-D试纸放入标准测试包，中间包好，水平放入灭菌柜内灭菌车的前底层，靠近柜门与排气口底前方（上方）灭菌柜内除测试包无任何物品。

2）结果判定:经134℃，3.5—4分钟后，取出B-D测试纸观察颜色变化。若变色均匀一致，说明冷空气排放效果良好，灭菌器可以使用。

（4）化学检测注意事项: 监测所用化学指示物须经卫生部批准，并在有效期内使用。

3、生物监测法

1）指示菌株: 指示菌株为耐热的嗜热脂肪杆菌芽胞(ATCC 7953 或SSIK 31株)，在121℃±0.5℃条件下，D值为1.3 min～1.9min，杀灭时间(KT值)≤19min，存活时间(ST值)为≥3.9min。（2）检测方法: 将压力蒸汽灭菌生物培养指示剂放于标准测试包（由16条41cm .66cm的全棉手术巾制成)中，按照国家规范，分别将测试包放于锅内不同位置，灭菌完毕，取出该生物指示剂送检。

3）结果判定: 每个指示剂接种的溴甲酚紫蛋白胨水培养基都不变色，判定为灭菌合格；指示菌片之一接种的溴甲酚紫蛋白胨水培养基，由紫色变为黄色时，则灭菌过程不合格。

4）注意事项: 监测所用菌片须经卫生部认可，并在有效期内使用。生物指示物监测应每周1次。

4、质控标准：

1）工艺监测应每锅进行。

2）化学监测：应每包内放置化学指示卡，包外贴化学指示胶带，监测合格方可使用。预真空和脉动真空压力蒸汽锅每日做B—D试验合格后方可使用。

3）生物监测应每周一次，无菌生长。

六、紫外线消毒效果的监测

1、检测方法: 开启紫外线灯5min后，将指示卡置紫外灯下垂直距离1m处，有图案一面朝上，照射1min（紫外线照射后，图案正中光敏色块由乳白色变成不同程度的淡紫色），观察指示卡色块的颜色，将其与标准色块比较，读出照射强度。

2、结果判定: 普通30w 直管型紫外线灯，使用中紫外线灯辐照强度≥70μW/cm2 为合格。