细胞计数板的使用方法

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细胞计数方法------细胞计数板法..

细胞计数方法------细胞计数板法..

实验原理:当待测细胞悬液中细胞均匀分布时,通过测定一定体积悬液中的细胞的数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。

具体操作:1.将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板。

2.将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间,静置3min ,注意盖片下不要有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中。

3.计算板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧和上方的。

然后按公式计算:细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104个/ml(注:当细胞很多时,可在四个格中选一定数目较平均的小格,由于每大格中有16 个小格,然后计左侧和上方的细胞数,求出每小格的细胞数,取平均值m,m × 16即每个格的平均值。

所以,细胞密度=m×16×104个/ml)说明:公式中除以4,因为计数了4个大格的细胞数。

公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为:33 1.0mm(长)× 1.0mm(宽)× 0.1mm(高)=0.1mm 3而1ml=1000ul=1000mm 3注意:镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团10%以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液。

)细胞计数板的使用一、血球计数板 -基本构造血球计数板是一块特制的厚型载玻片,载玻片上有四个槽构成三个平台。

中间的平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各刻有一小方格网,每个方格网共分九个大格,中央的一大格作为计数用,称为计数区。

计数区的刻度有两种:一种是计数区分为16 个大方格(大方格用三线隔开),而每个大方格又分成25 个小方格;另一种是一个计数区分成25 个大方格(大方格之间用双线分开),而每个大方格又分成16 个小方格。

但是不管计数区是哪一种构造,它们都有一个共同特点,即计数区都由400 个小方格组成。

计数区边长为1mm ,则计数区的面积为1mm 2,每个小方格的面积为1/400mm 2。

细胞计数板使用方法

细胞计数板使用方法

细胞计数板使用方法细胞计数板是一种用于精确计数细胞数量的实验工具,广泛应用于生物学、医学等领域的细胞学研究中。

正确的使用细胞计数板对于获取准确的实验数据至关重要。

下面将介绍细胞计数板的使用方法,希望能帮助大家更好地进行实验操作。

首先,准备工作。

在使用细胞计数板之前,需要将细胞悬液充分均匀搅拌,确保细胞分布均匀。

同时,还需要将细胞计数板和载玻片用75%酒精或其他消毒液清洗干净,以确保实验的无菌条件。

接着,将细胞悬液吸入细胞计数板。

首先,使用移液器吸取适量的细胞悬液,然后将其滴入细胞计数板的计数室中。

注意,要保持滴入的速度均匀稳定,避免产生气泡和溢出。

然后,观察和计数细胞。

将载玻片放置在细胞计数板上,通过显微镜在计数室中观察细胞的分布情况。

通常情况下,我们会选择某一小方格进行细胞计数,然后根据计数结果推算整个计数室中细胞的数量。

最后,计算细胞浓度。

根据所选小方格的面积和深度,以及计数的细胞数量,可以通过简单的公式计算出细胞的浓度。

通常情况下,细胞计数板上会标注出每个小方格的面积和深度,方便我们进行计算。

在使用细胞计数板的过程中,需要注意以下几点,首先,操作要轻柔,避免碰撞和摔落,以免损坏细胞计数板;其次,使用完毕后要及时清洗干净并晾干,避免细菌滋生和污染;最后,在观察细胞时要仔细认真,确保计数的准确性。

细胞计数板的正确使用方法可以帮助我们获取准确的实验数据,为科研工作提供可靠的支持。

希望以上介绍能够帮助大家更好地掌握细胞计数板的使用技巧,提高实验效率,取得更加可靠的实验结果。

祝实验顺利!。

细胞计数方法------细胞计数板法

细胞计数方法------细胞计数板法

细胞计数方法------细胞计数板法实验原理:当待测细胞悬液中细胞均匀分布时,通过测定一定体积悬液中的细胞的数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。

具体操作:1. 将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板。

2. 将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间,静置3min,注意盖片下不要有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中。

3. 计算板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧和上方的。

然后按公式计算:细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104个/ml(注:当细胞很多时,可在四个格中选一定数目较平均的小格,由于每大格中有16个小格,然后计左侧和上方的细胞数,求出每小格的细胞数,取平均值m,m×16即每个格的平均值。

所以,细胞密度=m×16×104个/ml)说明:公式中除以4,因为计数了4个大格的细胞数。

公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为:1.0mm(长)×1.0mm(宽)×0.1mm(高)=0.1mm3而1ml=1000ul=1000mm3(注意:镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团10%以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液。

)================================================细胞计数板的使用一、血球计数板-基本构造血球计数板是一块特制的厚型载玻片,载玻片上有四个槽构成三个平台。

中间的平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各刻有一小方格网,每个方格网共分九个大格,中央的一大格作为计数用,称为计数区。

计数区的刻度有两种:一种是计数区分为16个大方格(大方格用三线隔开),而每个大方格又分成25个小方格;另一种是一个计数区分成25个大方格(大方格之间用双线分开),而每个大方格又分成16个小方格。

但是不管计数区是哪一种构造,它们都有一个共同特点,即计数区都由400个小方格组成。

细胞计数板的使用方法

细胞计数板的使用方法

细胞计数板的使用方法细胞计数板是一种用于计算液体中细胞数量的实验仪器,广泛应用于生物学、医学、生化学等领域。

1. 准备工作:首先,确保细胞计数板和显微镜等设备是干净的。

使用无纺布或纸巾轻轻擦拭细胞计数板和显微镜镜片表面,确保没有灰尘或污垢。

2. 取样:将需要计数的细胞悬液充分摇匀,并使用一根吸管或移液器将约10 μl的悬液吸起。

3. 加样:将吸取的悬液滴在细胞计数板的一个计数室(通常是一个小的方形区域)中。

确保滴入的悬液不会溢出计数室,以避免误差。

4. 显微镜观察:使用显微镜将计数室的细胞放大到适当倍数。

通常,使用40倍或100倍镜放大细胞会更容易进行计数。

调节显微镜的对焦和光照使细胞清晰可见。

5. 细胞计数:用显微镜通过目视或帮助计数的软件来计数计数室内的细胞。

一般来说,通过从左上角开始顺时针或逆时针移动显微镜视野,并计算每个小方格内的细胞数量。

6. 计数室细胞数量的计算:根据计数室的大小和计数室中细胞的总数,以及所使用的倍数,计算出每个计数室内的平均细胞数量。

通常,计数室内每个小方格的面积和厚度在细胞计数板上都有标记。

7. 样本体积与细胞密度的计算:利用计数室内的平均细胞数量,结合计数室的体积,可以计算出样本中的细胞密度。

根据需要,这可以使用以下公式计算:细胞密度(cells/ml)= 细胞数÷(计数室体积×加样体积)8. 数据记录与分析:将结果记录下来,并根据需要进行数据的分析和进一步处理。

需要注意的是,在使用细胞计数板时要小心操作,避免细胞污染和误差的发生。

同时,细胞计数板的使用方法可能会因具体型号或厂家的要求而有所不同,建议参考厂家提供的使用说明书。

细胞计数板的使用方法

细胞计数板的使用方法

血球计数板‎-基本构造血球计数板‎是一块特制‎的厚型载玻‎片,载玻片上有‎四个槽构成‎三个平台。

中间的平台‎较宽,其中间又被‎一短横槽分‎隔成两半,每个半边上‎面各刻有一‎小方格网,每个方格网‎共分九个大‎格,中央的一大‎格作为计数‎用,称为计数区‎。

计数区的刻‎度有两种:一种是计数‎区分为16‎个大方格(大方格用三‎线隔开),而每个大方‎格又分成2‎5个小方格‎;另一种是一‎个计数区分‎成25个大‎方格(大方格之间‎用双线分开‎),而每个大方‎格又分成1‎6个小方格‎。

但是不管计‎数区是哪一‎种构造,它们都有一个‎共同特点,即计数区都‎由400个‎小方格组成‎。

计数区边长‎为1mm,则计数区的‎面积为1m‎m2,每个小方格‎的面积为1‎/400mm‎2。

盖上盖玻片‎后,计数区的高‎度为0.1mm,所以每个计‎数区的体积‎为0.1mm3,每个小方格‎的体积为1‎/4000m‎m3。

使用细胞计‎数板计数时‎,先要测定每‎个小方格中‎微生物的数‎量,再换算成每‎毫升菌液(或每克样品‎)中微生物细‎胞的数量。

细胞计数板‎-使用方法1.视待测菌悬‎液浓度,加无菌水适‎当稀释(斜面一般稀‎释100倍‎?),以每小格的‎菌数可数为‎度。

2.取洁净的细‎胞计数板一‎块,在计数区上‎盖上一块盖‎玻片。

3.将菌悬液摇‎匀,用滴管吸取‎少许,从计数板中‎间平台两侧‎的沟槽内沿‎盖玻片的下‎边缘滴入一‎小滴(不宜过多),让菌悬液利‎用液体的表‎面张力充满‎计数区,勿使气泡产‎生,并用吸水纸‎吸去沟槽中‎流出的多余‎菌悬液。

也可以将菌‎悬液直接滴‎加在计数区‎上(不要使计数‎区两边平台‎沾上菌悬液‎,以免加盖盖‎玻片后,造成计数区深度‎的升高),然后加盖盖‎玻片(勿使产生气‎泡)。

4.静置片刻,使细胞沉降‎到计数板上‎,不再随液体‎漂移。

将细胞计数‎板放置于显‎微镜的载物‎台上夹稳,先在低倍镜‎下找到计数‎区后,再转换高倍‎镜观察并计‎数。

细胞计数方法------细胞计数板法汇总

细胞计数方法------细胞计数板法汇总

细胞计数方法------细胞计数板法汇总细胞计数方法------细胞计数板法实验原理:当待测细胞悬液中细胞均匀分布时,通过测定一定体积悬液中的细胞的数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。

具体操作:1. 将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板。

2. 将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间,静置3min,注意盖片下不要有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中。

3. 计算板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧和上方的。

然后按公式计算:4细胞数/mL=四大格细胞总数/4×10个/ml(注:当细胞很多时,可在四个格中选一定数目较平均的小格,由于每大格中有16个小格,然后计左侧和上方的细胞数,求出每小格的细胞数,取平均值m,m 4×16即每个格的平均值。

所以,细胞密度=m×16×10个/ml) 说明:公式中除以4,因为计数了4个大格的细胞数。

4公式中乘以10因为计数板中每一个大格的体积为:331.0mm(长)×1.0mm(宽)×0.1mm(高)=0.1mm 而 1ml=1000ul=1000mm(注意:镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团10%以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液。

)================================================细胞计数板的使用一、血球计数板-基本构造血球计数板是一块特制的厚型载玻片,载玻片上有四个槽构成三个平台。

中间的平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各刻有一小方格网,每个方格网共分九个大格,中央的一大格作为计数用,称为计数区。

计数区的刻度有两种:一种是计数区分为16个大方格(大方格用三线隔开),而每个大方格又分成25个小方格;另一种是一个计数区分成25个大方格(大方格之间用双线分开),而每个大方格又分成16个小方格。

细胞计数方法-细胞计数板法

细胞计数方法-细胞计数板法

细胞计数方法------细胞计数板法实验原理:当待测细胞悬液中细胞均匀分布时,通过测定一定体积悬液中的细胞的数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。

具体操作:1. 将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板。

2. 将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间,静置3min,注意盖片下不要有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中。

3. 计算板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧和上方的。

然后按公式计算:细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104个/ml(注:当细胞很多时,可在四个格中选一定数目较平均的小格,由于每大格中有16个小格,然后计左侧和上方的细胞数,求出每小格的细胞数,取平均值m,m ×16即每个格的平均值。

所以,细胞密度=m×16×104个/ml)说明:公式中除以4,因为计数了4个大格的细胞数。

公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为:1.0mm(长)×1.0mm(宽)×0.1mm(高)=0.1mm3而1ml=1000ul=1000mm3(注意:镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团10%以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液。

)================================================细胞计数板的使用一、血球计数板-基本构造血球计数板是一块特制的厚型载玻片,载玻片上有四个槽构成三个平台。

中间的平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各刻有一小方格网,每个方格网共分九个大格,中央的一大格作为计数用,称为计数区。

计数区的刻度有两种:一种是计数区分为16个大方格(大方格用三线隔开),而每个大方格又分成25个小方格;另一种是一个计数区分成25个大方格(大方格之间用双线分开),而每个大方格又分成16个小方格。

但是不管计数区是哪一种构造,它们都有一个共同特点,即计数区都由400个小方格组成。

细胞计数板的使用方法

细胞计数板的使用方法

细胞计数板的使用方法细胞计数板是用于测定细胞浓度的实验仪器。

以下是细胞计数板的使用方法:1. 准备工作:a. 清洁:使用酒精或其他清洁剂将细胞计数板上的任何污迹清洁干净。

b. 预热:将细胞计数板放置在实验室温度下,以使其适应环境温度。

2. 样品制备:a. 取适量的细胞悬液,将其转移到一个小离心管中。

b. 用转速适中的离心机离心样品,以使细胞沉淀在离心管底部。

c. 倒掉上清液,轻轻将细胞沉淀重悬于适量的培养基或缓冲液中。

d. 用显微镜检查细胞的存活率和均一性。

3. 细胞计数:a. 用移液器吸取一定量的细胞悬液,注入细胞计数板中的一个小方格。

b. 在显微镜下,使用10倍或20倍目镜观察方格中的细胞数量。

c. 统计每个小方格中的细胞数量,并根据计数板的标记进行计数。

d. 如果细胞数目过多,需要稀释细胞悬液并重新计数。

4. 计算细胞浓度:a. 根据使用的细胞计数板的面积和深度来计算每个小方格中的体积。

b. 计算每个小方格中细胞的平均数量。

c. 乘以细胞计数板的稀释倍数(如果有的话)来得出实际的细胞浓度。

d. 根据需求将细胞浓度转化为适当的浓度单位,如每毫升细胞数。

5. 清洁细胞计数板:a. 将细胞计数板浸泡在去离子水或清洗液中,以去除细胞残留物。

b. 用纸巾或棉花球轻轻擦拭细胞计数板表面,确保其干净。

注意事项:- 操作过程中要注意避免细胞样品和细胞计数板的污染。

- 选择合适的细胞计数板,确保其适用于所要测定的细胞类型和浓度范围。

- 在进行细胞计数之前,最好对细胞悬液进行稀释,以使细胞数量在每个小方格中分散均匀,方便计数。

- 重复计数可以提高准确性和可靠性。

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血球计数板-基本构造血球计数板是一块特制的厚型载玻片,载玻片上有四个槽构成三个平台。

中间的平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各刻有一小方格网,每个方格网共分九个大格,中央的一大格作为计数用,称为计数区。

计数区的刻度有两种:一种是计数区分为16个大方格(大方格用三线隔开),而每个大方格又分成25个小方格;另一种是一个计数区分成25个大方格(大方格之间用双线分开),而每个大方格又分成16个小方格。

但是不管计数区是哪一种构造,它们都有一个共同特点,即计数区都由400个小方格组成。

计数区边长为1mm,则计数区的面积为1mm2,每个小方格的面积为1/400mm2。

盖上盖玻片后,计数区的高度为0.1mm,所以每个计数区的体积为0.1mm3,每个小方格的体积为1/4000mm3。

使用细胞计数板计数时,先要测定每个小方格中微生物的数量,再换算成每毫升菌液(或每克样品)中微生物细胞的数量。

细胞计数板-使用方法1.视待测菌悬液浓度,加无菌水适当稀释(斜面一般稀释100倍?),以每小格的菌数可数为度。

2.取洁净的细胞计数板一块,在计数区上盖上一块盖玻片。

3.将菌悬液摇匀,用滴管吸取少许,从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入一小滴(不宜过多),让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区,勿使气泡产生,并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。

也可以将菌悬液直接滴加在计数区上(不要使计数区两边平台沾上菌悬液,以免加盖盖玻片后,造成计数区深度的升高),然后加盖盖玻片(勿使产生气泡)。

4.静置片刻,使细胞沉降到计数板上,不再随液体漂移。

将细胞计数板放置于显微镜的载物台上夹稳,先在低倍镜下找到计数区后,再转换高倍镜观察并计数。

由于生活细胞的折光率和水的折光率相近,观察时应减弱光照的强度。

5.计数时若计数区是由16个大方格组成,按对角线方位,数左上、左下、右上、右下的4个大方格(即100小格)的菌数。

如果是25个大方格组成的计数区,除数上述四个大方格外,还需数中央1个大方格的菌数(即80个小格)。

为了保证计数的准确性,避免重复计数和漏记,在计数时,对沉降在格线上的细胞的统计应有统一的规定。

如菌体位于大方格的双线上,计数时则数上线不数下线,数左线不数右线,以减少误差。

即位于本格上线和左线上的细胞计入本格,本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中。

见下图:即本格中计数细胞为3个。

(细胞压线,仅计数相邻的两条线上的细胞)6.对于出芽的酵母菌,芽体达到母细胞大小一半时,即可作为两个菌体计算。

每个样品重复计数2-3次(每次数值不应相差过大,否则应重新操作),按公式计算出每mL(g)菌悬液所含细胞数量。

7.测数完毕,取下盖玻片,用水将细胞计数板冲洗干净,切勿用硬物洗刷或抹擦,以免损坏网格刻度。

洗净后自行晾干或用吹风机吹干,放入盒内保存。

细胞计数板-计数公式1、16格×25格的细胞计数板计算公式:细胞数/ml=100小格内细胞个数/100×400×10000×稀释倍数1、25格×16格的细胞计数板计算公式:细胞数/ml=80小格内细胞个数/80×400×10000×稀释倍数To prepare the counting chamber the mirror-like polished surface is carefully cleaned with lens paper. The coverslip is also cleaned. Coverslips for counting chambers are specially made and are thicker than those for conventional microscopy, since they must be heavy enough to overcome the surface tension of a drop of liquid. The coverslip is placed over the counting surface prior to putting on the cell suspension. The suspension is introduced into one of theV-shaped wells with a pasteur or other type of pipet. The area under the coverslip fills by capillary action. Enough liquid should be introduced so that the mirrored surface is just covered. The charged counting chamber is then placed on the microscope stage and the counting grid is brought into focus at low power.It is essential to be extremely careful with higher power objectives, since the counting chamber is much thicker than a conventional slide. The chamber or an objective lens may be damaged if the user is not not careful. One entire grid on standard hemacytometers with Neubauer rulings can be seen at 40x (4x objective). The main divisions separate the grid into 9 large squares (like a tic-tac-toe grid). Each square has a surface area of one square mm, and the depth of the chamber is 0.1 mm. Thus the entire counting grid lies under a volume of 0.9mm-cubedSuspensions should be dilute enough so that the cells or other particles do not overlap each other on the grid, and should be uniformly distributed. To perform the count, determine the magnification needed to recognize the desired cell type. Now systematically count the cells in selected squares so that the total count is 100 cells or so (number of cells needed for a statistically significant count). For large cells this may mean counting the four large corner squares and the middle one. For a dense suspension of small cells you may wish to count the cells in the four 1/25 sq. mm corners plus the middle square in the central square. Always decide on a specific counting patter to avoid bias. For cells that overlap a ruling, count a cell as "in" if it overlaps the top or right ruling, and "out" if it overlaps the bottom or left ruling.Here is a way to determine a particle count using a Neubauer hemocytometer. Suppose that you conduct a count as described above, and count 187 particles in the five small squares described. Each square has an area of 1/25 mm-squared (that is, 0.04 mm-squared) and depth of 0.1 mm. The total volume in each square is (0.04)x(0.1) = 0.004 mm-cubed. You have five squares with combined volume of 5x(0.004) = 0.02 mm-cubed. Thus you counted 187 particles in a volume of 0.02 mm-cubed, giving you 187/(0.02) = 9350 particles per mm-cubed. There are 1000 cubic millimeters in one cubic centimeter (same as a milliliter), so your particle count is 9,350,000 per ml.Cells are often large enough to require counting over a larger surface area. For example, you might count the total number of cells in the four large corner squares plus the middle combined. Each square has surface area of 1 mm-squared and a depth of 0.1 mm, giving it a volume of 0.1 mm-cubed. Suppose that you counted 125 cells (total) in the five squares. You then have 125 cells per 0.5 mm-cubed, which is 250 cells/mm-cubed. Again, multiply by 1000 to determine cell count per ml (250,000).Sometimes you will need to dilute a cell suspension to get the cell density low enough for counting. In that case you will need to multiply your final count by the dilution factor. For example, suppose that for counting you had to dilute a suspension of Chlamydomonas 10 fold. Suppose you obtained a final count of 250,000 cells/ml as described above. Then the count in the original (undiluted) suspension is 10 x 250,000 which is 2,500,000 cells/ml.我自己的一个细胞计数板的protocol,也很经典。

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