大肠杆菌的检测(MPN计数法)
大肠菌群检测(MPN法)
大肠菌群检测(MPN法)大肠菌群检测(MPN法)是一种常用的微生物学技术，可用于检测土壤、水源、食品等中的大肠菌群进行水质和食品安全监测。
本文将介绍大肠菌群及其检测方法-最可能数法(MPN法)。
一、大肠菌群概述大肠菌群是以肠道菌属为主体的一类细菌，包括肠道埃希菌、沙门氏菌、志贺菌、伤寒杆菌等成员，它们可以在人类和动物的肠道中生存并繁殖。
在自然界中，大肠菌群也是广泛存在的微生物家族，如彗星菌、副肠杆菌、耶尔森氏菌等都属于大肠菌群。
1.菌落计数法该方法主要是利用琼脂平板培养皿在水培的条件下，大肠菌群在培养基上经不同时间的生长，形成菌落来进行菌数计数。
缺点是容易受到其他微生物的干扰，只能算出概略的数值，一定误差，没有国家标准。
2. 硝酸德钠试剂法将测样加硝酸德阳试剂进行加热，最终乳黄色的镜检测前进行比色，得出含大肠菌群的细菌群落达标后延迟显色的时间。
该方法已被最可能数(MPN)法所替代。
3. 最可能数法(MPN法)该方法先将测量的样品分别稀释到不同浓度下，再将每一份稀释液添加到以琼脂平板固化培养基为基础的不同培养液中，观察哪一份培养液出现大肠菌群的生长，最后通过MPN表格计算每85ml或100ml的水样中最可能含有的大肠菌群数量，计算公式为：10^x = n / 联合效价（即dilution rate的倒数）其中，x代表最可能数，n代表测量到大肠菌群的样品数。
在实际工作中，MPN法检测显示出了较好的结果，优点是用固定方法，可重复性好，而且可以通过相关将分析获得定量值，便于与相关的标准进行比较。
三、大肠菌群的检测范围1. 水源：大肠菌群检测是办公室里检测饮用水可能携带的最佳方法。
一般情况下，检测过程是检测水中的微生物是否合乎标准。
2.食品：由于食品生产经常存在卫生要求，因此食品也是大肠菌群检测重要的一环。
例如，必须检测火腿或肉类制品中的大肠菌群是否合格以确保食品安全。
3. 其他领域：大肠菌群检测可以用于医学、农业、环境和建筑等领域，如医院污水浑浊度的检测和土壤中大肠菌群的检测。
mpn法检测大肠菌群的原理
mpn法检测大肠菌群的原理1. 什么是MPN法？大家好，今天咱们聊聊MPN法，也就是最可能数法，这可是检测水中大肠菌群的“神器”呢！MPN法的英文全名是“Most Probable Number”，翻译过来就是“最可能数”。
听起来是不是很神秘？其实它就是一种通过统计学的方法来估算水里大肠菌群的数量，通俗点说，就是看水中藏着多少小“坏蛋”。
首先，MPN法听起来有点复杂，其实它的工作原理还挺简单的。
咱们可以把它理解成一种通过“打样”的方法来找出水中的大肠菌群到底有多少。
这就好比我们去商场逛街，看到一件漂亮的衣服，试穿了几件差不多款式的，最终决定了买哪一件。
MPN法也是这样，它通过一系列的实验，来估算大肠菌群的数量。
要知道，大肠菌群这家伙可是影响水质的重要因素，所以咱们得好好了解一下它们的情况。
2. MPN法的基本步骤2.1 采样和稀释说到MPN法，首先要做的就是采样。
就像咱们去商场挑衣服一样，第一步是挑选你想要的样品。
这里咱们的样品是水，特别是那些咱们平时喝的水，或者用来洗菜、做饭的水。
这些水可得小心处理，不然大肠菌群的数量会被弄得不准确。
采样之后，我们需要把水样进行稀释。
稀释的目的是为了减少水中大肠菌群的浓度，使得后续的实验更容易操作。
这个过程就像是调配饮料时，加水稀释一样。
稀释得越多，水样中的细菌浓度就越低。
这样做是为了确保在实验时，能准确地找出大肠菌群的数量。
2.2 培养和观察接下来，我们把稀释后的水样放到培养基里去培养。
培养基是一种特殊的营养液，可以让细菌在里面繁殖。
就像给植物提供土壤一样，培养基给细菌提供了生长的环境。
这个过程需要一点时间，一般来说，细菌在培养基里待24到48小时，就可以看到结果了。
观察结果的时候，我们需要注意培养基的变化。
如果水样中有大肠菌群，它们会在培养基中产生一些气体或者改变颜色，这就像是植物长出了新芽一样。
通过观察这些变化，我们可以判断水样中是否有大肠菌群存在。
如果培养基的颜色发生了变化，那就意味着水中有大肠菌群，咱们可以进一步计算它们的数量。
大肠杆菌的检测MPN计数法
大肠杆菌的检测(MPN计数法) 大肠杆菌的检测在环境和食品微生物检测中至关重要，因为这些微生物的存在可能指示污染和潜在的健康风险。
MPN计数法是一种常用的检测大肠杆菌的方法，下面将详细介绍这种方法。
一、MPN计数法简介MPN计数法，全称Most Probable Number，即最可能数，是一种通过统计学方法估算微生物数量的方法。
它的基本原理是在一定的稀释度下，通过系列梯度稀释的样本中存在微生物的概率来推算样本中实际的微生物数量。
二、MPN计数法检测大肠杆菌的步骤1.样品采集：采集被检样品，如水、食品等，并按照无菌操作的要求进行处理，以避免污染和交叉感染。
2.制备稀释液：将样品进行一系列的稀释，如10-1、10-2、10-3等。
每个稀释度的样品需要进行三份平行试验，以增加结果的可靠性。
3.选择合适稀释度的样品：根据实验结果，选择适合的稀释度的样品进行MPN计数。
这个稀释度应该是使样品中大肠杆菌的数量落在10~100之间，以提高估算的准确性。
4.培养：将选择的稀释度的样品分别接种到含有特殊培养基的试管中，培养基是为了促进大肠杆菌的生长。
每个试管中接种的样品量为10ml。
5.结果分析：经过一定时间的培养后，观察每个试管中的菌落数并记录。
根据统计学原理，通过这些数据可以得出样本中大肠杆菌的最可能数。
6.结果报告：根据实验数据，计算并报告每100ml（或者每1g）样品中大肠杆菌的最可能数。
三、MPN计数法的优势和局限性优势：1.MPN计数法是一种广泛应用的方法，可用于估计微生物的数量，不仅适用于大肠杆菌，还适用于其他微生物。
2.该方法不需要昂贵的仪器设备，操作相对简单，可用于基层实验室。
3.MPN计数法可以提供微生物数量的范围，而非单一数值，对于初步估计和趋势分析具有一定的参考价值。
局限性：1.MPN计数法的主观性较强，结果会受到操作人员的影响。
因此，需要操作者接受专业培训并遵循严格的操作规程。
2.MPN计数法的准确性相对较低，尤其是在微生物数量较少的情况下，可能存在较大的误差。
MPN大肠菌群大肠杆菌原理
MPN大肠菌群大肠杆菌原理MPN的全称是Most Probable Number，即最有可能数目。
MPN是一种用于测定微生物数量的方法。
在微生物学中，常常需要知道一个环境样品中微生物的数量，这对于病原微生物的检测、食品与饮用水质量的检验等具有重要意义。
MPN方法的原理基于一种统计学的原则，即当样品中存在微生物时，根据样本连续稀释后的阳性结果的比率可以估算样品中微生物的数量。
首先，将样品连续稀释，然后分别将稀释液接种到不同的培养基中，根据不同培养基的阳性结果来估算微生物数量。
大肠菌群是人类消化系统中的一类细菌。
它们主要分布在人体肠道的大肠中，经常与人体共生共存。
通常情况下，大肠细菌对人体有很多益处，如帮助消化食物、合成维生素等。
然而，有些大肠细菌可能是致病菌，会导致人体感染。
因此，对大肠菌群的检测对于维护人体健康具有重要意义。
大肠杆菌（Escherichia coli）是大肠菌群中的一种细菌，是最常见的肠道细菌之一、大肠杆菌是革兰氏阴性杆菌，通常呈杆状且单株分离。
它们在肠道中发挥着重要的生理功能，如参与食物消化、产生维生素和促进免疫系统的功能。
此外，大肠杆菌在医学和微生物学中也经常被用作实验模型。
大肠杆菌的检测原理一般采用培养方法。
首先，将样品中的细菌进行传代培养，为了区分大肠杆菌和其他微生物，通常会在培养基中加入选择性抑制剂。
在培养基中生长的细菌经过一段时间后会形成典型的大肠杆菌形态，如菌落大小、形状和颜色等。
此外，还可用生化试剂进行进一步检测，如糖发酵试验和气体产生试验等，以确定细菌是否为大肠杆菌。
总结起来，MPN是一种用于估算样品中微生物数量的方法，大肠菌群是人体肠道中的一类细菌，而大肠杆菌则是大肠菌群中的一种最常见细菌。
大肠杆菌的检测一般采用培养方法，通过培养基中细菌的生长和形态特征以及生化试剂的反应来确定是否为大肠杆菌。
这些检测方法对于保障人体健康和食品安全具有重要作用。
大肠杆菌的检测(MPN计数法)
大肠杆菌的检测(MPN计数法)食品微生物检验技术课程综述大肠杆菌的检测（MPN计数法）院系：食品科学与药学学院班级：食科114姓名：张花学号：114031431组长：张军玲成员：张花赵晶郁朱娟娟大肠杆菌Petrifilm测试片计数法摘要食品检测是反映食品加工、贮藏、运输、等环节的卫生与安全状况的重要手段，而大肠菌群检测则是食品检测的重要指标均之一。
根据定义大肠菌群是在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和碱性厌氧的革兰氏阴性芽胞杆菌。
其主要检测意义在于反映食品卫生状况并推测其在肠道致病菌的可能性。
Petrifilm大肠菌群测试片是由美国3M生产的一种预先制备好的VRB平板培养基系统，并添加了TTC作为菌落指示剂便于菌落判读，而上层薄膜可以起到对大肠菌群发酵产生的气体截留的作用。
该方法目前已被多数权威机构认可，并在国内很多实验室开展运用。
关键词大肠杆菌Petrifilm测试法1设备和材料1.1恒温培养箱：36±1℃。
1.2冰箱2~5℃。
1.3恒温水浴箱:44.5±0.2℃。
1.4天平：感量0.1g。
1.5均质器1.6振荡器。
1.7无菌吸管：lmL(具0.01 mL刻度)、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。
1.8无菌锥形瓶：容量500mL。
1.9 玻璃珠:直径约5mm。
1.10pH计或pH比色管或精密pH试纸1.11试管架。
2. 培养基和试剂2.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（ LST ）肉汤。
2.2EC肉汤。
2.3蛋白胨水。
2.4缓冲葡萄糖蛋白胨水（MP-VP实验用）。
2.5磷酸盐缓冲液。
2.6无菌生理盐水:称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。
2.71mol/L氢氧化钠（NaOH ) ：称取40g 氢氧化钠溶于1000ml蒸馏水中。
2.81mol/L 盐酸（HCI ) ：移取浓盐酸90ml，用蒸馏水稀释至1000ml。
3检验程序4.样品稀释4.1固体和半固体样品：以无菌操作将检样25mL样品，置盛有225mL磷酸盐缓冲液的无菌均质杯内或其他稀释液的灭菌锥形瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。
食品微生物学检验 大肠菌群 MPN 计数法
9
无菌生理盐水
氯化钠8.5 g
蒸馏水1 000ml
称取8.5ｇ氯化钠溶于1 000ml蒸馏水中，121 ℃高压灭菌15 min。
磷酸盐缓冲液
磷酸二氢钾（KH2PO4）34.0 g
磷酸氢二钾(K2HPO4)2.75 g
磷酸二氢钾(KH2PO4)2.75 g
月桂基硫酸钠0.1 g
蒸馏水1 000ml
pH 6.8±0.2
将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH。分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10ml。121℃高压灭菌15 min。
注：用月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤，称取35.6 g于1 000ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装于有倒立发酵管的试管中，每管10ml，121℃高压灭菌15 min。双料LST肉汤除蒸馏水外，其他原料加倍。
蒸馏水500ml
pH 7.2
贮存液：称取34.0 g的磷酸二氢钾溶于500ml蒸馏水中，用大约175ml的1 mol/L氢氧化钠溶液调节，用蒸馏水稀释至1 000ml后贮存于冰箱。
稀释液：取贮存液1.25ml，用蒸馏水稀释至1 000ml，分装于适宜容器中，121 ℃高压灭菌15 min。
10
1 mol/L NaOH
如未产气则继续培养至48 h±2 h，产气者进行复发酵试验。
未产气者为大肠菌群阴性。
3
复发酵试验
用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种BGLB管中，36℃±1℃培养48 h±2 h，观察产气情况。
产气者，计为大肠菌群阳性管。
4
大肠菌群最可能数（MPN）的报告
大肠杆菌的检测(MPN计数法)
食品微生物检验技术课程综述大肠杆菌得检测(MPN计数法)院系: 食品科学与药学学院班级: 食科1１4姓名: 张花学号: 1140314３1组长: 张军玲成员: 张花赵晶郁朱娟娟大肠杆菌Petｒiｆilm测试片计数法摘要食品检测就是反映食品加工、贮藏、运输、等环节得卫生与安全状况得重要手段,而大肠菌群检测则就是食品检测得重要指标均之一。
根据定义大肠菌群就是在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气得需氧与碱性厌氧得革兰氏阴性芽胞杆菌、其主要检测意义在于反映食品卫生状况并推测其在肠道致病菌得可能性、Ｐｅtrifilｍ大肠菌群测试片就是由美国３M生产得一种预先制备好得ＶRＢ平板培养基系统,并添加了TTＣ作为菌落指示剂便于菌落判读,而上层薄膜可以起到对大肠菌群发酵产生得气体截留得作用、该方法目前已被多数权威机构认可,并在国内很多实验室开展运用、关键词大肠杆菌Petｒifilｍ测试法1设备与材料１。
１恒温培养箱:3６±1℃。
1。
２冰箱２～５℃、１。
３恒温水浴箱 :4４。
5±0、2℃。
1。
4天平:感量０。
１g。
1、5均质器1。
６振荡器。
1.７无菌吸管:ｌｍＬ(具０。
0１ mL刻度)、1０mＬ(具0、１mL刻度)或微量移液器及吸头。
1.8无菌锥形瓶:容量500ｍＬ。
1。
９玻璃珠:直径约5mm、１.10pH计或pH比色管或精密ｐH试纸1.１１试管架。
２。
培养基与试剂２.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨( LST )肉汤。
2、２ＥC肉汤。
2、3蛋白胨水。
2.4缓冲葡萄糖蛋白胨水(MP-VP实验用)。
2。
5磷酸盐缓冲液。
2。
6无菌生理盐水:称取8。
５ｇ氯化钠溶于10０0ml蒸馏水中,121℃高压灭菌1５ｍｉn。
2、71ｍol／L氢氧化钠(NａOＨ ) :称取40g 氢氧化钠溶于1000ml蒸馏水中、2.81moｌ/L 盐酸(HCI ) :移取浓盐酸９0ml,用蒸馏水稀释至100０ｍl。
3检验程序4.样品稀释4、1固体与半固体样品:以无菌操作将检样25mL样品,置盛有２25mL磷酸盐缓冲液得无菌均质杯内或其她稀释液得灭菌锥形瓶内(瓶内予置适当数量得玻璃珠,经充分振摇或研磨做成１:１0得均匀稀释液。
MPN法测定食品中大肠杆菌群数
知识点：MPN法测定大肠杆菌群数情境：微生物检测技术任务：MPN法测定大肠杆菌群数课程：食品微生物技术MPN 法测定大肠菌群原理一、大肠菌群什么叫大肠菌群大肠菌群是一群以大肠埃希氏菌为主的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，在37℃生长时，能在48h内发酵乳糖并产酸产气。
二、MPNMPN❞食品中大肠菌群数是以每100 mL（g）检样内大肠菌群最近似数（The most probable number，简称MPN）表示。
❞据此含义，所有食品卫生标准中所规定的大肠菌群均应以每mL（g）食品内允许含有大肠菌群的实际数值为报告标准。
三、MPN法测定原理MPN法是统计学和微生物学结合的一种定量检测法。
待测样品经系列稀释并培养后，根据其未生长的最低稀释度与生长的最高稀释度，应用统计学概率论推算出待测样品中大肠菌群的最大可能数。
大肠菌群测定步骤1.液体样品稀释以无菌吸管吸取25 mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）或其他无菌容器中充分振摇或置于机械振荡器中振摇，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。
2.梯度稀释❞用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取（1:10）样品匀液1 mL，沿管壁缓缓注入9 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管混匀或换用1支1 mL无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，作成1:100的样品匀液。
❞根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。
每递增稀释1次，换用1支1 mL灭菌吸管或吸头。
从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15min。
五、初发酵试验每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL（如接种量超过1mL，则用双料LST肉汤），36℃±1℃培养24h±2h，观察倒管内是否有气泡产生，24h±2h产气者进行复发酵试验（证实试验），如未产气则继续培养至48h±2h，产气者进行复发酵试验。
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食品微生物检验技术课程综述
大肠杆菌的检测（MPN计数法）
院系：食品科学与药学学院
班级：食科114
姓名：张花
学号： 114031431
组长：张军玲
成员：张花
赵晶郁
朱娟娟
大肠杆菌Petrifilm测试片计数法
摘要
食品检测是反映食品加工、贮藏、运输、等环节的卫生与安全状况的重要手段，而大肠菌群检测则是食品检测的重要指标均之一。
根据定义大肠菌群是在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和碱性厌氧的革兰氏阴性芽胞杆菌。
其主要检测意义在于反映食品卫生状况并推测其在肠道致病菌的可能性。
Petrifilm大肠菌群测试片是由美国3M生产的一种预先制备好的VRB平板培养基系统，并添加了TTC作为菌落指示剂便于菌落判读，而上层薄膜可以起到对大肠菌群发酵产生的气体截留的作用。
该方法目前已被多数权威机构认可，并在国内很多实验室开展运用。
关键词大肠杆菌 Petrifilm测试法
1设备和材料
1.1恒温培养箱：36±1℃。
1.2冰箱2~5℃。
1.3恒温水浴箱:44.5±0.2℃。
1.4天平：感量0.1g。
1.5均质器
1.6振荡器。
1.7无菌吸管：lmL(具0.01 mL刻度)、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。
1.8无菌锥形瓶：容量500mL。
1.9 玻璃珠:直径约5mm。
1.10pH计或pH比色管或精密pH试纸
1.11试管架。
2. 培养基和试剂
2.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（ LST ）肉汤。
2.2EC肉汤。
2.3蛋白胨水。
2.4缓冲葡萄糖蛋白胨水（MP-VP实验用）。
2.5磷酸盐缓冲液。
2.6无菌生理盐水:称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，121℃高
压灭菌15min。
2.71mol/L氢氧化钠（NaOH ) ：称取40g 氢氧化钠溶于1000ml蒸馏
水中。
2.81mol/L 盐酸（HCI ) ：移取浓盐酸90ml，用蒸馏水稀释至1000ml。
3检验程序
4.样品稀释
4.1固体和半固体样品：以无菌操作将检样25mL样品，置盛有225mL磷酸盐缓冲液的无菌均质杯内或其他稀释液的灭菌锥形瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。
固体检样最好用均质器,以8 000-10 000 r/min的速度处理1～2min,做成1:10的样品均匀稀释液）。
4.2液体样品：以无菌吸管吸取样品25ml置盛有225mL磷酸盐缓冲液的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的玻璃珠）中，充分振摇，制成1：10的样品匀液。
4.3样品匀液的pH值应在6.5～7.5之间，必要时分别用1mol/L
氢氧化钠（NaOH )或1mol/L 盐酸（HCI )调节。
4.4用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,沿管壁缓缓注入含有9mL磷酸盐缓冲液的无菌试管内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释液。
4.5根据对样品污染状况的估计,按上条操作依次做10倍递增稀释液,每递增稀释一次,换用1支1mL灭菌吸管。
从制备样品匀液至样品接种完毕，全程不得超过15min。
5检验
5.1接种和培养
选取2~3个适宜的连续稀释度的样品匀液，每个稀释度接种两张测试片。
将测试片置于平坦实验台面上，揭开上层膜，用吸管吸取样品匀液1ml垂直地价在测试片的中央，将上层膜缓慢盖下，避免气泡产生和上层膜直接落下，将压板放置在上层膜中央处，轻轻地压下，是样品匀液覆盖与圆形的培养膜表面，切勿扭转压板。
拿起压板，静置至少1min意识培养基凝固。
将测试片的透明面朝上放于36℃的培养箱内，地跌层数不超过20片，肉、家禽和水产品，培养时间为24±2h；其他食品培养时间为48±2h。
5.1判读
可肉眼观察计数，或用菌落计数器、放大镜、Petrifilm自动判读仪计数。
蓝色有气泡的菌落确认为大肠杆菌，不论蓝色的深浅，部分蓝色的带气泡菌落也判定为大肠杆菌。
圆形培养膜边缘及边缘以外的菌落不计数。
当测试片出现大量气泡、不明显的小菌落，培养区成
蓝色时，需要进一步稀释样品匀液，重新检验。
6 大肠杆菌测试片技术的报告
选择菌落数在15~150之间的稀释度，两张测试片菌落平均乘以稀释倍数，即为每克（或毫升）样品中大肠杆菌数，以CFU/g(CFU/ml)表示。
如果所有稀释度测试片上的菌落数都小于15，计数最低稀释度测试片上的平均菌落数乘以稀释倍数报告；如果所有稀释度测试片上均无菌落生长，以“小于1乘以最低稀释倍数”报告；如果所有稀释度的菌落数都大于150，计数最高稀释度测试片上的平均菌落数乘以稀释倍数报告。
技术菌落数大于150个的测试片，可计数一个或两个具有代表性的方格内的菌落数，换算成单个方格内的菌落数以后乘以20，即为测试片上估算的菌落数（圆形生长面积为20c㎡）。
参考文献
〖1〗中华人民共和国国家标准GB/T-4789.38-2010。
〖2〗食品微生物检验/周建新主编。
北京化工工业出版社，2011.6
〖3〗
〖4〗（学习的目的是增长知识，提高能力，相信一分耕耘一分收获，努力就一定可以获得应有的回报）〖5〗。