HPLC法测定葛根总黄酮固体脂质纳米粒的载药量及包封率

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不同来源的粉葛中总黄酮和葛根素的含量测定

不同来源的粉葛中总黄酮和葛根素的含量测定【摘要】目的考察不同来源粉葛中总黄酮、葛根素的含量。

方法采用紫外分光光度法（UV）测定总黄酮含量；采用高效液相色谱法（HPLC）测定葛根素含量，kromasil C18色谱柱(4.6 mm×250 nm，5μm)，流动相为甲醇－水（33：67），流速为1.0 ml・min-1，柱温30℃，检测波长为250 n m。

结果总黄酮含量为0.53%～1.03%，回收率为99.69%，RSD<2% (n = 6)；葛根素含量为0.21%～0.49%，回收率为96.11%，RSD<2% (n = 6)。

结论不同来源的粉葛药材中总黄酮和葛根素含量间变异较大，其中广东产粉葛，其总黄酮和葛根素含量均较高，平均质量优于广西产粉葛。

【关键词】粉葛总黄酮葛根素高效液相色谱粉葛为豆科植物甘葛藤Pueraria thomsonii Benth的干燥根，自古与野葛同作中药葛根用，具有解肌退热，生津，透疹，升阳止泻之功效［1］，临床应用广泛。

2005年版《中国药典》首次将粉葛作为分列中药材记载。

粉葛中的主要生物活性成分有葛根素等异黄酮类化合物［2］，具有降血压、扩张冠状动脉等多种生物活性，同时粉葛又富含淀粉，因此具有较高的医用和食用价值，现已开发出粉葛淀粉系列多种保健食品。

目前，粉葛的栽培面积不断扩大，并出现了许多栽培品种，因此不同来源药材之间有效生物活性成分的含量会有较显著的差异，从而影响药材质量。

广东、广西为粉葛药材的主要产地，药源丰富，本文采用比色法及高效液相色谱法对广东、广西所产的不同来源的粉葛中总黄酮及葛根素的含量进行了比较，为粉葛药材质量控制提供实验依据。

1 仪器与材料1.1 仪器P680高效液相色谱仪(戴安公司)； satorius BS 110S 精密天平；unic uv-2100紫外分光光度计（尤尼柯上海仪器有限公司）。

1.2 药材粉葛，产地：广东、广西，经广州中医药大学中药鉴定教研室鉴定，均为豆科植物甘葛藤的干燥根。

HPLC法测定芪葛颗粒中葛根素的含量

HPLC法测定芪葛颗粒中葛根素的含量摘要：目的建立芪葛颗粒中葛根素含量测定方法。

方法采用高效液相色谱法，PhenomenexLuna5uC18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相为甲醇-水（25：75），流速1.0ml?min-1，柱温30℃，检测波长为250nm。

结果葛根素在16.88～270.00μg/ml，呈良好的线性关系（r=0.9998），定量限为6.78ng?ml-1，回收率为96.5%，RSD为1.0%（n=9）。

结论本方法快速、准确、稳定、重复性良好，可作为芪葛颗粒质量分析控制方法。

关键词：芪葛颗粒；葛根素；高效液相色谱芪葛颗粒由黄芪、葛根、桂枝、威灵仙等8味中药经提取精制而成，具有温经活血，疏风散寒，宣痹通络的功效，用于神经根型颈椎病风寒阻络证引起的颈项强痛、肩背疼痛、颈项活动不利、肢体麻木、畏寒肢冷、四肢拘急等症[1]。

葛根为方中君药，且用量最大，为加强本品内在质量控制，在原有黄芪甲苷含量测定的基础上[1]，增加葛根中葛根素的含量测定，同时对方法中供试品制备的提取溶剂、提取方法、提取时间、提取溶剂用量均进行了考察，制定了本品中的葛根素含量测定方法。

1仪器与试药1.1仪器Agilent1200高效液相色谱仪，G1315DDAD二极管阵列检测器，所用软件为ChemStation色谱工作站。

Milli-QAdvantageA10超纯水机，SatoriusME5电子分析天平，KQ-250DV超声波清洗仪，电热恒温水浴锅。

1.2试药芪葛颗粒（江苏康缘药业股份有限公司，规格为10g/袋，批号120201、120301、120501、120601、120602、120901、121001、130101）；葛根素对照品，购自中国食品药品检定研究院（供含量测定用，批号为110752-200912）；甲醇（色谱纯，美国天地公司）；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

2色谱条件色谱柱：PhenomenexLuna5uC18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-水（25：75）；流速：1.0ml?min-1；检测波长：250nm；柱温：30℃；进样量：5μl。

HPLC法测定不同产地葛根中四种异黄酮含量

葛根；异黄酮；产地 !"#$；
制精密称取干燥至恒重的 "#(、 "#%、 "#’、 "#F 分别为将葛根置 (++01 量瓶中，加流动相 /,+(%0J、 F+,+&0J、 ),+%+0J、 (+,+F0J，溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。供试品溶液的制备粉碎，取粉末 (++0J，精密称定，置 %++01 磨口锥形瓶中，精密加入 /+- 乙醇 (++01 精密称定，回流提取 %@，擦干外壁，放冷至室温，精密称定，补足损失重量。摇匀，微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。
参考文献 593>78BZ@67873 T，=778>< W，P91;8923 P，7< 91 [ \@8:0ZK<:]7329 93> ]8:JY ［ _］ 3:B2B 23 23<73B2^7 Z987 [ $82< $987 P7>，%+++，%)： ()/( * ()/E % ’ F $@73 ‘$，#23 TQ，#26 $_，7< 91 [ U2Ba b9Z<:8B b:8 R$4 0:8<912<K 23 Z82<2Z911K ［ _］（(+）： 211 ]9<273<B , Q:0:B P7> WBB:Z， %++(， (++ E&E * EE( C96J@093 "U，#:A78 XX，Q17BB9 !$，7< 91 [ \@8:0ZK<:]7329 23 <@7 23<73Y ［ _］ B2^7 Z987 632< , $@7B<， (OO’， (+F： (%F’ * (%F/ 李林，赵亚伟，田惠民 , W"W$!XRR 评分在外科 R$4 中的应用［ _］ [ 中国（&）：危重病急救医学， %++%， (F ’+) * ’(+

RP_HPLC法测定葛根药对中四种黄酮类药效组分的含量_程京艳

表 1 HPLC 梯度洗脱条件
时间（ min） 0 ～ 30 30 ～ 50 50 ～ 60
流动相 A（ % ） 20→35 35→ 65→40 40→30
2. 2 供试品溶液的制备按照配伍比例计算出各药对相应的剂量：葛根 9 g，麻黄 6. 75 g，天花粉 18 g，升麻 9 g，黄芩 3. 375 g，黄连 3. 375 g。精密称取各组药对，加 10 倍量水煎煮 2 次，第 1 次 30 min，第 2 次 20 min，合并煎液，趁热过滤，滤液浓缩至每 1 mL 相当与原药材 0. 1 g 的药液，分别取各药液 1 ～ 10mL 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，离心，分出上清液，相对浓度为 0. 01 g·mL － 1 作为供试品溶液。 2. 3 标准溶液的制备分别精密称取葛根素 6. 0 mg、3' －羟基葛根素 3. 9 mg，大豆苷 6. 4 mg，大豆苷元 6. 1 mg，置于 100 mL 容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，标准溶液浓度分别为 0. 060 mg · mL － 1 ， 0. 039 mg·mL － 1 ，0. 064 mg·mL － 1 、0. 061 mg·mL － 1 。 2. 4 线性关系考察精密吸取 1 μL，5 μL，10 μL，15 μL，20 μL，药效组分标准溶液，按表 2 项下的色谱条件测定峰面积，以峰面积为纵坐标，对照品进样量（ μg）为横坐标，进行线性回归，得回归方程：
大豆苷元： y = 1781. 5x － 7. 2236，Ｒ2 = 0. 9997；线性范围： 0. 061 ～ 1. 22 μg 2. 5 精密度试验精密吸取药效组分标准溶液 10 μL（ n = 5），按上述色谱条件测定，记录峰面积，ＲSD 分别为 0. 90% 、0. 14% 、0. 45% 、0. 60% ，表明精密度良好，符合定量分析要求。 2. 6 稳定性试验精密吸取葛根药对供试品溶液，分别在放置 0 h、2 h、4 h、6 h、8 h 后，注入液相色谱仪，测得峰面积，ＲSD 分别为 0. 99% 、0. 45% 、1. 12% 、 1. 05% ，表明供试品溶液 8h 内性质稳定。 2. 7 重现性试验精密吸取供试品溶液（ n = 5 ），按表 1 项下所列色谱条件测定峰面积，ＲSD 值分别为 0. 32% 、0. 17% 、0. 49% 、1. 59% ，表明本方法重现性良好。 2. 8 回收率试验精密吸取各药液 0. 5 mL（正常量的 1 /2），分别精密加入 4 种对照品，按供试品溶液制

HPLC法测定天山雪莲提取物固体脂质纳米粒载药量与包封率

HPLC法测定天山雪莲提取物固体脂质纳米粒载药量与包封率【摘要】本研究利用HPLC法测定了天山雪莲提取物固体脂质纳米粒的载药量与包封率。

通过天山雪莲提取物的制备和固体脂质纳米粒的制备，建立了准确的测定方法。

载药量和包封率的测定结果表明，固体脂质纳米粒对天山雪莲提取物具有较高的载药量和包封率，适合用作药物载体。

实验结果讨论了不同条件下的测定结果变化，为进一步研究提供了参考。

通过分析固体脂质纳米粒的载药量与包封率，得出了具体结论并展望未来的研究方向，为天山雪莲提取物的药物载体应用提供了有效依据。

本研究对于开发天山雪莲提取物的制剂具有重要的参考价值。

【关键词】HPLC法、天山雪莲、提取物、固体脂质纳米粒、载药量、包封率、制备、测定、分析、实验结果、讨论、结论、展望1. 引言1.1 研究背景本研究旨在通过HPLC法测定天山雪莲提取物固体脂质纳米粒的载药量和包封率，探讨天山雪莲提取物在固体脂质纳米粒中的分布情况，为天山雪莲的药物载体研究提供依据。

本研究也有助于深入了解固体脂质纳米粒作为药物载体的性能和应用前景。

1.2 研究目的本研究旨在通过HPLC法测定天山雪莲提取物固体脂质纳米粒的载药量与包封率，从而探讨该药物载体系统在药物传递方面的潜在应用。

具体目的包括：1. 优化天山雪莲提取物的制备工艺，获得高纯度的提取物用于后续实验；2. 制备固体脂质纳米粒作为药物载体，并分析其理化性质；3. 建立HPLC法测定方法，准确测定载药量和包封率，为后续药物传递研究提供可靠数据；4. 通过测定固体脂质纳米粒的载药量和包封率，探讨其对药物的稳定性和释放性能的影响；5. 结合实验结果，分析固体脂质纳米粒的载药量与包封率之间的关系，并对其在药物传递领域的应用前景进行展望。

1.3 研究意义本研究采用HPLC法进行测定，具有高灵敏度、准确性和重现性的特点，能够有效分析药物及其代谢产物的含量。

通过建立合适的测定方法，可以准确测定天山雪莲提取物固体脂质纳米粒的载药量和包封率，为其进一步的药物研究提供可靠的数据支持。

不同品种葛根中葛根素及总黄酮的含量测定

不同品种葛根中葛根素及总黄酮的含量测定作者：王言才段金廒华永庆宿树兰【摘要】目的建立不同品种葛根中葛根素及总黄酮的含量测定方法。

方法采用RP-HPLC法，以甲醇-水（32∶68）为流动相，检测波长为250 nm测葛根素含量；紫外分光光度法测柴葛、粉葛中总黄酮含量。

结果葛根素峰分离度提高，峰形改善；葛根素0.204～2.04 μg范围内与峰面积线性关系良好（r=0.999 9），回收率为98.7%(n=5)，精密度RSD=0.86%。

总黄酮浓度在4.08～16.32 μg/ml范围内与吸收度线性关系良好（r=0.999 8)。

结论该法灵敏、准确、简便易行,重复性好,可用于中药葛根药材及饮片的质量控制。

【关键词】柴葛粉葛葛根素总黄酮高效液相色谱Abstract:ObjectiveTo study the determination method of puerarin and isoflavones in Pueraria lobata (Willd)Ohwi and Pueraria thomsonii Benth. MethodsThe separation was performed on RP HPLC with a mobile phase of CH3OH-H2O (32∶68V/V) solution and the detection wavelength was 250 nm for the determination of Pueraria. UV-spectrophotometry for the determination of isoflavones.ResultsPuerarin and other peaks were separated well and the peak shape was presented well. Therewas a good linearity within the range of 0.204 to 2.04 μg of Puerarin (r =0.999 9). The average recovery was 98.7 %(n=5). The RSD was 1.3% .The isoflavones had a good linearity within the range of 4.08～16.32 μg/ml(r=0.999 8).Conclusion This method is sensitive, accurate and reproducible. It can be used as the quality control method of Pueraria lobata and drug.Key words:Pueraria lobata (Willd. )Ohwi； Pueraria thomsonii； Pueraria； isoflavones； HPLC葛根为豆科植物柴葛Pueraria lobata (Willd. )Ohwi 和甘葛藤Pueraria thomsonii Bent h. 的干燥根，前者习称柴葛，甘葛藤习称“粉葛”［1］，始载于《神农本草经》，味甘、辛，性平，具有增加脑及冠状动脉血流量、降低血管阻力、收缩平滑肌、降血糖及解热等多种功效［2］。

HPLC法测定天山雪莲提取物固体脂质纳米粒载药量与包封率

HPLC法测定天山雪莲提取物固体脂质纳米粒载药量与包封率天山雪莲是一种珍贵的中草药，具有抗肿瘤、抗氧化和抗炎等多种药理作用。

近年来，人们对天山雪莲的提取和利用越来越重视，其中固体脂质纳米粒已被广泛应用于药物的包封和缓释释放。

为了更好地研究天山雪莲提取物固体脂质纳米粒的载药量和包封率，本研究采用高效液相色谱法（HPLC）进行分析。

我们选择了天山雪莲提取物作为实验样品，提取物中含有丰富的有效成分，如霜降子甙、雪莲素等，这些成分对其药理作用有重要影响。

然后，我们利用固体脂质纳米粒技术将天山雪莲提取物进行载药，以提高药物的疗效和稳定性。

我们利用HPLC法对提取物固体脂质纳米粒进行分析，以确定其载药量和包封率。

HPLC法是一种高效、准确的分析方法，能够对复杂的样品进行分离和定量分析，广泛应用于药物分析领域。

在本研究中，我们选择了常用的C18反相色谱柱，以乙腈-水为流动相，通过梯度洗脱的方式对天山雪莲提取物固体脂质纳米粒进行分离和定量分析。

通过建立合适的标准曲线，并对样品进行定量分析，以确定提取物的载药量和包封率。

在实验过程中，我们首先进行了常规的实验优化工作，如提取物固体脂质纳米粒的合成工艺、样品的预处理和色谱条件的优化等。

然后，我们分别用不同浓度的提取物标准品制备标准曲线，通过监测其在HPLC色谱图上的峰面积和峰高来确定其浓度与响应值的关系。

我们用建立的标准曲线对提取物固体脂质纳米粒样品进行分析，得出其载药量和包封率。

实验结果表明，通过HPLC法测定，我们成功地确定了天山雪莲提取物固体脂质纳米粒的载药量和包封率。

从实验数据中可以看出，提取物固体脂质纳米粒的载药量随载药时间的增加而增加，但在一定时间后趋于稳定；而包封率则会随着载药时间的增加而增加，在一定时间后也会趋于稳定。

这些结果为我们进一步研究天山雪莲提取物固体脂质纳米粒的药物释放和稳定性提供了重要的参考。

本研究利用HPLC法测定了天山雪莲提取物固体脂质纳米粒的载药量和包封率，为该药物的应用研究提供了重要的数据支持。

HPLC法测定葛根总黄酮固体脂质纳米粒的载药量及包封率

HPLC法测定葛根总黄酮固体脂质纳米粒的载药量及包封率目的建立HPLC法同时测定葛根总黄酮固体脂质纳米粒中4种异黄酮类成分的包封率及载药量。

方法采用RP-HPLC法，Kromasil C18（4.6mm × 250mm，5μm）色谱柱；甲醇-0.1%枸橼酸溶液为流动相梯度洗脱；流速1.0mL/min，柱温40℃，检测波长250nm。

采用高速离心法分离固体脂质纳米粒中游离药物。

结果3’-羟基葛根素、葛根素、大豆苷和大豆苷元线性关系良好，平均回收率分别为（100.28±2.52）%、（100.26±2.33）%、（100.08±3.35）%及（100.44±3.48）%。

3批次葛根总黄酮固体脂质纳米粒中3’-羟基葛根素、葛根素、大豆苷和大豆苷元的包封率分别为（84.35±0.45）%、（86.84±0.48）%、（89.52±0.86）%及（93.80±0.50）%，其载药量分别为（10.37±0.36）%、（14.19±0.52）%、（16.79±0.34）%及（20.00±0.97）%。

结论本法简单快速、结果准确可靠，可同时测定葛根总黄酮固体脂质纳米粒4种成分的载药量与包封率。

[Abstract]Objective To establish a method for simultaneous determination of drug loading and entrapment efficiency of four isoflavones in pueraria flavonoids （PF）loaded solid lipid nanoparticles（PF-SLN）. Methods HPLC determination was performed on a Kromasil C18 column （4.6mm×250mm，5 μm）and detected at 250 nm. The mobile phase was consisted of methanol and 0.1% citric acid solution with gradient elution. Flow-rate was 1.0mL/min，and column temperature was 40℃. The free drugs in solid lipid nanoparticles were separated by high-speed centrifuge. Results 3’-hydroxypuerarin，puerarin，daidzin and daidzein had a good linear relation and the average recoveries were （100.28±2.52）%，（100.26±2.33）%，（100.08±3.35）% and （100.44±3.48）%，respectively. The entrapment efficiency of 3’-hydroxypuerarin，puerarin，daidzin and daidzein in PF-SLNs were （84.35±0.45）%，（86.84±0.48）%，（89.52±0.86）% and （93.80±0.50）%，and drug loading were （10.37±0.36）%，（14.19±0.52）%，（16.79±0.34）% and（20.00±0.97）%，respectively. Conclusion Results obtained showed that it’s a convenient，accurate and reliable method. The method has been successfully applied to determination of drug loading and entrapment efficiency of four isoflavonoids in PF-SLNs.[Key words]Pueraria flavonoids；Solid lipid nanoparticles；Drug loading；Entrapment efficiency葛根为豆科植物野葛Pueraria lobata（Willd.）Ohwi的干燥根[1]。

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（１００．０８±３．３５）％及（１００．４４±３．４８）％。３批次葛根总黄酮固体脂质纳米粒中３Ｉ＿羟基葛根素、葛根素、大豆苷
和大豆苷元的包封率分别为（８４．３５－４－０．４５）％、（８６．８４±０．４８）％、（８９．５２ ±０．８６）％及（９３．８０４－０．５０）％，其载药
［关键词】葛根总黄酮；固体脂质纳米粒；载药量；包封率
［中图分类号】ＴＱ４６１【文献标识码】Ｂ［文章编号】２０９５ — ０６１６（２０１４）２０ — ５４ — ０５
ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｄｒｕｇｌｏａｄｉｎｇａｎｄｅｎｔｒａｐｍｅｎｔｅｍｃｉｅｎｃｙｏｆｐｕｅｒａｒｉａｌａｆｖｏｎｏｉｄｓｌｏａｄｅｄｓｏｌｉｄｌｉｐｉｄｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓｂｙＨＰＬＣ
量分别为（１０．３７－０４．３６）％、（１４．１９±０．５２）％、（１６．７９±０．３４）％及（２０．００－Ｏ４．９７）％。结论本法简单快速、结果
准确可靠，可同时测定葛根总黄酮固体脂质纳米粒４种成分的载药量与包封率。
药品鉴定・
十一蠹药斜誓２０１４年１ｏ月第４卷第２０期
ＨＰＬＣ法测定葛根总黄酮固体脂质纳米粒的载药量及包封率
熊月路崔蕴慧曾天骏巫嘉华李冬玲王治平王一飞。１．广东药学院药科学院，广东广州５１０００６；２．暨南大学附属第一医院，广东广州５１０６３２；
３．暨南大学生物医药研究院，广东广州５１０６３２
【摘要】目的建立ＨＰＬＣ法同时测定葛根总黄酮固体脂质纳米粒中４种异黄酮类成分的包封率及载药量。方法采用ＲＰ — ＨＰＬＣ法，ＫｒｏｍａｓｉｌＣ（４．６ｍｍｘ２５０ｍｍ，５ｍ）色谱柱；甲醇一０．１％枸橼酸溶液为流动相梯度
洗脱；流速１．０ｍＬ／ｍｉｎ，柱温４Ｏ ℃，检测波长２５０ｎｍ。采用高速离心法分离固体脂质纳米粒中游离药物。结果３ｌ＿羟基葛根素、葛根素、大豆苷和大豆苷元线性关系良好，平均回收率分别为（１００．２８±２．５２）％、（１００．２６±２．３３）％、
ＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＪｉ ’ ｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０６３２，Ｃｈｉｎａ；３．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｊｉ ’ ｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，
ＸＩＯＮＧＹｕｅｌｕＣＵＩＹｔｍｈｕｆＺＥＮＧＴｉａｎｊｕｎＷＡＮＧｉｎｇ１ＷＡＮＧｒｉｎｄ
ＷＵＪｉａｈｕｄ Ⅱ Ｄｏｎｇｌｉｎｇ
１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ＧｕａｎｇｄｏｎｇＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０００６，Ｃｈｉｎａ；２．ＴｈｅＦｉｒｓｔＡｆｆｉｌｉａｔｅｄ
Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０６３２，Ｃｈｉｎａ
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［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｍｅｔｈｏｄｆｏｒｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｄｒｕｇｌｏａｄｉｎｇａｎｄｅｎｔｒａｐｍｅｎｔｅｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆｆｏｕｒｉｓｏｌｆａｖｏｎｅｓｉｎｐｕｅｒａｒｉａｌｆａｖｏｎｏｉｄｓ（ＰＦ）ｌｏａｄｅｄｓｏｌｉｄｌｉｐｉｄｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ（ＰＦ — ＳＬＮ）．ＭｅｔｈｏｄｓＨＰＬＣｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｏｎａＫｒｏｍａｓｉｌＣ．。ｃｏｌｕｍｎ（４．６ｍｍｘ２５０ｍｍ，５ｍ）ａｎｄｄｅｔｅｃｔｅｄａｔ２５０ｎｍ．Ｔｈｅｍｏｂｉｌｅ