最新实验4-血清甘油三酯含量测定复习课程
十4-甘油三酯
KOH皂化TG
氧化
+
2HIO4
2HCHO（甲醛）
+乙酰丙酮+铵离子 3, 5-二乙酰-1, 4-二氢二甲基吡啶， 与同样处理的标准管进行比色，可测出甘油三酯的含量。
三、实验器材与试剂
722型分光光度计 试管、吸管、水浴锅 抽提液、0.04mol/L硫酸溶液、异丙醇 皂化试剂 氧化试剂 乙酰丙酮试剂 甘油三酯标准液，浓度1mg/ml
五、 结果计算
m(TG)（ mg ） =A测定管/A标准管 ×C0×100
正常参考值为30-150mg/dl。
注意事项：
1、 抽提时摇匀静置，待完全分层后才能吸取上层液， 吸取上层液时不能吸入下层液，摇匀时勿将试剂撒出。
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2 、选用小试管时试管口径不能太细，否则溶液过多不
能振荡混匀。
3、甘油三酯平均分子量为885。
4、试管使用时需要干燥，清洗需要用洗涤剂。
四、操作步骤
1、抽提
取三只小试管依次加入蒸馏水（空白B）、TG标准 液（S）、血清样品（U），抽提剂及硫酸，剧烈振 荡15秒； 静置分层后，吸取上层液。 2、皂化反应
取三只同样编号的试管加入上层液1ml，异丙醇1ml 及皂化试剂0.2ml，立即摇匀，放置65℃水浴5min。
3、氧化显色
各管再加入氧化试剂1ml，混匀后加入乙酰丙酮1ml 并混匀， 65℃水浴15min，取出冷却，以B管溶液调 零于420nm处比色测定S、U管。
实验十 血清甘油三酯简易测定法
一、目的
了解并掌握测定血清甘油三酯的简易测定法
二、原理
血清中的甘油三酯经正庚烷-异丙醇混合溶剂 抽提后，用KOH溶液皂化，并进一步用过碘酸
甘油三酯测定的操作规程
甘油三酯测定的操作规程一、实验前的准备工作：1.准备所需的实验仪器和试剂，包括分光光度计、离心机、试剂瓶、称量瓶、吸管等。
2.清洁实验用具，保证实验环境的卫生和安全。
3.检查仪器的使用情况，确保其正常工作。
二、实验步骤：1.取一定量的血液样本，将其放入离心管中。
2.将离心管放入离心机中，离心5-10分钟，使红细胞和血浆分离。
3.用吸管将上清液吸入试剂瓶中，确保不吸入红细胞沉淀。
4.在一个干净的试剂瓶中，加入一定量的甘油三酯试剂。
5.将试剂瓶摇匀，使甘油三酯试剂均匀分散。
6.取适量的上清液，加入已摇匀的试剂瓶中。
7.用吸管慢慢吸取液体，尽量避免产生气泡。
8. 将试剂瓶放入分光光度计中，设置波长为546nm。
9.读取并记录光密度值，作为读取的基准值。
10.按照甘油三酯试剂的说明书，进行标准曲线的制作。
11.将实验样本分别加入已制作好的标准曲线体系中。
12.读取标准曲线上与实验样本对应的光密度值。
13.根据标准曲线计算出实验样本中甘油三酯的浓度。
14.计算每个样本的甘油三酯浓度的平均值，并记录下来。
15.清洗实验仪器和试剂瓶，保持实验室环境的整洁和安全。
三、数据处理：1.对于每个样本，根据标准曲线计算出甘油三酯的浓度。
2.将测得的各样本的浓度值进行平均计算，得到样本组的平均浓度值。
3.根据实验设计和需要，对样本组的平均浓度值进行统计学分析。
四、实验注意事项：1.操作过程中要保持实验环境的卫生和安全。
2.严格按照试剂的使用说明操作，避免误操作。
3.操作过程中要注意换液的避免，避免产生气泡。
4.保持实验仪器的清洁和正常工作，可定期进行维护和保养。
5.实验结束后，及时清洁仪器和实验台面，保持实验室的整洁。
《生物化学试验》实验四：血清甘油三酯含量测定
A standard
0.2
M standard = C standard× V standard
正常参考值为10-150 mg/dl。
注意事项
抽提时摇匀静置，待完全分层后才能吸取上层液， 吸取上层液时不能吸入下层液； 选用小试管时试管口径不能太细；
试管使用时必须要干燥；
实验完成后，试管和比色杯必须用皂粉洗干净， 不能有油污，将水甩干，倒置晾干； 枪头必须清洗干净，甩干
组成与含量 总 脂 400~700mg/dl (5 mmol/L) 甘油三酯 10~150mg/dl (0.11 ~ 1.69 mmol/L) 总 磷 脂 150~250mg/dl (48.44 ~ 80.73 mmol/L) 总胆固醇 100~250mg/dl (2.59 ~ 6.47 mmol/L) 游离脂酸 5~20mg/dl (0.195 ~ 0.805 mmol/L)
实验四
血清甘油三酯含量测定
Assay of Triglyceride content
一、目的与要求
1、了解血清(serum)甘油三酯含量测定的 正常值与临床意义
2、掌握血清甘油三酯化学法测定的基本原 理及主要技术方法
BACKGROUND
血浆所含脂类统称血脂， 包括：甘油三酯、磷脂、胆固醇及其酯以及游离脂酸。
PRINCIPLE
甘 FA 油 FA
FA
1、血清脂蛋白中的甘油三酯经正庚烷-异丙醇混合 溶剂抽提(isolated )后，脂蛋白变性，结合的甘 油三酯分离。
2、用氢氧化钾皂化(saponified)，使甘油三酯水解 成脂肪酸和甘油。
3、游离的甘油被过碘酸氧化(oxided)成甲醛，甲 醛与乙酰丙酮在铵离子存在下，缩合成黄色的3, 5-二乙酰-1, 4-二氧二甲基吡啶，
甘油三酯的测定的实验报告
甘油三酯的测定的实验报告实验报告：甘油三酯的测定一、实验目的1.掌握甘油三酯测定的原理和方法。
2.熟悉甘油三酯在临床诊断中的应用。
3.学习使用实验室仪器进行样品检测。
二、实验原理甘油三酯是血液中的一种脂质成分，其测定主要用于评估心血管疾病的风险。
甘油三酯的测定通常采用酶法，利用甘油三酯酶将甘油三酯水解成甘油二酯和脂肪酸，再通过甘油激酶将甘油二酯转化为甘油一酯和磷酸，最后通过磷酸脱氢酶将甘油一酯转化为甘油和磷酸盐。
通过测定反应过程中产生的磷酸盐的量，可以推算出甘油三酯的浓度。
三、实验步骤4.样品准备：采集受试者的血液样本，分离出血清，备用。
5.试剂准备：准备好甘油三酯测定试剂盒，按照说明书上的操作配制好试剂。
6.仪器准备：准备好全自动生化分析仪，调试好仪器参数。
7.样品检测：将血清样品加入试剂中，充分混匀，放入全自动生化分析仪中进行检测。
8.数据记录：记录每个样品的检测结果，包括样品编号、甘油三酯浓度等。
四、数据分析9.数据整理：将检测结果进行整理，计算出每个样品的甘油三酯浓度。
10.数据统计：计算所有样品的甘油三酯浓度的均值、标准差、最大值和最小值等统计指标。
11.数据分析：根据统计结果，对数据进行进一步分析。
例如，可以绘制柱状图或折线图来直观地展示不同性别或年龄组的甘油三酯浓度分布情况。
五、实验结论根据实验数据和分析结果，我们可以得出以下结论：12.本实验采用的酶法测定甘油三酯的方法可靠，可以用于临床诊断。
13.通过对受试者血液样本的测定，我们得到了不同性别和年龄组的甘油三酯浓度分布情况。
这些数据可以为临床医生提供参考，以评估心血管疾病的风险。
14.从数据中可以看出，不同性别和年龄组的甘油三酯浓度存在差异。
因此，在临床实践中，应该根据不同人群的特点制定相应的甘油三酯控制标准。
15.需要注意的是，甘油三酯测定结果受多种因素的影响，如饮食、运动、药物等。
因此，在解释实验结果时应该综合考虑这些因素。
血清甘油三酯测定
2016/6/3
Biochemistry Experiments
2
甘油三酯(TG)chemistry Experiments
3
1.实验原理
抽提:正庚烷一异丙醇 皂化 氧化 显色 比色计算
0.2 × 100 0.2 ＝ mg% ×
测定管吸光度 标准管吸光度
7
1.0 0.3
1.0 0.3
氧化试剂
乙酰丙酮
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
2016/6/3
Biochemistry Experiments
6
3.注意事项
• 提取时,充分震荡,吸量上层液时注意不要吸到
到下层液;
• 每一步骤均应混匀,保温时间要准确;
2016/6/3
Biochemistry Experiments
Biochemistry Experiments
5
加入物(ml) 上清液
空白管 —
标准管 —
测定管 0.2
参考血清
蒸馏水 抽提液 硫酸溶液
—
0.2 2.5 0.5
0.2
— 2.5 0.5 充分摇匀剧烈震荡15秒 静止分层 取0.3ml 上层液
—
— 2.5 0.5
异丙醇 皂化试剂
1.0 0.3 混匀56度6分钟
血清甘油三酯测定
血清甘油三酯测定
血清中甘油三酯经正庚烷一异丙醇混合
溶剂抽提后，用氢氧化钾溶液皂化成甘油，
并进一步用过碘酸氧化成甲醛，在NH4＋的
存入下，甲醛与乙酰丙酮反应生成3,5—二乙 酰—1,4—二氢二甲基吡啶，后者为带荧光的 黄色物质。与同样处理的标准液比色计算， 即得血清中甘油三酯的含量。
实验血清甘油三酯与胆固醇的测定
胆固醇酯化的位点
第二十二页，讲稿共三十一页哦
六．相关知识与临床意义
1．胆固醇的生理功能
❖
是生物膜的重要成分，对控制生物膜的流动性有重要作用；
❖
是合成胆汁酸、类固醇激素及维生素D等生理活性物质的
前体。
第二十三页，讲稿共三十一页哦
六．相关知识与临床意义
第五页，讲稿共三十一页哦
三．器材及试剂
1．器材：
酶标仪，酶标板，37度恒温箱，移液枪。
2. 试剂：
一步法： Tris-HCl 缓冲液（ pH7.6 ，浓度为150mmlo/L），LPL或脂肪酶
（3000u/L），甘油激酶（GK）（250u/L），ATP（0.5mmol/L），磷酸甘油
氧化酶（GPO）（3000u/L ），过氧化物酶（POD；辣根）（1000u/L），
如肥大性骨关节炎、老年性白内障、牛皮癣等，血清胆固醇浓度间或也
有增加。
（ 2 ）在恶性贫血、溶血性贫血以及甲状腺功能亢进时，血清胆固醇含
量降低，其他如感染、营养不良等情况下，胆固醇总量常见减低。
（3）胆固醇酯系由胆固醇与脂肪酸结合而成，此反应主要在肝脏内进行。
肝脏有实质性病变时，胆固醇的含量可显著地减少，同时在胆固醇总量内
成的醌亚胺染料色泽强度与样品中胆固醇的含量成正比。测定标准样品溶液和待测
血清样品反应生成的醌亚胺染料吸光度（A）值，即可求出待测血清样品中总胆
固醇的浓量。反应如下：
胆固醇脂酶
胆固醇+RCOOH
胆固醇酯（TC）＋H2O
胆固醇氧化酶
胆固醇+O2
4-胆甾烯酮+H O
2 2
甘油三酯测定操作规程
甘油三酯测定操作规程甘油三酯（TG）是一种常见的生物体内能量储存物质，也是血液中的一种重要指标。
测定血液中的甘油三酯含量可以用于评估人体的脂质代谢水平和健康状况。
以下是甘油三酯测定的操作规程（SOP）。
一、实验室准备工作：1.1检查实验室仪器设备的工作状态，确保仪器正常运行。
1.2检查试剂的保存情况，确认试剂未过期。
1.3准备所需的实验室耗材和试剂。
二、试剂准备：2.2标准品溶液：准备一系列的浓度不同的甘油三酯标准品溶液，用于构建标准曲线。
三、仪器设置：3.1打开甘油三酯测定仪器，按照仪器说明书进行设置。
3.2按照试剂盒说明书的要求，设置测定参数，包括反应时间、温度等。
四、样品准备：4.1血液样品采集：按照标准操作程序采集受检者的静脉全血样本。
4.2血清分离：将采集的全血样本放置在离心机中，以适当的转速离心一段时间，将血浆和细胞分离。
4.3样品存储：为了保持样品的稳定性，将分离出来的血清样品储存在-80℃的低温冰箱中。
五、试剂操作：5.1标准曲线建立：取一定量的不同浓度的甘油三酯标准品溶液，按照试剂盒说明书中的操作方法进行处理，然后使用甘油三酯测定仪器测定各标准品的吸光度，并绘制标准曲线。
5.2样品处理：取一定量的血清样品，按照试剂盒说明书中的操作方法进行处理，使之适用于甘油三酯测定仪器。
5.3甘油三酯测定：将处理好的标准品和样品加入甘油三酯测定仪器中，按照仪器说明书中的要求进行测定。
六、数据处理：6.1利用标准曲线中各标准品的吸光度值和对应的浓度值进行回归拟合，得到样品中甘油三酯的浓度值。
6.2统计分析：对测定结果进行统计分析，根据实验需求进行数据分析。
七、质量控制：7.1进行质量控制：使用已知浓度和稳定性好的标准品进行质量控制，检查甘油三酯测定实验的准确性和可靠性。
7.2定期检查仪器的准确性和精密度。
7.3记录质量控制的结果和操作过程。
八、实验安全：8.1操作人员要穿戴好实验室安全用具，包括实验手套、眼镜等。
植物甘油三酯的测定
植物甘油三酯的测定1. 样品采集在进行植物甘油三酯的测定前，首先需要采集样品。
采集的样品应具有代表性，能够反映植物的整体状况。
根据实验要求，可以选择植物的不同部位，如叶片、茎、根等作为样品。
采集的样品应保持新鲜，避免长时间暴露在空气中，以免受到污染或氧化。
2. 样品处理采集的样品需要进行适当的处理，以去除杂质和水分，为后续的甘油三酯提取做准备。
样品处理的方法可以根据实验要求而定，一般包括清洗、干燥、粉碎等步骤。
处理后的样品应保持干燥，并妥善保存，避免受潮和污染。
3. 甘油三酯提取甘油三酯的提取是测定过程中的关键步骤。
常用的提取方法有溶剂提取法和匀浆法。
溶剂提取法是利用有机溶剂将甘油三酯从样品中溶解出来；匀浆法则是将样品与适量的溶剂混合，通过高速匀浆机破碎细胞，使甘油三酯释放出来。
可根据实验条件选择适合的方法。
4. 提取液净化提取出的甘油三酯溶液可能含有一些杂质，如色素、蛋白质等，需要进行净化处理。
常用的净化方法有离心法、过滤法和柱层析法等。
根据实验要求选择适当的净化方法，以确保甘油三酯测定的准确性。
5. 甘油三酯定量甘油三酯的定量可以采用不同的方法，如重量法、气相色谱法、液相色谱法等。
重量法是通过称重计算甘油三酯的质量，气相色谱法和液相色谱法则通过色谱分析确定甘油三酯的含量。
根据实验条件和要求选择适合的方法进行定量分析。
6. 结果分析通过对比已知标准品和样品的色谱峰，可以对甘油三酯的含量进行定量分析。
同时，还可以根据需要进一步分析甘油三酯的组成和结构，以了解植物甘油三酯的特点和功能。
7. 数据处理数据处理是测定过程中的重要环节。
对于收集到的实验数据，需要进行统计分析、图表绘制等处理。
通过数据处理，可以更好地理解实验结果，并对实验数据进行科学合理的解释和推断。
同时，数据处理还可以帮助我们发现实验中的异常值和误差来源，为改进实验和提高测定精度提供依据。
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比色杯的使用
1、分清光面、毛面。手应接触毛面，光从光面通过 2、用溶液润洗2-3次，装至2/3至4/5体积 3、粗纸吸水、柔纸擦亮光面
实验结果
Lambert-Beer 定律
标准管法
A1 ——
=
c1 ——
=
m1 ——
（终体积相同时）
A2 c2 m2
样品TG浓度 = ——AA—样标—品准——品—×—m—标（或4）只小试管，依次加入蒸馏水、标准液、样品，
抽提剂及硫酸，边加边摇，用力振摇10min，静置10min分层 注意：试管必须干燥
皂化
吸取上层液体0.5ml，加入对应的3 （或4）只大试管中，
加入异丙醇、皂化试剂，充分混匀，65℃水浴5min 注意：吸上层液时，务必当心，绝对不可吸入下层液体 （分光光度计预热）
氧化显色 加入氧化试剂，充分混匀后，
加入乙酰丙酮和氨的混合液，摇匀，65℃水浴15min
比色 取出试管，流水/室温冷却，测420nm的吸光度
分光光度计的使用
样品池 拉杆，0-4档
波长 读数
毛面 光面
1. 打开电源，调节旋钮至需要的波长，预热20~30min 2. 1档（空白管），T模式调100%，显示“Blank”、“100” 3. 拉杆拉至1.5档，T模式调0%，显示“0.00” 4. 换到A模式，拉至2、3、4档，读取各个样品的吸光度
急性胰腺炎、原发性高甘油三酯血症及 动脉粥样硬化等
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实验4-血清甘油三酯含量 测定
实验目的
掌握血清甘油三酯化学法测定的 基本原理及主要技术方法
了解血清甘油三酯含量测定的 正常值与临床意义
实验原理
皂化
+
KOH
60-70℃ 20min
3
+
甘油三酯
钾皂
甘油
氧化
HIO4 2
甘油
甲醛
显色
+
NH4+
甲醛
乙酰丙酮
3,5-二乙酰-1,4二氢-2,6 二甲基吡啶 （黄色带荧光）
选用小试管时试管口径不能太细；
试管使用时必须要干燥；
实验完成后，试管和比色杯必须用皂粉洗干净， 不能有油污，将水甩干，倒置晾干； 枪头必须清洗干净，甩干
临床应用
血脂：血甘油三酯、血胆固醇
餐后甘油三酯会增高，检查时一定要空腹抽血 饮酒可引起血清甘油三酯浓度急性、短暂性升高，
抽血前几天禁止饮酒 正常人血清甘油三酯水平有随年龄增高的趋势 血清甘油三酯水平升高多见于糖尿病、肾病综合征、
mg/ml
—A样—品— × 1mg/ml ×0.2ml = —A—标准—品—————————
0.2ml
mg/ml —摩—尔—质—量—g/m—o—l (8—85—)
×1000
mmol/L
国际单位
正常参考值为0.30~1.7mmol/L
注意事项
抽提时摇匀静置，待完全分层后才能吸取上层液， 吸取上层液时不能吸入下层液；