AKTA蛋白纯化系统操作指导
AKTA 制备型液相色谱蛋白分析仪 纯化蛋白步骤
AKATA 制备型液相色谱蛋白分析仪纯化蛋白步骤首先是所有溶液抽滤，超声波(主要是去除溶液中的气泡)；开机(仪器自检)，点开Unicorn ，选default ,ok；clear all (即出现流程图界面)；首先将20%Mannul，点任意选项，出现操作对话框；Pump---flow=1.0 ，execute，(注意：必须先设定流速，使其形成通路；即有流速时再作其他操作)。
此时观察柱压，柱压切记≤0.3Mpa；如果柱压高，则要更长时间洗。
柱压基本稳定时，洗泵：pump---pumpwashpurifier----------A1 ON B1 ON execute；这项仪器自动完成；完成后自动恢复为上一步的状态；此时还应该注意柱压。
注意中间有多次平衡状态出现：一种状态进入另一种状态时，一般要平稳几个柱体积；此时可以洗上样环；待平衡时换液：pause，A1---------A液B1---------B液，continue，然后达到平衡态；洗泵：pump---pumpwashpurifier-------A1 ONB1 ON execute；此时A泵走A液，B泵走B液此时可以安装镍柱；待稳定下来准备上样：将流速降下来，flow=0.5 ，先是load (默认)状态下，将蛋白溶液用注射器打入上样环(上样环是2 ml 的，所以一般最多上样2 ml ，否则浪费；)；然后改为inject状态，execute ，待走出2.5 柱体积时重新改为load状态，平衡几个柱体积；如果中间需上样多次，load , execute;pause;加样后，continue;inject , execute; 同样图上显示≥2 ml 时改状态为load;非目的蛋白不会挂在柱子上，此时出现蛋白峰，在峰上时收穿透；平衡后，洗脱。
准备接收纯化出的蛋白，改流速flow=1.0 ，gradient；100%B8 min; execucte;待B%≥20% 时，设定 pump---outletvalve----feed,executefrac-----0.5 ml，execute;首先出现的是杂蛋白的峰，也可以接收。
蛋白纯化AKTA操作说明(二)
蛋白纯化AKTA操作说明（二）引言概述：本文档旨在提供关于蛋白纯化AKTA操作的详细说明。
蛋白纯化是生物化学和生物技术中常用的实验技术之一，能够用于从复杂的生物样品中纯化目标蛋白质。
AKTA操作是常用的蛋白纯化系统，本文将介绍该系统的操作步骤和注意事项，帮助用户顺利进行蛋白纯化实验。
正文：一、AKTA操作之仪器准备1. 确保AKTA蛋白纯化系统已经连接好电源，并打开主机电源开关。
2. 检查液氮罐中的液氮是否充足，并确保液位高于所需运行温度。
3. 打开冰盒，准备好所需的离心管、移液器和其他实验器材。
二、AKTA操作之列柱装配1. 按照实验要求选择合适的色谱柱和填料，并正确装配到AKTA系统中。
2. 使用力学手套松开色谱柱底部的螺丝，将填料注入色谱柱中，确保填料均匀。
3. 同时，注意将填料与色谱柱的连接口处用黑色硅胶密封，以免液体泄漏。
三、AKTA操作之流程设置1. 打开AKTA系统的软件界面，并选择“新建方法”。
2. 在方法设置界面中，设定蛋白纯化的各个步骤，如进样、洗脱等流程参数。
3. 根据实验需求，选择合适的梯度洗脱方案，并输入相应的洗脱液体浓度。
四、AKTA操作之样品处理1. 将待纯化的生物样品进行预处理，如离心、过滤等，以去除杂质。
2. 根据纯化需求，可进行某些特定试剂的添加，如酶切剂、亲和标记剂等。
3. 根据方法设置，将样品装入进样器中，并调整进样量和进样流速。
五、AKTA操作之运行实验1. 保存并加载所设置的方法，确保参数设定正确。
2. 启动AKTA系统，开始实验运行，并监控过程中的各项参数指标。
3. 及时记录实验数据，并根据需要进行样品采样、保存等操作。
总结：通过本文所述的蛋白纯化AKTA操作说明，用户可以了解到系统准备、列柱装配、流程设置、样品处理和运行实验等关键步骤。
合理而正确的操作，将帮助用户获得高质量的蛋白纯化结果。
同时，用户还需根据实际操作中的具体情况，进一步优化实验参数，以满足各自的研究需求。
AKTA蛋白纯化层析系统操作规程
AKTA蛋白纯化层析系统操作规程一、目的：为了确保蛋白纯化层析系统操作的准确性、稳定性和安全性，保证实验结果的可靠性，制定本操作规程。
二、适用范围：本操作规程适用于实验室内的AKTA蛋白纯化层析系统操作。
三、操作流程：1.准备工作：(1)预热：打开系统电源，预热至设定温度（一般为室温）。
(2)洗涤缓冲液：根据实验要求，制备所需的洗涤缓冲液，确保其浓度和pH值符合要求。
(3)净化缓冲液：根据实验要求，制备所需的净化缓冲液，确保其浓度和pH值符合要求。
(4)样品：根据实验要求，制备所需的样品。
2.系统配置：(1)连接仪器：将系统中的各个模块连接好，包括色谱柱、注射器、检测器等。
(2)配置方法参数：根据实验要求，在系统内设置合适的流速、梯度洗脱条件等相关参数。
3.样品处理：(1)样品加载：将样品注入到加载注射器中，通过样品加载阀注入到色谱柱中。
(2)洗脱：根据实验要求，设置梯度洗脱条件，将混合物中的目标蛋白纯化。
4.系统清洗：(1)注射器清洗：每次实验结束后，将注射器从系统中取出，用纯化缓冲液反复洗涤至无污染为止。
(2)色谱柱清洗：每次实验结束后，将色谱柱从系统中取出，用纯化缓冲液反复洗涤至无污染为止。
5.系统关闭：(1)关闭电源：关闭系统电源，断开电源线连接。
(2)清洗系统：将系统中的各个模块用水冲洗干净，保持干燥。
(3)整理工作台：将使用过的耗材整理归位，清理工作台。
四、操作注意事项：1.操作前应仔细阅读操作手册，了解仪器的基本原理和操作要点。
2.操作时要穿戴实验室个人防护用品，避免吸入或接触有害物质。
3.在操作过程中，要严格按照实验要求进行，避免操作失误。
4.定期检查系统的运行状态，保证系统正常工作。
5.操作完成后，要及时清洗和整理仪器，保持仪器的干净和完好。
五、风险控制与安全措施：1.使用过程中，注意避免溶液飞溅引起的伤害，避免溶剂和化学品的吸入或接触。
2.避免电源短路或其他电气故障引起的意外事故。
蛋白纯化AKTA操作说明(一)2024
蛋白纯化AKTA操作说明（一）引言概述：蛋白纯化是生物技术研究中常用的一种重要技术手段，通过纯化目标蛋白，可以实现对其结构、功能和相互作用的进一步研究。
AKTA是一种常用的蛋白纯化设备，本文将介绍如何进行AKTA操作以获得高纯度的蛋白样品。
本文分为五个大点：设备准备、准备实验材料、样品制备、纯化操作步骤、数据处理和总结。
正文：一、设备准备：1. 查看设备状况：检查AKTA设备的各个组件是否齐全，并确保设备正常工作。
2. 设备消毒：使用适当的消毒剂对AKTA设备进行消毒，确保实验过程的无菌。
二、准备实验材料：1. 缓冲液：根据实验需要选择不同的缓冲液，并准备足够的量。
2. 标记抗体：根据实验需要选择适当的标记抗体，并准备足够的量。
3. 标记亲和树脂：根据实验需要选择适当的标记亲和树脂，并准备足够的量。
4. 标准品：准备适当浓度的标准品作为纯化过程中的参考。
三、样品制备：1. 细胞裂解：采用适当的方法对细胞进行裂解，获得含有目标蛋白的裂解液。
2. 预处理：根据裂解液的性质，进行适当的预处理，如去除杂质、调整pH值等。
3. 样品加载：将预处理后的样品加载到纯化系统中，确保样品的均匀分布。
四、纯化操作步骤：1. 初始化设备：打开AKTA软件，选择纯化方法，并设置相关参数。
2. 样品加载：将样品加载到设备中，并根据实验要求选择适当的柱子和纯化方案。
3. 洗脱：使用缓冲液进行洗脱，去除非目标蛋白和杂质。
4. 目标蛋白回收：使用适当的缓冲液洗脱目标蛋白，并将其收集到已经标记好的收集管中。
5. 清洗设备：使用适当的缓冲液对设备进行清洗，防止交叉污染。
五、数据处理和总结：1. 数据记录：记录纯化过程中的各项数据，如流速、吸光度和洗脱峰。
2. 数据分析：对纯化结果进行分析和比较，评估纯化效果。
3. 总结经验：根据纯化结果总结操作经验，以优化蛋白纯化的流程和效率。
总结：本文介绍了蛋白纯化AKTA操作的基本步骤。
通过设备准备、准备实验材料、样品制备、纯化操作步骤和数据处理，可以获得高纯度的蛋白样品，为后续的蛋白研究提供了可靠的基础。
AK蛋白纯化系统操作
A K蛋白纯化系统操作 Modified by JACK on the afternoon of December 26, 2020AKTA蛋白纯化系统操作AKTA蛋白纯化系统是当前蛋白纯化工作经常用到的一组设备，自动化程度很高。
AKTA系统依据不同的配置，可以分为AKTA EXPLORER、AKTA PILOT、AKTA PURIFIER等多种型号的设备。
以下以AKTA EXPLORER为例简单介绍AKTA蛋白纯化系统的一般操作。
1、认识AKTA。
AKTA explorer 是为方法开拓及研究应用而设计的全自动液相色谱系统。
该色谱系统的分离装置有三个主要组件，在底部平台的左侧整齐堆起（Fig 1）。
它们是：FIG 1、AKTA EXPLORER主机Pump-900 为双通道高效梯度泵系列。
在AKTAexplorer 100，流速范围ml/min，压力高达10 Mpa（泵名为P-901）。
在AKTA explore10，流速范围ml/min，压力高达25 Mpa（泵名为P-903）。
Monitor UV-900，同时监控190－700 nm 范围内高达3 个波长的多波长紫外-可见（UV-Vis）监测器。
（针对部分AKTA PURIFIER机型，尚有UPC-900监测器可供选择，光源为汞灯光源，一次可以监控一个波长，安装滤光片后，可以在选择的波长范围内进行切换。
）Monitor pH/C-900，在线电导和pH 监测的组合监测器。
Fig 2、AKTA EXPLORER硬件模式图AKTA EXPLORER系统的主要组成部件可以用模式图表示（Fig 2）。
组成部件，如混合器、柱及不同的阀安装在右边部分。
打开装阀的门可全部看到。
柱被挂在装阀的门的外侧。
分离装置由UNICORN 软件控制。
软件安装于一独立的电脑主机之中，在电脑与色谱系统之间的通信由数据采集装置CU950进行控制。
2、一般操作开机按位于底部平台前左侧的ON/OFF 按钮，打开色谱系统，然后打开电脑电源。
(完整word版)蛋白纯化AKTA操作说明
AKTA pure操作说明分子筛层析操作步骤：1. 开机：打开AKTA pure开关，看指示灯，泵同步（泵内有注入液体的声音）。
2. 打开系统：打开电脑：双击Unicorn 7.0打开系统，进入log on 界面，用户名默认为Default，输入密码：default，点ok键，出现提示对话框，继续点确定，进入系统。
注意：进入系统时会弹出三个界面：System Control界面，Evaluation界面和Administration界面。
其中system Control界面为主操作窗口，所有的设置选项都是在该界面下完成：Manual---Execute Manual instructions---......；Evaluation界面为结果数据查看及处理窗口；Administration界面为Unicorn 7.0系统设置界面。
3. 洗泵：把A1泵头从20%乙醇中取出，用去离子水冲洗，放入分子筛缓冲液中，在SystemControl界面下，点击manual---Execute Manual instructions---Pumps---Pump A wash---点开inlet，选择A1---Excuse。
4. 设置系统参数：设柱压：Alams---alam systerm pressure---high alam---设置柱压---Execute；设流速：Pumps---System flow ---设置system flow（1mL/min）---Execute。
注意：流速和柱压设置参照“GE蛋白纯化柱表”，不要超出最高限制。
5. 装柱子(先上后下)：接柱子的上面：拧下连接进样阀和检测器之间的线，等进样阀出口有液体流出时，拧开柱上面线头的螺帽，将它连到进样阀出口；接柱子的下面：去掉柱下端连接的注射器，连上接头，连上一段线，待液体滴出滴出液体滴到检测器上的连接口的洞里，滴满，将接头连到检测器的连接口里。
蛋白纯化AKTA操作说明
AKTA pure操作说明分子筛层析操作步骤：1. 开机：打开AKTA pure开关，看指示灯，泵同步（泵内有注入液体的声音）。
2. 打开系统：打开电脑：双击Unicorn 7.0打开系统，进入log on 界面，用户名默认为Default，输入密码：default，点ok键，出现提示对话框，继续点确定，进入系统。
注意：进入系统时会弹出三个界面：System Control界面，Evaluation界面和Administration界面。
其中system Control界面为主操作窗口，所有的设置选项都是在该界面下完成：Manual---Execute Manual instructions---......；Evaluation界面为结果数据查看及处理窗口；Administration界面为Unicorn 7.0系统设置界面。
3. 洗泵：把A1泵头从20%乙醇中取出，用去离子水冲洗，放入分子筛缓冲液中，在SystemControl界面下，点击manual---Execute Manual instructions---Pumps---Pump A wash---点开inlet，选择A1---Excuse。
4. 设置系统参数：设柱压：Alams---alam systerm pressure---high alam---设置柱压---Execute；设流速：Pumps---System flow ---设置system flow（1mL/min）---Execute。
注意：流速和柱压设置参照“GE蛋白纯化柱表”，不要超出最高限制。
5. 装柱子(先上后下)：接柱子的上面：拧下连接进样阀和检测器之间的线，等进样阀出口有液体流出时，拧开柱上面线头的螺帽，将它连到进样阀出口；接柱子的下面：去掉柱下端连接的注射器，连上接头，连上一段线，待液体滴出滴出液体滴到检测器上的连接口的洞里，滴满，将接头连到检测器的连接口里。
AKTA层析仪使用操作规程(AKTA蛋白纯化系统经典培训资料)
ÄKTApurifier层析仪使用操作规程1、开机打开仪器的主电源，打开电脑电源。
待仪器自检完毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁）。
双击桌面上UNICORN图标，进入操作界面。
2、准备工作溶液和样品所有的工作溶液和样品必须经过0.45µm的滤膜过滤，样品也可高速离心后取上清备用。
当缓冲液中含有有机溶剂（如乙腈、甲醇），需在使用前用低频超声脱气10min。
3、清洗及管道准备首先将A1管道放入缓冲液或平衡液，binding buffer中，将B1管道放入高盐溶液中或elution buffer，在system control窗口点击工具栏内的manual，选择 pump→pump wash basic，选中A1,B1管道为ON， execute。
泵清洗将自动结束。
4、安装层析柱在manual里选择pump→flow rate，输入流速1ml/ml，insert；选择Alarm&mon→alarm pressure，设置high alarm（输入填料的耐受压力，可在填料说明书中查到），insert，execute。
待InjectionValve的1号位管道流出水后接入柱子的柱头，稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉接入管道连上紫外流动池。
5、开始纯化：1）等待柱子平衡好了（观察电导COND，pH的数值和变化趋势）就准备上样了。
此时将紫外调零，选择Alarm&mon→autozero，exectue。
2）用样品环上：将样品吸进注射器，推掉气泡，从injectionValve的3号位推入（进样量不得低于样品环的体积的2倍）推好后不要取下注射器。
在manual里选择flowpath→injectionValve→inject，execute。
3）用泵上样：点击pause，将A1放入样品中，点击countine，待样品上完后，再将A1放入到平衡液中继续清洗柱子。
2),3)选择一种方式4）洗脱：上样后用缓冲液尽量将穿透峰洗回基线。