小鼠脑组织中单胺类神经递质含量测定方法的建立与比较_张海
高效液相色谱法对大鼠各器官中单胺类神经递质的测定
高效液相色谱法对大鼠各器官中单胺类神经递质的测定毛有彦;李爱芝【期刊名称】《中国误诊学杂志》【年(卷),期】2007(7)25【摘要】目的:以高效液相色谱法同时测定五种神经递质的含量,为神经递质的检测探索新的实验方法。
方法:色谱柱为C18柱,流动相为甲醇水(体积比为4∶6,其中每升中含EDTA-Na20.028g、SDS0.15g及浓硫酸0.22ml),流速1.0ml/min。
结果:本实验方法对大量样品进行过测定,其中包括正常、肝气郁症、肝气逆症等动物模型测定及用药后动物模型的测定,取得了可靠的结果。
结论:本方法实验成本低、样品处理量大,为稳定性及精密度、准确性都可靠的检测方法。
【总页数】2页(P5983-5984)【关键词】色谱法;高压液相;神经递质/分析;生物源单胺类/分析;动物【作者】毛有彦;李爱芝【作者单位】山东省潍坊市人民医院检验科;山东省潍坊市市立医院妇产科【正文语种】中文【中图分类】R122.11【相关文献】1.库仑阵列电化学高效液相色谱法测定大鼠脑组织中单胺类神经递质及代谢产物[J], 张向晖;刘军;苏林雁2.荧光-反相高效液相色谱法同时测定小鼠脑组织中3种单胺类神经递质 [J], 魏小娟;许建华3.库仑阵列电化学-高效液相色谱法同时检测大鼠不同脑区中的8种单胺类神经递质 [J], 邓少东;卢洪梅;林励;肖凤霞;成晓燕4.高效液相色谱法测定百草枯染毒后小鼠脑组织中8种单胺类神经递质的含量变化[J], 昝富文; 解裴育; 贾昊然; 刘迎; 马莉5.柱前衍生-高效液相色谱法同时测定血清中氨基酸类及单胺类神经递质 [J], 白洁;王妲;刘泽平;张佳琪;刘丽艳;韩艳梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
荧光-反相高效液相色谱法同时测定小鼠脑组织中3种单胺类神经递质
１３ ３ 线 性 范 围 ： 制 ５ ０ ｇ ｍＬ ， 百 草 枯溶 液 ， 其 用 ．． 配 ０ ・ 一 的 将 健康 人 血 清 逐 级 稀 释 成 ５ 、 ０ ４ ２ ０８ ０ ４ ０ ２ ０ １ ０ １ 、 、 、 ．、 ．、 ．、 ．、
００ ・ ． ５ ｇ ｍＬ ， 照 １ ３ １节 方 法 处 理 。在 ２ ７ ｍ 处 测 定 吸 按 ．． ５ｎ
［］ 环 境 与 健 康 杂 志 ．０ ７ ２ （ ）３ ５ Ｊ． ２ ０ ，４ ５ ：４ ．
１ ３６ 反 应 条 件 的选 择 ： 第 ～ 和 第 二 方 法 使 用 连 二 亚 硫 酸 ．． 与 钠法 比较 ， 面 二 法 操 作 条 件 较 为 苛 刻 ， 为连 二 亚 硫 酸 钠 溶 前 因
理， 清中百草枯浓度分别为 １ ． 血 ７２和 ９ ９ ／ ・ ．１ ｇ ｍＬ＿。 ｚ 。
２ 讨 论
百草 枯 是 毒 性 较 大 的 农 药 ． 旦 中 毒 时 ， 死 亡 率 可 达 一 其
５ ％～８ ％ ； 报 告 【 认 为可 达 ８ ％ ～９ ％ 。 体 液 中 的 浓 度 ０ ０ 有 ５ ］ ５ ５ 检 测 常 可 预 测 抢救 的 成 功 率 。 文 献 报 道 的 检 测 方 法 有 气 相 色
液本 身 稳 定 性 较 差 （ ．ｈ后 就 不 能 再 用 ） 须 随 用 随 配 ， 便 １５ ， 不
（］ 瑞 萍 ， 泽 武 ． ５张 邱 循证 医学 在 中毒 领 域 中 的 应 用 ［］ Ｊ ．中 国 急 救 医
时 较 长 ， 利 于 突 发 事 件 的 检 测 。 分 光 光 度 计 由 于 已 较 为 普 不
及， 作 简 便 快 速 。 敏 度 高 ， 有 实际 的 临 床 意 义 ， 操 灵 具 尤其 是 本
高效液相色谱_荧光法测定小鼠脑组织中单胺递质及其相关物质_张璐璐
学报Journal of China Pharmaceutical University2010，41（4）：367－371高效液相色谱-荧光法测定小鼠脑组织中单胺递质及其相关物质张璐璐1，冯芳1，2*，叶小敏1，朱杰1，马冯飞1（中国药科大学1药物分析教研室；2药物质量与安全预警教育部重点实验室，南京210009）摘要建立高效液相色谱-荧光分析方法，研究小鼠脑皮层、海马、纹状体、丘脑等不同部位的单胺类神经递质及其相关物质。
脑组织样本经高氯酸沉淀蛋白后进行色谱分析，采用Lichrospher C18柱（250mmˑ4.6mm，5μm），流动相为pH 3.06缓冲液（含1mmol/L庚烷磺酸钠；30mmol/L磷酸二氢钠-磷酸溶液）-甲醇（85ʒ15）；流速：1.0mL/min；柱温：35ħ。
荧光检测：激发波长为280nm，发射波长为315nm。
采用建立的方法，鉴别出小鼠脑中存在去甲肾上腺素（NE）、多巴胺（DA）、5-羟色胺（5-HT）、酪氨酸、色氨酸、3，4-二羟苯乙酸和5-羟吲哚乙酸等物质；对NE、DA和5-HT进行定量研究，确定它们的线性范围分别为2.4 471.0ng/mL（r=0.9996），2.6 519.5ng/mL（r=0.9994），2.4 469.3ng/mL（r= 0.9991），日内、日间RSD均小于9.0%，准确度达到限度要求，提取回收率大于90%。
本法专属性好，准确度高，可以反映不同鼠脑区域单胺类神经递质及相关物质含量上的差异。
关键词高效液相色谱-荧光分析；单胺类神经递质；相关物质；脑组织中图分类号R917文献标识码A文章编号1000－5048（2010）04－0367－05Determination of monoamine neurotransmitters and related substances in mouse brain tissue by HPLC-FLDZHANG Lu-lu1，FENG Fang1，2*，YE Xiao-min1，ZHU Jie1，MA Feng-fei11Department of Pharmaceutical Analysis;2Key Laboratory of Drug Quality Control and Pharmacovigilance(Ministry of Education)，China Pharmaceutical University，Nanjing210009，ChinaAbstract To establish an HPLC-FLD method for the investigation of monoamine neurotransmitters and related substances in mouse frontal cortex，hippocampus，striatum，and hypothalamus.Mouse brain samples were depro-teinized by perchloric acid and analyzed.The separation was carried out on a Lichrospher C18column(250mmˑ4.6mm，5μm).The mobile phase was composed of pH3.06buffer(including1mmol/L heptanesulfonic acidsodium salt，30mmol/L NaH2PO4-H3PO4solution)and methanol in the ratio of85ʒ15;the flow rate was1.0mL/min and the column temperature was35ʎC.Fluorescence detection:the excitation and emission wavelengthswere set atλex =280nm，λem=315nm.Under the optimized conditions，norepinephrine(NE)，dopamine(DA)，5-hydroxytryptamine(5-HT)，3，4-dihydroxy-phenyl acetic acid(DOPAC)，5-hydroxyindoleacetic acid(5-HIAA)，tyrosine(Tyr)，and tryptophan(Trp)in mouse brain were detected.NE，DA，and5-HT were quantified.The line-arity ranges of NE，DA，and5-HT were2.4-471.0ng/mL(r=0.9996)，2.6-519.5ng/mL(r=0.9994)，and 2.4-469.3ng/mL(r=0.9991)，respectively.The intra-and inter-day precision was always lower than9.0%．The accuracy could attain the demands and the absolute recovery values were always higher than90%．The pro-posed method has good specificity and accuracy.It could be used to analyze the content differences of monoamine neurotransmitters and related substances in different mouse brain areas.Key words HPLC-FLD;monoamine neurotransmitter;related substances;brain tissueThis study was supported by the National Natural Science Foundation of China(No.30973858)763*收稿日期2010-03-12*通讯作者Tel：025－83271301E-mail：fengfang1@基金项目国家自然科学基金资助项目（No.30973858）学报Journal of China Pharmaceutical University第41卷单胺神经递质，如去甲肾上腺素（NE）、多巴胺（DA）和5-羟色胺（5-HT）是中枢神经系统中非常重要的生物活性物质，它们的前体是酪氨酸（Tyr）和色氨酸（Trp），酸性代谢产物有3，4-二羟苯乙酸（DOPAC）、5-羟吲哚乙酸（5-HIAA）等。
高效液相色谱_荧光法测定小鼠脑组织中的单胺类神经递质
·774· ◇调查与分析 ◇
安徽医科大学学报 A cta U n iversita tis M ed icina lis A nhu i 2009 Dec; 44 (6)
急性白血病 1 185例次住院患者血流感染特点及危险因素分析
秦 慧 ,杨明珍 ,宋万灯 ,武琳琳 ,缪华伟 ,程 歆 ,吴 炜 ,刘沁华 ,王永庆
安徽医科大学学报 A cta U n iversita tis M ed icina lis A nhu i 2009 Dec; 44 (6)
·773·
1. 4 统计学处理 数据结果以 x ±s表示 ,采用线 性回归最小二乘法计算单胺类神经递质的标准曲 线。
2 结果
2. 1 标准色谱图 实验得到各标准物质谱图见图 1, 3种标准物质都达到了基线分离 。得到了小鼠脑 组织匀浆样品的色谱图 (图 2) ,除了多巴胺前有一 大的未知峰与多巴胺未达到基线分离外 ,其余各种 化合物均达到基线分离 。标准液和脑匀浆样品中的 NE、DA 和 52HT的峰之间分离较好 (样品中 DA 与 杂质峰的分离尚有待改善 ) 。
相关系数 0. 999 7 0. 999 9 0. 998 9
2. 3 回 收率 和精 密度 的测 定 按 113 操 作 , 按 0110 g脑 (湿重 )加入 110 m l的比例加入低 、中 、高 浓度的标准溶液 ,于同日内分别测定 NE、DA 和 52 HT加入量的对照品脑组织匀浆样品 ,每种加入量样 品平行测定 5次 ,计算各种标准物不同浓度的脑组 织匀浆样品回收率 ,结果如表 3。连续测定混合标 准液 5次 , NE、DA 和 52HT的峰面积日内测定的相 对标准偏差分别为 217%、215%和 314%。
图 1 3种神经递质混合标准溶液色谱图 (1: NE; 2: DA; 3: 52HT)
库仑电化学法快速测定单胺类神经递质的方法学研究
库仑电化学法快速测定单胺类神经递质的方法学研究【摘要】目的建立库仑阵列电化学高效液相色谱法快速测定大鼠脑组织中的单胺类神经递质的含量。
方法采用库仑阵列电化学检测器检测去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5�掺巧�胺(5��HT)、5�掺沁胚嵋宜�(5��HIAA)，采用Phenomenex C18反相色谱柱(150 mm×4.60 mm，5 μm)，流动相为缓冲液�惨译�(体积比87∶13)，流速为1 mL・min-1，柱温为35 ℃。
结果 4种单胺类神经递质的最低检测限为0.015 15～0.018 15 ng ，回收率为85.3 %～100.5 %。
结论该法具有快速、准确、灵敏、样品制备简便等优点，可用于大鼠脑组织中单胺类神经递质的分离检测。
【关键词】高效液相色谱法;单胺类神经递质;库仑阵列电化学检测器(1.School of TCM，Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine，Guangzhou Guangdong 510006，China; 2.Taishan Medical University，Taian，Shandong 271016，China)Abstract:Objective Toestablish a rapid method for determining monoamine neurotransmitters in rats’ brain tissue by HPLC with coularray detector.Methods HPLC was performed on a Phenomenex C18 column(150×4.60 mm，5 micron). The mobile phase，consisted of acetonitrile��water phase(13∶87)，was at aflow��rate of 1 mL・min-1. The column temperature was kept at 35 ℃. The levels of NE，DA，5��HT and 5��HIAA were determined.Results Theminimum measurement limit was 0.015 15-0.018 15 ng. The average recoveries were 85.3 %-100.5%.Conclusion This method is rapid，accurate，highly sensitive and easy to operate. The procedure issuitable for determining the monoamine neurotransmitters in rats’ brain tissue.Key words:HPLC; monoamine neurotransmitters; coularray detector单胺类物质包括去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5�掺巧�胺(5��HT)、五羟吲哚乙酸(5��HIAA)等物质，是哺乳动物和人类中枢神经重要的信息传递物质。
高效液相色谱-荧光法测定小鼠脑组织中的单胺类神经递质
高效液相色谱-荧光法测定小鼠脑组织中的单胺类神经递质金忠秀;许媛媛;李平;储成顶
【期刊名称】《安徽医科大学学报》
【年(卷),期】2009(44)6
【摘要】目的建立同时检测小鼠脑内的去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)3种神经递质的高效液相色谱方法 .方法采用的色谱条件为:C18柱分离,梯度洗脱.结果方法的检测限(以3倍信噪比计算)2.5μg/L以下,回收率均在
87.8%～105.7%之间,样品日内测定峰面积的相对标准偏差在3.4%以下.结论该方法具有检测灵敏度高、样品制备简便等优点,对小鼠脑内的3种单胺类递质的检测具有实用价值.
【总页数】3页(P772-774)
【作者】金忠秀;许媛媛;李平;储成顶
【作者单位】安徽医科大学附属省立医院脑外科,合肥,230001;安徽医科大学公共卫生学院,合肥,230032
【正文语种】中文
【中图分类】R329.54;R971
【相关文献】
1.固相萃取-高效液相色谱-荧光法测定人体尿液中单胺类神经递质 [J], 高慧;邢燕;汪洋;宋金枝;王旭
2.高效液相色谱-电化学检测法研究大蒜素对百草枯中毒小鼠脑组织中单胺类神经
递质含量的影响 [J], 檀笑昕;张淑娟;刘坤;张铧尹;连靠奇;徐向东;康维钧
3.荧光-反相高效液相色谱法同时测定小鼠脑组织中3种单胺类神经递质 [J], 魏小娟;许建华
4.高效液相色谱法测定百草枯染毒后小鼠脑组织中8种单胺类神经递质的含量变化[J], 昝富文; 解裴育; 贾昊然; 刘迎; 马莉
5.高效液相色谱-荧光法测定小鼠脑组织中单胺递质及其相关物质 [J], 张璐璐;冯芳;叶小敏;朱杰;马冯飞
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氨基酸类神经递质含量测定
一、样品处理
方法1 方法 【高效液相色谱法检测小鼠脑组织中氨基酸类神经递质 】 脑组织称重， 倍体积的甲醇 脑组织称重，加入 9倍体积的甲醇 水，冰浴匀 倍体积的甲醇/水 离心，上清液低温保存。 浆；离心，上清液低温保存。 衍生化反应：小脑组织液加入乙睛，混匀离心， 衍生化反应：小脑组织液加入乙睛，混匀离心， 二硝基氟苯， 取上清液加入 NaHCO3和2,4 -二硝基氟苯，混匀， 二硝基氟苯 混匀， 暗中衍生 (水浴 65 ℃ )，进样。 水浴 ，进样。
方法5 方法 【高效液相色谱 - 质谱 - 质谱法测定脑组织中氨基酸类神经递质】 脑组织称重， 脑组织称重，加入 HCl，冰浴超声粉碎 匀浆 ，冰浴超声粉碎, 液加入内标，离心取上清加入甲醇 甲醇， 液加入内标，离心取上清加入甲醇，振荡 30 s， ， 离心，上清液备用。 离心，上清液备用。 衍生化反应：组织液60 吹干， 衍生化反应：组织液 ℃加热并 N2吹干，取 出后加入盐酸正丁醇 盐酸正丁醇， 出后加入盐酸正丁醇，60 ℃衍生化反应 30 min。 。 吹干，残渣用甲醇 醋酸铵水溶液 甲醇-醋酸铵 60 ℃ 加热并 N2吹干，残渣用甲醇 醋酸铵水溶液 溶解，过滤后待用。 溶解，过滤后待用。
二、测试方法
方法1 方法 【高效液相色谱荧光法同时测定小鼠脑组织中4种氨基酸类神经递质 】 液相色谱仪系统：购自日本岛津， 液相色谱仪系统：购自日本岛津，RF-10AXL荧光 日本岛津 检测器 色谱条件：色谱柱为Agilent C18柱 色谱条件：色谱柱为Agilent ZORBAX C18柱 (4.6 mm× 150mm，5µm)，采用梯度洗脱。流动相 × ， ，采用梯度洗脱。 缓冲液。 A为甲醇，流动相 为醋酸钠缓冲液。柱温 ℃，进 为甲醇，流动相B为醋酸钠缓冲液 柱温30℃ 样量20µL。 样量 。 荧光检测波长： 荧光检测波长：激发光波长为 340 nm，发射光 ， 波长为 450 nm。 。
一种C57小鼠脑组织和血浆中18种氨基酸测定的前处理方法[发明专利]
![一种C57小鼠脑组织和血浆中18种氨基酸测定的前处理方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/563a963102d8ce2f0066f5335a8102d276a261b6.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010726469.9(22)申请日 2020.07.25(71)申请人 重庆医科大学地址 400016 重庆市渝中区医学院路1号(72)发明人 蒋心惠 李建沙 张静 龚涛 (51)Int.Cl.G01N 1/28(2006.01)G01N 21/31(2006.01)G01N 30/06(2006.01)G01N 30/74(2006.01)(54)发明名称一种C57小鼠脑组织和血浆中18种氨基酸测定的前处理方法(57)摘要本发明公开了一种C57小鼠脑组织和血浆中18种氨基酸测定的前处理方法，属于生物样品内源性物质前处理领域。
该方法使用紫外分光光度计和高效液相色谱仪，对采取液液萃取结合蛋白质沉淀法处理脑组织匀浆和血浆的方法进行考察，主要考察了样品前处理方法对样品中蛋白质去除量、总脂质去除量、18种氨基酸提取量的影响，进一步优化得到一种C57小鼠脑组织和血浆中18种氨基酸测定的最佳前处理方法。
权利要求书1页 说明书4页 附图5页CN 111829851 A 2020.10.27C N 111829851A1.一种C57小鼠脑组织和血浆中18种氨基酸测定的前处理方法，其特征在于，包括如下步骤：第一步，制备脑组织匀浆与血浆精密称定C57小鼠脑组织，按1：5～1：20(脑组织重量:超纯水＝mg：μL)的比例加入超纯水，以手持匀浆器匀浆30～90s，得到脑组织匀浆，将从眼眶取血得到的样品，离心取上清，得到待处理血浆；第二步，样品处理取100μL～300μL样品，加入100μL～300μL的甲基叔丁基醚，经涡旋震荡、离心、弃上层，以除去样品中的脂质；取100μL～300μL的上述去脂质样品，加入100μL～300μL的蛋白沉淀剂，经涡旋震荡、离心、取上清，以除去样品中的蛋白质；第三步，样品处理后总蛋白质和总脂质含量考察取100μL～300μL经处理后的样品，使用紫外分光光度计在280nm处测定样品的吸光度，考察经处理后的脑组织样品中总蛋白质含量；取100μL～300μL上述经处理后的样品于玻璃试管内，挥干溶剂，加入200μL浓H 2SO 4(96％)，涡旋，90℃水浴加热20min后迅速冷却至室温，再加入200μL 1mg ·mL -1香草醛溶液(17％的磷酸溶液配制)，常温下避光反应后，在500nm～550nm波长下测定吸光度；第四步，HPLC二极管阵列检测器切换荧光检测器考察杂质去除量和氨基酸提取量HPLC的液相条件包括色谱柱、流动相A和流动相B，其中色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱，流动相A为甲醇，流动相B为30mmol ·L -1和pH为6.20的乙酸钠缓冲溶液，脑组织和血浆样品中的氨基酸通过邻苯二甲醛衍生后测定，进样量为20μL，流速为0.9mL ·min -1，柱温为30℃，PDA检测器的检测波长选取230nm，荧光检测器的激发波长为340nm，发射波长为450nm；第五步，确定样品前处理条件经第四步的结果选择前处理方法，选择直接采用0.1～0.5mol ·L -1的高氯酸溶液去除样品中的脂质和蛋白质，为进一步优化样品前处理方法，对高氯酸的用量进行优化，按照1：3～1：9(样品：高氯酸溶液＝μL：μL)比例处理样品，按不同比例的0.1～0.5mol ·L -1高氯酸处理后的样品，经总蛋白质和总脂质含量考察，优化得到样品前处理方法；2.本文中所述的样品是C57小鼠脑皮层和血浆，18种氨基酸是：谷胱甘肽(Gsh)、天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、丝氨酸(Ser)、谷氨酰胺(Gln)、瓜氨酸酸(Cit)、甘氨酸(Gly)、精氨酸(Arg)、牛磺酸(Tau)、酪氨酸(Tyr)、丙氨酸(Ala)、γ-氨基丁酸(GABA)、、色氨酸(Trp)、甲硫氨酸(Met)、缬氨酸(Val)、苯丙氨酸(Phe)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)。
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第二军医大学学报 ２０１７年９月第３８卷第９期 ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｊｓｍｍｕ．ｃｎＡｃａｄｅｍｉｃ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｅｃｏｎｄ Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｅｐ．２０１７，Ｖｏｌ．３８，Ｎｏ．９ＤＯＩ：１０．１６７８１／ｊ．０２５８－８７９ｘ．２０１７．０９．１１７１·论 著·［收稿日期］ ２０１７－０３－２５ ［接受日期］ ２０１７－０５－１５［基金项目］ 国家自然科学基金（８１５７１２９９），军队医学创新工程（１６ＣＸＺ０１２）．Ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ ｂｙ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｉｎａ（８１５７１２９９）ａｎｄ Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ Ｐｒｏｊｅｃｔ（１６ＣＸＺ０１２）．［作者简介］ 张 海，博士，副主任药师，硕士生导师．Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈｘｄｋｓ２００５＠１２６．ｃｏｍ＊通信作者（Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ）．Ｔｅｌ：０２１－３１１６２３０９－８０４，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｍ＿ｙａｏｆｅｎ２００３＠１６３．ｃｏｍ小鼠脑组织中单胺类神经递质含量测定方法的建立与比较张 海１，２，孙 旭３，孙 森１，钱 跹１，刘 敏４＊１．第二军医大学东方肝胆外科医院药材科，上海２００４３８２．同济大学附属第一妇婴保健院药剂科，上海２０１２０４３．第二军医大学长海医院神经内科，上海２００４３３４．第二军医大学长海医院药材科，上海２００４３３ ［摘要］ 目的 比较高效液相色谱（ＨＰＬＣ）－紫外光（ＵＶ）、ＨＰＬＣ－荧光（ＦＬＤ）和ＨＰＬＣ－质谱（ＭＳ）３种检测方法测定小鼠不同脑组织中单胺类神经递质含量的优劣性，并应用最优方法测定血管性抑郁小鼠不同脑组织中单胺类神经递质的含量。
方法 分别采用ＨＰＬＣ仪器搭配ＵＶ、ＦＬＤ和ＭＳ检测器建立小鼠不同脑组织中多巴胺（ＤＡ）、去甲肾上腺素（ＮＥ）和５－羟色胺（５－ＨＴ）的含量测定方法，并进行系统的方法学验证，采用ＨＰＬＣ－ＦＬＤ法对血管性抑郁小鼠不同脑组织中单胺类神经递质ＤＡ、ＮＥ和５－ＨＴ含量进行测定。
结果 ＨＰＬＣ－ＵＶ法的定量限分别为ＤＡ １０３．５ｎｇ／ｍＬ、ＮＥ １０７．５ｎｇ／ｍＬ、５－ＨＴ ９３．６ｎｇ／ｍＬ；ＨＰＬＣ－ＦＬＤ法的定量限分别为ＤＡ １０．３５ｎｇ／ｍＬ、ＮＥ １０．７５ｎｇ／ｍＬ、５－ＨＴ９．３６ｎｇ／ｍＬ；ＨＰＬＣ－ＭＳ法的定量限分别为ＤＡ １０．３５ｎｇ／ｍＬ、ＮＥ ３２．２５ｎｇ／ｍＬ、５－ＨＴ ９．３６ｎｇ／ｍＬ。
ＨＰＬＣ－ＦＬＤ和ＨＰＬＣ－ＭＳ法对ＤＡ和５－ＨＴ的测定优于ＨＰＬＣ－ＵＶ法，ＨＰＬＣ－ＦＬＤ法对于ＮＥ的测定优于ＨＰＬＣ－ＭＳ法，而ＨＰＬＣ－ＭＳ法存在较强的基质效应。
ＨＰＬＣ－ＦＬＤ法检测结果示血管性抑郁小鼠海马组织中ＤＡ含量最低，大脑皮质中５－ＨＴ含量最低，而不同脑组织中ＮＥ含量没有明显差别。
结论 与ＨＰＬＣ－ＵＶ法和ＨＰＬＣ－ＭＳ法相比，ＨＰＬＣ－ＦＬＤ法更适用于小鼠脑组织中单胺类神经递质（ＤＡ、ＮＥ、５－ＨＴ）的含量测定。
ＤＡ和５－ＨＴ可以用作血管性抑郁症疾病的诊断标志物。
［关键词］ 单胺类神经递质；液相色谱－紫外检测器；液相色谱－荧光检测器；液相色谱－质谱检测器；血管性抑郁症 ［中图分类号］ Ｒ ９１７．１ ［文献标志码］ Ａ ［文章编号］ ０２５８－８７９Ｘ（２０１７）０９－１１７１－０７Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ａｎｄ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｃｏｎｔｅｎｔ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｍｏｎｏａｍｉｎｅ ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒｓ ｉｎ ｂｒａｉｎｔｉｓｓｕｅ ｏｆ ｍｉｃｅＺＨＡＮＧ Ｈａｉ １，２，ＳＵＮ Ｘｕ３，ＳＵＮ Ｓｅｎ１，ＱＩＡＮ Ｘｉａｎ１，ＬＩＵ Ｍｉｎ４＊１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｅａｓｔｅｒｎ Ｈｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙ Ｓｕｒｇｅｒｙ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２００４３８，Ｃｈｉｎａ２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｆｉｒｓｔ Ｍａｔｅｒｎｉｔｙ ａｎｄ Ｉｎｆａｎｔ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ａｆｆｌｉａｔｅｄ ｔｏ Ｔｏｎｇｊｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０１２０４，Ｃｈｉｎａ３．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，Ｃｈａｎｇｈａｉ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２００４３３，Ｃｈｉｎａ４．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｃｈａｎｇｈａｉ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２００４３３，Ｃｈｉｎａ ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｃｏｍｐａｒｅ ｔｈｅ ａｄｖａｎｔａｇｅｓ ａｎｄ ｄｉｓａｄｖａｎｔａｇｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ）－ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ（ＵＶ，ＨＰＬＣ－ＵＶ），ＨＰＬＣ－ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｄｅｔｅｃｔｏｒ（ＦＬＤ，ＨＰＬＣ－ＦＬＤ）ａｎｄ ＨＰＬＣ－ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ（ＭＳ，ＨＰＬＣ－ＭＳ）ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｎｏａｍｉｎｅ ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒｓ（ＭＮｓ）ｉｎ ｂｒａｉｎ ｔｉｓｓｕｅｓ ｏｆｍｉｃｅ，ａｎｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ＭＮｓ ｉｎ ｂｒａｉｎ ｔｉｓｓｕｅｓ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ ｍｉｃｅ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｍｅｔｈｏｄ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｗｅ ｕｓｅｄ ｔｈｅ ＵＶ，ＦＬＤ ａｎｄ ＭＳ ｄｅｔｅｃｔｏｒｓ ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｏｐａｍｉｎｅ（ＤＡ），ｎｏｒｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ（ＮＥ）ａｎｄ ５－ｈｙｄｒｏｘｙｔｒｙｐｔａｍｉｎｅ（５－ＨＴ）ｉｎ ｂｒａｉｎ ｔｉｓｓｕｅｓ．Ｔｈｅｎ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄｓ ｗａｓ ｖｅｒｉｆｉｅｄ ｗｉｔｈｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ．Ｔｈｅ ＨＰＬＣ－ＦＬＤ ｗａｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ＤＡ，ＮＥ ａｎｄ ５－ＨＴ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｂｒａｉｎ ｔｉｓｓｕｅｓｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ ｍｉｃｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｉｔ ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｌｉｍｉｔｓ ｏｆ ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｒ ＨＰＬＣ－ＵＶ，ＨＰＬＣ－ＦＬＤ ａｎｄＨＰＬＣ－ＭＳ ｗｅｒｅ ＤＡ １０３．５ｎｇ／ｍＬ，ＮＥ １０７．５ｎｇ／ｍＬ ａｎｄ ５－ＨＴ ９３．６ｎｇ／ｍＬ；１０．３５ｎｇ／ｍＬ，１０．７５ｎｇ／ｍＬ ａｎｄ９．３６ｎｇ／ｍＬ；ａｎｄ １０．３５ｎｇ／ｍＬ，３２．２５ｎｇ／ｍＬ ａｎｄ ９．３６ｎｇ／ｍＬ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｂｏｔｈ ＨＰＬＣ－ＦＬＤ ａｎｄ ＨＰＬＣ－ＭＳ ｆｏｒ ＤＡ·１７１１·第二军医大学学报 ２０１７年９月，第３８卷ａｎｄ ５－ＨＴ ｗｅｒｅ ｓｕｐｅｒｉｏｒ ｔｏ ＨＰＬＣ－ＵＶ．ＨＰＬＣ－ＦＬＤ ｆｏｒ ＮＥ ｗａｓ ｓｕｐｅｒｉｏｒ ｔｏ ＨＰＬＣ－ＭＳ．Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ＨＰＬＣ－ＵＶ ａｎｄＨＰＬＣ－ＦＬＤ，ＨＰＬＣ－ＭＳ ｓｈｏｗｅｄ ｒｅｍａｒｋａｂｌｅ ｍａｔｒｉｘ ｅｆｆｅｃｔｓ．ＨＰＬＣ－ＦＬＤ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆＤＡ ｗａｓ ｔｈｅ ｌｏｗｅｓｔ ｉｎ ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ，５－ＨＴ ｗａｓ ｔｈｅ ｌｏｗｅｓｔ ｉｎ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｃｏｒｔｅｘ，ａｎｄ ＮＥ ｄｉｄ ｎｏｔ ｄｉｆｆｅｒ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｂｒａｉｎｔｉｓｓｕｅｓ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ ｍｉｃｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ＨＰＬＣ－ＵＶ ａｎｄ ＨＰＬＣ－ＭＳ，ＨＰＬＣ－ＦＬＤ ｃａｎ ｍｏｒｅｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ＭＮｓ（ＤＡ，ＮＥ ａｎｄ ５－ＨＴ）．ＤＡ ａｎｄ ５－ＨＴ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ａｓ ｔｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｍａｒｋｅｒｓ ｏｆｔｈｅ ｖａｓｃｕｌａｒ ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ ｄｉｓｅａｓｅｓ．［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］ ｍｏｎｏａｍｉｎｅ ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒｓ；ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ ｄｅｔｅｃｔｏｒ；ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｄｅｔｅｃｔｏｒ；ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ ｄｅｔｅｃｔｏｒ；ｖａｓｃｕｌａｒ ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ［Ａｃａｄ Ｊ Ｓｅｃ Ｍｉｌ Ｍｅｄ Ｕｎｉｖ，２０１７，３８（９）：１１７１－１１７７］ 多巴胺（ＤＡ）、去甲肾上腺素（ＮＥ）和５－羟色胺（５－ＨＴ）是中枢神经调节系统中最重要的神经递质，它们在维持、调节神经系统和各器官的功能中发挥着重要作用［１－４］。
研究发现，一些重要的疾病与神经递质含量的变化关系密切，如帕金森病是一种神经退行性疾病，与脑内ＤＡ含量的变化密切相关［５－７］。
血管性抑郁是老年迟发性抑郁症的一种主要类型，与脑血管疾病及其危险因素相关［８］。
近年研究显示一些炎症细胞因子可导致５－ＨＴ含量下降、色氨酸代谢物的毒性增加，并促使海马神经元坏死和凋亡，导致了抑郁症的发生和认知功能障碍［９－１０］。
因此有必要建立一种灵敏的单胺类神经递质含量测定方法，用于体液中单胺类神经递质的含量测定和疾病诊断。
高效液相色谱（ＨＰＬＣ）、气相色谱（ＧＣ）和毛细管电泳（ＣＥ）均可用于生物样品中神经递质的检测。
其中ＨＰＬＣ仪器较为常见，且可以搭配紫外（ＵＶ）、荧光（ＦＬＤ）、质谱（ＭＳ）以及电化学（ＥＣＤ）等不同的检测器进行检测。
然而这些检测器都有其局限性和缺点，其中ＵＶ检测器不够灵敏；ＥＣＤ受流动相的组成限制，且缺乏重现性；ＭＳ分析生物样品时，干扰峰常常发生在低质荷比区域，导致灵敏度和特异性较差。
因此，对生物样品中的神经递质进行准确测定仍面临着很多挑战。