病理组织学检测

病理组织学检测

收集检测病料，各种典型病变的组织器官，用10%福尔马林溶液固定，常规石蜡切片，HE染色，光镜观察。

具体操作步骤如下：

（1）取材：选择刚死的新鲜的组织；采取样品的时候要注意，将动物剖检之后，要尽快的的采取相关组织的材料；采样的刀片一定要锋利，切取组织块时避免前后过度的拉动或用力挤压，以防止造成组织结构变形或人为损伤。

（2）固定：将采集好组织样品固定于10%的中性福尔马林溶液中，过夜固定或者至少固定24h。（市场技术人员只需采集病料，并用10%的中性福尔马林固定后，室温存放，直接送检。注：用封闭好的瓶子存放样品，防止福尔马林外流。）

（3）组织修块及水冲：将福尔马林溶液固定好的组织进行修整，选好病变部位组织的切面，尽量修的薄一些，将修整好的组织块放在流动的自来水下冲洗10-16h，以便去掉组织中的甲醛。

（4）脱水：将修好的组织块依次放入70%、80%、85%、90%、95%以及100%（一和二）梯度酒精中进行脱水处理。脱水的具体程序及时间为：70%酒精2h→80%酒精2h→85%酒精2h→90%酒精1h→95%酒精30min→无水乙醇（100%）I 45min→无水乙醇（100%）II 45min。

（5）透明及浸蜡：组织块完全脱水后，将其分别浸入二甲苯中进行透明，具体透明时间因组织块厚薄而异。将透明好的组织块，放在55℃左右的恒温箱中，进行浸蜡2-4h。

（6）包埋：将70℃融过的石蜡倒入铁制的包埋框内，整齐的摆放组织块，一段时间后再进行修切。

（7）切片：先将切片机调至3mm厚度，开始切片。

（8）展片及粘片：将切好的组织片取下放到40℃的温水中，利用酒精将之展开。

（9）烤片：将捞出的组织切片放于37℃培养箱中烤片2h或者过夜。

（10）HE染色：按照下面的时间及顺序进行。首先二甲苯Ⅰ15min→二甲苯Ⅱ10-15min→酒精/二甲苯3-5min→无水乙醇3-5min→95%酒精3-5min→85%

酒精3-5min→75%酒精3-5min→蒸馏水4-6min→苏木素染色液3-5min→自来水冲洗约1min→1%盐酸酒精4～5s→流动的自来水冲洗10-15min→90%酒精2-4s →1%伊红染色液3-6s→95%酒精Ⅰ3s→95%酒精Ⅱ1-2min→无水乙醇Ⅰ2-4min→无水乙醇Ⅱ5min→二甲苯Ⅰ20-30min。

（11）封片：将经过二甲苯清洗的盖玻片盖于滴加了中性树脂的组织切片上，37℃温箱中烤干，在光学显微镜下观察。