IGF-Ⅱ对人肝癌细胞HepG2中抑癌基因p16和p53表达的影响
“肝癌hepg2细胞”资料合集
“肝癌hepg2细胞”资料合集目录一、何首乌不同分离部位对人正常肝L02细胞和肝癌HepG2细胞的杀伤作用二、隐丹参酮可能具有诱导人肝癌HepG2细胞铁死亡的作用三、人肝癌HepG2细胞培养的体会四、谷甾醇诱导人肝癌HepG2细胞凋亡机制研究五、miR181b对肝癌HepG2细胞增殖以及Bcl2和SP1蛋白表达的影响六、钠钾泵抑制剂通过调节细胞周期相关蛋白的生成介导肝癌HepG2细胞周期S期阻滞与凋亡七、STAT3抑制剂及烟酰胺联合用药对肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用及机制研究八、海芒果种子提取物对人肝癌HepG2细胞增殖、周期和凋亡的影响及其作用机制九、山药多糖对人肝癌HepG2细胞葡萄糖消耗能力及胰岛素抵抗的影响何首乌不同分离部位对人正常肝L02细胞和肝癌HepG2细胞的杀伤作用何首乌是一种在亚洲地区广泛使用的传统中药，具有多种生物活性。
近年来，大量研究表明何首乌的各个分离部位对肿瘤细胞具有一定的杀伤作用。
然而，这些研究主要集中在单一分离部位上，很少有研究比较何首乌不同分离部位对正常肝细胞和肝癌细胞的影响。
为了填补这一研究空白，我们选取了人正常肝细胞L02和肝癌细胞HepG2作为研究对象，比较了何首乌的不同分离部位（如根部、茎叶等）对其的杀伤作用。
实验采用MTT法检测细胞的活性，通过计算细胞存活率来评估不同分离部位的杀伤作用。
实验结果显示，何首乌的不同分离部位对L02和HepG2细胞表现出不同程度的杀伤作用。
其中，某些部位的提取物对肝癌HepG2细胞的杀伤作用明显强于正常肝L02细胞，表明这些部位有可能成为治疗肝癌的潜在药物。
为了进一步探究其作用机制，我们还进行了细胞凋亡和细胞周期的检测。
结果表明，何首乌的不同分离部位可以通过诱导细胞凋亡和干扰细胞周期来发挥杀伤作用。
总的来说，我们的研究揭示了何首乌不同分离部位对正常肝细胞和肝癌细胞的杀伤作用，为进一步开发何首乌的抗癌药物提供了理论基础。
然而，仍需进行更多的研究以明确其具体的作用机制和最佳用药剂量，为临床应用提供依据。
HepG2与HepG2.2.15细胞中P53表达及活性的比较
３ ２Ｈｏ ｉｌｏ Ａ．ｅ ｉｇ １０ ３ ０ ｓ ｔ ｆ ｐａ Ｂ ｉｎ ０ ０ ９ ｊ ［ ｂ ｔ ｃ】 Ｏｂｅ ｔ ｅ Ｔ ｎ ｅｔ ａｅｔｅ ｅ ｅｔ ｏ ｅａｉｓＢ ｖｒｓ Ｈ Ｖ）ｎ ｅｐｅｓ ｎ ａ ｄ ａｔ ｉ ｆｔｍｏ ｓｐ Ａ ｓａｔ ｒ ｊｃｉ ｏ ｉｖｓｇｔ ｈ ｆ ｃ ｆｈ ｐｔｉ ｉ （ Ｂ ｏ ｘ ｒ ｉ ｎ ｃ ｖｙ ｏ ｕ ｒ ｕ — ｖ ｉ ｆ ｓ ｔ ｕ ｓｏ ｉｔ
Ｈｐ ２ ． ｅＧ ． １ ２ ５细胞 ，采用 Ｗｅｔｒ ｌ ｔ ｇ法检测两种细胞 Ｐ ３的表达状况 ；磷 酸钙法将报告基 因质粒 Ｐ ３ Ｃ Ｔ和 １ １ ｓ ｎ ｂｏｉ ｅ ｔｎ ５ Ｇ１一 Ａ ９ － ２ Ｌ Ｃ分别转染细胞 ， Ｕ 通过检测报告基 因的表达观察各细胞 中 Ｐ ３的活性 。结果 ５ 于 Ｈ ｐ ２细胞 ， ｅＧ 而且两种报告基因的表达在 Ｈ ｐ ２２１ ｅ Ｇ ． ５细胞 中也 较高 。 ． 结论 功能具 有一定 的增强作用 。
【 关键词 】 乙型肝炎病毒
Ｐ ３ Ｈ ｐ ２细胞 ５ ｅ Ｇ
Ｔ ｅ ｅ ｐ ｅｓ ｎ ａ ｄ ａ ｔ ｉ ｆＰ ３ ｉ ｐ ｎ ｐ ．．５ ｃ ｌ Ｂ Ｉ Ｗｅ ｌ ， Ｖ Ｊ ｎ ｕ， Ｏ ｎｅ １ ｈ ｈ ｘ ｒｓ ｏ ｎ ｃｉ ｔ ｏ ５ ｎ Ｈｅ Ｇ２ ａ ｄ Ｈｅ Ｇ２２１ ｅ ｓ Ａ ｎｉ Ｑ ｉ ｈ ｉ Ｕ Ｍｉ ，ｔａ ｉ ｖｙ ｌ ｎ ａ Ｌ ．Ｔｅ
验误差 。 培养基 Ｄ ｂ— ｄｆ ｄ ｅｇ ｅ ｉ Ｄ Ｍ）胎 ｕ ｅｍｏｉｅ ａｌ ｍ ｄｕ ＭＥ ， ｉ ｅ ｍ（ 牛血 清 （ Ｂ ） 自美 国 Ｇ ｂｏ公 司 ；一 氨酰胺 、 一 Ｆ Ｓ购 ｉｃ Ｌ谷 Ｂ 半乳 糖苷酶 （ — ａ）Ｏ Ｐ Ｂ ｇ１、 Ｎ Ｇ为上海生工公 司产品 。 磷酸钙转染 试剂 盒 、双荧光 素酶 报告 基 因检测 试剂 盒购 自 Ｐｏ ｅａ ｒｍ ｇ
CDK2干扰RNA对人肝癌细胞HepG2细胞周期和增殖的影响
（ ｅａｔｅｔｆＢｏｈｍｓｙａｄ Ｄｐ ｒ ｎ ｉ ｅ ｉｒ ｎ ｍ ｏ ｃ ｔ
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内蒙古 医学院学报 ２０ ０ ８年 ６月 第 ３ ０卷
香叶木素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及周期阻滞的机制研究
香叶木素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及周期阻滞的机制研究杨阳;林满洲;黄艺文;陈明【摘要】Objective To study the effect of Diosmetin on cell proliferation, cell apoptosis and cell cycle ar-rest in human hepatocellular carcinoma HepG2 cells, and dissect the underlying mechanism. Methods MTT assay was performed to detect the viability of HepG2 cells under different levels of Diosmetin. The cell apoptosis rate and cell cy-cle arrest were analyzed by flow cytometry (FCM). Western blot was applied to measure the protein levels of P53, Bcl-2, Bax, Cleaved-caspase3, Cleaved-caspase8, Cleaved-PARP, Bak, cdc2, cyclinB1, P21. Results Diosmetin treat-ment on HepG2 cells significantly inhibited cell proliferation and induced cell apoptosis (P<0.05). FCM results showed that Diosmetin treatment significantly promoted cell cycle arrest in G2/M phase in HepG2 cells (P<0.05), with the pro-portion of cells in G0/G1 phase significantly reduced. Besides, Diosmetin significantly downregulates Bcl-2, cdc2, cy-clinB1, and up-regulated Bax, Cleaved-caspase3, Cleaved-caspase8, Cleaved-PARP, Bak, P53, P21. Conclusion Dios-metin inhibits HepG2 cell proliferation and induces cell apoptosis by activation of p53/Bcl-2 pathway. Meanwhile, Dios-metin treatment induces G2/M cell cycle arrest in HepG2 cell by down-regulation of cell cycle related protein cdc2, cy-clinB1 and up-regulation of P53, P21.%目的研究香叶木素对人肝癌HepG2细胞的增殖、凋亡及周期阻滞的影响并揭示其分子机制.方法 MTT方法检测不同浓度香叶木素对肝癌HepG2的细胞活力的影响;流式细胞术检测不同浓度香叶木素处理对HepG2细胞周期阻滞及细胞凋亡的作用;Western blot检测香叶木素处理对细胞p53、Bcl-2、Bax、Cleaved-cas-pase3、Cleaved-caspase8、Cleaved-PARP、Bak、cdc2、cyclinB1、p21等细胞周期调节或细胞凋亡相关蛋白表达的调节.结果香叶木素能显著抑制人肝癌HepG2细胞的增殖并且诱导细胞凋亡(P<0.05);流式细胞术对细胞周期检测示:香叶木素处理HepG2细胞,使G0/G1期细胞比例显著降低,而G2/M期细胞比例显著升高(P<0.05).香叶木素可下调HepG2细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2、cdc2、cyclinB1的蛋白表达,上调p53、p21、Bax、Bak,Cleaved-caspase3、Cleaved-caspase8、Cleaved-PARP等促凋亡蛋白.结论香叶木素在体外实验能通过激活p53/Bcl-2细胞凋亡通路抑制人肝癌HepG2细胞的增殖及促进细胞凋亡,同时通过上调p53、p21下调cdc2、cyclinB1诱导细胞G2/M周期阻滞.【期刊名称】《海南医学》【年(卷),期】2016(027)003【总页数】4页(P354-357)【关键词】香叶木素;细胞凋亡;细胞周期阻滞;肝癌【作者】杨阳;林满洲;黄艺文;陈明【作者单位】广东医学院附属医院肝胆外科,广东湛江 524001;广东医学院附属医院肝胆外科,广东湛江 524001;广东医学院附属医院肝胆外科,广东湛江 524001;广东医学院附属医院肝胆外科,广东湛江 524001【正文语种】中文【中图分类】R735.7肝细胞癌是常见的恶性肿瘤之一，我国肝癌患者多有肝炎肝硬化背景，手术切除率低，为延长肝癌患者生存期，化学药物治疗仍是一个重要措施，临床上化疗药物主要是通过诱导细胞凋亡来消除肿瘤细胞，其疗效过程中如何与抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡的水平有关。
胰岛素抵抗在肝癌作用中的研究进展
胰岛素抵抗在肝癌作用中的研究进展胰岛素抵抗是一种代谢性疾病，它阻碍胰岛素的作用，导致血糖升高和胰岛素分泌增加。
近年来的研究表明，胰岛素抵抗也与癌症发展有关。
研究发现，胰岛素抵抗增加了肝癌的风险，同时也促进了肝癌的发展。
本文将探讨胰岛素抵抗在肝癌作用中的研究进展。
胰岛素抵抗与肝癌发生的关系研究表明，胰岛素抵抗是肝癌发生的一个重要因素。
胰岛素抵抗增加了胰岛素的分泌，并促进了胰岛素样生长因子（IGF）的合成和释放。
IGF可以促进肝癌的增殖和转移。
此外，胰岛素抵抗还会导致肝脏脂肪沉积和炎症，增加了肝癌的风险。
一项研究发现，2型糖尿病和胰岛素抵抗与肝癌的发生和死亡都有关联。
研究人员对10年的随访数据进行分析，发现肝癌患者中2型糖尿病和胰岛素抵抗的患病率更高。
此外，胰岛素抵抗也与肝癌的转移和复发有关。
一项研究发现，胰岛素抵抗可以加速肝癌的进展，特别是在慢性乙型肝炎或慢性肝病患者中。
这项研究对298名肝癌患者进行了随访，发现胰岛素抵抗是肝癌预后的独立危险因素。
胰岛素抵抗也会影响肝癌治疗的效果。
一项研究发现，胰岛素抵抗患者的肝癌治疗效果与非胰岛素抵抗患者相比要差。
研究人员对62名肝癌患者进行了治疗后的随访，发现胰岛素抵抗患者的预后不佳。
结论胰岛素抵抗是肝癌发生和发展的一个重要因素。
研究表明，胰岛素抵抗增加了肝癌的风险，并促进了肝癌的发展。
此外，胰岛素抵抗还会影响肝癌治疗的效果。
因此，如何减少胰岛素抵抗，防止肝癌的发生和发展，是目前肝癌研究的一个重要课题。
未来的研究应该探讨如何通过降低胰岛素抵抗的水平来预防和治疗肝癌。
青蒿琥酯对肝癌HEPG-2细胞Caspase-3和P53蛋白的影响实验研究
一
关键词 ： 青蒿琥酯； Ｃｓ ａｅ ３ Ｐ３ ａ ｐｓ 一 ； ５ ｅ Ｄ Ｉ 识 ：ｏ ：０ ３ ６ ／．ＳＹ １０ －８ ５ ２ １ ．７ ０ ３ Ｏ 标 ｄ ｉ１ ．９ ９ ｉｉ １ ０ ８０ ０ ．０ ０ ０ ． １ Ｓ．
摘要 ： 目的 研究青蒿琥酯（ｒ ｓ ａ ，ｒ 对肿瘤细胞增殖的影响和机制。方法 Ｍ Ｆ ａ ｅ ｎｔ Ａｔ ｔｕ ｅ ） Ｔ 法测定青蒿琥酯对 Ｈ Ｐ ２细胞 Ｅ Ｇ一
增 殖 的影 响 ， ＬＳ 方 法 研 究 Ｃ ｓａｅ一 Ｅ ＩＡ ａｐ ｓ ３的 活性 ， Ｎ 电泳 观 察 细 胞 Ｄ Ａ 的 变 化 ， 疫 组 化 研 究 凋 亡 相 关 蛋 白 ｐ３ ｂ ｌ Ｄ Ａ Ｎ 免 ５ ，ｃ
医 ， ０ ２ ９）： ． ２ ０５，５（ ８
青 蒿琥 酯 对 肝 癌 Ｈ Ｐ ２细胞 Ｅ Ｇ一 Ｃ ｓａｅ一３和 Ｐ ３蛋 白 的 影 响 实 验 研 究 ａｐ ｓ ５
陈永顺 李 ，
（ ． 南省 商丘 医学 高等 专科 学校 ， １河 河南 商丘
静 杨பைடு நூலகம்，
斌 ， 氏红 陈
４６ ０ ； ２ 广 西 医科 大 学药 学 院 ， 西 南 宁 ５ ０２ ） ７０ ０ ． 广 ３０ １
另外 ， 我们不能 忽略清肺 化痰丸组在某些分子 的表达 中亦 与 空 白组 有 显 著 差 异 。 纵 观 二 药 ， 消瘤 保 肺 丸 与 清 肺 化 痰 丸 的组 成 ［ ５］ 均 以化 痰 药 为 多 ， ？瘤 保 肺 丸 辅 以散 结 消 淤 之 法 ， 有 利 于 肺 然 肖 更 癌痰 、 淤之病 因。笔者前期 使用 流式 细胞仪 、 Ｔ — Ｐ Ｒ等方法 ［ Ｒ Ｃ ６］ 已初步证实化痰类 中药可提高粘 附分子 Ｅ —ｃｄ的表达水平 ， ａ 从 而增加肿瘤细胞间的粘附能力 ， 降低肿瘤细胞脱落进入周 围组织 ［ ７］ 和 血 管 的 机 率 。 由 此 我 们 认 为 ， 化 痰 类 药 为 主 的 中 药 方 剂 以
hIAP-2-siRNA对hepG2肝癌细胞抑制作用 肿瘤药学
·基础研究·hIAP-2-siRNA对hepG2肝癌细胞抑制作用王杨，罗映晖（湖南远泰生物技术有限公司细胞及分子生物学实验室，湖南长沙，410001）摘要：目的 合成凋亡抑制蛋白(hIAP-2)的si-RNA，观察其对hepG2细胞增殖、凋亡的影响。
方法 化学合成三条hIAP-2-siRNA干扰片段并用脂质体法转染hepG2细胞， 同时设立脂质体对照。
RT-PCR和western blotting检测hIAP-2-siRNA作用后hIAP-2 mRNA和蛋白的表达，MTT检测细胞增殖，AV-PI流式细胞术检测细胞的凋亡。
结果 RT-PCR及Western blootting检测显示3条siRNA均能有效抑制hIAP-2 mRNA及蛋白表达(P<0.05)，以siRNA 1作用效果最显著(P<0.05)。
MTT检测显示hIAP-2-siRNA 80 nmoL·L-1终浓度转染后的hepG2细胞的增殖受到显著抑制(P<0.01)，其中以80 nmoL·L-1转染72 h时增殖性下降最明显(P<0.01)。
流式细胞术检测结果显示hIAP-2-siRNA 转染hepG2细胞后凋亡率增加(P<0.05)。
结论 hIAP-2-siRNA可明显抑制该肿瘤细胞的增殖，促进hepG2肝癌细胞的凋亡。
关键词：hIAP-2；肝癌细胞；RNA干扰；凋亡；抗肿瘤中图分类号：R735.3 文献标识码：A 文章编号：2095-1264(2011)05-0426-05The Inhibitory Effect of hIAP-2-siRNA on HepG2 cellsWang Yang, Luo Yinghui（Hunan ProMab Biotechnologies Inc. Laboratory of Cell Molecular Biology, Changsha,Hunan, 410001）Abstract: Objective Observe the effects of siRNAs which are synthesized from human inhibitor of apoptosis protein 2 (hIAP-2) on the proliferation and apoptosis of HepG2 cells. Methods HepG2 cellswere transfected through liposome mediated transfection method with 3 strands of hIAP-2-siRNA syn-thesized through chemical method, and the normal liposome were used as the control. The hIAP-2 mRNAand protein expression were tested using RT-PCR and Western blotting after hIAP-2-siRNAs taking ef-fects. The cell proliferation and apoptosis were detected by MTT and AV-PI flow cytometry, respectively.Results The results of RT-PCR and Western blotting showed that all of 3 pieces of siRNA can inhibithIAP-2 mRNA and protein expression effectively (P<0.05), especially siRNA 1 (P<0.05). MTT showedthat the proliferation of HepG2 cells that were transfected by hIAP-2-siRNA of 80 nmoL·L-1has been re-markably inhibited (P<0.01), and cell proliferation declined greatly after 72h of transfection by hIAP-2-siRNA of 80 nmoL·L-1 (P<0.01). The result of flow cytometry showed that the apoptosis rate of HepG2 cellstransfected by hIAP-2-siRNA raised (P<0.05). Conclusion Obviously, hIAP-2-siRNA can inhibit theproliferation of this tumor cells, and promote HepG2 liver cancer cells apoptosis.Key words: hIAP-2; Liver Cancer Cell; RNA Interference; Apoptosis; Antitumor作者简介：王杨，男，研究方向：肿瘤抗体制备基础与应用研究。
谷胱甘肽过氧化物酶2干涉慢病毒系统构建及对人肝癌细胞凋亡的影响
谷胱甘肽过氧化物酶2干涉慢病毒系统构建及对人肝癌细胞凋亡的影响曹江平;唐刘君;张建宏;詹轶群;杨晓明;葛常辉【期刊名称】《南方医科大学学报》【年(卷),期】2015(35)6【摘要】目的：构建人谷胱甘肽过氧化物酶2（Glutathione peroxidase 2, GPX2）慢病毒干涉载体，获得稳定下调GPX2的高滴度慢病毒，检测敲低GPX2对细胞凋亡的影响。
方法通过筛选具有显著干涉效果的siRNA序列，构建pSicoR-GPX2慢病毒干涉载体，包装病毒并感染人肝癌HepG2细胞，分别用Western-blot和RT-PCR方法检测GPX2表达情况，应用流式细胞术分析敲低GPX2对人肝癌细胞凋亡的影响。
结果成功构建pSicoR-GPX2干涉慢病毒载体并获得高滴度慢病毒颗粒，GPX2蛋白表达水平和RNA表达水平均有显著下调，且人肝癌细胞感染GPX2干涉慢病毒后对凋亡更加敏感，其原因可能是促凋亡蛋白Bax的活化和抗凋亡蛋白Bcl-2活性的抑制。
结论成功构建人GPX2基因干涉慢病毒，为肝癌靶标治疗提供新的线索，为后续GPX2功能研究奠定基础。
%Objective To construct a RNA interference lentiviral vector for human glutathione peroxidase 2 (GPX2) gene and observe the effect of GPX2 knockdown on cell apoptosis. Methods The sequence of the small interfering RNA (siRNA) for GPX2 interference was inserted into the pSicoR vector. HepG2 cells were infected by the packaged si-GPX2 lentivirus and the expression of GPX2 in the infected cells was detected by both RT-PCR and Western blotting. Changes of cell apoptosis following the infectionwere analyzed by flow cytometry. Results The lentiviral particles pSicoR-GPX2 were successfully packaged. The expression of GPX2 in the infected cells was obviously down-regulated at both RNA and protein levels. GPX2 knockdown caused increased apoptosis rate, increased Bax expression and lowered Bcl-2 expression in HepG2 cells. Conclusion We have successfully constructed the lentiviral vector for RNA interference of human GPX2 gene.【总页数】6页(P832-837)【作者】曹江平;唐刘君;张建宏;詹轶群;杨晓明;葛常辉【作者单位】天津大学制药工程系，天津300072;军事医学科学院放射与辐射医学研究所，北京 100850;军事医学科学院放射与辐射医学研究所，北京 100850;军事医学科学院放射与辐射医学研究所，北京 100850;军事医学科学院放射与辐射医学研究所，北京 100850;军事医学科学院放射与辐射医学研究所，北京100850【正文语种】中文【相关文献】1.谷胱甘肽过氧化物酶模拟物2-TeCD对过氧化氢诱导人成神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的抑制 [J], 王程;徐亚维2.针刺"百会"、"大椎"对拟血管性痴呆大鼠脑内谷胱甘肽过氧化物酶及细胞凋亡的影响 [J], 程为平;马莉;原田俊英;王庆武3.不同运动处方对老年人丙二醛、超氧化物歧化酶、还原性谷胱甘肽和谷胱甘肽过氧化物酶的影响 [J], 陈琳;赵冰4.亚硒酸钠对沙土鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡及谷胱甘肽过氧化物酶的影响[J], 胡冬梅;李义召;赵同;张秋玲;黄庆玉;聂斌5.硒碘对大鼠谷胱甘肽过氧化物酶活力及甲状腺激素代谢的影响──Ⅰ．硒碘营养状态对大鼠组织谷胱甘肽过氧化物酶活力的影响 [J], 伊木清;夏弈明;田园因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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0论 著0♦基础研究♦IGF- II对人肝癌细胞HePG2中抑癌基因P16和P53表达的影响姬媛媛、王志东2,陈海燕、王宝太2,杨正安2,惠博2,史敏2,卓飞2The influence of IGF -n on expressions of antioncogenes p l6and p53 in HepG2 cellsJi Yuanyuan1，Wang Zhidong2, Chen Haiyan1，Wang Baotai2, Yang Zheng'an2, Hui Bo2，Shi Min2，Zhuo Fei21 Scientific Research Center-2Geriatric Digestive Surgery y the Second Affiliated Hospitaly X ian Jiaotong University,Shaanxi X ian710004, China.[Abstract]Objective:To probe the influence of IGF -II on changes of biological phenotype and expressions ofantioncogenes p l6and p53 in HepG2 cells. Methods： HepG2 cells were cultured and stimulated with IGF -II(25,50 and 100 ng/m l) for 24 ,48 and 72 h, changes of biological phenotype were observed. And HepG2 cells were stimulated with IGF -II(50ng/m l) for 48 h,m RNA levels and protein expressions of antioncogenes p l6and p53 were examined by Real - time PCR and Western blot. Moreover, expressions of p l6and p53 were detected by immunofluorescence. Results： HepG2 cells induced by IGF -II showed a morphological alteration. MTT, Brdu and clone - formationassay suggested that growth and proliferation of HepG2 cells were enhanced by IGF -II, but no significant differencewas found between IGF -II groups with control group(P> 0. 05 ). Compared with the control, mRNA levels of p l6and p53 were significantly decreased by IGF -II<0.05)in HepG2 cells,an d protein expressions of p l6and p53were remarkably reduced by IGF -II(P<0. 05) in HepG2 cells. Furthermore,immunofluorescent expressions of p l6and p53 could be found in the nucleus of HepG2 cells. Compared with the control,immunofluorescent expressions ofp l6and p53 were distinctly declined by IGF -II in HepG2 c e lls(P<0.05).Conclusion： IGF -II might inducechanges of biological phenotype and inhibit expressions of antioncogenes p l6and p53 in HepG2 cells,further promoting the development of hepatocellular carcinoma.【Key words】IGF- II，pl6，p53，g ro w tli an d proliferation，HepG2 cellsModem Oncology 2017,25(12) ：1853 -1858【摘要】目的:观察胰岛素样生长因子-n(IGF- n)对人肝癌细胞H ePG2中生物学表型变化及抑癌基因P16和P53表达的影响。
方法：培养人肝癌细胞株H ePG2，IG F- n(25、50、100 n g/ml)作用于不同时间点(24、48、72 h)，观察各组细胞生物学表型变化。
IGF- II (50 n g/ml)作用于H ePG2 48 h后，分别采用Realtim e PCR、W estem blot及细胞免疫突光法检测人肝癌细胞中 pl6 和 p53 的表达情况，并进行定量分析。
结果 ：IGF- II诱导H ePG2细胞形态发生一定改变；IGF- II可增加HePG2细胞存活率及细胞增殖，但差异无统计学意义(P>〇.〇5); IGF- II(50 n g/ml)对H ePG2细胞的克隆形成有一定的促进作用，但差异无统计学意义(P> 0. 05)。
与对照组相比,IGF- II组H ePG2细胞中P16和P53 mRNA及蛋白表达量明显降低（P< 0. 05)。
此外，P16和P53阳性表达主要位于细胞核。
对照组、IGF - II组H ePG2细胞中P16荧光表达量分别为（100. 00 ± 11.55)%、（68. 33 ±6. 01)% ,p53 荧光表达量分别为（100. 00 ± 17. 32)%、（57. 67 ± 10. 11)%。
与对照组相比,IGF- II组H ePG2细胞中P16及P53荧光表达量明显减弱（P<0.05)。
结论:IGF- II可通过诱导人肝癌细胞HePG2生物学表型的改变，下调抑癌基因P16和P53的mRNA及蛋白表达，继而发挥促进肝癌进展的作用。
【关键词】IGF- II ;pl6;P53;生长增殖;HepG2细胞【收稿日期】2〇16-11-01【修回日期】2〇16_12-26【基金项目】国家自然科学基金资助项目（编号:81201925);西安交通大学第二附属医院人才培养专项科研基金资助项目[编号:RC ( GG) 201502]【作者单位】1西安交通大学第二附属医院科研中心实验室;2干四病区老年消化外科，陕西西安710004【作者简介】姬媛媛（1976 -),女，陕西榆林人，副研究员，主要从事消化道肿瘤发生发展的分子机制研究。
E -m a il:j i yuanyuan1234@ 163.com【通讯作者】王志东（1978 -),男，陕西蓝田人，副主任医师,主要从事消化道肿瘤研究。
E-m ai l:xawZ d@163.C O m【中图分类号】R735.7【文献标识码】A D O I：10. 3969/j. issn. 1672 -4992. 2017.12.001【文章编号】1672 -4992-(2017)12-1853-06肝癌是严重威胁人类健康和生命的临床常见恶性肿瘤 之一，癌基因的过度表达及抑癌基因的突变、失活在肝癌的 发生发展过程中扮演着重要角色[1]。
胰岛素样生长因子- II(insulin- like gro w th factors - II ,IGF- II)可与相关癌基 因相互作用促进肝癌的进展[2]。
我们研究已证实,i g f- n 可上调肝癌细胞中癌基因C - myc和N- ras的mRNA及蛋 白表达[3]，但是,IGF- n与抑癌基因表达之间的关系仍不清 楚。
因此，本研究以IGF- II作用于人肝癌细胞HepG2，观察 其对人肝癌细胞H ePG2生物学表型的变化及抑癌基因(P16、P53)表达的影响，进一步阐明IGF - II与肝癌细胞生 物学表型变化及抑癌基因表达之间的关系，对明确肝癌发生 发展的分子机制和开展更为有效的基因诊疗手段具有重要 意义。
1材料与方法1.1材料人肝癌细胞株H ePG2由ATCC公司提供。
DMEM高糖 和培养基胎牛血清（FBS)来自美国Hyclone公司。
IGF - I I 及噻唑兰（MTT)来自美国Sigma公司。
Brdu细胞增殖检测 试剂盒购自上海麦约尔生物技术有限公司。
总RNA提取试 剂盒购自陕西先锋生物科技有限公司。
逆转录试剂盒、SYBR Prem ix Ex Taq™II Perfect Real - tim e 试剂盒来自Takam宝生物工程有限公司，荧光实时定量PCR仪为美国 Applied Biosystem s Step One。
pi6、p53 及（3 - actin 弓1物由 Takam宝生物工程有限公司合成。
RIPA裂解液购自北京百 泰克生物技术有限公司，蛋白酶抑制剂（Cocktml)购自美国 Roche公司，NC膜购自美国M UUpore公司。
EC L化学发光 试剂购自美国Pierce公司。
兔抗人一抗pl6和p53购自美国 Abeam公司，兔抗人p - actin—抗购自美国Proteintech公司，羊抗兔IgG- HRP二抗购自陕西先锋生物科技有限公司。
1.2实验方法1.2.1细胞培养人肝癌细胞HePG2加人DMEM高糖完 全培养液（1〇〇ml/L FBS,100万U/L青霉素及100 m g/L链 霉素），并放置于5%C02、37 T：培养箱中进行培养，每隔2~ 3天传代1次，取对数生长期细胞用于后续的实验。
1.2.2 MTT比色法 HepG2 细胞（2x l04/ml)加人 96 孔 板,200 |j〇/孔。
细胞贴壁生长24 h后，予以不同浓度的IGF -II(25、50、100 n g/ml),对照组为无血清DMEM培养基，每 孔200 ^1。
每组设置6个复孔。
分别作用24、48、72h后，每 孔加人MTT溶液(5 m g/ml) 2〇 |jd。