鲁米诺与化学发光
化学鲁米诺荧光实验报告
一、实验目的1. 熟悉鲁米诺荧光实验的基本原理和操作步骤；2. 掌握鲁米诺荧光反应的检测方法；3. 通过实验验证鲁米诺荧光反应的灵敏度和特异性。
二、实验原理鲁米诺荧光实验是利用鲁米诺在碱性条件下与过氧化氢发生氧化还原反应，产生蓝绿色荧光的现象。
实验中，鲁米诺与过氧化氢在铁离子等催化剂的作用下，生成具有荧光性质的产物。
本实验通过观察鲁米诺荧光反应，实现对微量物质的检测。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：鲁米诺试剂、过氧化氢、氯化铁、蒸馏水、血迹样品、试管、移液器、镊子、酒精灯、荧光灯等。
2. 实验仪器：荧光灯、显微镜、分析天平、烧杯、滴定管等。
四、实验步骤1. 准备实验材料：将鲁米诺试剂、过氧化氢、氯化铁等试剂分别倒入试管中，并准备好血迹样品。
2. 配制鲁米诺溶液：取一定量的鲁米诺试剂，加入适量蒸馏水，搅拌均匀。
3. 检测血迹样品：取少量血迹样品，加入鲁米诺溶液，观察是否产生蓝绿色荧光。
4. 验证灵敏度：取一定量的血迹样品，加入鲁米诺溶液，观察荧光强度。
逐渐减少血迹样品的量，观察荧光强度变化，以验证鲁米诺荧光反应的灵敏度。
5. 验证特异性：取其他含有铁离子的物质，如氯化铁，加入鲁米诺溶液，观察是否产生蓝绿色荧光，以验证鲁米诺荧光反应的特异性。
6. 清理实验器材：实验结束后，用蒸馏水清洗实验器材，确保实验环境整洁。
五、实验结果与分析1. 鲁米诺溶液与血迹样品混合后，观察到蓝绿色荧光，证明血迹样品中含有血红蛋白。
2. 随着血迹样品量的减少，荧光强度逐渐减弱，说明鲁米诺荧光反应具有较高灵敏度。
3. 在氯化铁溶液中加入鲁米诺溶液，观察到蓝绿色荧光，证明鲁米诺荧光反应对铁离子具有特异性。
六、实验结论1. 鲁米诺荧光实验是一种简单、灵敏、特异的检测方法，可用于微量物质的检测。
2. 鲁米诺荧光反应具有较高的灵敏度，可检测出极微量的血红蛋白。
3. 鲁米诺荧光反应对铁离子具有特异性，可用于检测含有铁离子的物质。
七、实验注意事项1. 实验过程中，应避免鲁米诺试剂与皮肤、眼睛接触，如不慎接触，应立即用大量清水冲洗。
鲁米诺CAS521-31-3在蛋白质WB实验中的应用
鲁米诺CAS521-31-3在蛋白质WB实验中的应用
化学发光试剂鲁米诺，全称3-氨基苯二甲酰肼，俗名发光氨luminol，通常用于酶促化学发光实验以及刑侦上的微量血迹检测。
由于其结构简单、易合成、发光量子效率高的特点，现也被用于蛋白质印迹试验western blot中。
蛋白免疫印迹是将经过PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）分离的蛋白质样品，转移到固相载体NC膜（硝酸纤维素薄膜）或PVDF膜（聚偏二氟乙烯膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。
以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。
该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。
鲁米诺发光反应
鲁米诺的发光反应是属于整个蛋白质Western Blot印迹实验中的最后一步，加入1：1的溶液A和溶液B，覆盖pvdf膜，可以显色或发光来观察实验结果。
一般使用的发光液A和B分别是鲁米诺和过氧化氢。
由于鲁米诺被过氧化氢催化氧化发光的反应需要过氧化物酶的参与，属于酶促化学发光，需要维持反应的pH值，实验中的匀浆缓冲液通常用我们Tris-HCL配成的TBS缓冲液，蛋白质转膜缓冲液也是用Tris加SDS、甘氨酸、甲醇缓冲体系，如果是高于20kd的蛋白则可以使用CAPS缓冲剂，也快吃用Tricine代替甘氨酸。
市场上通常鲁米诺是做成即用型的ECL发光液，德晟生产的鲁米诺是粉末试剂，因为发光试剂对光和温度敏感，粉末试剂更利于保存，需要使用时，现配现用即可，可以根据不同的实验配置不同的浓度，不用采购多种浓度试剂，减少浪费。
ecl发光液 过氧化氢浓度 鲁米诺
ecl发光液过氧化氢浓度鲁米诺鲁米诺是一种常见的化学发光剂，它能够在一定的条件下产生强烈的发光效果。
而过氧化氢则是一种常用的氧化剂，在许多化学反应中起到重要的作用。
本文将以ECL发光液和过氧化氢浓度为主题，介绍它们之间的关系以及相关实验结果。
ECL发光液是一种特殊的液体，它能够在一定的条件下产生强烈的化学发光效果。
而过氧化氢是ECL发光液中的一种重要成分，它在发光过程中起到了关键的作用。
过氧化氢浓度的变化会直接影响到ECL发光液的发光效果。
为了研究ECL发光液中过氧化氢浓度对发光效果的影响，我们进行了一系列的实验。
首先，我们准备了不同浓度的ECL发光液样品，分别含有不同浓度的过氧化氢。
然后，我们在同样的条件下进行了发光实验，并记录了不同浓度下的发光强度。
实验结果显示，随着过氧化氢浓度的增加，ECL发光液的发光强度也随之增加。
当过氧化氢浓度较低时，发光效果较弱，甚至无法观察到明显的发光现象。
而当过氧化氢浓度逐渐增加时，发光强度也逐渐增强，最终达到一个峰值。
随后，随着过氧化氢浓度的进一步增加，发光强度开始下降，直至最终消失。
通过这些实验结果，我们可以得出结论：过氧化氢浓度对ECL发光液的发光效果具有决定性的影响。
适当的过氧化氢浓度可以产生强烈的发光效果，而过高或过低的浓度则会导致发光效果的减弱或消失。
这一发现对于ECL发光液的应用具有重要的意义。
在实际应用中，我们可以通过控制过氧化氢浓度来调节ECL发光液的发光效果，以满足不同需求。
同时，对于ECL发光液的进一步研究也可以通过调节过氧化氢浓度来探索更多的发光效果。
ECL发光液和过氧化氢浓度之间存在着密切的关系。
过氧化氢浓度的变化会直接影响到ECL发光液的发光效果。
通过合理调节过氧化氢浓度，我们可以实现不同的发光效果。
这一发现为ECL发光液的应用和研究提供了重要的理论基础，并为进一步的探索提供了新的思路。
鲁米诺化学发光体系的应用
鲁米诺化学发光体系的应用鲁米诺（5-氨基-2，3-二氢-1，4-二杂氮萘二酮，也称3-氨基邻苯二甲酰肼）俗名发光氨luminol，因其结构简单、易合成、水溶性好，以及发光量子效率高等特点，常温下是一种黄色晶体或者米黄色粉末，是一种比较稳定的化学试剂,化学式C8H7N3O2 。
鲁米诺是最常用的液相化学发光试剂之一。
自从1928年albrecht首次报道了鲁米诺与氧化剂在碱性溶液中的化学发光反应以来，人们对该化学发光体系的研究就一直十分活跃，使得该化学发光体系被应用于许多领域之中。
通常用于酶促化学发光实验以及刑侦上的微量血迹检测。
由于其结构简单、易合成、发光量子效率高的特点，现也被用于蛋白质印迹试验western blot 中。
鲁米诺化学发光体系的分析应用主要基于以下几个方面。
一、鲁米诺-过氧化氢化学发光体系应用最为广泛。
许多过渡金属离子对鲁米诺-过氧化氢化学发光反应具有很好的催化作用。
李正平等发现铁蛋白催化，产生很强的化学发光信号，建立简便灵敏的检测铁蛋白的化学发光方法。
方法的线性范围为0.5～10μg/l，检出限为0.36μg/l，为铁蛋白作为纳米粒子标记物及直接检测提供一种新的途径。
戴路等报道了一种新的测定雌性激素的流动注射化学发光方法。
在碱性条件下，金银复合纳米粒子能显著地增强鲁米诺-过氧化氢化学发光，而雌性激素能明显地抑制该体系的化学发光强度，建立了测定天然雌激素（雌酮、雌二醇和雌三醇）的化学发光方法。
该方法已用于孕妇尿样中雌激素总量的测定。
刘振波等基于人的血清白蛋白对鲁米诺-过氧化氢-叶绿素铜钠化学发光体系的抑制作用，采用流动注射技术建立了一种简单、快速、可连续测定人的血清白蛋白的新方法。
二、鲁米诺-高碘酸钾化学发光体系。
王瑞琪等发现在碱性介质中，镧（iii）对鲁米诺-高碘酸钾体系的化学发光反应有显著的增敏作用。
据此，建立了测定镧（iii）的反相流动注射化学发光新方法，并将此法用于合成样品的测定。
鲁米诺与化学发光
不断搅拌，5 min后，稍微冷并加入2.6 mL冰醋酸，冰水浴冷却至室温，
析出黄色晶体，过滤、洗涤后收集产品。
鲁米诺的化学Leabharlann 光在100 mL磨口锥形瓶中依次加入4 g KOH、20 mL DMSO和0.2 g未干 燥的鲁米诺，塞上瓶塞。剧烈摇荡使溶液与瓶内空气充分接触，此时，在暗 处就能观察到锥形瓶中发出微弱的蓝色荧光；继续摇振并不时打开塞子让新 鲜空气进入，瓶中荧光会越来越亮。 将不同荧光染色剂（1-5 mg）分别溶于2-3 mL水中，并加入到鲁米诺的 二甲亚砜溶液就可观察到不同颜色的荧光。 无染料：蓝白色； 曙红：橙红色； 罗丹明B：绿色； 荧光素：黄绿色。
鲁米诺与化学发光
陕西师范大学化学化工学院
实验目的
掌握鲁米诺制备所涉及的酰胺化、硝基还原 基本实验操作。 了解鲁米诺发光的原理。
实验原理
鲁米诺制备 鲁米诺化学发光
鲁米诺的制备
1.3 g 3-硝基邻苯二甲酸和2 mL 10% 水合肼加入装有温度计和回流冷 凝管的100 mL三口烧瓶中，三口烧瓶的另一支口通过安全瓶与水泵相连。 电热帽加热至固体溶解后，加入4 mL二缩三乙二醇。开启循环水泵并快 速加热三口瓶，使反应体系温度维持在210-220oC约2 min，打开安全瓶旋 塞使体系与大气相通，停止加热并关闭水泵。反应液冷却至100oC，加入 约20 mL热水，进一步冷却至室温，过滤，收集黄色晶体3-硝基-邻苯二甲 酰肼中间体。 将3-硝基-邻苯二甲酰肼中间体转移至100 mL烧杯，加入6.5 mL10% NaOH溶液，搅拌使固体溶解，加入4 g 水合连二硫酸钠，加热至沸腾并
鲁米诺化学发光底物液使用说明书
【产品名称】
通用名称：鲁米诺化学发光底物液 英文名称：Luminol substrate solution
【包装规格】
组分
规格
发光液A
10mL/瓶，1瓶/盒
发光液B
10mL/瓶，1瓶/盒
【预期用途】
适用于化学发光实验的发光底物液。
【检验原理】
原理是应用酶联免疫学基本原理——抗原-抗体反应的高度特异性与 酶催化的高度灵敏性结合起来，利用酶催化底物的化学发光反应以对组
织或细胞内特定物质进行定性或定量。
【主要组成成份】
底物发光液A液（避光保存）：鲁米诺、对碘苯酚、Tris-缓冲液等 底物发光液B液：双氧水、Tris-缓冲液 【储存条件及有效期】
储存条件：2到8℃保存，避光。 有效期：12个月。 【自备仪器】
移液器，光子计数仪或发光免疫分析仪。
【使用方法】
1、在加入HRP酶标记物洗涤后，准备加入发光底物液。 2、使用底物时将化学发光底物液A和化学发光底物液B等体积加入。 3、根据具体的实验体系的体积，加入相应的量的混合底物液，然后
置于暗处室温放置5分钟。 4、检测测量得结果（发光值RLU）。
【检验结果的分析】
1．空白对照不加HRP标记的抗体/抗原和阴性对照结果应无色。阳性 对照及加HRP标记的抗体/抗原发出蓝色光。
2. 通过绘制标准曲线，检测未知浓度的发光值，对应标准曲线找欲测 目标物浓度。
【产品性能指标】
1、外观与结构：发光液A液、B液均为无色透明液体，无沉淀、颗粒
邮政编 ： 215123 码
电话号 ： 0512-62950056 码
传真号 ： 0512-69250163 码
号】 【产品标准编号】 【说明书批准及修改日期】
鲁米诺-盐酸羟胺-钴(Ⅱ)化学发光体系研究
鲁 米 诺 一盐 酸 羟胺 一钻 （ 化 学 发 光体 系研 究 Ⅱ）
张建华
（ 福建省环境监测中心站， 福建
摘
福州
３０ ０ ） ５０３
要： 在碱性介 质中 ， 鲁米诺与还原剂盐酸羟胺 反应产 生化学 发光 ， ｏ Ⅱ） ｃ （ 可催 化此化 学发光 反应 ， 究 了鲁 米 研
ｉ ．Ｔ ｅｐｓｉ ｅｍ ｃａｉ ｗ ｓｐｏ ｓｄ ｉｃ ｏ ｎ）ａ ｔ ｙｅｔｅ ｈｍｉ ｍ ｎｓ ｎｅｓｓ ｍ ｏ ｍｎ —ｈｄｏｙ— ｅ ｈ ｏｓ ｌ ｅｈｎｓ ａ ｒｐ ｅ ．ＳｎｅＣ （ ｃｎｅ ａ ｓ ｅ ｌ ｉｅｃ ｃ ｔ ｌ ｉａ ｙ ｒ ｌ ｄ ｂ ｍ ｏ ａｌ ｈ ｃ ｕ ｅ ｙ ｅ ｆｕ ｌ ｘ ａ ｉｅｈｄｏｈｏｉ ， ｅ ｈｍ ｌｍ ｎｓｅｃ ｅ ｏ ｅ ｒ ｉｅＣ （ ｗ ｓ ｓ ｂｉ ｅ ． ｎ ｅ ｅｏｔ ｕ ｏ ｄ ｉ ， ｍ ｎ ｙｒｃｌｒ ｅ ａｎｗｃｅ ｉ ｉｅｃｎ ｍ ｔ ｄｔ ｄｔ ｍ ｎ ｏ ｎ） ａ ｔ ｌ ｈｄ Ｕ ｄｒ ｐ ｍ ｍ ｃｎ ｉｏ ｄ ｕ ｅ ｈ ｏ ｅ ｅａ ｓ ｈ ｔ ｉ ｔｎ ｈ ｈ ｍｌ ｉｅｃｎ ｅｉ ｅ ｉ ａ ｆ ｎ ｐ ｄｌ ｅｒ ｏ Ｈ）ｎｔ ｏｃ ｔ ｉ ｇ ． —１ｐｂａｄｔ ｅ ｔｅｃ ｅ ｉ ｍ ｎｓｅ ｃ ｔ ｓｙＷ ｕｄｔ ｒｓ ｎ ｎａｌ ｔ Ｃ （ ｉ ｅｃｎ ｎｒｔ ｎｒｎ ０ １ ０ ｐ ｎ ｅｄ— ｕ ｎ ｎｔ ｓ ｏ ｏ ｅｏ ｉ ｙｏ ｈ ｅ ａｏ ａ ｈ
析化学主要 是作为还原剂用 以改变待测离子或干 扰离子价态 以达到测定或 消除干扰 的 目的， 有时也 用作掩蔽剂 ， 化学发光分析中涉及盐酸羟胺的报导 极少。张帆等 发现盐酸羟胺在碱性介质 中注入 铜（ ） Ｉ 离子的发光行为 ， Ｉ 并优化 了利用该反应测定 铜 （Ｉ的最佳条件 。我们在实验 中发现鲁米诺等有 Ｉ ）
精子细胞氧化应激活性氧（ROS）鲁米诺化学发光法定量检测试剂盒产品说明书
精子细胞氧化应激活性氧（ROS）鲁米诺化学发光法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途精子细胞氧化应激活性氧（ROS）鲁米诺化学发光法定量检测试剂是一种旨在通过自由基探针鲁米诺和强化剂的参与下，精子细胞中的活性氧族使发光物氧化降解并发光，在化学发光仪（Luminometer）的帮助下定量检测精子细胞活性氧族（过氧化氢）的生成和数量的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
适用于动物和人体精子细胞的活性氧族的检测。
可以被用于细胞凋亡、衰老、代谢和营养学，以及发育生物学（男性不育）等的研究。
产品严格无菌，即到即用，操作简易，性能稳定，检测敏感。
技术背景超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，甚而导致诸如男性不育、冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理状况。
鲁米诺（luminol），又称氨基邻苯二甲酰肼（luminol;3-aminophthalic hydrazide 5-amino-2,3-dihvdro- 1,4-phthalazinedione），是一种脂溶性的发光剂，氧化后生成鲁米诺自由基而化学发光，具有460nm左右峰值的带状光谱，肉眼可观察到鲜明的紫蓝色。
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陕西师范大学化学化工学院
实验目的
➢ 掌握鲁米诺制备所涉及的酰胺化、硝基还原 基本实验操作。 ➢ 了解鲁米诺发光的原理。
实验原理
➢鲁米诺制备
➢鲁米诺化学发光
鲁米诺的制备
1.3 g 3-硝基邻苯二甲酸和2 mL 10% 水合肼加入装有温度计和回流冷 凝管的100 mL三口烧瓶中，三口烧瓶的另一支口通过安全瓶与水泵相连 。电热帽加热至固体溶解后，加入4 mL二缩三乙二醇。开启循环水泵并 快速加热三口瓶，使反应体系温度维持在210-220oC约2 min，打开安全瓶 旋塞使体系与大气相通，停止加热并关闭水泵。反应液冷却至100oC，加 入约20 mL热水，进一步冷却至室温，过滤，收集黄色晶体3-硝基-邻苯二 甲酰肼中间体。
将3-硝基-邻苯二甲酰肼中间体转移至100 mL烧杯，加入6.5 mL10% NaOH溶液，搅拌使固体溶解，加入4 g 水合连二硫酸钠，加热至沸腾并 不断搅拌，5 min后，稍微冷并加入2.6 mL冰醋酸，冰水浴冷却至室温， 析出黄色晶体，过滤、洗涤后收集产品。次加入4 g KOH、20 mL DMSO和0.2 g未干 燥的鲁米诺，塞上瓶塞。剧烈摇荡使溶液与瓶内空气充分接触，此时，在暗 处就能观察到锥形瓶中发出微弱的蓝色荧光；继续摇振并不时打开塞子让新 鲜空气进入，瓶中荧光会越来越亮。
将不同荧光染色剂（1-5 mg）分别溶于2-3 mL水中，并加入到鲁米诺的 二甲亚砜溶液就可观察到不同颜色的荧光。
无染料：蓝白色； 曙红：橙红色； 罗丹明B：绿色； 荧光素：黄绿色 。