【CN110093403A】荧光PCR试剂的冻干保护剂以及冻干芯片的制备方法【专利】
一种PCR反应试剂的冻干微球及其制备方法[发明专利]
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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810429361.6(22)申请日 2018.05.08(71)申请人 北京中科生仪科技有限公司地址 100176 北京市大兴区经济开发区中和街14号汇龙森B座307-2(72)发明人 代有来 高静 蔡亦梅 张瑜 范东雨 李洁昆 任鲁风 (51)Int.Cl.C12Q 1/6806(2018.01)C12Q 1/686(2018.01)(54)发明名称一种PCR反应试剂的冻干微球及其制备方法(57)摘要本发明提供了一种PCR反应试剂的冻干微球，冻干微球成分包含酶反应液、脱氧核糖核酸三磷酸、引物、模板、生物缓冲液、葡聚糖、海藻糖、牛血清白蛋白、明胶、甘油、二甲基亚砜、表面活性剂、消泡剂、防腐剂等。
本发明的目的是提供一种PCR反应试剂的冻干微球及其制备方法，以解决现有技术中，PCR试剂不能常温保存与运输的问题；解决PCR试剂不易封装和贮存，冻干粉试剂不易定量的问题。
该冻干品包括PCR反应主要试剂，使用简便，有效避免了实验操作过程中引入的污染和减少反应组份添加的误差，并且节省时间。
权利要求书1页 说明书6页 附图3页CN 110452956 A 2019.11.15C N 110452956A1.一种PCR反应试剂的冻干微球，其特征在于，包括：PCR反应体系、冻干保护剂。
2.根据权利要求1所述的冻干微球，其特征在于，所述冻干保护剂包括：葡聚糖、海藻糖、牛血清白蛋白、明胶、甘油、二甲基亚砜、表面活性剂、消泡剂、防腐剂。
3.根据权利要求1所述的冻干微球，其特征在于，所述PCR反应体系包括酶反应液、脱氧核糖核酸三磷酸、引物、模板、生物缓冲液。
4.根据权利要求2，所述表面活性剂包括：吐温20、吐温80、聚乙二醇辛基苯基醚（Triton X -100）、乙基苯基聚乙二醇（NP -40）。
5.根据权利要求2所述，该试剂冻干微球的冻干保护剂质量配比为：。
一种冻干保护剂、PCR扩增试剂及其冻干方法和应用[发明专利]
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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010947689.4(22)申请日 2020.09.10(71)申请人 上海创宏生物科技有限公司地址 201600 上海市松江区洞泾镇振业路161号九幢四层401室申请人 上海农林职业技术学院(72)发明人 马晶晶 张江 韩相敏 徐添悦 吴碧清 赖志 高俊锋 蒋洁 徐莉 代书玲 (74)专利代理机构 北京艾皮专利代理有限公司11777代理人 马小辉(51)Int.Cl.C12Q 1/686(2018.01)(54)发明名称一种冻干保护剂、PCR扩增试剂及其冻干方法和应用(57)摘要本发明适用于生物技术诊断检测领域，提供了一种冻干保护剂、PCR扩增试剂及其冻干方法和应用，该PCR扩增试剂包括扩增反应体系和冻干保护剂；其中，冻干保护剂包括如下组分：甘油、海藻糖、蔗糖、吐温‑80、右旋糖酐‑40、甘氨酸、组氨酸、谷氨酸钠、抑菌剂、叔丁醇。
本发明提供的冻干保护剂，可与荧光PCR需要用到的组分制备在一起，也可搭配任意PCR检测所需引物和探针，并进行冻干以制得PCR扩增试剂；该PCR扩增试剂不仅能够实现常温运输及保存，且在使用时只需用ddH 2O溶解，然后加入样本核酸即可，具有操作方便的优点。
权利要求书1页 说明书7页 附图4页CN 112048545 A 2020.12.08C N 112048545A1.一种冻干保护剂，其特征在于，包括如下浓度的组分：甘油3~7wt%、海藻糖80~120mg/mL、蔗糖80~120mg/mL、吐温-80 0.3~0.7wt%、右旋糖酐-40 3~7mmol/L、甘氨酸5~15mg/mL、组氨酸5~15mg/mL、谷氨酸钠0.5~1.5wt%、抑菌剂0.1~0.5wt%、叔丁醇0.5~1.5wt%。
2.根据权利要求1所述的一种冻干保护剂，其特征在于，所述冻干保护剂包括如下浓度的组分：甘油4~6wt%、海藻糖90~110mg/mL、蔗糖90~110mg/mL、吐温-80 0.4~0.6wt%、右旋糖酐-40 4~6mmol/L、甘氨酸8~12mg/mL、组氨酸8~12mg/mL、谷氨酸钠0.8~1.2wt%、抑菌剂0.1~0.3wt%、叔丁醇0.8~1.2wt%。
一种PCR扩增冻干预存试剂及其制备方法[发明专利]
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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710472385.5(22)申请日 2017.06.21(71)申请人 安徽安龙基因医学检验所有限公司地址 230000 安徽省合肥市庐阳区工业区阜阳路与北城大道交口A6号1-2层(72)发明人 韦玉军 李航 李静 苏军 吴远航 (74)专利代理机构 杭州君度专利代理事务所(特殊普通合伙) 33240代理人 王桂名(51)Int.Cl.C12Q 1/68(2006.01)(54)发明名称一种PCR扩增冻干预存试剂及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种PCR扩增冻干预存试剂及其制备方法，包括以下组分：DNA聚合酶、Mg2+、dNTP混合物、低温冻干保护剂，具体步骤如下：将DNA聚合酶、Mg2+、dNTP混合物混合在一起，制备得到PCR反应体系混合液，再将PCR反应体系混合液与低温冻干保护剂混合均匀；将混匀后的液体放入冷冻干燥箱中，进行预冻3-5h；在-45℃—-55℃的条件下，进一步升华，保持冷冻干燥2-4h；重复步骤三两次，得到最终的PCR扩增冻干预存试剂；将PCR扩增冻干预存试剂分装进96孔板反应管中，使用时加ddH 2O稀释即可。
本发明具有运输方便、稳定性好等优点。
权利要求书1页 说明书5页CN 107177685 A 2017.09.19C N 107177685A1.一种PCR扩增冻干预存试剂，其特征在于：包括以下组分：DNA聚合酶、Mg2+、dNTP、低温冻干保护剂。
2.根据权利要求1所述的一种PCR扩增冻干预存试剂，其特征在于：所述的DNA聚合酶的浓度为0.05U/ul，所述的Mg 2+的浓度为4mM，所述的dNTP的浓度为0.4mM，所述的低温冻干保护剂的浓度为1.2-7mM。
3.根据权利要求1所述的一种PCR扩增冻干预存试剂，其特征在于：所述的低温冻干保护剂由以下组分组成：海藻糖4-25g、甘露糖醇1-7g、牛血清白蛋白1-7g、吐温0.1-0.25ml、Tris-HCl 2.5-5.0mmol、水49-50ml。
一种用于荧光PCR扩增试剂的冻干方法及其应用[发明专利]
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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810792650.2(22)申请日 2018.07.18(71)申请人 贝南生物科技（厦门）有限公司地址 361026 福建省厦门市海沧区坪山南里31号3#1105单元之二(72)发明人 童超 陈智林 魏莎莎 高幼冷 (74)专利代理机构 福州元创专利商标代理有限公司 35100代理人 蔡学俊(51)Int.Cl.C12Q 1/686(2018.01)(54)发明名称一种用于荧光PCR扩增试剂的冻干方法及其应用(57)摘要本发明提供用于荧光PCR扩增试剂的冻干方法及其应用，荧光PCR扩增试剂包含荧光PCR扩增缓冲液、引物、探针、热启动Taq酶、UNG酶、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、dUTP及冻干保护剂。
将荧光PCR扩增试剂各组分混合均匀，-35℃预冻3小时后，将冻干机气压降到10Pa以下-35℃真空处理2小时、10℃真空处理2小时、30℃真空处理2小时，即可得到荧光PCR扩增试剂冻干粉末。
本发明将荧光PCR需要用到的所有组分制备在同一冻干粉末中，能够实现常温运输及保存；使用时只需用冻干粉溶解液溶解该冻干粉，然后加入样本即可。
具有使用方便、稳定可靠的特点。
权利要求书1页 说明书7页序列表1页 附图7页CN 108913758 A 2018.11.30C N 108913758A1.一种用于荧光PCR扩增试剂的冻干方法，其特征在于：将荧光PCR扩增液体试剂经过预冻，在真空状态下进行升华，从而制备成冻干粉。
2.根据权利要求1所述的一种用于荧光PCR扩增试剂的冻干方法，其特征在于：所述荧光PCR扩增试剂包含荧光PCR扩增缓冲液、引物、探针、热启动Taq酶、UNG酶、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、dUTP、冻干保护剂。
3.根据权利要求2所述的一种用于荧光PCR扩增试剂的冻干方法，其特征在于：所述的冻干保护剂，包含：5wt.%的甘油、100mg/mL的海藻糖、5mmol/L的DTT、1wt.%牛血清白蛋白、0.3wt.%Proclin 300、1wt.%甲酰胺。
一种冻干保护剂及其制备方法、使用方法[发明专利]
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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201611036699.2(22)申请日 2016.11.22(71)申请人 郑州大学地址 450000 河南省郑州市高新区科学大道100号(72)发明人 鲁吉珂 林松洋 刘鑫 康巧珍 郝利民 鲁来政 (74)专利代理机构 北京高沃律师事务所 11569代理人 王加贵(51)Int.Cl.C12N 1/04(2006.01)C12N 1/20(2006.01)C12R 1/46(2006.01)C12R 1/25(2006.01)C12R 1/245(2006.01)C12R 1/225(2006.01)C12R 1/01(2006.01)(54)发明名称一种冻干保护剂及其制备方法、使用方法(57)摘要本发明提供一种冻干保护剂及其制备方法，使用方法，用于解决现有技术中不同种乳酸菌菌种冻干保护剂的制备问题。
本发明提供的一种冻干保护剂及其制备方法，使用方法，冻干保护剂直接来源于经低温冷冻预处理后的相应乳酸菌细胞，经细胞破碎处理直接获得；原料易得，制备工艺简单，成本花费低，冷冻保护效果好，具有较强的工业化实施性。
权利要求书1页 说明书16页 附图1页CN 106754374 A 2017.05.31C N 106754374A1.一种冷冻保护剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将培养至对数期的菌体进行阶梯降温处理；将菌体进行洗涤离心处理,收集菌体；将菌体破碎；离心收集上清液，并进行冻干处理，获得冷冻保护剂。
2.如权利要求1所述的冷冻保护剂的制备方法，其特征在于，所述的梯度降温处理包括在31℃-0、0--45℃、-45--80℃，每个温度梯度下冷冻处理0.5-5h。
3.如权利要求1所述的冷冻保护剂的制备方法，其特征在于，所述将菌体进行洗涤离心处理,收集菌体包括:将菌体在转速为5000rpm，离心时间为10-20min，温度为0-6℃下进行离心；用缓冲液洗涤，缓冲液为摩尔浓度0.05M的pH为6.63的Tris-HCl溶液，其中,菌体的质量和缓冲液的体积配比为1g：(30-50)ml。
一种RNA扩增反应试剂的冻干保护剂及冻干方法[发明专利]
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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610911305.7(22)申请日 2016.10.19(71)申请人 珠海丽珠试剂股份有限公司地址 519000 广东省珠海市南屏科技工业园屏东三路一号珠海丽珠试剂有限公司(72)发明人 邓京 欧格 (74)专利代理机构 广州三环专利代理有限公司44202代理人 温旭(51)Int.Cl.C12Q 1/68(2006.01)(54)发明名称一种RNA扩增反应试剂的冻干保护剂及冻干方法(57)摘要本发明公开了一种RNA扩增反应试剂的冻干保护剂及冻干方法，属于生物技术领域。
本发明的冻干保护剂包括海藻糖、聚蔗糖和水，所述冻干保护剂是将海藻糖6.4～16.0g、聚蔗糖0.4～1.0g混合并加水至40ml制成的。
本发明还提供了一种RNA扩增反应试剂的冻干方法，包括以下步骤：a、将冻干保护剂与实时荧光RT-PCR反应试剂混合均匀，得到实时荧光RT-PCR反应液；b、将RT-PCR反应液进行冷冻干燥，即得到RT-PCR冻干试剂。
本发明所述的冻干保护剂及冻干方法能使RNA荧光定量PCR反应试剂能在2～8℃甚至室温稳定长时间存放。
权利要求书1页 说明书9页 附图3页CN 106591432 A 2017.04.26C N 106591432A1.一种RNA扩增反应试剂的冻干保护剂，其特征在于：包括海藻糖、聚蔗糖和水。
2.根据权利要求1所述的RNA扩增反应试剂的冻干保护剂，其特征在于：所述冻干保护剂是将海藻糖6.4～16.0g、聚蔗糖0.4～1.0g混合并加水至40ml制成的。
3.根据权利要求2所述的RNA扩增反应试剂的冻干保护剂，其特征在于：所述海藻糖与聚蔗糖的配比为16g：1g，加水至40ml。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的RNA扩增反应试剂的冻干保护剂，其特征在于：所述聚蔗糖为Ficoll400。
一种用于核酸扩增的冻干粉试剂及其制备方法和使用方法[发明专利]
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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010806287.2(22)申请日 2020.08.12(71)申请人 济南国益生物科技有限公司地址 250100 山东省济南市天桥区明湖西路明湖广场3-2006(72)发明人 陈大为 陈龙 李佳慧 王秀艳 孙玉凤 (74)专利代理机构 济南信在专利代理事务所(特殊普通合伙) 37271代理人 黄波(51)Int.Cl.C12Q 1/686(2018.01)(54)发明名称一种用于核酸扩增的冻干粉试剂及其制备方法和使用方法(57)摘要本本申请属于核酸纯化技术领域，具体为一种用于核酸扩增的冻干粉试剂及其制备方法和使用方法，包括下述原料：荧光PCR扩增缓冲液、引物、探针、热启动Taq酶、UNG酶、dNTP9和冻干保护剂。
本申请适用于任何一种荧光PCR扩增试剂的预处理；且本申请减少操作步骤、提高试剂稳定性，保证临床荧光PCR检测结果的可靠性，实现常温保存及运输，减少企业生产成本及客户使用成本。
权利要求书1页 说明书7页 附图10页CN 111893169 A 2020.11.06C N 111893169A1.一种用于核酸扩增的冻干粉试剂，其特征在于，包括下述原料：荧光PCR扩增缓冲液、引物、探针、热启动Taq酶、UNG酶、dNTP9和冻干保护剂。
2.如权利要求1所述的一种用于核酸扩增的冻干粉试剂，其特征在于，包括下述体积份数的原料：4-6份荧光PCR扩增缓冲液、1-3份引物、0.2-1份探针、0.2-1份热启动Taq酶、0.1-0.3份UNG酶、2-10份dNTP9和35-38份冻干保护剂。
3.如权利要求1所述的一种用于核酸扩增的冻干粉试剂，其特征在于，包括下述体积份数的原料：5份荧光PCR扩增缓冲液、2份引物、0.5份探针、0.5份热启动Taq酶、0.2份UNG酶、5份dNTP9和36.8份冻干保护剂；所述印务包括上游引物和下游引物，所述上游引物和下游引物的体积比为1:1。
一种冻干保护剂及其应用和冻干苗及其制备方法[发明专利]
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专利名称：一种冻干保护剂及其应用和冻干苗及其制备方法专利类型：发明专利
发明人：马昭明,任昭源,陈山岭,严秋萍,吴盈盈,李泳宏,陈政钦,杨远超,王明珠
申请号：CN202010487563.3
申请日：20200602
公开号：CN111588859A
公开日：
20200828
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种冻干保护剂及其应用和冻干苗及其制备方法，所述冻干保护剂各成分配制浓度为：蔗糖10%、右旋糖酐0.5～2.0%、谷氨酸钠1%、KCL1%，或者是蔗糖10%、右旋糖酐1%、海藻糖1~5%、谷氨酸钠1%、KCL1%，配制冻干保护剂的溶剂为注射用水，用10%氢氧化钠溶液调节冻干保护剂的pH值为7.3～7.5。
该冻干保护剂不含明胶，在制备冻干治疗用卡介苗时使用，可使内毒素含量下降，不易发生过敏反应，并且仍然能保持较高的稳定性和较长的有效期。
申请人：成都可恩生物科技有限公司
地址：610200 四川省成都市双流区天府国际生物医学工程产业加速器(双流区凤凰路618号)国籍：CN
代理机构：成都天嘉专利事务所(普通合伙)
代理人：向丹
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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910208009.4
(22)申请日 2019.03.19
(71)申请人 融智生物科技（青岛）有限公司
地址 266000 山东省青岛市高新技术产业
开发区松园路17号工业技术研究院D2
楼
(72)发明人 陈娇 刘琦 冯政德 李运涛
周晓光
(74)专利代理机构 北京正理专利代理有限公司
11257
代理人 赵晓丹
(51)Int.Cl.
C12Q 1/6851(2018.01)
(54)发明名称
荧光PCR试剂的冻干保护剂以及冻干芯片的
制备方法
(57)摘要
本发明公开一种荧光PCR试剂的冻干保护剂
以及冻干芯片的制备方法，涉及生物检测技术领
域。
所述冻干保护剂为由以下组分制备得到的溶
液：海藻糖、棉子糖、右旋糖酐、甘油，以及焦磷酸
二乙酯处理过的水。
由该冻干保护剂制备得到的
荧光PCR冻干制剂可长期常温保存，且复溶速度
快。
本发明还提供一种包括上述冻干保护剂的荧
光PCR冻干芯片的制备方法，该方法简单快速，可
在八小时内完成冻干步骤。
权利要求书1页 说明书8页序列表1页 附图3页CN 110093403 A 2019.08.06
C N 110093403
A
权 利 要 求 书1/1页CN 110093403 A
1.一种荧光PCR试剂的冻干保护剂，其特征在于，所述冻干保护剂为由以下组分制备得到的溶液：海藻糖、棉子糖、右旋糖酐、甘油，以及焦磷酸二乙酯处理过的水。
2.根据权利要求1所述的冻干保护剂，其特征在于，所述冻干保护剂中各组分的含量为：海藻糖0.05-0.20g/ml、棉子糖0.05-0.20g/ml、右旋糖酐0.025-0.10g/ml、甘油的体积百分比含量为1％-2％，其余为焦磷酸二乙酯处理过的水。
3.根据权利要求1所述的冻干保护剂，其特征在于，所述冻干保护剂中各组分的含量为：海藻糖0.05g/ml、棉子糖0.12g/ml、右旋糖酐0.10g/ml、甘油的体积百分比含量为1％，其余为焦磷酸二乙酯处理过的水。
4.一种荧光PCR冻干制剂，其特征在于，所述冻干制剂由荧光定量PCR试剂和如权利要求1所述的冻干保护剂混合均匀后冻干制成。
5.根据权利要求4所述的冻干制剂，其特征在于，荧光定量PCR试剂和冻干保护剂的体积比为3:1。
6.根据权利要求4所述的冻干制剂，其特征在于，所述荧光定量PCR试剂包括荧光定量PCR反应缓冲液、引物、探针、dNTPs和DNA聚合酶。
7.一种荧光PCR冻干芯片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
制备冻干保护剂：称取海藻糖、棉子糖、右旋糖酐、甘油、焦磷酸二乙酯处理过的水，置于容器中混合均匀，加热至完全溶解，放入2～8℃冷却；
预混荧光定量PCR试剂：将PCR反应缓冲液、引物、探针、dNTPs和DNA聚合酶混合均匀；
将预混的荧光定量PCR试剂和冻干保护剂混合均匀，制备成冻干试剂；
取5～8μL的冻干试剂点在微流控芯片的试剂冻干腔中，将点好冻干试剂的微流控芯片移入冻干机中冻干；
冻干结束后，从冻干机中取出冻干芯片并真空封装。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，冻干机中的冻干程序为：
预冻阶段：-40℃预冻3h±0.5h；
主干燥阶段：用时5min抽真空到1mbar，用时20～40min将隔板温度升高至-25℃；
解析干燥阶段：真空保持1mbar，用时2h±0.5h将隔板温度升高至30℃；然后抽真空至0.01mbar，保持2h±0.5h。
9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，冻干试剂中，预混的荧光定量PCR试剂和冻干保护剂的体积比为3:1。
10.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述冻干保护剂中各组分的含量为：海藻糖0.05-0.20g/ml、棉子糖0.05-0.20g/ml、右旋糖酐0.025-0.10g/ml、甘油的体积百分比1％-2％，其余为焦磷酸二乙酯处理过的水。
2。