waters_UPLC现场培训教程
WATERS公司的UPLCTQD培训资料MS调谐页面
Compromise
94 %
Smooth Appearance
4 data points/amu
100
101
102
103
104
m/z
42
数据点/Da 的数量对表观分辨率的影响
100-500 amu - Continuum - 8 pts/amu
Test3 9 (0.190) 100
353.22
4 Data Points / Dalton No Smoothing
显示的中心 质量数 MS Scan等功能 的显示 显示质量数(Da) 的范围或者宽度 显示的信号 增益
27
峰显示设置
在底部或者顶部的工 具栏双击鼠标，可以 增加或者减少增益的 设置
点击 X 一下，可以恢复前面的范围和增益设 置，再点击一下可以回到缺省的设置。
28
可以同时显示多个质谱峰
点击选择 是否显示
13
常用的质量分析器参数设置 – SIR
14
常用的质量分析器参数设置 - Daughter Scan
15
常用的质量分析器参数设置 – MRM
16
常用的质量分析器参数设置 - Parent Scan
17
典型的质量分析器参数设置 – Constant Neutral Loss
18
流路（Fluidics） 控制
设置Mass 分辨率（Resolution ）
碰撞能量（Collision Energies）已优化 执行采集
1
Accessing the TQD Tune Page
使用仪器快捷菜单 （Instrument Shortcut Item）
仪器调谐页面 (MS Tune)
WatersLCMS液质联用培训讲义
校正的时候必须同时校正两个质量分析器的三种模式（静 态扫描、动态扫描、扫描速率补偿）的缘故。
Waters 四极杆质谱培训
©2005 Waters Corporation
仪器质量校正
Waters 四极杆质谱培训
仪器质量校正
©2005 Waters Corporation
©2005 Waters Corporation
6. 混合扫描
• 样品：对羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸丙酯/对羟
基苯甲酸丁酯与氨基酸混合液。
• 要求：一次实验同时完成多种扫描组合方式 • 羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸丙酯/对羟基苯甲酸
丁酯采用母离子扫描
• 氨基酸采用中性丢失扫描
Waters 四极杆质谱培训
Waters 四极杆质谱培训
仪器质量校正
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5. 从下拉式选单选择适当的参考档案，如以碘化钠铯，从 下拉式选单选择适当的参考档案，如以碘化钠铯校正质 量范围两千以内可选择 Naics2 。确认后按开始键。
Waters 四极杆质谱培训
©2005 Waters Corporation
实验要点:通过调谐仪器各项参数,不同化合物ESI/APCI的响应,毛细管电压,锥 孔电压,RF lens,离子能量,去溶剂化气温度,去溶剂化气流量,反吹气流量等参 数,找出目标化合物最佳响应参数,发挥最佳仪器检测灵敏度.
1．全扫描 full scan
Collision
MS1
Cell
MS2
Scanning (m/z M)
:609 (CV=45)
Waters 四极杆质谱培训
WATERS公司的UPLC-TQD培训资料 MS7校正
appropriate fittings.
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参考溶液（Reference Solutions）
参考溶液用于在一个宽mass 范围内产生多离子。 质谱仪可以在此范围内被校正。 常用的参考溶液:
— PEG, PPG — NaI/CsI, NaI/RbI — Horse Myoglobin, Poly Alanine
NaI with Cs or Rb
Pegh.ref Pegh1000.ref Pegh2000.ref peghna.ref peghnam.ref peghnh4.ref ppghna.ref ppghnh4.ref
PEG or PPG
— 如同您不愿意在定量曲线之外进行定量计算一样，您也不希望在您的质量 数校正曲线之外工作。
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仪器的校正曲线（Calibration Curves）
一台三重四极杆的仪器需要有三种校正曲线：对于MS1和 MS2, 有六 条校正曲线
— 静态校正（Static calibration）可以使四极杆质量分析器准确地定位于 感兴趣的特定质量数上。 (例如 调谐，SIR和MRM).
进行仪器校正
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校正仪器Calibrate Instrument
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校正窗口
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校正的参考文件
Calibration Reference Files Are Stored in: C:\MASSLYNX\REF
参考文件中的每一个峰与采集的质谱图中对应的峰相匹配。Each peak in the Reference File is matched to a corresponding peak in the acquired spectrum file.
UPLC 仪器操作
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Acquity BSM的准备(2)
湿灌注(Wet Priming)二元溶剂管理器
• 用于排除泵头及管路中的气泡 • 用于更换从储液瓶到溶剂管理器之间的溶剂 • Prime时的流速已设定为:A泵和B泵各4ml /min,总流 速为8mL/min,无法改动
ACQUITY Console 样品管理器
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ACQUITY Console 色谱柱诊断 – eCord™
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ACQUITY Console TUV检测器
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ACQUITY Console PDA检测器
Waters 中国有限公司 培训中心
ACQUITY UPLCTM 仪器操作 指南
2006
ACQUITY UPLCTM仪器简介
二元高压梯度系统(BSM)
– 4种溶剂可选(实际运行中只用两种) – 每台泵均为Alliance专利设计 – 每台泵最大流速2ml/min(通常工作流速:0.2-0.6ml/min)
自动进样器(针内针设计)(SM)
– –
常规2×48位样品盘 使用2ml进样瓶
高采样速率的TUV或PDA及ELSD检测器
– 采样速率最高可达80点／秒
仪器须在软件控制下运行(Empower 或 Masslynx)
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开机程序
制备新鲜流动相 打开计算机及网络集线器电源,进入Windows 打开泵和进样器电源,待通过自检后 打开MassLynx软件 打开控制台界面(在Inlet Method界面Acquity Additional Status右侧) 进行仪器的Star up功能(若是与以前相同的流动相且仪器 停用时间并不长,只需做refresh功能 设定0.1ml/min流速平衡色谱柱及系统(有液体流出) 打开TUV(PDA)检测器电源 编制仪器方法,开始实验
UPLC超高效液相色谱入门指南沃特世
首先，导入采集到的色谱数据；其次，进行基线校正以消除背景干扰；接着，进行峰识 别与积分以确定各色谱峰的保留时间和峰面积；最后，根据标准曲线进行定量分析，得
到各组分的浓度信息。
结果解读与报告生成
结果解读
根据处理后的色谱数据和定量分析结果， 可以解读出样品中各组分的含量和相关信 息。需注意检查数据的合理性和准确性。
妥善处理。
核实实验室是否遵守环保法规 和相关标准，如废水、废气、 噪声等排放是否符合环保要求。
个人防护措施和应急处理能力培训
对实验人员进行个人防护知识培训，包括如何正确佩戴和使用个人防护装备，如防护服、护目镜、手 套等。
提供应急处理能力培训，包括如何应对实验过程中可能出现的突发情况，如化学品泄漏、火灾等。
避免污染和交叉污染措施
使用高质量的试剂和溶剂， 减少杂质和污染物的引入。
对于不同性质的样品，要 采用不同的进样器和色谱 柱，避免交叉污染的发生。
ABCD
定期清洗进样器、色谱柱 和检测器等部件，避免残 留物对后续分析的影响。
在更换样品或溶剂时，要 彻底清洗相关部件，确保 无残留物对后续分析造成 干扰。
生物分析
要点二
食品分析
UPLC可用于生物样品（如血液、尿液等）中生物标志物的检 测和分析。
UPLC可用于食品添加剂、营养成分等的检测和分析。
沃特世UPLC技术特点
高品质色谱柱
先进的仪器设计
沃特世提供多种类型的高品质色谱柱，满足 不同分离需求，确保分析结果的准确性和可 靠性。
沃特世UPLC仪器设计先进，操作简便，具有 高度的稳定性和可靠性，确保长时间运行的 稳定性和准确性。
分离系统
即色谱柱，是实现样品中各组分分离的关 键部分。
WATERS公司的UPLCTQD培训资料 MS4QpHWOper.ppt
前级泵的外观
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涡轮分子泵
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Z－喷雾离子源: 两级正交取样
Isolation Valve
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电喷雾毛细管
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操作电压
Electrospray Probe APcI Discharge Needle
Tune Page Name
Capillary
Corona
ESI +ve -ve
APcI +ve -ve
+3.0 (kV) -3.0 (kV) Not applicable
Source temp.
120
Desolvation temp. 300
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电喷雾 Tune Page 设置
气流
锥孔气 ~100
去溶剂气
300
1000
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探头位置
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将HPLC 洗脱液导入MS离子源 75 m 内径不锈钢管 高电压给液滴提供过量电荷 对于正离子方式通常在 2-4 kV 之间优化 对于负离子方式通常在 2-3 kV 之间优化
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APCI 电晕(冠状)放电针
高电压促使溶剂分子发生化学电离 对于正离子方式通常在 3-5 kV 之间优化 对于负离子方式通常在 2-4 kV 之间优化
waters UPLC_School_3 仪器原理
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ACQUITY 的软件控制 硬件
Empower
控制台
MassLynx
状态
系统条件
直接控制
系统信息
诊断和故障排除
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Filter/ Mixer/ Tee Assembly
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低系统体积流路设计
Vent Valve Filter/ Mixer/ Tee Assembly
“A” Primary
“A” Accumulator
“B” Primary
“B” Accumulator
色谱柱管理器: 加热/冷却柱温控制 革新枢轴转动设计 多个色谱柱出口至检测器位置
二元溶剂管理器: 高压混合 二元梯度 四种溶剂选择 在线脱气 低扩散设计 UPLC 压力能力
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2
ACQUITY UPLC™系统 技术创新诸要素
小颗粒杂化填料（1.7μm） 更高耐压(达15000Psi)、低系统体积的输液单元 降低自动进样器的进样周期时间、减少交叉污染 高速检测器，光学及质谱 新的色谱单元之间的通讯协议 功能齐全的诊断能力 为系统完整性而设计的软件
温度： 样品： 进样体积： 检测波长： 压力：
30˚C Phenone测试混合物 5µL 214nm 5,900psi
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流路
流路入口线 —溶剂 (4 条线) —Strong Wash Solvent (强洗针溶剂) —Weak Wash Solvent (弱洗针溶剂) —Seal Wash (密封垫清洗) 流路出口线 —Purge/waste (冲洗/废液) —Needle Wash/Syringe(洗针/注射器) —Plunger (seal) wash (柱塞密封垫清洗) —Degasser vent (脱气机放空)
WATERS公司的UPLCTQD培训资料 MS7校正.ppt
参考文件中的每一个峰与采集的质谱图中对应的峰相匹配。Each peak in the Reference File is matched to a corresponding peak in the acquired spectrum file.
A calibration curve is created that ‘adjusts’ the masses of the experimantal spectral peaks to the theoretical masses of peaks as listed in the reference file.
四极杆系统的校正
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校正 – 硬件 vs 软件
硬件的校正是由原厂和维修工程师进行的，可以保证名义质量数的准 度。
对于某些应用，硬件校正是足够的。 对于需要最高的质量准确度的情况，用户可以通过Masslynx 软件进
行软件校正，并将系统的质量校正变得更为精确。 在识别未知物以及MRM 和 SIR 分析时，确认选择了准确的质量数，
参考文件置于Masslynx软件的Ref 文件夹下。 参比文件都是 text 文本文件，.ref” 的扩展名。
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MS 校正的方式
从调谐页面进入，选择校正－仪器校正 使用自动调谐中的校正功能 对于SQD、TQD，可以使用IntelliStart – Instrument Setup功能
— 扫描校正（Scanning calibration） 保证在扫描采集中峰采集的质量数 准确性。 (例如 全扫描 Full Scan).
— 扫描速度补偿（Scan speed compensation calibration）：当仪器快 速扫描是，补偿系统中的“滞后时间” 。
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Empower 2 软件现场培训教材目录一． 登录1 二． 编辑仪器方法和方法组 (以ACQUITY UPLC TM PDA 为例)2 三．编辑仪器方法和方法组 (以ACQUITY UPLC TM TUV 为例) 7 四． 进样13 1．在控制面板上设置溶剂灌注及洗针程序在控制面板上设置溶剂灌注及洗针程序。
13 2．平衡系统/监视基线 14 3．单进样14 4．使用向导建立样品组和样品组方法15 五．建立数据处理方法23 1．2D 数据处理方法 23 2．建立3D 数据处理数据处理方法方法32 六．查看结果和视图筛选 43 七．预览结果并创建报告方法 43 八． 方法组的建立46 九． 数据管理48 1. 项目的备份 48 2．项目的还原51一．登录1．双击电脑桌面上的Empower快捷图标出现Empower登录界面，输入用户名和密码。
注：出厂设置的默认用户帐号为system，密码为manager。
建议每个系统都建立自己的用户帐号和密码。
己的用户帐号和密码2. 单击高级高级键, 选择用户类型和QuickStart界面高级3．选择QuickStart界面，点击“确定”,然后选择待选定的操作项目以及色谱系统（仅查看数据可选择色谱系统中的“没有系统”），单击“确定”。
4．登录Empower的QuickStart界面。
二．编辑仪器方法和方法组(以ACQUITY UPLC TM PDA 为例)1．监视区单击方法组编辑向导。
2．选择选项。
3．弹出仪器方法编辑器。
4．单击ACQUITY二元溶剂管理器(BSM)常规选项栏：1）单击编辑溶剂A和溶剂B的名称；2) 输入压力上限、下限，建议上限设为10000psi；3）泵模式设置：等度设置：在梯度表内初始值行输入总流速及流动相配比；梯度设置：在梯度表内输入梯度流程及梯度曲线。
5．单击数据栏选取系统压力选项（可监视压力波动）。
6. 单击ACQUITY样品管理器(ACQ-SM) 进入通用栏编辑进样方法：7．选择进样类型：1）不充满环针溢出（使用针溢出）-使用不充满定量环模式推荐进样模式。
需额外消耗样品，进样准确范围为定量环体积的25 – 75%。
如果需要，单击标识出不充满环针溢出几样模式。
2）不充满环定量环-压力辅助-适用于高通量和样品量很少进样，其不充满定量环默认设置为使用气泡的几样方式。
3）充满定量环-压力辅助-这种进样方式准确，重现性好，但是需要4倍定量环体积的样品量。
8．单击ACQUITY_PDA 进入PDA编辑界面。
1) 3D数据采集：在通用栏中选择其用3D数据，输入检测波长的范围；2) 2D数据采集：在通用栏中选择2D通道，最多可同时采集8通道2D数据。
注：ACQUITY PDA检测器“快速”时分辨率需设置到1.2nm；采样速率以一个色谱个点为准。
峰上的采样点不少于15个点为准10．点击“文件”，选择“另存为”，输入仪器方法名称，点击“保存”；点击“文件”，选择“退出”。
11．在被选项中选择所需的仪器方法名称，点击12．在下拉菜单中选择所需的处理方法和报告方法（如果没有合适的方法选择“无处理”、“无报告”），点击下一步。
13．输入方法组名称，单击“完成”。
三．编辑仪器方法和方法组(以ACQUITY UPLC TM TUV 为例)1．监视区单击方法组编辑向导2．选择选项3．弹出仪器方法编辑器。
4．单击ACQUITY二元溶剂管理器(BSM)常规选项栏：1）单击编辑溶剂A和溶剂B的名称；2) 输入压力上限、下限，建议上限设为10000psi；3）泵模式设置：等度设置：在梯度表内初始值行输入总流速及流动相配比；梯度设置：在梯度表内输入梯度流程及梯度曲线。
5．单击数据栏选取系统压力选项，在数据采集时可以监视压力波动。
6．ACQUITY样品管理器(ACQ-SM) 进入通用栏编辑进样方法：7．选择进样类型1）不充满环针溢出（使用针溢出）-使用不充满定量环模式推荐进样模式。
需额外消耗4ul样品，进样准确范围为定量环体积的25 – 75%。
2）不充满环定量环-压力辅助-适用于高通量和样品量很少进样（不需要额外4ul样品）-其不充满定量环默认设置为使用气泡的几样方式。
3）充满定量环-压力辅助-这种进样方式准确，重现性好，但是需要4倍定量环体积的样品量。
8．单击ACQUITY TUV 进入TUV编辑界面。
1）在中选择相应得波长模式；a. 单波长模式如下图所示：b. 双波长模式如下图所示：注： ACQUITY TUV 检测器检测器滤波常数滤波常数“快速”选项仅适用于单波长模式选项仅适用于单波长模式；；采样速率以一个色谱峰上的采样点不少于15个点为准个点为准。
9． 点击“文件”，选择“另存为”，输入仪器方法名称，点击“保存”；点击“文件”，选择“退出”。
10．在被选项中选择所需的仪器方法名称，点击11．在下拉菜单中选择所需的处理方法和报告方法（如果没有合适的方法选择“无处理”、“无报告”），点击下一步。
12． 输入方法组名称，单击“完成”。
四． 进样1．在控制面板上设置溶剂灌注及洗针程序。
1）更换洗针溶剂后，鼠标右键点击样品管理器界面，选择灌注注射器。
为了避免溶剂的交叉污染，建议运行5个循环。
2）更换流动相后，鼠标点击二元溶剂管理器，选择灌注A/B溶剂。
选中A和B两路流动相，建议灌注时间为2分钟。
平衡/监视器监视器，在监平衡系统/监视基线监视基线界面，选择相应的仪器方法，点击平衡2．点击进入平衡系统视窗口监视基线至系统平衡, 点击。
3．单进样：点击，进入定义单进样参数定义单进样参数编辑界面，输入样品名、功能、方法组等参数。
定义单进样参数点击4．使用向导建立样品组和样品组方法。
1）选择，然后单击，进入样品列表。
2）单击新建样品组向导建立样品组。
3）选择创建样品组方法类型为“LC 或PDA/MS”，然后点击4）在列表中按下图所示选择样品表类型和样品板布局位置。
点击下一步。
5）“选择标准进样在那里开始”时选择“在样品组开始时”。
检查开始加载样品瓶的位置是否正确，如表示第一个plate 1，A1位置。
点击“下一步”6) 选择标样的校正选项：6）在描述标样中需要设置一下内容：样品组中的标样数：x；每瓶标样进样次数: x；进样体积: x ；运行时间：xx；方法组xxx；点击“选项”：输入下一进样延迟时间x ；点击下一步7）样品数: x；每瓶样品进样次数:x; 进样体积: x ;运行时间: x方法组x;点击选项: 输入下一进样延迟时间x; 点击下一步.8）在识别标准样界面中，输入标样名称，增量后缀使用1。
在识别样品界面中，输入样品名称，增量后缀使用a。
点击下一步。
9）运行模式选项中选择“只测试”。
查看摘要，点击下一步。
[注：弹出组分编辑器，输入标样中每个组分的名称（内标不需要输入含量）。
可以直接关闭该窗口，在处理数据的时候再添加。
10）查看摘要，估算运行时间等参数，点击下一步。
11）点击完成，在菜单栏中选择文件，保存样品组方法并为方法组命名。
12）从文件下拉菜单中选择保存样品组方法。
13）为样品组方法命名，点击保存。
14）选择需运行的样品组名称，点击运行。
15）样品组运行过程中，在“正在运行”栏中正在运行以及运行完毕的样品以红色显示。
以向导建立的样品组首行功能一般为清除校正，，一般删除该行或改为平衡注：以向导建立的样品组首行功能一般为清除校正五．建立数据处理方法1．2D数据处理方法1）单击键，在中选择目标样品组2）在样品组上点击鼠标右键选择查看相关通道，样品组在单个通道中显示。
3）选择定最低浓度的标样，点击鼠标右键，选择下拉菜单中的查看，会显示未处理的色谱图形。
4）点击处理方法快捷键，选择创建新处理方法，点击确定。
5） 确认处理类型为LC ，积分方式可选择为传统，再点击使用处理方法向导，选择确定。
注：使用Apextrack 积分方法积分方法时不时不时不要选择跨通道内标样要选择跨通道内标样要选择跨通道内标样，，这个功能仅适用于MS6） 常按鼠标左键，选择色谱图上最窄缝。
注：在色谱图区域方可以放大某个需要监测的峰在色谱图区域方可以放大某个需要监测的峰。
点击鼠标右键选择全视图可以还原色谱图还原色谱图。
7）在色谱图的积分界面选择一段平滑的基线作为积分的阈值，点击下一步。
8）常按鼠标左键，在基线上选取积分的起始时间点。
9）建议选择最小峰高，选择所要积分的高度最小峰（或键入相应数值）。
小于此峰高90%的峰将不被积分。
点击下一步。
10）定量方法选择面积，组分面积选择含量，校正类型选择线形。
点击下一步。
11）跨通道内标样界面点击否。
12）因为选择的是标样，点击峰1可以看到一个下拉菜单选择相应的组分名称或者键入运行样品相应的名称。
添加于组分名称相匹配的标准含量，然后点击下一步。
13）如果是多组分的混合样品，跳过添加含量的窗口直接点击下一步。
（单组分需要在这里添加含量）。
14）选择外标法：15）选择单一内标样，需要在下拉菜单中选择或键入内标相应得名称，然后点击下一步。
16）选择多重内标需要输入所有内标的名称。
17）为处理方法命名，点击完成。
色谱图界面会显示该处理方法应用后的色谱结果，包括积分。
18）如需为积分方法添加积分事件，鼠标右键点击色谱图窗口，选择添加积分事件。
积分事件所示功能会立刻应用于处理方法中。
19）编辑处理方法的高级功能需要选择快捷键。
有任何更改均需再次保存处理方法。
20）点击峰表底部可预览2D通道和峰。
21）点击键，选择或标签栏，右键点击目标样品组或通道并选择处理。
22）在处理界面，选择使用指定的处理方法，选择相应的处理方法名称，点击清除校正，选择校正并定量。
23）点击确定，数据处理，产生结果。
可在结果栏中查看。
2．建立3D数据处理方法1）单击键，在中选择目标样品组2）在样品组上点击鼠标右键选择查看相关通道，样品组中各个数据在单个通道中显示。
3）选择定最低浓度的标样，点击鼠标右键，选择下拉菜单中的查看。
4）在预览界面选择标签栏，会显示未处理的轮廓图。
处理下拉菜单中选择提取色谱选项。
5）从处理处理6）键入所需要提取得波长，点击回车键，得到该波长的色谱图。
7）点击处理方法快捷键，选择创建新处理方法，确认处理类型为PDA，积分方式可选择为传统，再点击使用处理方法向导，点击确定。
积分方法时不要选择跨通道内标样，，这个功能仅适用于注：使用Apextrack积分方法时不要选择跨通道内标样MS8） PDA纯化及匹配选项：9）常按鼠标左键，选择色谱图上最窄缝。
在色谱图区域方可以放大某个需要监测的峰。
点击鼠标右键选择全视图可以注：在色谱图区域方可以放大某个需要监测的峰还原色谱图。
还原色谱图10）在色谱图的积分界面选择一段平滑的基线作为积分的阈值，点击下一步。