N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)试剂盒使用说明书.
人N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)酶联免疫试剂盒使用说明书
氨基葡萄糖苷酶(NAG)酶联免疫试剂盒【试剂配制】洗液工作液：洗液需提前配制，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制。
取出洗液浓缩液，浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
浓洗涤液按1:20倍进行稀释。
例如用量筒量取285ml去离子水，倒入烧杯或其他洁净容器中，再量取15ml浓洗涤液，均匀加入，搅拌混匀。
【注意事项】1.实验开始前，请提前配置好所有试剂。
试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。
2.用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。
3.如样品浓度过高时，用合适的溶液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。
【操作步骤】1.将各种试剂移至室温（18-25℃）平衡至少30分钟，按前述方法配制试剂，备用。
2.将酶标板取出，设一个空白对照孔、不加任何液体；每个标准点依次各设两孔，每孔加入相应标准品50μl；其余每个检测孔直接加待测标本50μl。
3.每孔加入酶结合物50μl（空白对照孔除外），充分混匀，贴上不干胶封片，置37℃温育1小时。
4.手工洗板，弃去孔内液体。
洗涤液注满各孔，静置10秒甩干，重复三次后拍干；洗板机洗板，选择洗涤三次程序，洗板后拍干。
5.每孔加显色剂A液50μl，显色剂B液50μl，振荡混匀后，37℃避光显色15分钟，每孔加终止液50μl。
6.用酶标仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。
在反应终止后10分钟内进行检测。
【操作要点】1.为保证检测结果的准确性，建议标准品及样品均设双孔测定。
每次检测均需做标准曲线。
2.如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时再乘以相应的稀释倍数。
3.加样时，请使用一次性的洁净吸头，避免交叉污染。
加样时应尽量轻缓，避免起泡，将样品加于酶标板孔底部，切勿沿孔壁加样。
4.为防止样品蒸发，温育过程中酶标板必须覆上板贴，任何时候都应避免酶标板处于干燥的状态。
5.洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性，在每次洗涤过程中，需要将孔内液体完全甩干，并在吸水纸上拍干，切勿将吸水纸直接放入反应孔中吸水，或用枪在孔中吸取液体。
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)测定试剂盒(MPT法)产品技术要求利德曼
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）测定试剂盒（MPT法）适用范围：本产品用于体外定量测定人尿液中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的含量。
1.1 规格试剂1（R1):2×45mL、试剂2（R2): 2×15mL；校准品（选配）：1×2mL；质控品（选配）：1×2mL。
1.2 组成试剂盒由试剂、质控品（选配）和校准品（选配）组成。
试剂1(R1)：柠檬酸缓冲液（PH=4.5），200mmol/L。
试剂2(R2)：6－甲基－2吡啶－N－乙酰－1－硫代－β－D－氨基葡萄糖苷，6mg/dl。
校准品：冻干品，含NAG：（100～200）IU/L、磷酸盐缓冲液：50mM、乳糖：5％、酶稳定剂：1％。
质控品：冻干品，含NAG：（5～25）IU/L、磷酸盐缓冲液：50mM、乳糖：5％、酶稳定剂：1％。
2.1 外观液体双试剂：R1：无色澄清液体；R2：无色或淡黄色液体。
校准品：冻干品，溶解后为无色液体。
质控品：冻干品，溶解后呈黄色匀质液体。
2.2 装量:不得低于标示体积。
2.3 溯源性：根据GB/T 21415及有关规定提供校准品的来源、赋值过程及测量不确定度等内容，该校准品溯源至Inner standard。
＜1.5ABS ( 1cm；340nm；37℃)。
2.4 空白吸光度： A（空白）2.5 灵敏度：浓度为100IU/L时，吸光度变化△A/min＞0.01 ABS。
2.6 线性：测定结果在(0,200]IU/L范围内r≥0.996；测定结果(5,200] IU/L 时相对偏差应≤15%，测定结果(0,5] IU/L时绝对偏差应<0.75 IU/L。
2.7 精密度：用（5～12）IU/L和（15～25）IU/L的样本各重复检测10次，其变异系数CV<5%。
2.8 批间差：取三个批号试剂，分别测定浓度接近正常值上限的样本，每个批号测3次，不同批号之间测定结果的相对极差应<10%。
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)测定试剂盒(MPT底物法)产品技术要求sainuopu
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）测定试剂盒（MPT底物法）适用范围：用于体外定量测定人体尿液中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的活性。
1.1试剂盒包装规格试剂1：1×15ml，试剂2：1×5ml；试剂1：2×54ml，试剂2：2×18ml；试剂1：3×39ml，试剂2：3×13ml；试剂1：4×54ml，试剂2：4×18ml；试剂1：2×300ml，试剂2：1×200ml；试剂1：2×30ml，试剂2：2×10ml。
校准品（选配，冻干品）：1×1ml；1×2ml。
质控品（选配，冻干品）：1×1ml；1×2ml。
1.2试剂盒主要组成成分2.1 外观试剂1：无色澄清液体；试剂2：无色或淡黄色液体。
校准品：冻干品，溶解后为无色至黄色液体。
质控品：冻干品，溶解后为无色至黄色液体。
2.2 净含量液体试剂的净含量不得低于标示体积。
2.3试剂空白2.3.1试剂空白吸光度在37℃、340nm波长、1cm光径条件下，试剂空白吸光度应不大于1.5。
2.3.2试剂空白吸光度变化率在37℃、340 nm波长、1cm光径条件下，试剂空白吸光度变化率（△A/min）应不大于0.05。
2.4 分析灵敏度测定活性为100U/L样本时，吸光度变化率（ΔA/min）应不小于0.01。
2.5 线性范围在（0，200）U/L线性范围内，线性相关系数r应不小于0.996。
在（20，200）U/L范围内的线性相对偏差应不大于±15%；在（0，20] U/L范围内的线性绝对偏差应不大于±3U/L。
2.6 重复性重复测试两份高低浓度的样本，所得结果的变异系数（CV%）应不大于5%。
2.7 批间差不同批号试剂测试同一份样本，测定结果的批间相对极差应不大于10%。
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶测定标准操作程序
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶测定标准操作程序1.摘要N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶检测主要用于肾脏疾病、肝硬化和慢性活动性肝炎的诊断。
2.适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测尿液中NAG的浓度。
3.职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定NAG浓度的工作人员要严格按照本SOP程序进行,室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）试剂盒采用的是速率法。
5.原理26N---O---β−+−→−DN NAG-H-氨基葡萄糖苷乙酰硫代吡啶甲基巯基吡啶氨基葡萄糖-甲基-乙酰62--2--N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)催化底物6-甲基-2-硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(MPT-NAG)水解产生6-甲基-2-巯基吡啶(MPT)和N-乙酰-氨基葡萄糖，MPT在340nm附近有吸收峰，所以，可以通过监测340nm附近的吸光度变化值计算样本中的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力。
6.仪器日立7600自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分：柠檬酸缓冲液、Tris6-甲基-2-硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷、防腐剂7.3试剂稳定性：试剂避光保存于2-8℃，若无污染，可稳定至失效期，本试剂有效期为12个月。
试剂不可冰冻。
7.4试剂准备：试剂为即用式。
8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用上海科华公司提供的K校准因子对自动分析仪进行校准。
按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品响应量通过合适的数学模型绘制校准曲线。
8.2质控品：上海科华公司提供的生化质控血清做为室内质控品。
每日在测定前做一次质控。
该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。
06 NAG
复星长征体外诊断试剂标准操作规程试剂名称：N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶测定试剂盒（MPT 底物法）上海复星长征医学科学有限公司目录1 试剂盒概况2 方法学原理3 试剂主要组分4 样本准备5 试剂准备6 校准要求7 质量控制8 计算方法9 参数设定10 参考范围11 试剂性能概要12 超出可报告范围的处理13 其他必须说明的内容14 参考文献1 试剂盒概况1．1 货号：1.02.5001/1.02.5002/1.02.5003/1.02.5005。
1．2 包装规格：试剂1（R1）：4×45mL 试剂2（R2）：2×30mL。
试剂1（R1）：2×60mL 试剂2（R2）：2×20mL。
1．3 医疗器械注册证编号/产品技术要求编号沪械注准20172400274/沪械注准201724002742 方法学原理试剂采用6-甲基-2硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷（MPT-NAG）为底物。
MPT-NAG在N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷（NAG）的作用下分解生产6-甲基-2-巯基吡啶（MPT）,使波长340nm处的吸光度值的上升速率进行监测，即可测得样本中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷（NAG）的活性。
NAGMPT-NAG+H2O N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷+MPT3 试剂主要组分3．1 试剂1（R1）柠檬酸盐缓冲液200mmol/L3．2 试剂2（R2）6-甲基-2硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷15mmol/L3．3 储存条件3．3 . 1 在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂盒自生产之日起效期12个月。
3．3 . 2 试剂启用后，在2～10℃避光的条件下可稳定20 天。
4 样本准备样本要求：血清或者尿液标本新鲜，应不溶血，避光保存。
5 试剂准备试剂为液体双试剂形式，无须特别准备，可直接上机使用。
6 校准要求6．1 校准品：使用与试剂配套使用的复星长征N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶校准血清对测定进行校。
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)测定试剂盒(MPT法)产品技术要求百奥泰康
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)测定试剂盒（MPT法）适用范围：该产品用于体外定量测定人尿液中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的活性。
1.1 产品规格1.2 组成成分1.2.1 试剂组成试剂1：柠檬酸缓冲液（PH=4.5），200mmol/L试剂2：6－甲基－2吡啶－N－乙酰－1－硫代－β－D－氨基葡萄糖苷，6mg/dL。
1.2.2 校准品的组成冻干品，含NAG（30IU/L）、磷酸盐缓冲液（50mM）、乳糖（50g/L）。
定值范围为：20-50U/L。
1.2.3质控品的组成冻干品，含NAG（10IU/L）、磷酸盐缓冲液（50mM）、乳糖（50g/L）。
定值范围为：5-25U/L。
2.1 外观液体双试剂：试剂1：无色至淡黄色液体；试剂2：无色至淡黄色液体。
校准品：冻干品，溶解后为无色至淡黄色液体。
质控品：冻干品，溶解后呈黄色匀质液体。
2.2 装量不得低于标示体积。
2.3 空白吸光度空白吸光度应≤1.02.4 空白吸光度变化率空白吸光度变化率应≤0.05。
2.5 灵敏度浓度为100IU/L时，吸光度变化（△A/min）应≥0.01 。
2.6 线性：在(0,200.0]IU/L线性范围内，线性相关系数r 应≥0.990；在(0,50]IU/L范围内绝对偏差不超过5IU/L；在(50,200]U/L范围内的相对偏差不超过±10%。
2.7 精密度：变异系数CV应≤5%。
2.8 批间差：不同批号之间测定结果的相对极差应≤10%。
2.9 准确度回收试验：回收率在90%-110%之间。
2.10 质控品赋值有效性测定值在质控靶值范围内。
2.11瓶间重复性（均一性）校准品、质控品瓶间重复性CV≤5%。
2.12校准品溯源性根据GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品控制物质赋值的计量学溯源性》及有关规定提供 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶校准品的来源、赋值过程以及测量不确定度等内容。
医院检验中心N乙酰葡萄糖苷酶操作规程
医院检验中心N-乙酰葡萄糖苷酶(NAG)操作规程（1）试剂配制：1） NAG缓冲液： PH5．0 +β糊精含量10％2）基质干粉(CNP—NAG):5mg十6mlNAG缓冲液(PH6.0，柠檬酸缓冲液)．（2）方法：Beckman分析仪上操作．（3）计算公式：NAG测—NAG空NAG=───────×100(U／g.Cr)Cr×50/88.4注:此尿肌酐为50倍稀释．B12、腺苷脱氨酶(ADA)（1）试剂:宁波新芝（2）操作:BECKMAN CX9生化仪上自动检测，仪器参数按试剂说明书。
（3）计算：ADA＝Au—Aub／As—ab×30（4）参考植：0—25单位（5）临床意义：1.肝硬化，原发性肝癌，ADA均可升高。
2.测定胸水ADA及与血清ADA的比值对诊断结核性胸膜炎有很大的诊断价值，积液中的ADA活性结核的明显高于癌性和心衰性的，比值大于l是诊断结核性的一项可靠指标．3.伤寒病的ADA的活性显著升高，明显高于非伤寒的发热患者，据报道，ADA的敏感性达100%，特异性为92.3%，伤寒的发病初期可高于正常人2-4倍，极期及缓解期持续处于高水平，至病程第4周逐渐降低，所以ADA检测对伤寒病的早期诊断很有价值。
4．血液病血细胞中的ADA活性比血清中的ADA活性大40-70倍，在慢淋及白血病性网状内皮增生病，淋巴细胞中ADA活性明显下降，而急淋和急粒患者，其淋巴细胞中ADA活性比正常高1-10倍，各类恶性肿瘤患者，外周血淋巴细胞ADA活性明显降低。
5．其他一些疾病，如传单、栗粒性结核、风湿热、溶血性贫血、白血病、及部分肿瘤病人，血清ADA呈不同程度升高。
6.结核性脑膜炎ADA活性升高，其他脑膜炎不升高。
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶测定试剂盒(MNP-G1CNAc底物法)产品技术要求九强
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶测定试剂盒（MNP-G1CNAc 底物法）适用范围：用于体外定量测定人尿液中的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的含量。
1.1 包装规格包装规格见表1。
表1 包装规格主要组成成分三试剂：表2 试剂成分双试剂：表3 试剂成分2.1 外观三试剂：试剂1为黄色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；试剂2为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；试剂3为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物。
双试剂：试剂1为黄色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；试剂2为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物。
校准品为白色或淡黄色粉末，复溶后为无色或淡黄色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；质控品为白色或淡黄色粉末，复溶后为无色或淡黄色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物。
试剂盒标签标识清晰，外包装完整无损。
2.2 净含量试剂的净含量应不少于标称量。
2.3 试剂空白2.3.1 试剂空白吸光度A505nm下测定空白吸光度应≤0.5000。
2.3.2 试剂空白吸光度变化率A505nm下测定的空白吸光度变化率（ΔA/min）应≤ 0.1000。
2.4 准确度与已上市产品进行比对试验：在[1.5，200.0]U/L区间内，相关系数r≥0.975，在[1.5，50.0] U/L区间内测定的线性偏差应不超过±5U/L，在（50.0，200.0] U/L区间内测定的线性偏差应不超过±10%。
2.5 分析灵敏度样本浓度为50.0U/L时，其吸光度变化在0.0500～0.4000之间。
2.6 线性范围在[1.5，200.0] U/L区间内，线性相关系数r≥0.99，在[1.5，50.0] U/L区间内测定的线性偏差应不超过±5U/L，在（50.0，200.0] U/L区间内测定的线性偏差应不超过±10%。
2.7 测量精密度2.7.1 重复性对不同浓度的同一尿液样本或质控品重复测定10次，其测定值的变异系数（CV％）应不大于10％。
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N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)试剂盒使用说明书
(酶法·液体双试剂)
用途
本试剂盒用以测定尿液中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)的活力。
原理
在第一反应中用己糖激酶(HK)消去血清中内源性葡萄糖的影响，在第二反应中，NAG作用于基质P-硝基苯酚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(PNP-NAG)，生成N-乙酰氨基葡萄糖，此N-乙酰氨基葡萄糖在N-乙酰氨基葡萄糖氧化酶(NAGOD)的作用下生成H2O2。
此H2O2在过氧化物酶(POD)的作用下与高灵敏的发色剂双〔3-双(4-氯酚)甲基-4-•二甲氨苯基〕胺(BCMA)反应，生成绿色色素。
通过测定此色素可求得NAG的活力。
第一反应：
HK
葡萄糖+ A TP ─────────→葡萄糖-6-磷酸+ ADP
第二反应：
NAG
PNP-NAG + H2O ──────→N-乙酰氨基葡萄糖+ p-硝基苯酚
NAGOD
N-乙酰氨基葡萄糖+ O2 + H2O ───→N-乙酰氨基葡萄糖酸+ H2O2
POD
H2O2 + BCMA + H+────→绿色色素+ 2H2O
试剂
━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━试剂成份含量
──────────────────────────────────R-1A1(冻干) NAGOD ≥3000U/L
POD ≥12500U/L
HK ≥8000U/L
A TP·2Na ≥5mg/ml
R-1A2(冻干) PNP-NAG 10.5mmol/L
R-1B 2-吗啉乙烷磺酸(MES) 30mmol/L
──────────────────────────────────R-2A(冻干) BCMA 0.17mmol/L
R-2B MES 30mmol/L
──────────────────────────────────
标准酶NAG 约为50U/L
标准酶溶解液MES 30mmol/L ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
标本
尿液
试剂配制
R-1：以一瓶R-1B溶解一瓶R-1A2，再以此溶液溶解一瓶R-1A1。
溶解后，低温避光保存(2-8℃)可稳定二周。
R-2：以一瓶R-2B溶解一瓶R-2A。
溶解后，低温避光保存(2-8℃)可稳定二周。
标准酶溶液：吸取5.00ml标准酶溶解液溶解一瓶标准酶。
测定方法
分析方法：速率A；主波长：750nm；副波长：600nm（可不用）；样品量：4.0ul；R-1：240ul，R-2：120ul；校准方式：线性；反应方向：上升；测定温度：37℃。
样品与R-1混匀后反应5分钟，加入R-2混合后延迟157秒，测定125秒。
样品 4.0ul 主波长750nm
R-1 240ul R-2 120ul 副波长600nm
0 5 7 10min
计算
ΔAs/min
NAG(U/L) = ━━━━━━×标准酶标示值
ΔAstd/min
ΔAs/min = 测定管的吸光度变化量
ΔAstd/min = 标准管的吸光度变化量
计算实例
采用日立7020型自动分析仪测得测定管的ΔA/min为0.105，标准管的ΔA/min（标准酶的含量为51.7 U/L）为0.153, 则
0.105
NAG(U/L) = ━━━━━━━×51.7=35.5
0.153
参考范围
尿液：1.1-11.9 U/L
建议各实验室建立自己的正常值参考范围
注意事项
1. 正常浓度的胆红素、抗坏血酸等还原物质对测定无影响。
异常高浓度时会导致负的误差。
2. 高浓度的尿糖会导致正的误差。
尿糖异常高值时请将样品稀释至尿糖≤7g/dl后测定。
3. 备有各种自动分析仪的参数可供参考。
试剂性能
1. 灵敏度：以纯水为样品测定时的吸光度为0.000-0.050；以50 U/L的标准酶溶液为样品测定时，吸光度为0.140-0.160。
2. 线性范围：0-125 U/L。
3. 精密度：n=5，CV< 5％。
4. 准确性：测定定值质量控制物时，测得值在定值±2SD的范围以内。
相关：r=0.999, y=1.231x+0.411 (y：本法，x：CPR-NAG法)。
储存及稳定性
本试剂盒在2-8℃避光保存可稳定一年；试剂R-1、R-2配制后在2-8℃避光保存可稳定二周。
临床意义
NAG是肾小管损伤的标记物，尿NAG活性升高是肾脏损害的较敏感指标。
NAG活性可用于肾小管间质性肾炎、尿路感染、糖尿病肾病综合症、高血压肾病、肾移植后的排异反应和肾病综合症的早期诊断。
上述疾病时NAG活性的升高均早于其他相应指标，有利于疾病的早期发现和及时治疗。
NAG活性还可用于重金属等肾毒性物质环境污染的人群筛查、职业病调查等。
上海申索佑福医学诊断用品有限公司
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传真（Fax）: 021-********
2004年1月
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)试剂盒常用的自动分析仪主要参数。