免疫分析方法的最新研究进展 PPT课件

常见的发光体系
• 鲁米诺、异鲁米诺及其衍生物类：
• 吖啶类化合物：
（金刚烷）-1,2-二氧乙烷及其衍生物
电化学发光体
生物发光体系
• 北美荧火虫体内的荧光素/荧光素酶是 著名的生物化学发光体系,它由虫荧光 素酶、虫荧光素[D-(-)-2-6’-羧基-2’苯 并噻唑-△2-噻唑啉-4-羧酸]、ATP、 Mg2+及O2所组成。虫荧光素酶在催 化时,首先与虫荧光素酰腺苷酸(由 Mg2+-ATP与虫荧光素复合而成)生成 复合物,然后该复合物放出质子,酶变 构导致虫荧光素氧化脱羧并发射光子。 另一生物发光体系是水母发光蛋白,它 不需要加入荧光素酶,只需加入Ca2+ 或Se2+便能通过分子内反应而发出 λmax为470 nm的蓝光。生物发光体系 的特点是发光效率、灵敏度、选择性 均非常高。
方法 10-18
优 点
缺 点
放射免疫 10-15
试剂成本低，灵敏度较 操作复杂，放射性污染， 高 有效期短
灵敏度低，适用于定性和 10-12 酶联免疫 试剂成本低，操作简单 线性范围 半定量测定 10-9 操作简单，成本较低， 105 化学发光 工作曲线随时间漂移 灵敏度较高，试剂较 稳定 104 发光 酶标 放免 荧光 操作复杂，发光时间短， 灵敏度较高，试剂较稳 103 时间分辨 试剂成本高，仪器维护 定 费用较高 102 操作复杂，试剂成本高， 电化学发 灵敏度较高，试剂较稳 仪器维护费用较高，有 光 定 酶标 荧光 放免 发光 本底干扰
其他无机氧化剂的化学发光体系
• 近年来，一些科学家就一些无机氧化 剂直接氧化一些物质产生化学发光的 化学发光新体系,如高锰酸钾、铈(Ⅳ)、 过氧化氢、高碘酸钾、次氯酸盐和铁 氰化钾等在药物分析方面的应用展开 了研究，并取得了一定的成果。
优点：避免对人体的放射性伤害,环 境的污染 酶标记物较稳定,半衰期可 超过1年. 酶免疫反应通常不需要温 育，不需将与抗体结合的标记药物 同游离的标记药物分开,. 产生的信号 用普通的可见一紫外分光光度计就 可测定,不需昂贵的仪器没备。 缺点：标记酶不像同位素标记物,荧 光标记物那样能直接产生信号,而必 须要何其它试剂,如酶底物,辅酶的参 与,才能完成酶反应,引起吸收光谱等 变化后方可进行测定.
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免疫扩散
免疫电泳
胶体金免疫技术 发光免疫技术(CLIA) 铁蛋白免疫技术 荧光免疫技术(FIA) 放射免疫分析 RIA ） 放射免疫分析（ 酶免疫分析 EIA） 酶免疫分析（
免疫分析标记技术
• 免疫分析标记技术是指以抗原抗体 间的特异性反应为基础,研究标记 以各种标记物(定量信号)来对某种 物质进行定性或定量检测的研究。
• 免疫分析法通过对半抗原或抗体 进行标记，利用标记物的生物或 物理或化学放大作用来进行工作， 它集测定的高灵敏性和抗体反应 的强特异性于一体。 • 优点：操作简单、快速、灵敏度 高、特异性强、价廉、样品所需 量少
免 疫 分 析 方 法
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标 记 免 疫 分 析 技 术
非 标 记 免 疫 分 析 技 术
• 至2007年，应用于免疫分析检测 中的各种标记技术:放射物标记、 酶标记、发光标记、荧光标记、金 标记和超顺磁粒子标记等
放射免疫分析
• 放射免疫分析是以放射性同位素为示踪物, 与免疫反应相结合的一种分析方法, 提供 的检测信号是不断发出的放射线。 • 常用来标记的放射性同位素有3H、14C、 25 N、121I、125I等。 • 优点：准确灵敏、特异性强, 仪器试剂价 格低廉、技术成熟。 • 缺点：药盒的使用寿命短,批间、批内变 异较大，难进行自动化分析。
免疫是机体识别和排除进人体 内的抗原性异物的保护性应答反应。
免疫分析法是生物酶技术、荧光光 谱技术、辐射技术、免疫分析技术 应用于分析领域的一门新技术，是 基于抗原和抗体之间的特异性识别 和结合反应为基础的一种微量分析 方法。
免疫分析法起始于本世纪50 年 代, 首先应用于体液大分子物质的分 析, 1960 美国学者Yalow 和Berso n 等将放射性同位素示技术和免疫反 应结合起来测定糖尿病人血浆胰岛 素浓度, 开创了放射免疫分析方法的 先河。同年,Oliv er 将地高辛同牛血 清白蛋白结合, 使之成为人工抗原, 免疫动物后成功获得了抗地高辛抗 体, 从而开辟了用免疫分析和化学发 光分析2个系统。免疫分析系统是将化学发 光物质或酶作为标记物,直接标记在抗原或 抗体上,经过抗原与抗体反应形成抗原-抗体 免疫复合物。化学发光分析系统是在免疫 反应结束后,加入氧化剂或酶的发光底物,化 学发光物质在碱性介质中经氧化剂的氧化 时释放大量自由能, 产生激发态的中间体， 该激发态的中间体由最低振动能级回到稳 定的基态， 各个振动能级时产生辐射，同 时产生能量，多余的能量即为发射光子， 从而产生发光现象。发光强度可以利用发 光信号测量仪器进行检测、分析接收光量 子的产量，根据化学发光标记物与发光强 度的关系,可利用标准曲线计算出被测物的 含量。
化学发光免疫分析法
• 化学发光免疫分析是将高灵敏度的化 学发光测定技术与高特异性的免疫反 应相结合, 借以检测抗原或抗体的分析 技术。它兼有发光分析的高灵敏度和 免疫反应的特异性。 • 优点：灵明度高，线性范围宽，光信 号持续时间长，分析方法简便快速， 结果稳定、误差小，安全性好，使用 周期长。
灵敏度(mol/L)
酶免疫分析方法
• 酶免疫分析是一种非放射性标记免疫 分析技术,以酶标记抗原或抗体作为示 踪物, 由高活性的酶催化底物显色或发 光, 达到定量分析的目的。
• 到目前为止, 酶标记法所用的酶大多是 辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、酸性 磷酸酶、葡萄糖氧化酶等。酶通过与 自己的特殊作用底物反应, 而产生典型 的有色沉淀物。
荧光免疫分析法
• 荧光免疫分析法是以荧光物质标记 抗原或抗体, 形成的标记物发生免 疫反应后, 引起荧光强度发生变化, 从而达到定量分析的目的。
• 目前为止认为比较满意标记物的有: 异硫氰酸荧光素( FITC )、二氯三 嗪氨基荧光素( DTAP)、四乙基罗 丹明( RB200)和四甲基异硫氰酸罗 丹明( TMR ITC ) 。