蛋白纯化系统Biologic-LP使用说明
蛋白质纯化仪的使用(1)资料
1.认识机器
样品泵
层析柱 切换阀
整合电导检测 pH 计
多波长检测器
进样环
混合池
A泵
B泵
A 泵溶液进口线
本机器常规流程图：
溶液由 A/B 泵进 入仪器
层析柱切换阀
B 泵溶液进口线 自动收集器
废
进样阀
多波长检测处
液 出
口
使用机器前所有端口请按如图所示连接，将“ A 泵溶液进口线”
“B 泵溶液进口线”放进超纯水中。按如图所示先不要连接柱子。
不特殊设置，默认 A 泵工作
双击“层析柱切换阀”模块如下图所示：
此步骤主要是洗泵工作， 请确保层析柱不在程序 中，点击“ Bypass”
点击 1-5 可设置连接 不同的层析柱端口
点击此处可让可更 改溶液的流动方向。
3
双击“样品泵”模块出现如下图所示：
选择“System Pump Wast”e 模式后，轻按仪器上“A 泵”的“Purge” 按钮，稍等片刻，即将进行 A 泵的洗泵工作，此时流速将会达到最 大 10 mL/min 。如果想洗 B 泵（凝胶过滤时不需要） ，轻按仪器上“ B 泵”的“ Purge”按钮即可。注意此时废液将从“样品泵”模块上的 “Waste 2”出口处留出，拿好废液缸。
首先单击这里
按如上过程设置好自己需要的流程后，即可开始程序： 点击上方第二行的“ Star Run”→“ OK”即可。
运行以后会出现如下图画面，等待机器运行：
9
程序运行以后，先不要急着休息， 点击下图左上角的“ Hold Step”， 此时连接柱子。
将“层析柱交换阀”上相互连接的两根线从中间拧开，接柱子。 注意： 1.注意柱身上标示的溶液流动方向（上端→下端） 。 2.旋开柱子顶端和下端的螺母，让纯化仪的出水端先连接柱子的 下端，让水从柱子的上端流出，待柱子上端有水滴停留时，将纯化仪 的出水端接到柱子的上端，此时再连接柱子的下端。目的：防止有气 泡进入柱子内。 3.如果用凝胶过滤柱时，除了要特别注意防止气泡进入，还要， 注意的摆放姿势一定要保持垂直，否则会影响纯化的效率。 4.顺便说一下，柱子使用完毕后，应在保持液体流动的情况下， 先拆卸柱子的下端，再拆卸柱子的上端，防止柱内保护液体的损失。 4℃保存。 柱子安装完毕后，在“ Hold Step”点击“ Resume”开始运行你 预先设置好的程序。 嗯，当然，咱们的机器也不是全自动的，开头和结尾还是需要动 身换一下相应的溶液的。 1.记好是 A 泵还是 B 泵进液。 2.换溶液时，
Biolog使用手册1
Biolog使用手册目录1 启动................ (4)1.1 系统需要................ . (4)1.2 安装软件和数据库 (4)1.3 软件配置................ (4)2 系统介绍................ .. (5)2.1 原理................ (5)2.2 鉴定程序................ . (5)2.3 使用简单的软件 (5)2.4软件背后的数学 (5)2.5 鉴定微生物和管理数据 (6)3 进入系统................ (7)3.1 限制性进入模式....................... (7)3.2 创建使用者列表 (7)3.3 使用记录................ . (7)3.4 改变进入模式 (7)4 准备样品................ (8)4.1 分离一个纯培养物 (8)4.2 革兰氏染色 (8)4.3 Wet Prep................ (8)4.4 定义好氧菌特征 (8)4.5 定义厌氧菌特征 (8)4.6 定义丝状真菌和酵母菌特征 (9)4.7 培养................ (9)4.8 准备接种物................ (9)4.9 革兰氏阳性产芽孢杆菌的处理 (9)4.10 丝状真菌的处理 (9)4.11 接种鉴定板................ (9)4.12 培养鉴定板................ .. (9)4.13 厌氧鉴定板的处理 (10)4.14 丝状真菌的准备 (10)4.15 GN，GP，AN的准备 (10)5 读结果................ (11)5.1 登录................ . (11)5.2 选择人工，读数仪或文件输入模式 (11)5.3 选择打印方法................ (11)5.4 人工读结果................ (11)5.5 用读数仪读结果 (11)5.6 从文件读结果 (11)5.7 设置一个工作表 (11)5.8 设置保存文件................ (11)5.9 使用工作表来读多个平板 (11)5.10 人工调整域值 (11)5.11 选择数据库................ (12)5.12 退出................ .. (12)6 结果解释................ (13)6.1 读结果................ . (13)6.2 评估鉴定结果的准确性 (13)6.3 解释不好的鉴定结果的可能原因.. (13)6.4 种的比较................ . (14)6.5 查找并评估种的信息 (14)6.6 使用真菌的宏观和微观图片 (15)6.7 查看更多的种................ (15)6.8 评估原始OD值 (15)7 数据管理和编辑数据库 (16)7.1 文件备份................ . (16)7.2 文件合并................ . (16)7.3 文件浏览和编辑 (16)7.4 自定义数据文件 (16)7.5 输入/输出ASCII数据 (17)7.6 输出为ACCESS (17)7.7 群落分析 (17)8 技术注解 (19)8.1 材料列表 (19)8.2 培养基和接种液准备 (19)8.3 特殊用途的微孔板 (22)9 经常问到的问题 (23)10 故障处理 (25)10.1 革兰氏染色 (25)10.2 培养微生物 (25)10.3准备接种物 (26)10.4接种微板 (26)10.5培养微板 (26)10.6 读数仪 (27)11 术语表 (28)12 附录 (30)附录1 微孔板的数据统计.附录2 样品准备的流程表附录3 真菌样品准备的流程表附录4 数据库表及特性附录5 结果打印输出的格式附录6 危险病原菌数据库附录7 产品注册表1 启动1.1 系统需要计算机（Windows95,98,2000或NT, 有光驱和软驱），显示器，鼠标，键盘，读数仪，浊度仪，菌落放大灯，八头电动加液器，系统软件。
【免费下载】蛋白纯化试剂盒说明书
变性剂 洗涤剂 其他添加剂
缓冲液
10 mmol/L 还原型谷胱甘肽
8 mol/L尿素 6 mol/L 盐酸胍
2% TritonX-100(非离子物质) 2% Tween 20（非离子物质） 2% NP-40 (非离子物质) 2% 胆酸盐 1% CHAPS（两性离子）
20% 乙醇 50% 甘油 100 mmol/L Na2SO4 1.5 mol/L NaCl 1 mmol/L EDTA 60 mmol/L柠檬酸盐 100 mmol/L 磷酸钠，pH 7.4
洗脱液 唑，pH 8.0
20 mmol/L Tris-HCl，8 mol/L 尿素，500 mmol/L NaCl，500 mmol/L 咪
注意：样品和缓冲液中适当浓度的咪唑对获得最大的纯化是必需的，而且产量因蛋白 而不尽相同。自然条件下，20-40 mmol/L 的咪唑的几盒缓冲液对许多蛋白已经足够。洗脱 液中500 mmol/L 咪唑绝大多数情况下完全可洗下目的蛋白。
含螯合剂，例如EDTA，EGTA，柠檬酸等
20%乙醇
4或30℃
5 mmol/L DTE(二硫赤藓糖醇) 5 mmol/L DTT(二硫苏糖醇)
20 mmol/L β-巯基乙醇 5 mmol/L TCEP(磷酸三氯乙酯)
对全部高中资料试卷电气设备，在安装过程中以及安装结束后进行高中资料试卷调整试验；通电检查所有设备高中资料电试力卷保相护互装作置用调与试相技互术关，系电，力根通保据过护生管高产线中工敷资艺设料高技试中术卷资，配料不置试仅技卷可术要以是求解指，决机对吊组电顶在气层进设配行备置继进不电行规保空范护载高与中带资负料荷试下卷高问总中题体资，配料而置试且时卷可，调保需控障要试各在验类最；管大对路限设习度备题内进到来行位确调。保整在机使管组其路高在敷中正设资常过料工程试况中卷下，安与要全过加，度强并工看且作护尽下关可都于能可管地以路缩正高小常中故工资障作料高；试中对卷资于连料继接试电管卷保口破护处坏进理范行高围整中，核资或对料者定试对值卷某，弯些审扁异核度常与固高校定中对盒资图位料纸置试，.卷保编工护写况层复进防杂行腐设自跨备动接与处地装理线置，弯高尤曲中其半资要径料避标试免高卷错等调误，试高要方中求案资技，料术编试交写5、卷底重电保。要气护管设设装线备备置敷4高、调动设中电试作技资气高，术料课中并3中试、件资且包卷管中料拒含试路调试绝线验敷试卷动槽方设技作、案技术，管以术来架及避等系免多统不项启必方动要式方高，案中为；资解对料决整试高套卷中启突语动然文过停电程机气中。课高因件中此中资，管料电壁试力薄卷高、电中接气资口设料不备试严进卷等行保问调护题试装，工置合作调理并试利且技用进术管行，线过要敷关求设运电技行力术高保。中护线资装缆料置敷试做设卷到原技准则术确：指灵在导活分。。线对对盒于于处调差，试动当过保不程护同中装电高置压中高回资中路料资交试料叉卷试时技卷，术调应问试采题技用，术金作是属为指隔调发板试电进人机行员一隔，变开需压处要器理在组；事在同前发一掌生线握内槽图部内 纸故，资障强料时电、，回设需路备要须制进同造行时厂外切家部断出电习具源题高高电中中源资资，料料线试试缆卷卷敷试切设验除完报从毕告而，与采要相用进关高行技中检术资查资料和料试检，卷测并主处且要理了保。解护现装场置设。备高中资料试卷布置情况与有关高中资料试卷电气系统接线等情况，然后根据规范与规程规定，制定设备调试高中资料试卷方案。
蛋白质纯化仪的使用 (1)
蛋 白 质 纯 化 仪 使 用 说 明1.认识机器本机器常规流程图：使用机器前所有端口请按如图所示连接，将“A 泵溶液进口线”“B 泵溶液进口线”放进超纯水中。
按如图所示先不要连接柱子。
建议一般使用A 泵进液，如需梯度洗脱时才用B 泵。
***除上样样品（14000 rpm/12000 rpm 离心30min ）外，所有在此机器上要用的溶液必须要经过0.22 μm 滤膜过滤。
***样品泵A 泵B 泵 多波长检测器 pH 计 混合池 层析柱 切换阀进样环 溶液由A/B 泵进入仪器 进样阀层析柱切换阀多波长检测处 自动收集器 废 液 出 口A 泵溶液进口线B 泵溶液进口线 整合电导检测2.开机打开计算机、蛋白质纯化仪（电源在右侧下角）、自动收集器（电源在后面右侧）。
此时蛋白质纯化仪上部分指示灯会亮，有黄色的、有蓝色的，开机较慢，请稍等，当蛋白质纯化仪上所有指示灯不亮时，才可进行操作。
3.启动电脑“ChromLab”软件双击电脑“ChromLab”应用程序，进入如下界面：4.洗泵单击“Manual Run”进入：我们主要看右下方这块（图中所示模块均可双击设置参数）：双击“样品泵”模块出现如图所示对话框：双击“层析柱切换阀”模块如下图所示：此步骤主要是洗泵工作，请确保层析柱不在程序中，点击“Bypass ” 点击此处可让可更改溶液的流动方向。
点击1-5可设置连接不同的层析柱端口 设置流速 设置压力，小于选择的柱子承受最大压力。
在下面“控制流速以防止超压”前面打对勾，以保护柱子。
不特殊设置，默认A 泵工作此处可控制机器的运行与停止。
双击“样品泵”模块出现如下图所示：选择“System Pump Waste”模式后，轻按仪器上“A泵”的“Purge”按钮，稍等片刻，即将进行A泵的洗泵工作，此时流速将会达到最大10 mL/min。
如果想洗B泵（凝胶过滤时不需要），轻按仪器上“B 泵”的“Purge”按钮即可。
英赛斯蛋白纯化系统安全操作及保养规程
英赛斯蛋白纯化系统安全操作及保养规程1. 简介英赛斯蛋白纯化系统是生物技术实验室中常用的一种设备，用于蛋白质的纯化和富集。
为了确保用户的操作安全和设备的良好运行，请严格按照以下操作规程进行操作和保养。
2. 安全操作规程1.在使用英赛斯蛋白纯化系统之前，必须仔细阅读设备的操作手册，并确保完全理解其中的操作步骤和安全注意事项。
2.操作人员应穿戴个人防护装备，包括实验室服装、手套、护目镜等，并按照实验室安全制度要求操作。
3.在操作之前，确保设备的电源已经关闭，连接线已经插好，并检查设备外壳和连接线是否完好无损。
4.操作人员应严格按照设备的使用说明进行操作，不得随意更改设备的设置和参数。
5.在操作过程中，避免用手直接接触设备的运动部件和尖锐物体，以免发生伤害。
6.操作过程中如遇到异常情况，如设备异常响声、烟雾、异味等，应立即停止操作，切断电源，并向实验室负责人报告，并按照实验室应急处理程序进行处理。
3. 设备保养规程1.设备的保养应定期进行，以确保设备的正常运行和延长设备的使用寿命。
2.在保养之前，必须切断设备的电源，并等待设备完全停止运行后进行保养操作。
3.首先，清洁设备的外壳和显示屏，可以使用软布擦拭，禁止使用含酸碱物质的清洁剂。
4.检查设备连接线是否完好无损，如有损坏应及时更换。
5.定期检查设备的运动部件和配件，如有磨损或损坏应及时更换，以免影响设备的正常运行。
6.设备需要进行液体处置时，必须按照实验室的废液处理规程进行处理，禁止随意倾倒废液。
4. 总结通过严格遵守英赛斯蛋白纯化系统的安全操作规程和定期进行设备的保养维护，可以确保用户的操作安全和设备的良好运行。
同时，操作人员还应定期参加相关的培训和学习，提高自己的实验操作技能和安全意识。
蛋白纯化系统操作规程
蛋白纯化系统操作规程一、注意事项：1.保持系统、馏分收集器内外清洁。
2.使用进口过滤器、过滤后的缓冲液，最后脱氧缓冲液。
3.为获得最佳的结果,在运行期间使用缓冲液,系统和柱处于环境温度。
4.上样之前，离心或过滤样品。
5.定期清洗和清洁整个仪器,包括馏分收集器。
6.防止交叉污染和细菌生长, 系统在每次运行后执行系统清洗(CIP)。
7.系统处于强洗涤液中不超过2小时。
8.系统停用之前，用20%乙醇填满系统，以避免滋生细菌。
9.设置UNICORN TM系统通知,提示定期维护时间。
例如,定期更换泵清洗液。
二、运行必需品：运行前1.泵清洗液：20%乙醇，混浊时或量少时及时更换。
2.检查所有管道, sure no tubing is nicked.3.确保所有缓冲液处于相同的温度系统以减少气泡的问题。
4.所有入口用缓冲液填满。
5.排气：从泵头内把气体抽出。
6.开始一个流动相，观察是否有泄漏。
7.调整ph电极。
8.执行系统预运行，使正确的缓冲液填满系统的整个流路。
9.启动一个流程检查信号从显示器看起来稳定,如果不现实，看7-1210.wipe off the fraction collector sensors(code reader & drop sync sensor) with a tissue and fillthe fraction collector with the tubes plates needed. 除去馏分收集器传感器(代码读者&下降同步传感器)组织和填补与管板所需馏分收集器。
11.wipe off the fraction collector sensors(code reader & drop sync sensor) with a tissue and fillthe fraction collector with the tubes plates needed.12.附上需要的柱子，并设置正确的柱压力。
蛋白纯化试剂盒说明书
蛋白纯化试剂盒介绍试剂盒有10个重力流柱，而该柱在自然条件下纯化可重新装填Ni-IDA Sefinose TM 6 Fast Flow 和结合缓冲液，洗脱液。
这10个柱子通过固定化金属亲和层析可用于纯化带组氨酸标签的蛋白。
Ni-IDA Sefinose 6 Fast Flow 有很高的蛋白结合能力，低镍离子（Ni2 +）的泄漏以及可与变性剂和广泛的添加剂相兼容。
澄清和非澄清的样品可使用该柱。
特殊的frits 在纯化过程可防止介质变干燥。
一次纯化平均需要30分钟。
在变性下纯化，请自备额外的结合缓冲液和洗脱液。
特征柱材料聚丙烯桶，聚乙烯筛板介质Ni-IDA Sefinose 6 Fast Flow平均粒径90 µm蛋白结合能力约6 mg组氨酸标签蛋白/1毫升树脂床体积 1 mL/柱使用时兼容性在各种通用缓冲液，洗涤剂和变性剂中稳定避免在缓冲液中含螯合剂，例如EDTA，EGTA，柠檬酸等pH稳定性，短期（2h）2-14储存20%乙醇保存温度4或30℃与NI-IDA树脂相兼容的试剂还原试剂5 mmol/L DTE(二硫赤藓糖醇)5 mmol/L DTT(二硫苏糖醇)20 mmol/L β-巯基乙醇5 mmol/L TCEP(磷酸三氯乙酯)10 mmol/L 还原型谷胱甘肽变性剂8 mol/L尿素6 mol/L 盐酸胍洗涤剂2% TritonX-100(非离子物质)2% Tween 20（非离子物质）2% NP-40 (非离子物质)2% 胆酸盐1% CHAPS（两性离子）其他添加剂20% 乙醇50% 甘油100 mmol/L Na2SO41.5 mol/L NaCl1 mmol/L EDTA60 mmol/L柠檬酸盐100 mmol/L 磷酸钠，pH 7.4 缓冲液100 mmol/L Tris-HCl pH 7.4100 mmol/L Tris pH 7.4100 mmol/L HEPES pH 7.4100 mmol/L MOPS pH 7.4100 mmol/L 醋酸钠pH 4注意：1.为了最佳的操作过程，按照上述纯化步骤进行预洗以除去任何削弱结合镍离子的物质。
蛋白纯化仪安全操作及保养规程
蛋白纯化仪安全操作及保养规程前言蛋白纯化仪是生化和分子生物学实验室中必不可少的设备之一。
准确、安全地操作和维护蛋白纯化仪对于提高实验效率和保障实验人员的身体健康非常重要。
本文旨在介绍蛋白纯化仪的安全操作和保养规程。
安全操作1. 设备安装在蛋白纯化仪安装前，需要选择一个耐重、耐腐蚀、耐高温的设备摆放区域，并确保设备周围药品和试剂放置整齐。
使用前请检查设备和设备周围配件是否齐全。
2. 装填样品（1）根据实验的需要先准备好要分离的样品。
（2）在使用蛋白纯化仪前，应先检查使用范围，如PH值、盐度、清洁程度等进行调试。
（3）在装填前，需确保仪器内部是干燥和清洁的，并需要对仪器和采样管进行预冻结。
（4）将样品缓冲液注入仪器，按设置好的菌液流速和流量进行分离。
3. 设备操作（1）在操作过程中，避免直接接触电极和传感器。
（2）在操作过程中，应确保培养条件和样品的干净，在使用前先洗手，并戴上手套。
（3）在操作过程中，不要自行拆卸或试图调整电机和传感器。
（4）在使用蛋白纯化仪时，需要保持专注，避免拥挤、喧哗等情况。
（5）在设备操作结束后，应清理样品缓冲液、水分和其他非必需物件。
4. 安全储存（1）将蛋白纯化仪放置在干燥、清洁、阴凉处，避免阳光直射，避免风雨侵扰。
（2）储存前，应将设备清理干净，检查电线和仪器外壳是否损坏。
（3）如需长期储存，应选择干燥剂，放在密封袋中存放。
保养规程1. 保养前准备（1）在维修和保养前，请务必断开电源，等待设备冷却。
（2）在检查仪器故障前，请避免使用强酸、强碱等腐蚀性溶液。
（3）在保养蛋白纯化仪前，请确保清洗采样器，以保证设备的卫生和稳定性。
在某些实验条件下，可使用特殊清洗剂进行清洗。
2. 保养方法（1）每次使用后，应清理仪器内和采样器上的残渍。
已销毁的细胞和不适当的样品会在放置一段时间后附着在样品杯或采样器上，导致蛋白纯化仪运行不稳定，应当及时进行清洗。
（2）维修时，请遵循蛋白纯化仪安全操作规程。
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蛋白纯化系统Biologic-LP使用说明
Biologic-LP是蛋白质层析纯化系统, 其原理是利用不同蛋白分子所具有的特性（如等电点、分子量及亲水或疏水性）与层析柱中的介质产生的吸附作用后，再用相应的洗脱液来对吸附在层析柱上的蛋白进行洗脱。
根据目标蛋白及不同层析柱介质的特性，设计相应的洗脱程序可以使目标蛋白与其他杂蛋白先后从层析柱上洗脱下来。
通过观察紫外光的吸收峰，可分别收集不同时段洗脱下来的蛋白液。
蛋白混合物通过这样的程序可被分离至单个蛋白。
通常分布在混合物中的目标蛋白需要通过组合而不是单一的层析路线来进行分离操作。
常规的分离路线如通过疏水层析—离子交换—疏水层析的技术路线来有效分离目标蛋白。
本层析系统使用主要分为三个部分。
首先在使用前确认分离的技术路线和使用的层析柱。
其次根据层析柱使用的要求配制相关试剂和确定层析过程的参数。
最后通过层析操作分离纯化目标蛋白，并清洗层析柱和管道以确保仪器能长期有效使用。
一设计蛋白的纯化路线及选择不同的层析柱及层析方法根据目标蛋白的特性及来源，设计纯化的路线并确定每一步操作所需要的层析柱及层析方法。
根据不同层析方法的要求，准备蛋白样品及洗脱液及洗脱方式（如线形洗脱或梯度洗脱）。
而后确认层析操作中的主要参数。
二层析系统的操作
以下是对所有层析操作中共同的步骤进行的描述。
特别注意的是不同的分离方式如离子交换和疏水层析它们的原理和参数设置完全不同。
这里仅就相同的操作进行描述，具体的参数设置见使用说明书并咨询负责本仪器的老师，切不可擅自操作，以免破坏仪器。
1、确定目标蛋白层析柱的选择，不同的分离方式选择不同的层析柱。
2、样品制备。
根据层析柱介质对蛋白样品的要求，制备样品和洗脱
液。
所有用于层析的溶液及样品均要通过0.45μm膜过滤，以免堵塞层析柱。
3、打开层析仪电源，按照显示屏的提示，分别设置好A液、B液、
流速、时间等相关参数，并将接样管插入接样仪。
4、打开电脑及Biologic-LP Data View软件，观察层析过程是否正常
或是否需要调整，做好接样前的准备。
三、层析系统的维护
操作结束后，按仪器使用说明，清洗层析柱及管道，将层析柱保存好，备用。
特别注意不同的层析柱要求的清洗方式不同，对管道的清洗也不同，层析柱的保存方式也不同。
清洗和保存时一定要按照使用说明书的要求进行操作，不能出现错误以免对层析系统造成破坏。