纯化水中需氧菌总数检测方法
纯化水微生物限度检查记录表
检验日期
年月日
报告日期
年月日
检验依据 《中国药典》2015 年版二部、四部通则微生物检查法
需氧菌总数检查：取纯化水 50ml，用薄膜过滤器（0.45±0.02um，50MM 直径）过滤，减
压抽干。取出滤膜，将滤膜放入制备好的 R2A 培养基平板上，在 30～35℃培养 3 天，计数。
需氧菌阴性对照：取 50ml 已灭菌的纯化水按供试品同法处理，作为阴性 对照 。
R2A 琼脂培养基配制批号
培养温度
放入培养时间 年 月日时 培养 / 时间
取出培养时间 年 月 日时
取样点编号
累计培养时间 h
阴性对照
1 24h
2
□长菌 □未长菌
1 48h
2
□长菌 □未长菌
1 72h
2 菌数报告 CFU/ml
标准规定
项目结论
检验人：
□符合规 定
□不符合 规定
□长菌 □未长菌
/
需氧菌总数每 1ml 不得过 100CFU。
□符合规 □符合规 □符合规 □符合规 □符合规
定
定
定
定
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
定
/
□不符合 □不符合 □不符合 □不符合 □不符合
规定
规定
规定
规定
规定
复核人：
水质化学需氧量(COD)怎么检测
水质化学需氧量（COD）怎么检测试剂选用区分点1.预制试剂预制管检测，无需自备硫酸等药剂、烧杯等器皿2.固体试剂比色皿检测，需自备硫酸、烧杯、试剂瓶等耗材，用以配制试剂COD预制试剂操作流程01）依据水样预判值选择合适量程的试剂；02）依据水样数量准备试剂管，一支作为空白，其余作为水样管；03）空白管加入2mL纯水，水样管加入2mL水样04）消解仪165℃消解20分钟05）冷却后上机检测COD固体试剂操作流程01）水样预判值选择合适量程的试剂；02）依据水样数量准备试剂管，一支作为空白，其余作为水样管；03）空白管加入2.5mL纯水，水样管加入2.5mL水样04）依次加入A、B试剂05）消解仪165℃消解15分钟06）冷却后再于每支试管中加入2.5mL纯水07）冷却后转入30mm玻璃比色皿中08）上机检测仪器使用注意事项1.请认真阅读手册，在把握了仪器的各个功能及注意事项后，再进行操作.2.假如电源线已损坏（导线外露或断裂）请勿再使用，以免引起触电.3.在仪器进行比色时，勿将比色溶液溢漏到仪器中，以防导致光路系统的腐蚀损坏.4.用比色管比色时，需将比色管外壁的水渍及残留溶液擦拭干净.5.在试验过程中必需做好个人防护工作（试验服、手套、眼罩、口罩），使用硫酸时注意个人安全.6.在对水样进行分析时，水样中加入试剂后必需混匀再进行比色.7.仪器中配带的试剂，应在干燥、密封、避光、低温条件下储存.8.使用结束后，用于比色的废液，应集中储存并处理，不要任意搁置或倾倒.9.使用过程中比色溶液假如沾到皮肤上或衣裳上，立刻用大量清水清洗，以免对皮肤造成损害仪器使用安全警示1.请勿在高湿、高温或灰尘多的地方存放或工作，以免造成仪器硬件故障.2.仪器及设备不具备防水功能，应防止被水淋湿等情况发生.3.避开猛烈碰撞、震动，否则可能导致仪器光路损坏.在搬运过程中建议使用仪器原包装.4.禁止仪器在有腐蚀性气体的空间中工作，以免造成电路系统的损坏.5.请勿在湿手时拔插仪器电源线，以防止触电.6.请勿在强光直射的情况下使用该仪器.7.请勿擅自拆开仪器进行维护和修理或更改其内部结构，以防事故及故障的发生.8.仪器使用过程中，假如显现硬件异常情况软件操作故障时，应尽快与厂家技术部门联系.9.请勿擅自对仪器进行维护和修理、拆装.10.当水或其他液体不慎进入仪器时，请立刻关闭仪器，并将电源插头从插座中拔出.。
纯化水微生物限度检查方法验证方案
纯化水微生物限度检查方法验证方案产品名称：纯化水验证类型：验证部门：质量部目录1、概述2、验证目的3、适用范围4、验证小组成员及职责5、验证项目6、验证内容7、验证总结论8、偏差处理情况9、再验证周期10、结果审批及综合评价11、参考文献验证方案签字表1、概述纯化水作为我公司的一种用于产品生产的原辅料及清洁用水，为保证产品的质量，应对纯化水进行微生物限度检查方法的确认，参照《中国药典》2015年版二部纯化水微生物限度的要求，重新建立微生物限度检查的试验，以确认改产品在该试验条件下所采用的方法适合于该产品的微生物限度检查。
2、验证目的按照《中国药典》2015年版规定对纯化水微生物限度检查采用薄膜过滤法进行试验，在现有检验程序、检测条件及培养条件下，通过试验以确认所采用的方法适合于纯化水需氧菌总数的测定；3、适用范围本验证方案适用于本公司 QC 实验室，对纯化水微生物限度检查方法（薄膜过滤法）适用性的验证。
4、验证小组成员及职责5、验证项目及描述5.1项目：需氧菌总数检查方法的验证5.2 描述取三个不同批号的纯化水用薄膜过滤法检测微生物限度，通过比较试验菌的恢复生长结果评价整个检验方法的准确性、有效性，通过计算回收率来判断检查方法是否有影响，通过验证来确认薄膜过滤法适合于纯化水需氧菌总数的测定。
三次试验中，稀释剂对照回收率应在 50%～200%范围内，试验组回收率也应在 50%～200%范围内。
进行微生物限度检查方法（薄膜过滤法）验证时，所有的平皿和稀释剂都应该严格灭菌消毒、灭菌，确保对试验结果没有影响。
6、验证内容：6.1 人员培训、仪器设备、培养基、菌种及相关文件的确认6.1.1人员培训6.1.2验证用仪器设备的确认6.1.3相关文件确认6.1.4 试验用菌株的确认6.1.5培养基及冲洗液的确认6.2试验步骤6.2.1.菌液的制备取铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌工作用菌种挑取少量培养物接种至10ml胰酪大豆胨液体培养基中，30～35℃培养18～24小时。
纯化水检验操作规程
纯化水检验操作规程《纯化水检验操作规程》一、检验目的纯化水是在工业、实验室和医疗等领域中广泛使用的一种水质。
为了确保纯化水符合相关要求，需要进行定期检验。
本规程旨在规范纯化水检验操作，确保检验结果准确可靠。
二、检验仪器与设备1. 电导率计2. pH计3. 紫外可见分光光度计4. 各类试剂及耗材5. 符合纯化水检验所需的其他仪器与设备三、检验项目与方法1. 电导率检验：使用电导率计测量纯化水的电导率，确保其在规定范围内（通常为18.2 MΩ/cm）。
2. pH值检验：使用pH计测量纯化水的pH值，确保其在规定范围内（通常为6.5-8.5）。
3. TOC检验：使用紫外可见分光光度计测量纯化水中的总有机碳含量，确保其在规定范围内。
4. 其他检验项目：根据具体需求，可以进行微生物检验、有害物质检验等。
四、样品采集与处理1. 样品采集：从纯化水系统中取样，并尽量避免样品受到外界污染。
2. 样品处理：需要根据检验项目的需要，进行必要的预处理，确保检验结果准确可靠。
五、质量控制1. 日常质量控制：定期对检验仪器进行校准和验证，确保其准确性和可靠性。
2. 质量评价：对检验结果进行定性和定量评价，确保检验结果符合要求。
六、记录与报告1. 记录：对每次检验的操作过程、结果和质量控制情况进行详细记录。
2. 报告：根据实际需要，出具检验报告，并及时通知相关部门。
七、安全操作1. 全程佩戴实验室防护用具，避免接触有害物质。
2. 操作过程中注意安全，避免事故发生。
通过执行上述规程，可以确保纯化水的检验过程准确可靠，为生产和实验提供稳定的水质保障。
纯化水需氧菌总数计数用培养基适用性检查验证方案
纯化水需氧菌总数计数用培养基适用性检查验证方案纯化水需要氧菌总数计数，是用来检查水中的氧需求微生物的数量。
这项检测可以确认水样品的纯度和卫生质量，以确保水可以安全使用。
本文将介绍一种用于验证纯化水需氧菌总数计数用培养基的适用性的方法，包括准备培养基、验证培养基的选择以及验证培养基性能的实验方案。
1.准备培养基首先，需要选择适用于需氧菌的培养基。
通常使用含有可溶性碳源和其他适当营养物质的培养基。
常用的培养基有碳水化合物培养基、富含氨基酸的培养基等。
可以根据具体需求来选择合适的培养基。
2.培养基选择验证为了验证培养基的选择是否适用于需氧菌的计数，可以进行以下实验验证。
2.1.培养基对需氧菌的支持能力验证：将需氧菌接种在待验证的培养基上，并进行恒温（通常在30-37°C 之间）和恒氧（使用压力式培养器或其他适当方法）条件下的培养。
培养一段时间（通常为24-48小时），观察生长情况。
如果培养基能够支持需氧菌的生长并产生可见的生长，说明培养基是适合用于需氧菌计数的。
2.2.培养基对其他微生物的选择性验证：将其他非需氧菌或其他微生物接种在待验证的培养基上，并进行相同的培养条件下的培养。
观察生长情况，如果其他微生物能够在该培养基上生长，说明培养基存在选择性差异性，可能不适用于需氧菌计数。
3.验证培养基性能实验方案在验证培养基适用性之后，可以进行以下实验方案来验证培养基性能。
3.1.验证培养基的灵敏度：根据纯化水需氧菌总数预期浓度的范围，使用不同的稀释比例将水样接种在培养基上。
根据菌落形成情况和数量，可以确定培养基的灵敏度。
通常，预期浓度越高，菌落数量越多。
3.2.验证培养基的线性范围：在一定的时间内，使用不同浓度的需氧菌接种培养基，观察菌落数量和接种浓度的关系。
如果菌落数量和接种浓度呈线性关系，则说明培养基的线性范围较好。
3.3.验证培养基的重复性：使用相同浓度的需氧菌接种培养基的多个平行样品，进行培养。
纯化水需氧菌检查R2A培养基适用性试验方案--2015年版药典-上上2018年
纯化水需氧菌检查R2A培养基适用性试验方案--2015年版药典-上上2018年纯化水需氧菌检查R2A培养基适用性试验方案下表用于记录修订/变更主要内容及历史1・概述2.验证目的和范围3.组织及职责4.验证进度计划表5.验证所需要的仪器设备的确认确认6.验证所需要的菌种、培养基、试剂、检验样品的7.验证项目和验证方法7. 1试验菌株7.2菌液制备7・3培养基适用性检查7. 4计数方法适用性试验（薄膜过滤法）&偏差与漏项控制9.验证报告会审第 4 页共16 页制药有限公司制药有限公司第5 页共16 页1. 概述我公司自制纯化水微生物限度检查项目为需氧菌总数检查。
参照《中国药典》2015 版四部附录1105：微生物计数法的规定，须对纯化水检查所用的R2A 培养基进行适用性试验。
通过适用性试验以确认所采用的培养基适用于纯化水的需氧菌检查。
本验证方案通过试验菌株的回收率测试，验证R2A琼脂培养基是否适用于本品的需氧菌总数检查。
2.验证目的和范围验证纯化水的需氧菌检查所用R2A 培养基的适用性，对其有效性进行评价，保证检验结果的可靠性。
本验证方案采用1批按GMF要求组织生产的纯化水，并进行R2A培养基适用性检查。
3.组织及职责3.1验证方案和验证报告的起草、审核、批准验证方案由质量部QC组负责起草，由质量部审核，最终由质量负责人批准。
验证方案实施完成后，由QC组负责汇总需氧菌检查法验证的结果、撰写报告，由质量部审核，最终由质量负责人批准报告。
3.2验证方案的培训验证方案在经质量负责人批准后，由QC组组长对本次验证实施的相关人员组织培训工作，并将该次的培训记录归档。
3.3验证方案实施过程中的变更和偏差验证方案实施过程中如有变更和偏差，质量负责人应当组织进行评估并采取相应的控制措施。
3.4验证工作小组成员表4.验证进度计划表本次R2A培养基的适用性试验的计划安排时间是2015年8月至2015年9月。
5.验证所需要的仪器设备的确认主要检验仪器设备确认表检查人/ 日期复核人/日期：6.验证所需要的菌种、培养基、试剂、检验样品的确认6.1.试验菌种检查表检查人/ 日期复核人/日期：6.2试验所需的培养基检查检查人/ 日期复核人/日期：6.3试剂检查人/ 日期复核人/日期：64试剂及培养基配制pH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液（冲洗液）：称取pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液干粉16.09g。
纯化水微生物限度检查标准操作规程
纯化水微生物限度检查标准操作规程1目的规定纯化水微生物限度检查操作。
2适用范围本文件适用于纯化水微生物限度检查操作。
3职责微生物限度检查操作人员。
4微生物限度检查方法纯化水采用薄膜过滤法进行检查。
滤膜孔径应不大于0.45μm，直径一般为50mm。
5内容5.1设备洁净工作台、恒温培养箱（30~35℃）、恒温水浴锅、电热干燥箱（250~300℃）、高压蒸汽灭菌器（使用时要进行灭菌效果检查并应定期请有关部门检定）。
5.2仪器及器皿5.2.1薄膜过滤器、放大镜、显微镜。
5.2.2玻璃器皿：蓝盖试剂瓶（250ml）、培养皿（90mm）、吸管（l0ml分度0.l）、载玻片、盖玻片。
玻璃器皿用前应洗涤干净无残留抗菌物质。
吸管口上端距0.5cm处塞入约2cm的适宜疏松棉花，置吸管桶内或用牛皮纸包好。
玻璃器皿，均于高压蒸汽121℃灭菌30min，烘干备用。
5.3用具5.3.1大、小橡皮胶头（放于干净带盖的容器中，并应定期用75%乙醇溶液浸泡）。
纯化水微生物限度检查标准操作规程5.3.2无菌衣、帽、口罩、手套（洗净后配套，用牛皮纸包严）灭菌，备用。
也可用一次性无菌衣、帽、口罩、手套。
5.3.3酒精灯、酒精棉球、灭菌剪刀、灭菌镊子、试管架、无菌滤杯、无菌滤膜、打火机、记号笔、接种环、灭菌抹布等。
5.4消毒液5.4.10.1%苯扎溴铵溶液（供洗手、擦拭操作台面用）。
5.4.275%乙醇溶液5.4.33~5%来苏尔溶液5.5培养基R2A琼脂培养基5.5.1灭菌前后应对培养基的pH值进行校验。
5.5.2配制的培养基不应有沉淀，如有沉淀，应于溶化后趁热过滤灭菌后使用。
5.5.3培养基的分装量不得超过容器的2/3，以免灭菌时溢出。
包装时，塞子必须塞紧以免松动或脱落造成染菌。
5.5.4培养基配制后应在2h内灭菌，避免细菌繁殖。
5.5.5灭菌后的培养基在2~8℃处保存备用，放置时间不能过长，以免水分散失及染菌。
已熔化的培养基应一次用完，开启后不宜再用。
纯化水检验操作规程
取两只25ml纳氏比色管放于试管架上，用100ml量筒量取本品100ml于100ml烧杯中，用20m量筒量取19ml水加入该烧杯，于电炉上加热使蒸发至20ml，放冷，倒入第一只比色管，用1ml移液管量取铅标准使用液1ml于第二只比色管中，用量筒量取19ml水再加入该管，用2ml移液管分别量取醋酸盐缓冲液（PH3.5）2ml加入两比色管中，用滴管加水至25ml刻度线，用2ml移液管分别量取硫代乙酰胺试液2ml加入两比色管中，摇匀，放置2分钟后，置白纸上观察两管颜色。
取上述溶液，照总有机碳分析仪标准操作规程操作，测定完后打印出图谱并注明页码和测定人。响应系数应介于85%～115%之间，蔗糖对照品溶液3次的TOC值的相对标准偏差（RSD）应不大于5.0%。
c)测定步骤：
用50ml量筒量取50ml本品置于50ml烧杯中，用2ml移液管量取碱性碘化汞钾试液2ml加入其中，放置15分钟，如显色，另取一50ml烧杯，加1.5ml氯化铵溶液，48ml无氨水（灭菌注射用水）与碱性碘化汞钾试液2ml制成对照液，颜色比较。
d)结果判定：
样品溶液的颜色比对照溶液的颜色浅（≤0.00003%），即为合格。
1.1.不挥发物
a)仪器及用具
100ml量筒、水浴锅、电热干燥箱、蒸发皿、干燥器、电子天平、坩埚钳
b)实验前准备：
蒸发皿使用前用蒸馏水清洗干净、放在105℃±2℃的烘箱中烘干2小时，放在干燥器内冷却至室温称重，再次烘干，冷却，再称量，直至恒重。每次烘干时间不少于1小时连续两次称量的重量差不超过0.3mg视为恒重，放在干燥器内备用。称量蒸发皿时要求精确到0.0001g。
1.目的
为QC检验人员提供检验依据。
2.适用范围
适用于纯化水的检验操作。
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纯化水微生物限度检测
计数方法适用性试验
1.供试液制备
根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备供试液。
供试液制备若需加温时，应均勻加热，且温度不应超过45#C。
供试液从制备至加人检验用培养基，不得超过1小时。
常用的供试液制备方法如下。
如果下列供试液制备方法经确认均不适用，应建立其他适宜的方法。
(1)水溶性供试品取供试品，用PH7.0无菌氣化钠-蛋白胨缓冲液，或PH7.2磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养基溶解或稀释制成1:10供试液。
若需要，调节供试液pH值至6〜8。
必要时，用同一稀释液将供试液进一步1 0倍系列稀释。
水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。
2.接种和稀释
按下列要求进行供试液的接种和稀释，制备微生物回收试验用供试液。
所加菌液的体积应不超过供试液体积的1%。
为确认供试品中的微生物能被充分检出，首先应选择最低稀释级的供试液进行计数方法适用性试验。
(1)试验组取上述制备好的供试液，加入试验菌液，混勻，使每lm l供试液或每张滤膜所滤过的供试液中含菌量不大于100cfu。
(2 )供试品对照组取制备好的供试液，以稀释液代替菌液同试验组操作。
(3)菌液对照组取不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液，按试验组操作加人试验菌液并进行微生物回收试验。
若因供试品抗菌活性或溶解性较差的原因导致无法选择最低稀释级的供试液进行方法适用性试验时，应采用适宜的方法对供试%液进行进一步的处理。
如果供试品对微生物生长的抑制作用无法以其他方法消除，供试液可经过中和、稀释或薄膜过滤处理后再加人试验菌悬液进行方法适用性试验。
供试品检查
检验量即一次试验所用的供试品量(g、m l或cm2)。
一般应随机抽取不少于2个最小包装的供试品，混合，取规定量供试品进行检验。
除另有规定外，一般供试品的检验量为10g或10ml;膜剂为100cm2;贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。
检验时，应从2个以上最小包装单位中抽取供品，大蜜丸还不得少于4丸，膜剂还不得少于4片。
供试品的检査
按计数方法适用性试验确认的计数方法进行供试品中需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的测定。
胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基用于测定需氧菌总数；沙氏葡萄糖琼脂培养基用于测定霉菌和酵母菌总数。
阴性对照试验以稀释液代替供试液进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长，如果阴性对照有菌生长，应进行偏差调査。
1.平皿法
平皿法包括倾注法和涂布法。
除另有规定外，取规定量供试品，按方法适用性试验确认的方法进行供试液制备和菌数测定，每稀释级每种培养基至少制备2个平板。
培养和计数除另有规定外，胰酪大豆胨琼脂培养基平板在30〜35°C培养3〜5天，沙氏葡萄糖琼脂培养基平板在20〜25°C培养5〜7天，观察菌落生长情况，点计平板上生长的所有菌落数，计数并报告。
菌落蔓延生长成片的平板不宜计数。
点计菌落数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规则报告菌数。
若同稀释级两个平板的菌落数平均值不小于15，则两个平板的菌落数不能相差1倍或以上。
菌数报告规则需氧菌总数测定宜选取平均菌落数小于300cfu的稀释级、霉菌和酵母菌总数测定宜选取平均菌落数小于lOOcfu的稀释级，作为菌数报告的依据。
取最髙的平均菌落数，ij*算lg 、lm l或10cm2供试品中所含的微生物数，取两位4效数字报告。
如各稀释级的平板均无菌落生长，或仅最低稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小于1时，以< 1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。
2.薄膜过滤法
除另有规定外，按计数方法适用性试验确认的方法进行供试液制备。
取相当于l g 、lm l或10cm2供试品的供试液，若供试品所含的菌数较多时，可取适宜稀释级的供试液，照方法适用性试验确认的方法加至适量稀释液中，立即过滤，冲洗，冲洗后取出滤膜，菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养基上培养。
培养和计数培养条件和计数方法同平皿法，每张滤膜上的菌落数应不超过lOOcfu苗数报告规则以相当于lg 、lm l或10cm2供试品的菌落数报告菌数；若滤膜上无菌落生长，以< 1报告菌数（每张滤膜过滤lg 、lm l或10cm2供试品），或< 1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。
3. MPNxx
取规定量供试品，按方法适用性试验确认的方法进行供试液制备和供试品接种，所有试验管在30〜35X：
培养3〜5天，如果需要确认是否有微生物生长，按方法适用性试验确定的方法进行。
记录每一稀释级微生物生长的管数，从表3査每l g 或lm l供试品中需氧菌总数的最可能数。
结果判断
需氧菌总数是指胰酪大豆胨琼脂培养基上生长的总菌落数(包括真菌菌落数霉菌和酵母菌总数是指沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长的总菌落数(包括细菌菌落数）。
若因沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长的细菌使霉菌和酵母菌的计数结果不符合微生物限度要求，可使用含抗生素（如氣霉素、庆大霉素）的沙氏葡萄糖琼脂培养基或其他选择性培养基（如玫瑰红钠琼脂培养基)进行霉菌和酵母菌总数测定。
使用选择性培养基时，应进行培养基适用性检查。
若采用M P N法，测定结果为需氧菌总数。
各品种项下规定的微生物限度标准解释如下：
lO ^ fu：
可接受的最大菌数为20;
102cfu：
可接受的最大菌数为200;
103cfu：
可接受_____的最大菌数为2000，依此类推。
若供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的检査结
果均符合该品种项下的规定，判供试品符合规定；若其
中任何一项不符合该品种项下的规定，判供试品不符合
规定。
稀释液、冲洗液及培养基
见非无菌产品微生物限度检查：
控制菌检查法。