纯化水微生物限度检查法验证方案和验证报告
纯化水验证方案
纯化水验证方案概述纯化水（Purified Water）是一种通过去除杂质和微生物来得到高纯度水的过程。
在实验室、医疗设备、制药和化妆品等领域中，纯化水被广泛使用。
为确保纯化水的质量符合要求，需要进行严格的验证和控制。
本文档将介绍纯化水验证的方案，包括验证目的、验证方法和验证参数等内容，以确保纯化水质量的稳定性和符合相关标准。
验证目的纯化水验证的目的是确定纯化水系统的性能是否符合预期和规定的要求。
通过验证，可以评估纯化水的质量和系统的运行情况，并识别潜在的问题和改进措施。
验证目的包括：1.纯化水符合质量标准：验证纯化水是否符合相关质量标准，如美国药典（USP）、欧洲药典（EP）、中国药典（CP）等。
2.检测系统的有效性：验证纯化水系统的设计和运行是否能够有效地去除杂质和微生物。
3.确保系统的稳定性：验证纯化水系统在长期运行中的稳定性，以确保纯化水质量的可靠性和一致性。
验证方法纯化水验证通常包括几个步骤：预验证、操作性验证和性能验证。
预验证预验证是为了确认纯化水系统的设计和建设是否符合预期，在正式验证之前进行。
预验证包括以下步骤：1.系统设计评估：评估纯化水系统的设计，并确认其是否满足要求。
例如，评估纯化水系统的材料选择、工艺流程、设备配置等。
2.设备和材料验证：验证纯化水系统使用的设备和材料是否符合预期要求，并与供应商确认其可靠性和性能。
3.环境条件评估：评估纯化水系统所处的环境条件是否符合要求，如温度、湿度、空气质量等。
操作性验证操作性验证是为了确认纯化水系统在正常操作下的性能是否符合要求。
操作性验证涉及以下方面：1.标定和验证仪器：校准和验证用于监测纯化水系统性能的仪器，如电导率计、溶解氧仪等。
2.操作规程验证：验证纯化水系统的操作规程是否能够实现所需的水质和流程。
3.反渗透膜验证：验证反渗透膜的清洗、消毒和更换程序，并确保其性能符合要求。
性能验证性能验证是为了评估纯化水系统在长期运行中的性能和稳定性。
纯化水微生物限度
纯化水微生物限度滤膜法微生物检测：将适当孔径的滤膜放入滤器，过滤样品，由于滤膜的作用而将微生物保留在膜的表面上。
样品中微生物生长抑制剂可在过滤后用无菌水冲洗滤器而除去。
然后，将滤膜放在培养基上培养，营养物和代谢物通过滤膜的微孔进行交换，在滤膜表面上培养出的菌落可以计数，并和样品量相关。
滤膜法的优点：- 与直接法比较，可以检测大量的样品- 浓缩效应使微生物检测的准确度提高- 带有菌落的滤膜，可作为检测的永久记录存档- 可见的菌落和样品量直接对应，得出定量结果操作具体一点就是：薄膜过滤法检测，一个样过滤一份，就是200ml的纯化水通过滤膜，将该滤膜浸泡在灭菌好的l生理盐水中，再接种到平皿中，制成10级、100级、1000级稀释倍数的细菌、霉菌和酵母菌稀释培养皿，即可用平皿法检测纯化水的微生物限度摘要：目的探讨平皿法检查纯化水微生物限度的可行性。
方法采用《中华人民共和国药典》2005年版二部附录平皿法和薄膜过滤法同时时纯化水进行微生物限度检壹并作出比较。
结果平皿法操作简便，菌落清晰．准确可靠。
结论平皿法检测纯化水微生物限度是可行的，尤其适用药厂、医院开展此项检验。
关键词；纯化水；微生物限度；平皿法；薄膜过滤法纯化水为蒸馏法、离子交换法、反渗透法或其它适宜的方法制得的供药用的水，不含任何附加剂。
纯化水的优劣，直接关系到药品质量。
《中华人民共和国药典》2005年版规定其微生物限度检查采用薄膜过滤法。
并规定其细菌、霉菌和酵母菌总数每毫升不得过100个。
由于此法操作较繁，滤膜较小(直径只有50mm)，菌落多时清晰度欠佳，影响计数的准确性。
笔者采用平皿法进行比较，该法操作简便，菌落清晰，计数准确，效果较为理想。
1 材料和仪器1．1 样品来源 19批纯化水系辖区内7家制药厂生产的为微生物限度检查验证用送样检品。
其中用盐水瓶盛装的12个批次，三角烧瓶盛装的7个批次。
1．2 培养基和仪器设备1．2．1 培养基：营养琼脂培养基批号050401，玫瑰红钠琼脂培养基批号050202，蛋白胨批号050523均为北京三药科技开发公司生产。
纯化水验证方案与验证报告
VM-1-2001-00 纯化水系统验证方案目录1.验证方案的起草与审批1.1验证方案的起草1.2验证方案的审批2.验证小组的组成及进程安3.概述4.验证目的5.文件6.检测仪器7.安装确认7.1主要设备的安装确认7.1.1设备概况7.2仪器、仪表检查7.3公用介质安装及检查7.3.1自来水安装及检查7.3.2电源连接检查8.运行测试9.监控10.日常监测11.最终评价和建议及验证报告1.验证方案的起草与审批3.概述本纯化水系统是由机械过滤器、活性碳过滤器、保安过滤器、反渗透装置、紫外线灭菌和终端过滤器组成。
其中反渗透装置是最新膜分离技术，能将原水中的离子、细菌等分离排除，获得符合中国药典标准规定的纯化水，本系统的生产能力为1T/h。
4.验证目的4.1检查并确认工艺用纯水系统设备安装符合设计要求，资料和文件符合GMP的管理要求。
4.2检查并确认主设备及管路分配系统、泵、阀门及贮罐等设备的运行性能达到设计要求，确保产水水质到达《中国药典》2010年版二部纯化水项下要求。
4.3检查并确认各独立单元设备出水量、水质达到设计要求，并能与生产规模相适应。
7.安装确认7.1主要设备的安装确认7.1.1设备概况目的：检查并确认主要设备的随机文件和资料以及附件符合使用和管理要求。
依据设备的装箱清单确认，随机附件及文件资料，检查主要设备安装是否布局合理；是否便于操作；是否利于监控。
检查结果于表中并作出评价主要设备概况检查记录表7.2仪器、仪表检查目的：检查并确认仪器仪表外观、性能、精度等符合规定要求。
检查：7.3公用介质安装及检查依据系统安装图的设计要求，检查系统安装的位置和空间能满足生产和维修的需要；各介质连接是否匹配，符合管理及安装规范要求。
7.3.1自来水连接及检查按设计要求检查自来水连接情况，记录于表中7.3.2电源连接检查7.4管路、管道分配系统、泵、阀门的安装及检查7.4.1验证目的：依据设计图纸及技术资料，检查各独立单元、安装是否符合设计和规范。
1AVP MLT PW 00 纯化水微生物限度检查分析方法验证报告
苏州东瑞制药有限公司AVR-MLT-PW纯化水微生物限度版本号：00纯化水微生物限度检查分析方法验证报告苏州东瑞制药有限公司AVR-MLT-PW 纯化水微生物限度版本号：00下面表格的签署表明该文件已经被审核和批准。
修订历史苏州东瑞制药有限公司AVR-MLT-PW 纯化水微生物限度版本号：00目录1.确认结论 (4)1.1过程描述 (4)1.2分析方法确认结论 (5)2.测试数据表及附件 (6)2.1测试数据表 (6)2.2附件 (7)苏州东瑞制药有限公司AVR-MLT-PW纯化水微生物限度版本号：001.确认结论1.1过程描述备注____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________苏州东瑞制药有限公司AVR-MLT-PW 纯化水微生物限度版本号：001.2分析方法确认结论通过验证,该分析方法是否适用于纯化水的细菌、霉菌及酵母菌数的测定：□适用□不适用评价和建议____________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________苏州东瑞制药有限公司AVR-MLT-PW纯化水微生物限度版本号：002.测试数据表及附件2.1测试数据表苏州东瑞制药有限公司AVR-MLT-PW 纯化水微生物限度版本号：00 2.2附件。
纯化水控制菌检查方法验证方案及验证报告
纯化水控制菌检查方法验证方案及验证报告验证方案：1.确定验证目标：纯化水控制菌检查方法的准确性和可重复性。
2.确定验证方法：选取一批纯化水样品进行验证，分别使用纯化水控制菌检查方法和参比方法进行测定。
3.确定验证指标：验证指标包括检出限、准确度和重复性。
-检出限：比较两种方法在检测纯化水样品中的最低检出限。
-准确度：比较两种方法在检测纯化水样品中的测定结果的准确性。
-重复性：比较两种方法在检测纯化水样品中的测定结果的重复性。
4.验证步骤：a.准备样品：准备一批代表性的纯化水样品，确保样品之间的差异尽可能小。
b.纯化水控制菌检查方法测定：按照该方法进行纯化水样品的检测，记录结果。
c.参比方法测定：选取一种已经被广泛认可的纯化水控制菌检查方法作为参比方法进行测定，记录结果。
d.分析比较：比较两种方法的检出限、准确度和重复性。
e.结果分析与判定：根据比较结果判断纯化水控制菌检查方法的准确性和可重复性。
5.验证报告：根据验证结果编写验证报告，包括验证目标、验证方法、验证过程、比较结果和结论等内容。
验证报告：验证目标：本次验证旨在验证纯化水控制菌检查方法的准确性和可重复性。
验证方法：本次验证选取了一批代表性的纯化水样品，分别使用纯化水控制菌检查方法和参比方法进行检测。
验证指标：本次验证的指标包括检出限、准确度和重复性。
验证步骤：a.准备样品：准备了10个代表性的纯化水样品，确保样品之间的差异尽可能小。
b.纯化水控制菌检查方法测定：按照该方法进行纯化水样品的检测，记录结果。
c.参比方法测定：选取了参比方法A进行纯化水样品的检测，记录结果。
d.分析比较：比较了两种方法的检出限、准确度和重复性。
e.结果分析与判定：根据比较结果判断纯化水控制菌检查方法的准确性和可重复性。
比较结果：1.检出限：纯化水控制菌检查方法的检出限为10CFU/mL，参比方法A的检出限为5CFU/mL。
2.准确度：在10个样品中，纯化水控制菌检查方法的准确度为90%，参比方法A的准确度为95%。
纯化水细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证方案及报告
纯化水细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证方案及报告文件编号：**VP*****-*文件类别：验证***********公司验证方案批准验证小组人员名单目录1、引言 (5)2、验证参与部门及责任 (5)3、验证方法 (5)文件要求 (6)菌种 (6)菌液制备 (7)验证方法 (7)验证结果 (8)4、结果判断 (10)5、验证结论及评价 (11)6、验证报告批准书 (12)1.引言1.1概述微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及原料、辅料受微生物污染程度的方法。
检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。
当建立药品的微生物限度检查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证和控制菌检查方法的验证。
进行上述验证前，应首先对验证过程中使用的仪器、仪表及微生物限度检查的环境进行验证。
微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域进行。
检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。
除另有规定外，细菌培养温度为30-35℃；霉菌、酵母菌培养温度为23-28℃；控制菌培养温度为35-37℃。
1.2验证目的确认所采用的方法适合于纯化水的细菌数、霉菌数、酵母菌数的测定。
1.3验证执行的文件超净工作台标准操作规程微生物限度检查法培养箱标准操作规程热压灭菌锅标准操作规程2. 验证参与部门及责任3.验证方法：3.1文件要求所需文件检查人：日期：3．2菌种验证试验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。
确认人：日期：3．3菌液制备3．3．1分别取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物少许，各接种至5ml营养肉汤培养基中，在36℃±℃培养18-24小时，取均匀培养物1ml用0.9%无菌氯化钠溶液按10倍递增稀释至1:107,制成每1ml含菌数为50~100cfu的菌悬液。
3．3．2接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，培养24-48小时，取均匀培养物1ml用0.9%无菌氯化钠溶液按10倍递增稀释至1:107,制成每1ml含菌数为50~100cfu 的菌悬液。
纯化水微生物限度检查法验证
目录A、验证方案1.概述2.适用范围3.验证目的4.验证小组及职责分工4.1 验证小组4.2 职责分工5.验证内容6.漏项与偏差及采取的纠偏措施.7.验证结论8.验证方案批准B、验证报告1.概述2.适用范围3.验证目的4.验证小组及职责分工4.1 验证小组4.2 职责分工5.确证内容6.漏项与偏差及采取的纠偏措施.7.验证结论8.最终批准9. 再验证周期与年度回顾性验证1 概述由于某些供试品抗菌活性，在建立测定方法或原测定法的检验条件发生改变时，可能影响检验结果的准确性，必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性、重现性进行验证。
验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法进行。
对各试验菌的回收率应逐一进行验证。
2 适用范围纯化水微生物限度检查——薄膜过滤法的验证。
3 验证目的验证纯化水微生物限度检查——薄膜过滤法符合《中国药典》2005年版二部的规定要求。
4 验证小组及职责分工5 验证内容5.1 品种：纯化水5.2 验证方法：《中国药典》2005年版二部微生物限度检查——薄膜过滤法5.3 计数方法的验证5.3.1 验证试验用菌种验证试验用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。
大肠埃希菌(Escherichia coli)〔CMCC(B) 44 102〕金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) CMCC(B) 26 003〕枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)〔CMCC(B) 63 501〕白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC(F) 98 001〕黑曲霉(Aspergillus niger)〔CMCC(F)98 003〕5.3.2 菌液制备取经32.5℃培养18～24小时的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌营养肉汤液体培养物，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液。
AVP-MLT-PW-00 纯化水微生物限度检查分析方法验证方案
纯化水微生物限度检查分析方法验证方案该方案确认于：下面表格的签署表明该文件已经被审核和批准。
修订历史目录1.目的 (4)2.范围 (4)3.方法说明 (4)4.法规和指南 (5)5.缩略语 (5)6.职责 (6)6.1 QC化验员 (6)6.2 QC工程师 (6)6.3质量部经理 (6)7. 分析方法验证的确认计划 (7)8.分析方法验证执行方法 (7)8.1先决条件 (7)8.2签名登记和培训 (7)8.3执行方法 (8)8.4执行记录规范 (8)8.5合格/不合格标注 (8)8.6偏差处理 (8)8.7测试的验收 (8)9.分析方法确认报告 (8)10.附录 (9)1.目的本验证方案的目的是确定所采用的微生物限度检查法适合于纯化水的细菌、霉菌及酵母菌数的测定。
照此检查法和检验条件进行纯化水细菌、霉菌及酵母菌数的测定能保证检验结果的准确、可靠。
2.范围本方案确定位于苏州东瑞制药有限公司在苏州吴中经济开发区民丰路268号新建质检办公楼三楼QC纯化水微生物限度分析方法的验证。
3.方法说明微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。
检查项目包括细菌、霉菌及酵母菌的菌落计数及控制菌检查。
当建立纯化水微生物限度检查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证。
本公司对照2010版中国药典的要求对纯化水微生物限度检查方法进行验证。
4.法规和指南●中国药典2010年版●(SFDA) GMP(2010年修订版)5.缩略语在下面的表格中规定了本方案中使用的缩略语。
6.职责6.1 QC化验员●负责验证方案的起草●负责最终验证报告的编写●按照验证方案实施验证工作●负责记录验证过程中产生的数据并整理汇总6.2 QC工程师●负责审核验证方案●负责审核验证报告●指导QC化验员按照验证方案实施验证工作6.3质量部经理●负责批准验证方案●负责批准验证报告●负责批准验证偏差的评估及所采取的措施7. 分析方法验证的确认计划在下面的表格中列出了将要执行的测试。
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*******有限公司验证文件纯化水微生物限度检查法验证案纯化水微生物限度检查法验证案起草、审核、批准：验证组织：目录1.验证目的2.验证人员职责3.参照标准4.验证项目容5.评价合格标准6.验证试验材料7.验证实施计划8.菌液制备9.供试液制备10.计数法验证11.控制菌检查法验证12.验证结论和评价纯化水微生物限度检查法验证案1. 验证目的：纯化水微生物限度试验采用薄膜过滤法检查。
确认该法适合于纯化水细菌、霉菌及酵母菌数测定，控制菌的测定。
2．验证人员职责2.1验证领导小组：2、1、1负责验证案及报告的批准2、1、2组织协调验证工作2、1、3签发验证证书。
2.2.项目验证小组长2.2.1.负责验证案的起草2.2.2.负责验证的协调工作，以保证本验证案的顺利实施。
2.2.3.负责验证报告的起草。
2.2.4.负责再验证期的确认。
2．3. 质量部2．3.1.负责验证案审核2．3.2.负责取样及对样品的检验2．3.3.负责收集验证记录，并加以分析后，协助项目验证小组长起草验证报告。
2．3.4.负责验证数据及结果的审核3. 参照标准：2010版中国药典一部附录XIII微生物限度检查法。
4. 验证项目容：细菌、霉菌及酵母菌计数法的验证，控制菌检查法验证。
5. 评价合格标准：试验组的菌回收率和稀释剂对照组的菌回收率均不得低于70%。
6. 验证试验材料：6.1. 被验证产品：品名纯化水取样点：（1）4T/h纯水系统二级反渗透装置进纯水箱口;(2) 4T/h纯水系统液体制剂二楼洁具间用水点；(3) 4T/h纯水系统三楼固体制剂纯水箱总回水口。
检验量5ml /次6.2. 仪器设备：6.2.1. YX.400A电热蒸汽压力消毒器6.2.2 YS－840净化工作台6.2.3. 101型电热干燥箱6.2.4. SPX-250B型生化培养箱6.2.5.PYX-DUS-X型隔水式电热恒温培养箱6.2.6 303A-4型电热培养箱6.2.7 天平6.3. 稀释剂：PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液；0.9%的无菌氯化钠溶液6.4. 验证用培养基6.5. 验证用菌株：7、验证设施计划8. 菌液制备8.1.大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌菌悬液的制备①取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜斜面培养物1白金耳接种至10ml营养肉汤培养基中，35℃培养18~24小时。
②取经35～36℃培养18~24小时的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、与枯草芽孢杆菌营养肉汤新鲜培养物1ml加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-6~10-7约为50~100cfu∕ml的菌悬液备用。
8.2白色念珠菌、黑曲霉菌悬液的制备①取白色念珠菌的新鲜斜面培养物1白金耳接种至10ml改良马丁培养基中，25℃培养24~48小时。
取培养物1ml，加入9%灭菌生理盐水9ml，混匀，10倍稀释至10-5~10-6细菌数约50~100cfu∕ml的菌悬液备用。
②接种黑曲霉的新鲜培养物于改良马丁琼脂斜面培养基上，25℃培养5~7天至大量孢子产生。
加0.9%无菌氯化钠溶液10ml将孢子洗脱。
然后吸出孢子悬液，加入蒙有灭菌纱布的无菌试管中。
取此孢子悬液1ml加到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，逐管10倍稀释至10-5约为50~100cfu∕ml的菌悬液备用。
9.供试品制备供试品名称及取样点：纯化水取样点（1）4T/h纯水系统二级反渗透装置进纯水箱口;(2) 4T/h纯水系统液体制剂二楼洁具间用水点；(3) 4T/h纯水系统三楼固体制剂纯水箱总回水口。
法建立：2010版中国药典规定纯化水微生物限度试验采用薄膜过滤法检查。
但没规定取样量,由于所使用的滤膜径不大于0.45um ，直径为50mm, 规定每片滤膜上的菌落数应不超过100个。
如果取样量过大,样品含菌量较多,就会造成细菌不宜分散,点计困难;如果取样量过少,不能有效反映样品染菌量。
为此采用每滤膜取样品5ml。
10.计数法验证10.1试验组取纯化水5ml，以无菌操作加入过滤器，用PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜3次，每次100ml，在最后一次的冲洗液中分别加入上述的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉菌菌液（50～100cfu/ml）各1ml，平行两滤膜，过滤后，取滤膜，将其菌面朝上贴于相应培养基上培养。
10.2菌液组大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌分别取1ml面液分别注入平皿中，并立即倾注营养琼脂培养基，每个面液分别制备二个平皿，置35～36℃培养24小时；白色念珠菌、黑曲霉分别取1ml面液分别注入平皿中，并立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每个面液分别制备二个平皿，置24～25℃培养48小时。
菌落计数结果（2个平皿计数取平均值）见下表菌落计数结果（cfu∕ml）10.3 供试品对照组取纯化水5ml，以无菌操作加入过滤器，用0.9%无菌氯化钠溶液冲洗滤膜3次，每次100ml，平行两滤膜，过滤后，取出滤膜，菌面朝上贴于琼脂培养基平板上培养。
细菌、霉菌及酵母菌各制备2个平皿，测定供试品本底菌数。
10.4.稀释剂试验组取0.9%无菌氯化钠溶液300ml，以无菌操作加入过滤器，每次100ml，在最后一次的冲洗液中分别加入上述的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉菌菌液（50～100cfu/ml）各1ml，平行两滤膜，过滤后，取滤膜，将其菌面朝上贴于相应培养基上培养。
10.5.稀释剂对照组取0.9%无菌氯化钠溶液300ml，以无菌操作加入过滤器，平行两滤膜，减压抽干后,取出滤膜，菌面朝上贴于琼脂培养基平板上培养，平行制备2个平皿，置适宜温度培养48～72h，观察结果，测定菌数。
10.6. 结果见附表11、控制菌检查法验证（常规法）11.1 试验组取纯化水5ml，以无菌操作加入过滤器，用PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，冲洗滤膜3次，每次100ml，在最后一次的冲洗液中分别加入上述的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉菌菌液（50～100cfu/ml）各1ml，平行两滤膜，过滤后，取滤膜，接入胆盐乳糖培养基100ml中，按相应控制菌检查法进行检查。
试验结果：上述试验组检出试验菌，按此控制菌检查法进行供试品的该控制菌检查。
故可按常规法进行控制菌检查。
12 验证结论和评价根据验证试验结果，纯化水微生物限度检查按照2010版中国药典二部附录XIII微生物限度检查法检验，细菌、霉菌及酵母菌计数可采用薄膜过滤法检查。
附表1：独立试验一：各试验组菌落计数（回收率%）取样点：试验时间年月日完成时间年月日结论：本次试验各试验组的菌回收率和各稀释剂对照组的菌回收率均不低于70%,按标准规定, 本次试验结果符合规定。
复核人(签名)：试验人(签名)：附表2：独立试验二：各试验组菌落计数（回收率%）取样点：试验时间年月日完成时间年月日结论：本次试验各试验组的菌回收率和各稀释剂对照组的菌回收率均不低于70%,按标准规定, 本次试验结果符合规定。
复核人(签名)：试验人(签名)：附表3：独立试验三：各试验组菌落计数（回收率%）取样点：试验时间年月日完成时间年月日结论：通过三次独立试验,证明所采用的供试液制备法及薄膜过滤法适合于纯化水细菌、霉菌及酵母菌数测定。
复核人(签名)：试验人(签名)：******有限公司验证文件纯化水微生物限度检查法验证报告目录1、验证目的2、参照标准3、验证项目容4、评价标准5、验证实施时间6、验证法7、验证结论和评价一、验证目的根据中国药典2010年版的要求，纯化水微生物限度试验采用薄膜过滤法检查。
为了确认该法适合于本公司纯化水细菌、霉菌及酵母菌数计数测定，控制菌的测定。
特对此检测法进行验证。
二、参照标准中国药典2010版二部附录微生物限度检查法。
三、验证项目容细菌、霉菌及酵母菌计数法验证，控制菌的验证。
四、评价标准试验组的菌回收率和稀释剂对照组的菌回收率均不得低于70%。
五、验证实施我们项目验证小组从(微生物限度检验室完成验证时间开始)开始，进行各种菌液、供试液的制备，开始验证工作。
1、菌液制备1.1大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌菌悬液的制备①取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜斜面培养物1白金耳接种至10ml营养肉汤培养基中，35℃培养18~24小时。
②取经35～36℃培养18~24小时的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、与枯草芽孢杆菌营养肉汤新鲜培养物1ml加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-6~10-7约为50~100cfu∕ml的菌悬液备用。
1.2白色念珠菌、黑曲霉菌悬液的制备①取白色念珠菌的新鲜斜面培养物1白金耳接种至10ml改良马丁培养基中，25℃培养24~48小时。
取培养物1ml，加入9%灭菌生理盐水9ml，混匀，10倍稀释至10-5~10-6细菌数约50~100cfu∕ml的菌悬液备用。
②接种黑曲霉的新鲜培养物于改良马丁琼脂斜面培养基上，25℃培养5~7天至大量孢子产生。
加0.9%无菌氯化钠溶液10ml将孢子洗脱。
然后吸出孢子悬液，加入蒙有灭菌纱布的无菌试管中。
取此孢子悬液1ml加到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，逐管10倍稀释至10-5约为50~100cfu∕ml的菌悬液备用。
2.供试品制备供试品名称及取样点：纯化水。
取样点（1）4T/h纯水系统二级反渗透装置进纯水箱口;(2) 4T/h纯水系统液体制剂二楼洁具间用水点；(3) 4T/h纯水系统三楼固体制剂纯水箱总回水口。
按照验证案，采用每滤膜取纯化水5ml。
六、验证法（一）、细菌、霉菌及酵母菌计数法1、试验组取纯化水5ml，以无菌操作加入过滤器，用0.9%无菌氯化钠溶液冲洗滤膜3次，每次100ml，在最后一次的冲洗液中分别加入上述的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉菌菌液（50～100cfu/ml）各1ml，平行两滤膜，过滤后，取滤膜，将其菌面朝上贴于相应培养基上培养。
计数。
2、菌液组大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌分别取1ml面液分别注入平皿中，并立即倾注营养琼脂培养基，每个面液分别制备二个平皿，置35～36℃培养24小时；白色念珠菌、黑曲霉分别取1ml面液分别注入平皿中，并立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每个面液分别制备二个平皿，置24～25℃培养48小时。
菌落计数结果（2个平皿计数取平均值）见下表菌落计数结果（cfu∕ml）3 供试品对照组取纯化水5ml，以无菌操作加入过滤器，用0.9%无菌氯化钠溶液冲洗滤膜3次，每次100ml，平行两滤膜，过滤后，取出滤膜，菌面朝上贴于琼脂培养基平板上培养。
细菌、霉菌及酵母菌各制备2个平皿，测定供试品本底菌数。