枯草芽孢杆菌Bs_15在枣树体内_省略_定殖及其对土壤微生物多样性的影响_余贤美
枯草芽孢杆菌、春雷霉素对黑土微生物的生态影响的开题报告
枯草芽孢杆菌、春雷霉素对黑土微生物的生态影响的开题报告题目：枯草芽孢杆菌、春雷霉素对黑土微生物的生态影响一、研究背景和意义黑土是我国重要的农业资源，具有优质水分保持能力、土壤肥力高等特点。
然而，由于现代农业的发展，大量的农业化肥、农药等化学品被广泛使用，导致黑土微生物群落的分布和数量发生变化，引起生态环境问题。
因此，了解黑土中微生物群落的组成及其生态影响，对于维护黑土生态环境具有重要的意义。
枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）和春雷霉素是常用的生物农药，对一些农业有害生物有极强的杀灭作用。
然而，这些生物农药对黑土微生物的生态影响却鲜有研究。
因此，本研究选取枯草芽孢杆菌、春雷霉素为研究对象，研究其在黑土中的生态影响，为生物农药在实际应用中提供科学依据。
二、研究目的1. 探究枯草芽孢杆菌、春雷霉素在黑土中的生态影响。
2. 分析枯草芽孢杆菌、春雷霉素对黑土微生物的影响及其恢复能力。
3. 为优化生物农药在农业生产中的应用提供科学依据。
三、研究内容和方法1. 采集黑土样品，经过处理后分为对照组和分别添加一定浓度的枯草芽孢杆菌、春雷霉素组。
2. 利用高通量测序技术对黑土微生物群落进行测序分析，比较不同组之间的差异。
3. 通过土壤微生物孔板计数法、流式细胞术等方法，量化不同处理组的微生物数量和数量变化。
4. 评价枯草芽孢杆菌、春雷霉素对黑土微生物群落生态系统中的影响，探究黑土微生物群落的恢复能力。
四、预期结果和意义预期结果:1. 枯草芽孢杆菌、春雷霉素对黑土微生物群落的组成和数量具有显著影响。
2. 枯草芽孢杆菌、春雷霉素对黑土微生物群落的生态系统具有破坏作用，黑土微生物群落恢复速度较慢。
3. 在实践中，应严格控制生物农药使用量和频次，防止对农业生态环境带来负面影响。
意义：1. 对于生物农药在农业生产中的应用提供了科学依据，促进生物农药的合理应用。
2. 为黑土生态环境的维护提供科学依据，推动可持续农业的发展。
枯草芽孢杆菌的作用
枯草芽孢杆菌的作用众所周知微生物菌肥之功效和价位的特殊主要是因为添加了活性有益菌！所以菌种的作用对于微生物肥料来说是最重要的。
今天我们主要了解应用最广泛的“枯草芽孢杆菌”·······菌肥一般都离不开它！微生物菌种都是靠生物发酵培育得来的。
真正的枯草芽孢杆菌是一种生物制剂，对作物、对土壤都有很好的生长调节作用，基本是多功能的，不是只针对一点起作用，最重要的是它的使用效果是累加的，是单纯的肥料或激素达不到的。
根据长期的实践结果和研究表明枯草芽孢杆菌对改善土壤、提高农作物品质有以下9种作用。
1.抗生作用抗生作用是指拈抗微生物通过产生代谢产物在低浓度下就能够对病原微生物的生长和代谢产生抑制作用，从而来影响病原微生物的生存和活动。
近半个世纪以来，人们从枯草芽孢杆菌不同菌株的代谢产物中分离纯化了多种有效的抗菌物质。
2.溶菌作用枯草芽孢杆菌的溶菌作用主要表现在是通过吸附在病原菌的菌丝上，并随着菌丝生长而生长，而后产生溶菌物质造成原生质泄露使得菌丝体断裂；或者是产生抗菌物质通过溶解病原菌孢子的细胞壁或细胞膜，致使细胞壁穿孔、畸形等现象从而抑制孢子萌发。
3.诱导植物产生抗性及促进植物生长诱导植物产生抗性作用是指枯草芽孢杆菌不但能够抑制植物病原菌，而且还能够诱发植物自身抗病机制从而增强植物的抗病性能的作用。
什么是PGPR国际上把土壤中能促进植物生长的根际自生细菌通称为植物促生根圈细菌，简称为PGPR。
其中以枯草芽孢杆菌的抗逆性最强、功能最多、适应性最广、效果最稳定。
枯草芽孢杆菌能够产生类似细胞分裂素、植物生长激素的物质，促进植物的生长使植物抵抗病原菌的侵害。
4.保护环境。
枯草芽孢杆菌大量应用于生物肥料。
当作用于作物或土壤时，能够在作物根际或体内定殖，并起到特定肥料效应。
目前，微生物肥料在培肥地力，提高化肥利用率，抑制农作物对硝态氮、重金属、农药的吸收，净化和修复土壤，降低农作物病害发生，促进农作物秸秆和城市垃圾的腐熟利用。
枯草芽孢杆菌在土壤生态系统中的功能与作用研究
枯草芽孢杆菌在土壤生态系统中的功能与作用研究枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是一种广泛存在于土壤中的益生菌，其在土壤生态系统中拥有重要的功能与作用。
研究表明，枯草芽孢杆菌具有促进植物生长、增强土壤肥力、抑制植物病原菌和土壤病害、降解有机物质和减少污染物等方面的能力。
首先，枯草芽孢杆菌能够与植物根系形成共生关系，促进植物生长和发育。
通过产生植物生长激素和有益的代谢产物，这种细菌能够促进植物根系的生长，并提高植物对营养元素的吸收利用效率。
枯草芽孢杆菌还能够抑制植物叶片上的有害菌群，增强植物的自抗病能力，降低植物的病害发生率。
其次，枯草芽孢杆菌在土壤肥力的提高和维持中起着重要作用。
这种细菌具有强大的有机酸分解能力，能够降解残留的植物残渣和有机物质，将其分解成有机酸和可溶性营养物，提供给植物和其他微生物的营养需求。
同时，枯草芽孢杆菌还能够固氮和解磷，将大气中的氮转化为植物可利用的形式，促进植物的生长，并将土壤中的磷溶解，增加土壤的磷有效性。
此外，枯草芽孢杆菌对土壤中的病原菌和病害有抑制作用。
通过产生一系列的抗生素和抗菌物质，枯草芽孢杆菌能够抑制土壤中一些常见的病原菌，如根腐病菌、立枯病菌等，减少植物病害的发生。
此外，它还能与土壤中的其他益生菌相互作用，增加土壤抗生性，提高土壤中对病原微生物的综合抵抗能力。
枯草芽孢杆菌还具有降解有机物质和减少污染物的能力。
这种细菌能够分解有机物质中的复杂结构，将其转化为简单的无机盐和气体等形式，降解有机污染物的浓度和毒性。
同时，枯草芽孢杆菌还能够吸附和分解土壤中的重金属和有机化合物，减少其对土壤和水体的危害，提高土壤的生态安全性。
综上所述，枯草芽孢杆菌在土壤生态系统中具有重要的功能和作用。
它可以促进植物生长和发育，增强土壤肥力，抑制植物病原菌和土壤病害，降解有机物质和减少污染物。
因此，深入研究枯草芽孢杆菌在土壤生态系统中的功能与作用，将有助于推动可持续农业和农田生态安全的发展。
枯草芽孢杆菌对土壤群落结构的影响
枯草芽孢杆菌对土壤群落结构的影响作者：邱萌萌吴玉斌陆洪省来源：《南方农业·下旬》2021年第01期摘要采用含毒介质法研究枯草芽孢杆菌对茄链格孢菌和灰葡萄孢菌菌丝生长的抑制能力，采用高通量测序的方法探究枯草芽孢杆菌对土壤浸出液中真菌菌群群落结构的影响。
结果表明，枯草芽孢杆菌对茄链格孢菌和灰葡萄孢菌菌丝生长的抑制率达到100%;在门分类水平上，枯草芽孢杆菌会明显改变土壤浸出液中真菌菌群的群落结构。
因此，枯草芽孢杆菌可作为生防菌广泛应用。
关键词枯草芽孢杆菌;含毒介质法;高通量测序中图分类号：S476;S154.36 文献标志码：B DOI：10.19415/ki.1673-890x.2021.03.084芽孢杆菌是土壤和植物微生态区系的优势生物种群，具有很高的抗逆能力和抗菌防病作用。
枯草芽孢杆菌是芽孢杆菌中性状优良的分离株，其生理特征多样，在自然界中广泛分布，极易分离培养。
枯草芽孢杆菌不仅可以广泛存在于土壤、植物根际表面和其他外部环境中，而且可以存在于植物体内，是植物体内常见的内生细菌，尤其是在植物的根部、茎部。
该菌不仅对人畜无毒无害，不污染环境，而且能产生多种抗菌素和酶，具有广谱抗菌活性和极强的抗逆能力。
枯草芽孢杆菌可通过成功定殖至植物根际、体表或体内的方式，与病原菌竞争植物周围的营养，分泌抗菌物质以抑制病原菌生长，同时诱导植物防御系统抵御病原菌入侵，改变植物根际土壤中微生物群落结构，从而达到生防的目的，已成为一种理想的生防细菌[1-3]。
高通量测序技术是目前应用最广泛的新一代测序技术，与传统的琼脂培养基培养、Biolog 平板法、磷脂脂肪酸、PCR-DGGE和RFLP等分析方法相比，具有通量高、灵敏度高、准确性高和运行成本低等特点。
高通量测序技术通过检测土壤微生物细胞内特定遗传物质（原核微生物16S rRNA、真核微生物18S rRNA）的碱基序列，可以更全面、准确地分析土壤中微生物群落的多样性，已广泛应用于土壤微生物群落的研究中[4-6]。
枯草芽孢杆菌的生物防治机制及效果评估
枯草芽孢杆菌的生物防治机制及效果评估枯草芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）是一种广泛应用于生物农药的重要微生物。
它发现于1901年，最初用于治理蚕食害虫，后来又被用于防治农作物和森林中的许多其他害虫。
枯草芽孢杆菌的生物防治机制主要涉及其产生的杀虫晶体蛋白和细菌产物。
首先，枯草芽孢杆菌通过产生杀虫晶体蛋白（cry蛋白）来防治害虫。
这些杀虫晶体蛋白是由菌株分泌的一种内毒芽孢准晶蛋白所组成。
当害虫摄入枯草芽孢杆菌或接触菌株分泌的晶体蛋白时，蛋白会在害虫的中肠内溶解，并释放出毒素。
这些毒素具有高度的特异性，只对某些昆虫具有杀伤作用，对人类和其他非目标生物无害。
其次，枯草芽孢杆菌通过产生其它细菌产物来对抗害虫。
这些细菌产物包括抗菌肽、酸、酶和其它生物活性分子。
抗菌肽能够杀死害虫的细菌感染，保护枯草芽孢杆菌在害虫体内生长和繁殖。
酸和酶能够改变害虫的生理环境，导致害虫死亡。
此外，枯草芽孢杆菌还能分泌一些生物活性分子，如胞外抗氧化物和抗生物膜物质，来抑制害虫的营养吸收和生长发育。
枯草芽孢杆菌的防治效果评估主要通过实验室研究和田间实验来进行。
在实验室研究中，首先需要筛选出高毒力的枯草芽孢杆菌菌株，然后通过培养菌株并提取晶体蛋白，通过浓度和时间的变化来确定其对害虫的毒力。
同时，还需要评估杀虫晶体蛋白对非目标生物的毒性，以确保安全性。
实验室研究还可以利用分子生物学技术对枯草芽孢杆菌中产生杀虫晶体蛋白的基因进行分析，从而进一步优化杀虫晶体蛋白的产量和毒力。
田间实验是评估枯草芽孢杆菌生物防治效果的重要方法。
在田间实验中，首先需要确定目标害虫的发生和危害程度，然后选择适当的施药时间和浓度，将枯草芽孢杆菌菌株喷洒在农作物上。
经过一段时间后，观察农作物上害虫的死亡情况和防治效果。
此外，还需要考虑如何最大限度地降低枯草芽孢杆菌对环境和非目标生物的影响，以及如何合理利用生物农药与化学农药相结合，提高农作物的产量和质量。
枯草芽孢杆菌Bs-15对柿树炭疽病的离体防治效果
ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ ｓ ｐ ｒ ａ ｙ ｉ ｎ ｇ ｔ ｈ ｅ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ｕ ｍ ｓ ｕ ｓ ｐ ｅ ｎ ｓ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｂ ｓ— — １ ５ ｂ ｅ ｆ ｏ ｒ ｅ ｉ ｎ ｏ ｃ ｕ ｌ ａ ｔ ｉ ｎ ｇ ｔ ｈ ｅ ｐ ａ ｔ ｈ ｏ ｇ ｅ ｎ ｉ ｃ ｄ ｉ ｓ ｋ ｗａ ｓ ｂ ｅ ｔ ｔ ｅ ｒ ｔ ｈ ａ ｎ ｔ ｈ ａ ｔ ｏ ｆ ｓ ｐ ｒ ａ ｙ ｉ ｎ ｇ ｔ ｈ ｅ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｉｕ ｒ ｍ ｓ ｕ ｓ ｐ ｅ ｎ ｓ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｂｓ ・ － １ ５ ａ ｔ ｆ ｅ ｒ ｉ ｎ ｏ ｃ ｕ ｌ ａ ｔ ｉ ｎ ｇ ｔ ｈ ｅ ｐ ａ ｔ ｈ ｏ ｇ ｅ ｎ ｉ ｃ ｄ ｉ ｓ ｋ ｗｉ ｔ ｈ ｔ ｈ ｅ ｉ ｎ ｈ ｉ ｂ ｉ — －
枯草芽孢杆菌的生态功能及应用前景
枯草芽孢杆菌的生态功能及应用前景枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是一种常见的土壤中存在的革兰氏阳性细菌。
它具有广泛的生态功能和广泛的应用前景。
本文将分别从枯草芽孢杆菌的生态功能和应用前景两个方面进行详细的介绍。
首先，枯草芽孢杆菌在土壤中具有重要的生态功能。
它是一种很强的生防菌，能够对许多植物病原真菌和细菌进行拮抗作用，如白色念珠菌、灰霉病菌等。
其产生的抗生素能够有效抑制病原菌的生长繁殖，保护植物免受病原菌的侵害。
此外，枯草芽孢杆菌还能够分泌一系列的酶类物质，如纤维素酶、蛋白酶等，能够分解土壤中的有机物质，促进养分的释放和循环利用。
因此，枯草芽孢杆菌对土壤的生态系统有着积极的影响，有助于维持土壤的健康和平衡。
其次，枯草芽孢杆菌在农业、环境保护和食品安全等领域具有广泛的应用前景。
首先在农业领域，枯草芽孢杆菌可以作为一种生物农药，用于防治农作物的病害。
相比化学农药，生物农药更环保、安全，并且可以降低对环境的污染。
枯草芽孢杆菌的抗菌活性能够有效地抑制农作物的病原微生物，提高农作物的产量和质量。
其次，在环境保护领域，枯草芽孢杆菌具有治理土壤和水体中污染物的潜力。
枯草芽孢杆菌可以降解有机废弃物和油污，将其转化为二氧化碳和水等无害物质，减少对环境的污染。
此外，枯草芽孢杆菌还可以吸附重金属离子和放射性物质，从而减少它们对环境和人体的危害。
此外，枯草芽孢杆菌还有潜力应用于食品安全领域。
它具有抗菌、抗真菌和抗氧化等活性，可以有效地抑制食品中的病原微生物和腐败菌的生长繁殖。
同时，枯草芽孢杆菌产生的一些代谢产物，如多糖和多肽，具有保湿和抗氧化的功能，可以被应用于食品添加剂的生产，提高食品的保鲜性和品质。
总之，枯草芽孢杆菌作为一种常见的土壤细菌，具有广泛的生态功能和应用前景。
它可以作为一种生防菌在农业领域应用，能够对农作物的病虫害进行有效防治；同时还可以用于土壤和水体的污染治理，具有环境保护的潜力；此外，在食品安全领域也有着重要的应用前景。
探索：枯草芽孢杆菌
探索：枯草芽孢杆菌国内外关于枯草芽孢杆菌的研究与应用已有100多年的历史，早期大部分工作集中在形态观察、分类鉴定、生理机制、功能发掘及防治等方面。
近年来，对枯草芽孢杆菌的研究渐进到遗传学与分子生物学领域，研究内容体现在特定功能基因的寻找并克隆到需要的物种中或者通过诱变、基因工程等手段对枯草芽孢杆菌生产菌进行遗传改造等。
1.枯草芽孢杆菌的生物拮抗作用：枯草芽孢杆菌生长过程中能代谢分泌细菌素（枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素等）、脂肽类化合物、有机酸类物质等，这些代谢产物可有效抑制病原菌的生长或溶解病原菌，以致杀死病菌，高抗重茬。
枯草芽孢杆菌分泌的酶类有几丁质酶抗菌蛋白对多种植物病原菌具有强烈抑制作用。
枯草芽孢杆菌代谢分泌的脂肽类化合物可用于防治小麦白粉病、稻瘟病、赤霉病、纹枯病、炭疽病、黄瓜霜霉病、番茄青枯病、灰霉病、等植物病害。
2.枯草芽孢杆菌具有竞争优势：枯草芽孢杆菌施入土壤后，和其它微生物争夺氧气和营养物质，具有竞争排它性，它在作物根部形成了优势生物种群。
通过这种方式，-草芽孢杆菌就有效的防止了其它病菌的侵入，获取周围菌的营养，病原菌的生长受到抑制，枯草芽孢杆菌像疫苗一样起到了防病抗病的作用。
3.枯草芽孢杆菌可诱导植物产生抗性：枯草芽孢杆菌能通过诱发植物自身抗病机制增强植物的抗病性能，具有诱导植物抗病性作用。
-枯草芽孢杆菌激活植物的天然防御机制，使植物免受病原物危害减轻危害，这是-枯草芽孢杆菌作为生防菌发挥生防作用的一个重要方面。
4.枯草芽孢杆菌的杀菌溶菌作用：枯草芽孢杆菌可在病原菌的菌丝上伴随生长，分解消耗消耗病原菌，使病菌菌丝发生断裂、解体细胞消解，这样病原菌就不能进一步侵染植株。
5.枯草芽孢杆菌可大幅促进植物生长：枯草芽孢杆菌在防病抗病的同时，它还可诱导作物产生吲哚乙酸等物质，提高作物生长刺激素的水平，从而促进作物生长繁殖。
尽管当前化学杀菌剂在农药产业仍占主导地位。
但枯草芽孢杆菌杀菌剂具有对人畜相对安全、环境兼容性好、不易产生抗药性等优点，因而更符合现代社会对农业生产及有害生物综合防治(IPM)的要求。
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DOI:10.16409/ki.2095-039x.2014.04.00230(4)497-502 中国生物防治学报 Chinese Journal of Biological Control 2014年8月枯草芽孢杆菌Bs-15在枣树体内和土壤中的定殖及其对土壤微生物多样性的影响余贤美1，侯长明2，王海荣1，安淼1，张琼1，王中堂1，周广芳1*（1. 山东省果树研究所，泰安 271000；2. 山东省农业科学院，济南 250100）摘要：为明确枯草芽孢杆菌Bs-15在枣树定殖能力及其对土壤微生物多样性的影响，本研究通过盆栽试验研究了菌株Bs-15在枣树体内和土壤中的定殖情况，通过固体平板法和Biolog方法分析了菌株Bs-15对土壤微生物种群数量和功能多样性的影响。
结果显示，通过浇灌法和涂抹叶片法，菌株Bs-15均能在枣树根、茎、叶和土壤中成功定殖，定殖量达到104 cfu/g以上的水平。
接种菌株Bs-15后，土壤中细菌和放线菌的数量略有增加，而真菌数量的增长速度极显著下降。
Biolog ECO微生物平板分析结果显示，菌株Bs-15提高了土壤中微生物的每孔颜色平均变化率，72 h后达到极显著差异；提高土壤微生物多样性指数，其中Shannon多样性指数、Simpson多样性指数和McIntosh多样性指数的差异达到极显著水平，Simpson均匀度和McIntosh均匀度的差异达到显著水平。
本研究结果表明菌株Bs-15具有良好的定殖能力，提高了土壤微生物的整体活性以及土壤微生物种群和功能多样性。
关 键 词：枯草芽孢杆菌；定殖；微生物种群；土壤微生物；功能多样性中图分类号：S476；S154.36 文献标识码：A 文章编号：1005-9261(2014)04-0497-06 Colonization of Bacillus subtilis Bs-15 in Jujube Plant and Soil and Its Influence on theMicrobial Diversity in the SoilYU Xianmei1, HOU Changming2, WANG Hairong1, AN Miao1, ZHANG Qiong1,WANG Zhongtang1, ZHOU Guangfang1*(1. Shandong Institute of Pomology, Tai’an 271000, China; 2. Shandong Academy of Agricultural Sciences, Ji’nan 250100, China)Abstract:We evaluated the colonization of B. subtilis Bs-15 in jujube (Zizyphus jujuba Mill. ‘Jinsi 4’) plants and its rhizospheric soil via pot experiments, and measured its effects on the community structure and functional diversity of soil microbes. Results showed that the Bs-15 colonized well in jujube plant and soil by irrigating and leaf daubing, with no less than 104 cfu/g of colonization amount. The number of bacteria and actinomycetes in soil increased but without significance, while that of fungi decreased significantly after Bs-15 inoculation. The Biolog ECO microplates analysis showed that averaged well color development (AWCD) value of the microbial communities in the Bs-15 inoculated soil increased a little before 72 h, and increased significantly after 72 h. In the presence of Bs-15, the parameters (Shannon index, Simpson index and McIntosh index) of the functional diversity of the soil microbial communities increased significantly at 0.01 level, and Shannon uniformity and McIntosh uniformity increased significantly at 0.05 level.Key words: Bacillus subtilis; colonization; microbial communities; soil microorganism; functional diversity植物病害的生物防治是现代农业生产主流方向之一，而生防菌在实际应用中会受到很多因素的影响，在土传病害生防实践中，生防菌被引入土壤时，往往会受到土壤中土著微生物的抑菌作用、生防菌与植收稿日期：2013-12-13基金项目：国家自然科学基金（31100086）；国家科技支撑计划（2013BAD14B0301）；山东省农业良种工程（2012LZ012，2013LZ12-01）作者简介：余贤美（1976-），博士，副研究员，E-mail：yuxianmei95@；*通信作者，研究员，E-mail：gkskyb@。
498 中国生物防治学报第30卷物根部亲和能力以及其它非生物因子的影响，这是生物制剂防治植物土传病害防效不稳定的重要原因之一[1,2]。
因此，作为生防因子的生防菌能否在靶标植物及其根际定殖，以及对植株根围微生物的影响已成为筛选、评定土传病害生防菌的一个重要指标，并最终决定该生防菌的开发利用潜力[3]。
土壤微生物是维持土壤质量的重要组成部分，土壤微生物多样性能敏感地反映生态系统的功能演变及环境等的影响[4~6]。
生防菌的引入可能会破坏土壤原有微生物的群落结构和功能，从而对整个生态系统产生有害的影响，最大的潜在影响是引入微生物对土壤小生境中原有微生物的取代作用，导致土壤生态系统的多样性和（或）机能降低[7]。
并且，向土壤中引入生防细菌可能会对群落中原有的非病原真菌产生非目标效应，Glandorf等[8]将基因修饰的假单胞菌GMM和未经修饰的野生型菌株WCS358r引入均会对根围原有真菌微生物系统的组成产生短暂的影响；对用这两种菌处理的小麦根围PCR（一种真菌抑制物质）检测发现，基因修饰的假单胞菌GMM处理的小麦根围有PCR，而未经修饰的野生型菌株WCS358r处理的根围则没有。
而所有引入的菌株，不论有没有经过基因修饰，都没有影响土壤微生物种群的代谢能力、土壤硝化潜能、纤维素分解能力、植株的高度和产量。
这些结果表明引入生防菌对土壤微生物群落可能没有大的影响。
这也表明和野生型菌株相比，基因改良菌株对土壤微生态的影响并没有显著的差异。
但是，不论生防菌有无经过基因修饰，在应用前必须对其在农业生态环境中的行为和对土壤生态系统的潜在影响进行风险评估。
枯草芽孢杆菌Bs-15对稻瘟病菌Magnaporthe grisea、芋疫病菌Phytophthora colocasia、西瓜枯萎病菌Fusarium oxysporum f. sp. niveum、辣椒枯萎病菌Fusarium oxysporum f. sp. vasinfectum、瓜果腐霉Pythium aphaniderm atum等15个病原菌具有较强的抑制作用，而且在温室中对辣椒枯萎病的防效达到44.4%，并诱导产生系统抗性，且具有良好的促进植物生长的作用[9~11]。
本研究分析了枯草芽孢杆菌Bs-15在枣树体内和土壤中的定殖情况，通过Biolog微平板法研究了该菌株对土壤微生物群落及其功能多样性的影响，旨在为枯草芽孢杆菌Bs-15对生态环境的影响及风险性评估提供科学依据，为菌株Bs-15的实际开发应用奠定基础。
1材料与方法1.1 材料供试菌株枯草芽孢杆菌B. subtilis Bs-15为本实验室分离并保存，枣树Zizyphus jujuba Mill.植株为“金丝4号”根蘖分株。
1.2 方法1.2.1 菌株标记本试验选择抗生素利福平作为枯草芽孢杆菌Bs-15抗性标记药剂[12]。
首先将拮抗细菌在牛内膏蛋白胨培养基上划线活化，挑取单菌落转入含利福平5 μg/mL牛肉膏蛋白胨液体培养基中，于30 ℃、200 r/min条件下培养24 h，然后在含有利福平5 μg/mL的牛肉膏蛋白胨培养基（NB）平板上划线培养，待长出单菌落后转入下一浓度梯度中，依次经过含利福平10、20、50、100、150、180、200 μg/mL牛肉膏蛋白胨培养基诱导，直至筛选到稳定的抗利福平200 μg/mL的突变菌株。
1.2.2 土样采集从施用缓释有机肥（山东沃地丰生物肥料有限公司）的枣园中，随机挑选10株“金丝4号”5年树龄的枣树，于根围25 cm范围内，采集0～20 cm深的土壤，土质为砂壤土，微酸性，每株土壤分别过筛去除杂质，并等量混匀备用。
1.2.3 菌株Bs-15的定殖将“金丝4号”枣树根蘖分株栽于盆钵中，成活后备用。
将菌株Bs-15突变株在利福平200 μg/mL的NB培养基中，30 ℃、200 r/min条件下振荡培养24 h，调整菌液浓度，采用浇灌法（用菌液浇灌土壤，使土壤中菌液浓度达到3×106 cfu/g）和涂抹叶片法（菌液浓度3×106 cfu/mL，在叶片上涂抹）进行接种，分别于接菌后1、3、7、14、21、28 d取样进行定殖量的检测[13]。
分别称取0.5 g 根、茎、叶和土，置于装有100 mL、pH 7.0的无菌磷酸缓冲液的三角瓶中，于30 ℃、200 r/min条件下培养30 min，取样品悬浮液1 mL，稀释10倍，取100 μL稀释液，均匀涂布于含利福平200 μg/mL的NB平板上，30 ℃恒温培养2 d，观察并统计平板上的菌落数量。