细胞计数与细胞增
细胞增殖及细胞活力检测方法
细胞增殖及细胞活力检测方法1.细胞计数法细胞计数法是最常用的细胞增殖检测方法之一、该方法通过显微镜观察细胞密度和数量来判断细胞的增殖情况。
首先，将培养皿中的细胞样本取出，使用显微镜观察细胞的形态和数量，然后用显微镜同时观察已知数量的细胞，计算出单位面积或体积中的细胞数量，最后通过比较细胞数量的变化来评估细胞的增殖情况。
2.三(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑盐(MTT)法MTT法是一种常用的细胞活力检测方法。
MTT是一种黄色噻唑盐，可以通过还原作用转化为紫色的甲氧基-4-硝基苯胺（formazan），这个转化过程是仅在活细胞中发生的。
首先，将MTT溶液加入细胞培养皿中，细胞内的活细胞色素（还原酶）可以将MTT转化为紫色的formazan。
然后，用溶剂将formazan溶解，测量溶液的吸光度，就可以通过测量吸光度的变化来评估细胞的活力。
3.荧光素酶体积法（ATP法）ATP法是一种用于检测细胞的能量代谢水平的方法。
ATP是细胞内的能量分子，在细胞进行代谢活动时会不断产生。
将细胞样品加入含有高能底物的反应溶液中，ATP酶将底物中的ATP转化为体积比较大的荧光素酶（luciferin）。
接下来，荧光素酶与荧光素生成一个反应产生的发光，发光强度与ATP浓度成正比。
通过测量发光强度来评估细胞的活力。
4.分子探针染色法分子探针是一种与特定分子结合的荧光标记物质，可以通过显微镜观察细胞中特定分子的分布和浓度。
常用的分子探针有细胞核染色剂（如DAPI），线粒体染色剂（如JC-1），胞质钙染色剂（如Fluo-3）等。
将细胞与特定分子探针共同孵育，根据分子探针的荧光强度和分布情况，可以评估细胞内特定分子的含量和活动水平，从而间接评估细胞的增殖和活力。
5.流式细胞术流式细胞术是一种基于细胞的物理和化学性质，通过细胞悬浮液在液体流动中的传递和分析的技术。
通过染色、抗体标记、荧光探针等方法，可以区分和分析细胞的不同类型和状态。
细胞生物学细胞计数法和MTT法
实验题目：细胞增殖和活力的检测方法一、摘要：细胞增殖是生物体生长和繁殖的基础，当细胞增殖发生异常时往往会导致疾病的发生，比如肿瘤的发生就是细胞增殖失控的结果。
掌握细胞增殖和活力的检测是从事细胞生物学研究的一个重要方面。
针对细胞增殖和活力的检测方法有很多，这些方法除了能用于细胞本身增殖特性的研究、还能应用于药物毒副性检测，生长因子对细胞增殖和活力的影响等。
二、实验原理：〔1〕细胞计数法：最简单直接的方法：传统细胞计数的方法是用血球计数板，原理：将一定量的细胞悬液载入固定体积的玻片夹层中，在显微镜下数出细胞数量，然后换算出原始的细胞悬液浓度。
使用自动化细胞计数器，它通过拍下计数界面照片，利用软件程序设定去识别细胞，实现自动化计数。
好处:这种方法能兼容台盼蓝染色，染上蓝色的细胞视为死细胞，直接观察就能大致判断细胞的活力状态，计数后能定量分析细胞存活率。
缺点:①它的灵敏度低②线性范围太窄，细胞浓度低于 10 万个/ml 则计数不准确。
〔2〕 MTT 法MTT 称为噻唑蓝，是一种黄颜色染料。
定义：MTT 比色法是一种通过检测细胞代谢活性间接反映细胞增殖的方法。
原理：活细胞线粒体里的酶能够将外源性 MTT 还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中，活细胞数量越多，形成的有色沉淀越多，通过测定颜色的深浅也就是吸光值来反映细胞代谢活性的强弱，而细胞代谢活性与细胞数量呈正比，从而反映细胞数量的多少。
缺点： MTT被还原形成的有色沉淀需要溶解后才能比色，检测用时较长，检测结果会受到沉淀溶解效果的影响。
三、实验材料和用品：细胞计数法：待测细胞悬液、细胞计数板、盖玻片、普通光学显微镜、微量移液器及枪头、酒精棉球、吸水纸、台盼蓝染液MTT法：贴壁细胞（A549 肺癌细胞株）酶标仪、酶标板振荡器、超净工作台，倒置显微镜，CO2培养箱、96 孔培养板，EP 管及管架，微量移液器及枪头、5mg/ml MTT 溶液，DMSO 溶液，1640 完全培养液四、实验操作（细胞计数法）：实验过程分为四个环节：（首先）清洁细胞计数板及盖玻片—（然后）镜检计数室—（接着）细胞加样—（最后）细胞计数具体操作细节如下：1、清洁细胞计数板及盖玻片：用 75%酒精棉球仔细擦拭细胞计数板的计数室区域，接着擦拭盖玻片，放置吸水纸上自然晾干；2、镜检计数室：1）细胞计数板和盖玻片干燥后，将盖玻片覆盖到细胞计数板的计数室部位；2）在显微镜下观察擦拭效果，确定计数室区域已擦拭干净、能清晰看到计数室的大方格及中方格3）直接平行移出计数板，平放在实验台上；3、待测细胞加样：1）将待测细胞悬液混匀后，吸取 10ul 细胞悬液加入 EP 管，然后再吸取10ul台盼蓝染液加入 EP，混匀，染色静置 2 分钟。
细胞名词解释
细胞名词解释1.愈伤组织：原意是指植物体的局部受创伤刺激后，在其伤⼝表⾯新⽣的⼀团薄壁细胞。
在组织培养中是指在⼈⼯培养基上由已经分化的外植体的细胞重新分裂⽣长⽽形成的⼀团⽆特定形状、⽆序⽣长的薄壁细胞。
在⼀定条件下离体状态的植物组织中已经分化并停⽌⽣长的细胞重新分裂⽣长所形成的⽆组织结构的细胞团。
2.外植体：指植物组织培养中作为培养材料的离体组织块离体器官或离体细胞。
3.胚状体：由外植体或愈伤组织产⽣的与正常受精卵发育成的胚相类似的胚胎状结构。
据来源分为体细胞胚与⽣殖细胞胚。
4.极性：⾼等植物均具⼀主轴，各器官沿此主轴有顺序的进⾏⽣长分化。
主轴的⾸尾两端在⽣理形态上都有着明显差异，通常⾸段⽣芽尾端长根（形态学上端下端）这种现象叫极性。
5.植株再⽣：指通过组织培养技术将植物的细胞、组织、器官等培养成完整植株的过程。
6.形态发⽣（形态建成）：指⽣物个体发育或再⽣过程中⽣物体及其器官的形态结构的形成过程。
7.试管苗：指在⽆菌离体条件下的⼈⼯培养基上对植物细胞、组织或器官进⾏培养所获得的再⽣植株。
8.玻璃苗：指外表呈玻璃状，幼茎、叶⽚呈现半透明⽔渍状态的畸形试管植物。
9.体细胞⽆性系：指由同⼀个外植体反复进⾏继代培养后得到的⼀系列后代。
在细胞培养中，由单细胞形成的后代叫但细胞⽆性系。
10.培养基：⽤于满⾜植物正常发育所需各种营养物质的总和。
11.初代培养：指从植物体上分离外植体进⾏的第⼀次培养。
12.继代培养：将初代培养的培养物（愈伤组织、芽等）重新切割转移到新的培养基上继续扩⼤培养的过程。
13.固体培养：指加⼊琼脂等固化剂使培养基呈固体状态所进⾏的培养。
14.液体培养：指不加Agar等固化剂使培养基呈液体状态所进⾏的培养。
U11、细胞⼯程：按照⼀定的设计⽅案，通过在细胞、亚细胞或组织⽔平上进⾏实验操作，获得重构的细胞、组织、器官以及个体，创造优良品种和产品的综合性⽣物⼯程。
2、摇床：常⽤来进⾏细胞悬浮培养，可根据震荡⽅式分为⽔平往复式和回旋式两种，震荡速度因培养材料和培养⽬的的不同⽽不同，常⽤的震荡速度为100r/min.3、培养瓶：⼀般的植物组织和细胞培养常⽤玻璃三⾓瓶、试管、各种⼤⼩的⼴⼝玻璃瓶时，有时甚⾄⽜奶瓶和罐头瓶也都可以利⽤，特别是在进⾏快速繁殖时更常⽤造价较低的培养器⽫。
细胞计数实验报告讨论
细胞计数实验报告讨论1. 引言细胞计数是细胞生物学和医学领域中非常重要的实验方法，用于评估细胞的数量和生存状态。
细胞计数的准确性很大程度上决定了后续实验结果的可靠性。
在本实验中，我们使用了经典的容积计数法和显微镜计数法进行细胞计数，比较了两种方法的优缺点，并讨论了结果的可靠性与误差来源。
2. 实验方法我们首先收集了细胞培养物，并将其转移到计数室板中进行操作。
对于容积计数法，我们使用了血细胞计数板，将细胞悬浮液染色后在计数板上进行视觉计数。
对于显微镜计数法，我们使用了显微镜和计数室板，在显微镜下直接对细胞进行计数。
3. 实验结果我们对同一细胞悬浮液使用了容积计数法和显微镜计数法进行计数，并记录了两种方法的计数结果。
容积计数法得到的结果为每个视野中细胞的平均数目，例如第一次计数的结果为40个细胞，第二次为45个细胞，第三次为42个细胞，那么容积计数法得到的结果为42个细胞。
显微镜计数法则是在显微镜下直接计数细胞的数量，例如计数得到的结果为每个视野中细胞的数目为35个，那么显微镜计数法得到的结果为35个细胞。
4. 讨论与分析4.1 容积计数法的优缺点容积计数法的优点是操作简单、快速，并且不需要高级的仪器设备。
而且通过多次计数可以增加结果的准确性。
然而，容积计数法的缺点也是显而易见的。
首先，容积计数法只能提供细胞数目的平均值，并不能提供每个视野中细胞数量的详细信息。
其次，容积计数法对于聚集的细胞较为困难，因为聚集的细胞会导致计数不准确。
最后，如果细胞浓度过高，容积计数法会出现低估的情况。
4.2 显微镜计数法的优缺点显微镜计数法的优点是可以提供每个视野中细胞数量的详细信息，并且可以观察到细胞的形态特征。
显微镜计数法也可以应对聚集的细胞，因为我们可以通过调整显微镜的聚焦来分辨聚集细胞的数目。
然而，显微镜计数法也存在一些缺点。
首先，显微镜计数法需要较长时间来进行操作，所以在大规模计数时效率较低。
其次，显微镜计数法受到视野选择的影响，如果选择的视野中细胞数量较少或较多，可能会导致结果的误差。
微生物计数方法
微生物计数方法微生物计数是许多领域中重要的分析方法，包括环境科学、食品科学、医学和生物技术。
正确的计数方法能够准确地估计样品中微生物的数量，对于研究和工业应用都是至关重要的。
下面将介绍几种常用的微生物计数方法。
血细胞计数器法是一种使用显微镜进行微生物计数的经典方法。
该方法使用血细胞计数器对微生物样品进行计数，每个格子中的微生物数量被计算出来，然后进行统计分析。
此方法的优点是准确性高，但是耗时长，操作繁琐，需要熟练的操作人员。
流式细胞术是一种使用流式细胞仪进行微生物计数的现代方法。
该方法将微生物样品通过流式细胞仪进行计数和分析，能够快速准确地测定样品中的微生物数量和种类。
此方法的优点是速度快、精度高、可自动化操作，但是设备成本高，维护成本也较高。
自动细胞计数器法是一种使用自动细胞计数仪进行微生物计数的现代方法。
该方法使用自动细胞计数仪对微生物样品进行计数，能够快速准确地测定样品中的微生物数量和种类。
此方法的优点是速度快、精度高、可自动化操作，而且设备相对较为经济实惠，易于推广应用。
平板计数法是一种常用的细菌计数方法。
该方法将微生物样品涂布在平板上，培养后计算菌落数量，从而得出样品中的细菌数量。
此方法的优点是简单易行、成本低，但是结果受培养条件和操作者技能水平的影响，准确性相对较低。
不同的微生物计数方法具有不同的优缺点，应根据具体的研究目标和实际情况选择合适的方法。
为了提高计数的准确性，需要注意样品的采集、保存、制备和处理等方面的问题，确保样品的质量和代表性。
微生物的分离与计数是微生物学中重要的实验技术之一。
通过分离和计数，我们可以获得微生物群体的相关信息，如种类、数量、生长状况等，对于微生物学研究、应用以及工业生产等领域都具有重要的意义。
选择合适的培养基：根据目标微生物的种类和生长需求，选择适合的培养基。
培养基应具有营养丰富、透明度高、易于观察等特点。
制备样品：从目标环境中采集样品，如土壤、水、食品等，并进行预处理，以去除不需要的杂质和大型生物。
细胞计数仪的使用方法与结果解读
细胞计数仪的使用方法与结果解读细胞计数仪是一种用于准确计数和分析细胞数量的实验室工具。
它广泛应用于生物医学研究和临床实践中，能够对各种类型的细胞进行快速、方便和准确的计数。
本文将介绍细胞计数仪的使用方法，并提供一些关于细胞计数结果的解读。
一、细胞计数仪的使用方法细胞计数仪的使用方法通常分为以下几个步骤：1. 准备样本：将待检测的细胞样本制备成适当的悬浮液，确保悬浮液均匀且细胞密度适中，避免过高或过低的细胞浓度对计数结果产生影响。
2. 校准仪器：仪器通常需要进行校准，以确保结果的准确性。
校准步骤通常包括零点校准和参考样本校准。
零点校准是将样本室中的计数槽清空，使细胞计数仪认定该位置为零细胞计数；参考样本校准是使用已知细胞数目的样本进行校准，确保仪器对细胞的计数准确。
3. 收集数据：将制备好的样本注入细胞计数仪中，按照仪器操作说明进行测量。
一般情况下，细胞计数仪会自动吸取适量的样本并进行计数。
4. 记录结果：细胞计数仪会显示细胞计数和浓度等结果。
将结果记录下来，以备后续分析和解读使用。
二、结果解读细胞计数仪的结果解读包括两个方面：细胞计数和浓度。
下面分别进行解读：1. 细胞计数：细胞计数指的是在给定体积的样本中计算出的细胞数。
细胞计数结果可以用于评估细胞生长情况、细胞浓度和细胞活性等。
通常情况下，细胞计数较高可能表示细胞增殖活跃，而较低的计数值可能与细胞凋亡或生长停滞有关。
2. 细胞浓度：细胞浓度是指在单位体积中存在的细胞数量。
它是通过将总细胞数除以样本的体积来计算得出的。
细胞浓度的高低可以反映细胞的密度和稀释程度。
高浓度的细胞样本可能需要进一步稀释，以便进行后续实验或操作。
而低浓度的细胞样本则可能需要进行浓缩或寻找其他方法增加样本的细胞数量。
细胞计数仪的使用方法和结果解读需要根据具体实验目的和细胞类型进行调整和优化。
此外，操作时应注意消毒和清洁的问题，以避免细菌和其他污染物对实验造成干扰。
总结起来，细胞计数仪是一种非常有用的实验工具，它能够快速、准确地计数和分析细胞数量。
细胞增殖及细胞活力检测方法1
细胞增殖及细胞活力检测方法1细胞增殖及细胞活力检测方法1细胞增殖是指细胞数量的增加，是生物体生长和发育的基础过程。
细胞活力是指细胞代谢水平和功能状态的综合体现。
细胞增殖和细胞活力的检测方法在细胞生物学和生物医学研究中非常重要。
本文将介绍一些常用的细胞增殖和细胞活力检测方法。
一、细胞增殖检测方法1.平板计数法：平板计数法是一种直接计数方法，通过显微镜观察计数细胞数量。
首先，将细胞悬液均匀地涂布在显微镜滑片上。
然后，使用显微镜对细胞进行计数。
这种方法简单直接，但在大量细胞计数时比较耗时。
2.显微镜观察法：显微镜观察法是另一种直接计数方法。
通过显微镜观察细胞在培养皿中的覆盖度，以评估细胞增殖。
这种方法可以快速获得细胞增殖信息，但由于操作主观性较强，结果可能存在一定的误差。
3. MTT法：MTT法是一种间接计数方法，通过测定细胞代谢能力来估计细胞增殖。
首先，将MTT试剂加入细胞培养皿中，MTT会被活细胞还原成紫色的甲基化四氮唑盐（formazan）。
然后，通过比色法测定培养基中的甲基化四氮唑盐含量，从而间接反映细胞的增殖情况。
MTT法具有操作简便、结果可重复性好的优点。
4.WST-1法：WST-1法也是一种间接计数方法，通过测定细胞膜透过性来估计细胞增殖。
首先，将WST-1试剂加入细胞培养皿中，WST-1会被细胞色素P450酶一氧化还原成形成可溶性产物。
然后，通过光密度测定产生的产物浓度，从而间接反映细胞的增殖情况。
WST-1法灵敏度高，操作简单。
二、细胞活力检测方法1.ATP酶联反应法：ATP酶联反应法是一种直接测定细胞活力的方法。
ATP是细胞内的能量分子，可以反映细胞代谢水平。
通过酶联反应，将ATP转化为发光物质，然后使用发光仪测定发光强度，间接反映细胞活力。
这种方法灵敏度高，但样品处理复杂。
2.细胞膜透过性检测法：细胞膜透过性检测法是一种间接测定细胞活力的方法。
细胞在不同状态下，细胞膜透过性会发生变化。
细胞计数原理
细胞计数原理
细胞计数是生物学和医学领域中常用的实验技术之一，用于确定给定样本中细胞的数量。
细胞计数原理基于显微镜下观察细胞形态、结构和数量的方法。
以下是细胞计数的原理及其步骤。
1. 样本制备：首先，从待测样本中取得一定数量的细胞。
样本可以是细胞培养物、血液样本、组织样本等。
确保样本取得的方式不会破坏细胞的完整性。
2. 稀释样本：根据细胞的浓度，将样本适当稀释。
这样有助于将细胞分散开来，使其更容易被计数和观察。
3. 准备计数室：可以使用计数室或者用带有方格的显微镜载片。
计数室有预定的区域，用来放置需要计数的细胞。
4. 抹片制作：在计数室或者显微镜载片上制作细胞抹片。
将少量稀释的细胞放在载玻片上，然后用另一块载玻片将其涂抹开来，形成一个薄层的细胞悬液。
5. 显微镜观察：在显微镜下使用适当的放大倍率观察制作好的细胞抹片。
细胞通常可见为圆形或不规则形状。
6. 细胞计数：通过目视细胞数量和位置进行计数。
通常是在计数室或方格中选择一个特定的区域计数，然后根据所选择的区域的大小和形状进行计算。
7. 计算细胞浓度：使用计数的结果可以计算出细胞的浓度。
假
设样本已经稀释了，可以将计数的细胞数乘以稀释倍数来计算初始样本中的细胞数量。
细胞计数是许多实验和研究中必不可少的步骤。
通过了解细胞计数的原理和步骤，可以对细胞样本的数量和浓度进行准确的评估。
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荧光染料Hoechst33258染色法检测支原体 荧光染料Hoechst33258染色法检测支原体
荧光染色法(33258)显示染色体，细胞周围亮点为支原体
Giemsa染色法，附于胞质上黑点为支原体
扫描电镜法显示支原体，附于细胞表面众多的圆 形颗粒为支原体
支原体的清除
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支原体清除剂MRA （Mycoplasma Removal Agent）处理法 支原体清除剂 ） 天换一次液， 每4天换一次液，连续处理 天 天换一次液 连续处理15天 清洗纯化法 细胞营养驯化→优质细胞群的筛选 细胞清洗→反复离心洗涤 优质细胞群的筛选→细胞清洗 细胞营养驯化→优质细胞群的筛选→细胞清洗→反复离心洗涤 原理：由于支原体个体小且除发酵支原体外多为细胞外寄生， 原理：由于支原体个体小且除发酵支原体外多为细胞外寄生，所以通 过反复洗涤细胞和低速离心换液使其中潜在的支原体数量降低至极限. 过反复洗涤细胞和低速离心换液使其中潜在的支原体数量降低至极限 如结合敏感抗生素的抑杀作用，可达到更好的效果。 如结合敏感抗生素的抑杀作用，可达到更好的效果。 药物辅助高温处理法 先用药物处理后，再将污染的组织培养物放在41℃培养18小时 小时， 先用药物处理后，再将污染的组织培养物放在 ℃培养 小时，可杀 死支原体，但对细胞有不良影响。 死支原体，但对细胞有不良影响。 支原体特异性血清法 的兔支原体免疫血清可去除支原体污染， 用5%的兔支原体免疫血清可去除支原体污染，因特异抗体可抑制支原 的兔支原体免疫血清可去除支原体污染 体生长，故经抗血清处理后11天即转为阴性 并且5个月后仍为阴性 天即转为阴性， 个月后仍为阴性。 体生长，故经抗血清处理后 天即转为阴性，并且 个月后仍为阴性。
生长特点 排列成放射状， 排列成放射状，漩涡状 放射状 并不紧靠连成片， 并不紧靠连成片， 细胞—细胞接触易断开而 细胞 细胞接触易断开而 单独行动 游离的单独的成纤维样细胞， 游离的单独的成纤维样细胞， 单独的成纤维样细胞 常有几个伸长的细胞突起 常有几个伸长的细胞突起
培养细胞形态不稳定 血清 Hela pH Hela 高血清 低血清
分类 根据形态大致的不同，主要 类 根据形态大致的不同，主要2类： 上皮样 成纤维细胞样 其它， 其它，不定型
上皮样细胞型
名称：仅形态上似体内，实际上不完全等于 名称：仅形态上似体内，实际上不完全等于-来源：来源于外胚层，内胚层细胞 来源：来源于外胚层， 如：皮肤及其衍生物 消化道，乳腺， 消化道，乳腺，肺泡 上皮性肿瘤 形态：类似体内的上皮细胞 形态：类似体内的上皮细胞 体内的 扁平，不规则多角形， 扁平，不规则多角形，中有圆形核
优点 生存空间大， 生存空间大，提供数量大 传代方便(不需消化 传代方便 不需消化) 不需消化 易于收获 可获得稳定状态 缺点 观察不方便 很多细胞不能悬浮生长(尤以正常细胞 很多细胞不能悬浮生长 尤以正常细胞) 尤以正常细胞
贴壁细胞在生长状态良好时，细胞内颗粒少，看不到有空泡， 细胞边缘清楚，培养基内看不到悬浮的细胞和碎片，培养液 清澈透明，而当细胞内颗粒较多，透明差，空泡多时，表明 生长较差。当瓶内培养基混浊时，应想到细菌真菌污染的可 能。悬浮细胞当边缘清楚，透明发亮时，生长较好；反之， 则较差或已死亡。由于培养基内有 pH 指示剂的存在，因此 它的颜色往往可以间接地表明细胞的生长状态。呈橙黄色时， 细胞一般生长状态较好；呈淡黄色时，则可能是培养时问过 长，营养不足，死亡细胞过多；如呈紫红色，则可能是细胞 生长状态不好，或已死亡。
2．细胞活力 ． ①将细胞悬液以0.5ml加入试管中。 ②加入0.5ml 0.4%台盼兰染液，染色2一3分钟。 ③吸取少许悬液涂于载玻片上，加上盖片。 ④镜下取几个任意视野分别计死细胞和活细胞数， 计细胞活力。 死细胞能被台盼兰染上色，镜下可见深兰色的细胞， 活细胞不被染色，镜下呈无色透明状。另外，活力 测定可以和细胞计数合起来进行，但要考虑到染液 对原细胞悬液的加倍稀释作用。
Hemocytometer Cell Counts
Hemocytometer
The most common routine method for cell counting which is efficient and accurate is with the use of a hemocytometer.
支原体污染
95％以上是以下四种支原体： 95％以上是以下四种支原体：
•口腔支原体（M.orale） 口腔支原体（ orale） 口腔支原体 •精氨酸支原体（M.arginini） 精氨酸支原体（ arginini） 精氨酸支原体 •猪鼻支原体（M.hyorhinis） 猪鼻支原体（ hyorhinis） 猪鼻支原体 •牛莱氏无胆甾原体（idlawii） 牛莱氏无胆甾原体（ laidlawii） 牛莱氏无胆甾原体
!
真菌污染
真菌污染后，细胞生长变慢，但最后由于营养耗尽及毒性作 用而使细胞脱落死亡。
细菌和真菌的清除
使用抗生素
抗生素对杀灭细菌较有效。（当在无血清培养基中添 加抗生素时，降低至少在有血清培养基中所使用浓度 的50%。血清蛋白会结合和灭活一些抗生素。在无血 清培养条件下，抗生素不被灭活，可能对于细胞达到 毒性水平）。 联合用药比单独用药效果好。 预防用药比污染后再用药效果好，一般用双抗生素。 污染后清除用药需采用大于常用量5～10倍药物冲洗 法，于加药后作用24～48小时再换常规培养液。此 法在污染早期有效。
成纤维细胞样
太酸或太碱
上皮样细胞
标准pH 标准
成纤维细胞样
细胞密度 3T3 生长状态改变 悬浮或贴附 转化与否 低密度
上皮样细胞
高密度
成纤维细胞样
悬浮
上皮样细胞
贴附
圆形
未转化
成纤维或上皮样
转化后
成纤维样
可成上皮样
悬浮生长型
概念 培养时不贴附于底物而呈悬浮状态生长 培养时不贴附于底物而呈悬浮状态生长 或以机械方法使保持悬浮状态下生长 来源自血，脾或骨髓， 来源自 脾或骨髓， 特点 在悬浮中生长良好 细胞圆形， 细胞圆形，单个或小细胞团 圆形 尤以血中白细胞 癌肿细胞也可能
细胞污染
细菌污染 真菌污染 细菌和真菌的清除 支原体污染 支原体的清除
细菌污染
细胞培养常见的污染 最常见的有革兰氏阳性菌，如枯草杆菌以及大肠杆菌、假单胞菌等革兰 氏阴性菌，其中又以白色葡萄球菌较常见。 培养细胞受细菌污染后，会出现培养液变混浊，pH改变。 污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡。
⑦染色标本在计数细胞时必须在15分钟内检查计数完毕。因为台盼蓝染液可 以将死细胞迅速地染上蓝色，再延长时间则活细胞也将逐渐着色。
细胞增殖实验（ 细胞增殖实验（MTT法） 法
(一)原理 MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide, MTT（噻唑蓝）为 基础。MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作 用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素 C的作用下tetrazolium环开裂，生成蓝色的formazan结晶， formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比（死细胞中琥 珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原）。还原生成的formazan 结晶可以用DMSO来溶解，利用酶标仪测定570 nm处的光 密度OD值，以反映出活细胞数目。
支原体污染检测
荧光染色法 电镜检查：扫描电镜、透射电镜 电镜检查：扫描电镜、 支原体培养 聚合酶链反应(PCR)法 法 聚合酶链反应
支原体污染表现
细胞营养液常常仍清亮但变黄,细胞生长变缓， 细胞营养液常常仍清亮但变黄 细胞生长变缓，部分细胞发 细胞生长变缓 生脱落等等，细胞间隙可见铺满细沙样小点。 生脱落等等，细胞间隙可见铺满细沙样小点。
1 mm 0.1 mm 1 mm Volume : 0.1mm3 1 ml = 1 cm3 = 1000 mm3
Dead cell
细胞计数及活力
细胞计数时的注意事项 ①消化单层细胞时，务求细胞分散良好，制成单个细胞悬液。否则 会影响细胞计数结果。 ②取样计数前，应充分混匀细胞悬液。在连续取样计数时尤应注意 这一点。否则，前后计数结果会有很大误差。 ③镜下计数时，遇见2个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计数。 如细胞团占10%以上，说明消化不充分。 ④细胞数少于200个/10mm2或多于500个/10mm2时，说明稀释不当， 200 /10mm2 500 /10mm2 需重新制备细胞悬液。 ⑤在计数板上盖玻片的一侧加微量细胞悬液时，加液量不要溢出盖 片，也不要过少或带气泡。 ⑥在计数过程中，对大方格的边缘压线细胞应按数上不数下，数左 不数右的原则进行计数。
培养时：这些细胞被放到体外环境中以后, 培养时：这些细胞被放到体外环境中以后,同样需要粘附于某 一固相表面才能生存和生长， 一固相表面才能生存和生长，因而 属于粘附型细胞。 属于粘附型细胞。 粘附(锚定或锚着)依赖型( 粘附(锚定或锚着)依赖型(性)细胞：唯有粘附于固相表面才能 细胞： 生存的细胞
类型 细胞在体内、外的粘附方式：存在差异 细胞在体内、 粘附方式： 方式 体内：粘附是 体内：粘附是全方位 外形具有复杂的立体特征 外形具有复杂的立体特征 具有 体外：多数情况，细胞只有一个附着平面 体外：多数情况，细胞只有一个附着平面 外形一般 一般与体内时明显不同 外形一般与体内时明显不同 按照培养细胞的主要形态，可分为几大类型 按照培养细胞的主要形态，可分为几大类型
贴壁(粘附) 贴壁(粘附)型细胞
粘附:是大多数有机体细胞在体内 粘附:是大多数有机体细胞在体内 细胞 生存和生长发育的 生存和生长发育的基本存在方式 基于粘附特性，使细胞与细胞之间相互结合形成组织， 基于粘附特性，使细胞与细胞之间相互结合形成组织， 有机体的绝大多数细胞必须 粘附于一固相表面 粘附于一固相表面 于一 才能生存和生长。 才能生存和生长。 生存