密度离心法(精)
密度梯度离心法的原理解析
密度梯度离心法的原理解析密度梯度离心法是一种广泛应用于生物化学、分子生物学和医学领域的实验技术，用于分离和纯化生物大分子、细胞和次细胞结构。
该方法基于样品中不同组分的密度差异，利用离心力和密度梯度分离的原理来实现。
密度梯度离心法的原理可以简单概括为以下几个步骤：1. 密度梯度制备：制备一个由多个密度层构成的梯度液体。
这些密度层是根据密度逐渐增加或减少排列的，通常由离心管或离心管中的夹层形成。
常用的密度梯度制备物质包括蔗糖、葡萄糖或碘化物等。
2. 样品处理：将待分离的样品加入到密度梯度中。
样品可以是生物大分子如蛋白质、核酸或多肽，也可以是细胞或次细胞结构如细胞核或线粒体等。
3. 离心分离：通过高速离心设备，施加离心力将密度梯度中的样品分离。
离心过程中，样品中的各个组分受到的离心力不同，根据其密度的差异在密度梯度中上下移动。
离心力越大，移动距离越远。
4. 提取和分析：离心分离后，不同密度层中的组分被提取出来，然后进一步进行分析。
这可以是采用分光光度法、蛋白质电泳、质谱分析或核酸杂交等技术。
通过分析不同密度层中的组分，可以获取样品中各种生物大分子或细胞结构的纯度和数量信息。
密度梯度离心法的优点是可以实现高分辨率和高效率的分离和纯化。
这是因为，不同密度的组分在离心力的作用下可以根据其密度差异均匀地分布在梯度液体中，从而实现准确分离。
该方法对样品体积和细胞大小没有特别严格的要求，适用于分离和研究多种不同类型的生物样品。
密度梯度离心法还可以用于研究细胞功能和结构的多个方面。
它可以用于分离不同亚细胞器如线粒体、内质网和高尔基体等，进一步研究它们的功能和组成。
该方法还可用于分离和纯化蛋白质复合物、染色体和病毒等，为进一步研究它们的生理和生化特性提供有力的工具。
总结和回顾上述内容，密度梯度离心法是一种基于样品中不同组分密度差异的分离和纯化技术。
它可以通过制备密度梯度、施加离心力和分析不同密度层中的组分来实现。
该方法具有高分辨率、高效率和广泛适用性的优点，可用于研究多种生物样品的分离和纯化，以及细胞和亚细胞结构的功能和组成研究。
密度梯度离心法联合上游法处理精液对精子功能的影响
密度梯度离心法联合上游法处理精液对精子功能的影响1. 引言1.1 研究背景精子功能是影响生育成功的关键因素之一，而精液处理对精子功能的影响直接影响着人类繁衍的可能性。
密度梯度离心法和上游法是目前常用的精液处理方法，它们在精子分离和净化中发挥着重要作用。
密度梯度离心法通过不同浓度的离心液将精子分离，可以去除掉不活跃的精子和其他杂质，提高有效精子的纯度和活力。
而上游法则可以帮助去除掉精液中的颗粒和细胞碎片，净化精液。
仅仅使用其中一种方法来处理精液可能无法达到最佳效果。
密度梯度离心法联合上游法处理精液成为了一个研究的焦点。
研究人员希1.2 研究目的研究的目的是探讨密度梯度离心法联合上游法处理精液对精子功能的影响机制，为优化辅助生殖技术中的精子处理流程提供理论依据。
通过比较不同处理方法对精子形态、活力、浓度等指标的影响，分析精子功能受到影响的原因，为提高精子质量和生殖成功率提供参考。
本研究还旨在探讨密度梯度离心法与上游法联合应用在精子处理中的优势，为临床操作提供更具操作性和效果更优的处理方案。
通过深入研究精子的功能变化，为精子质量评估和处理提供更加科学的方法和标准，为解决精子质量下降导致的生育问题提供新的解决方案。
通过本研究的开展，可以为辅助生殖技术领域的发展和进步做出一定的贡献。
2. 正文2.1 密度梯度离心法在精子分离中的应用密度梯度离心法是一种常用的精子分离技术，通过调控不同密度的离心液，在离心过程中将不同密度的精子分离出来。
这种方法可以有效地分离出高质量的精子，提高精子的纯度和活力，适用于临床辅助生殖技术中的精子筛选和提取。
密度梯度离心法在精子分离中的应用具有操作简便、效果稳定和成本较低的优点，逐渐成为临床上首选的精子分离技术。
随着科技的不断进步和技术的不断优化，密度梯度离心法在精子筛选和提取中的应用前景将更加广阔，为生殖医学领域带来更多的发展机遇。
2.2 上游法在精液处理中的作用上游法是一种常见的精液处理方法，主要作用是对精液进行初步的处理和净化。
(整理)密度梯度离心法 density gradient centrifugation method
密度梯度离心法density gradient centrifugation method〔1〕亦称平衡密度梯度离心法。
用超离心机对小分子物质溶液，长时间加一个离心力场达到沉降平衡，在沉降池内从液面到底部出现一定的密度梯度。
若在该溶液里加入少量大分子溶液，则溶液内比溶剂密度大的部分就产生大分子沉降，比溶剂密度小的部分就会上浮，最后在重力和浮力平衡的位置，集聚形成大分子带状物。
利用这种现象，测定核酸或蛋白质等的浮游密度，或根据其差别进行分析的一种沉降平衡法。
自1958年米西尔逊（M．Meselson），斯塔尔（F．W．Stahl），维诺格拉德（J．Vinograd）成功地分离了〔15N〕DNA和〔14N〕DNA以来，该法取得许多成果。
为得到必要的浓度梯度，多采用浓氯化铯溶液，所以有时也使用氯化铯浓度梯度离心法这个名称，还可采用氯化铷、溴化铯等溶液。
通常利用分析超离心机，但在将细胞颗粒成分进行分离等以纯化为目的的情况，利用密度差，使用分离超离心机，采用预先制备好的蔗糖等的密度梯度。
〔2〕采用蔗糖等一些小分子溶液，预先在分离超离心机的样品地内制备出密度梯度，在其上面再加上一层少量的大分子溶液后，离心，大分子就形成层状而沉降。
若含有沉降系数不同的许多成分，就会出现许多层。
这种情况采用适当的编排号码，取出样品池内的溶液，然后进行研究。
这是与〔1〕不同的一种沉降速度法，除了以相同的目的被用于通常的沉降速度法外，在能取出分离物这点上是有优越性的。
因多采用蔗糖密度梯度，所以亦称为蔗糖密度梯度离心法。
按同样原理，也可使用分析超离心机进行测定。
方法2：纯化病毒常用的方法是蔗糖密度梯度离心法，能得到比较纯的病毒。
其过程如下：1、将收集的组织或脏器或其他,用玻璃匀浆器充分研磨后制成悬液,经反复冻融3 次后,置- 20 ℃冰箱中,备用。
2、先以5000g离心15分钟后，获取上清夜，然后再20000g高速离心30分钟后取上清夜。
(整理)密度梯度离心法densitygradientcentrifugationmethod.
密度梯度离心法density gradient centrifugation method，为得到必要的浓度梯度，可采用浓氯化铯溶液，也可以采用蔗糖等一些小分子溶液，预先在分离超离心机的样品地内制备出密度梯度，在其上面再加上一层少量的大分子溶液后，离心，大分子就形成层状而沉降。
不连续密度蔗糖梯度离心液一般可以采用优级纯的蔗糖用超纯水配制成百分比浓度分别为16.1%、37.4%、45%的蔗糖溶液，从离心管底部逐层向上铺设。
也有用8层Feicoll梯度离心,即在14mL离心管中由下至上从84％到35％Feicoll液，按7％递减，各加1．0mL，形成7层Feicoll 梯度。
连续密度蔗糖梯度离心液则需要用专用仪器配制。
密度梯度离心又称速率—区带离心,沉降系数较接近的物质分离的方法；原理：不同颗粒之间存在沉降系数差时，在一定离心力作用下，颗粒各自以一定速度沉降，在密度梯度不同区域上形成区带的方法。
介质梯度应预先形成，介质的最大密度要小于所有样品颗粒的密度。
常用的有蔗糖、甘油；密度梯度液的制备用梯度混合器，形成由管口到管底逐步升高的密度梯度；操作：离心前将样品小心铺放在密度梯度溶液表面，离心形成区带。
离心后不同大小、不同形状、有一定沉降系数差异的颗粒在密度梯度液中形成若干条界面清楚的不连续区带；可用来分离核酸、蛋白质、核糖体亚基及其它成分〔1〕亦称平衡密度梯度离心法。
用超离心机对小分子物质溶液，长时间加一个离心力场达到沉降平衡，在沉降池内从液面到底部出现一定的密度梯度。
若在该溶液里加入少量大分子溶液，则溶液内比溶剂密度大的部分就产生大分子沉降，比溶剂密度小的部分就会上浮，最后在重力和浮力平衡的位置，集聚形成大分子带状物。
利用这种现象，测定核酸或蛋白质等的浮游密度，或根据其差别进行分析的一种沉降平衡法。
自1958年米西尔逊（M．Meselson），斯塔尔（F．W．Stahl），维诺格拉德（J．Vinograd）成功地分离了〔15N〕DNA和〔14N〕DNA 以来，该法取得许多成果。
3种精子优化处理方法处理精液效果评价
3种精子优化处理方法处理精液效果评价目的:为了解上游法､Percoll梯度离心法､Isolate密度梯度离心法等精子优化处理方法处理精液的效果。
方法:选取120例女性原因引起继发不孕的夫妇,将男方的精液标本按处理方法不同随机分4组,即为上游组､Percoll组､Isolate组和对照组,应用指标精子密度､a+b级活力､正常形态率和绿色荧光精子百分率,对精液处理后的效果进行比较。
结果:上游组､Percoll组和Isolate组,富集的精子a+b 级活力､正常形态率､绿色荧光精子明显高于对照组(P＜0.01),Percoll组和Isolate 组的精子密度与对照组无明显差异(P> 0.05),但上游组的精子密度很明显低于对照组(P＜0.01);上游组､Percoll组及I sola te组之间比较,富集的精子a+b级活力､正常形态率没有明显差异(P>0.05),但精子回收Percoll密度梯度离心法和Isolate 密度梯度离心法明显高于上游法(P＜0.01),Isolat e密度梯度离心法富集绿色荧光精子最多,上游法次之,Percoll密度梯度离心法最低。
结论: Isolate密度梯度离心法处理精液效果较好。
标签：精子;优化;评价Evaluation on the effect of semen processed with three semen optimized methods/D ENG Jun-yao, ZHANG Chao hui, QIN Ying jian∥Laboratory of Reproductive MedicalCenter, Hospital of Guilin Women and Children, Guilin 541000, ChinaAbstract: Objective: To investigate the effect of semen processedwith Swim up m ethod,Percoll gradient centrifugation method, Isolate density gradient centrifug ation method. Methods: 120 cases of female seco ndary infertility in couples were investigated. The m ale’s semen specimens by th e different treatme nt method were randomly divided into four groups,they were Swim up group, Percol l group, Isolate group and the control group. The parameter s with semen conventional analysis and the percentage of green fluorescent spermwith AO Fluorescence staining were compared. Results: Swim up group, Percoll g roup and Isolat e group concentrated sperm with the a + b class dynamic, the rate of normal formand the rate of green fluorescent sperm were significantly higher than that ofthe con trol group(P＜0.01). The sperm density showed no obvious difference in Per coll group a nd Isolate group compared with the control group(P>0.05). However, the sper m de nsity of Swim up group was significantly lower than that of the control group( P＜0.01) ,the sperm a + b class dynamic and the rate of normal form showed no obvious di fferen ce between Swim up group and Percoll group and Isolate group(P>0.05). Ho weve r, the sperm density of Percoll group and Isolate group was significantly higherthan that ofSwim up group(P＜0.01). The rate of green fluorescent spermof Isolate gro up was the highest among Swim up group, Percoll group and Isolate group. Conclusion: T heeffect of semen processed with Isolate density gradient centrifugation method was better in three methods.Key words: sperm; optimization; evaluation精子优化处理是辅助生殖技术治疗中的常规步骤,目的是富集足够数量具有高活力､正常形态和正常功能的精子。
密度梯度离心法联合上游法处理精液对精子功能的影响
密度梯度离心法联合上游法处理精液对精子功能的影响精子功能是影响生育能力的重要因素之一，而精液质量的优劣直接影响着精子功能的表现。
近年来，随着辅助生殖技术的不断发展，越来越多的男性因为精子功能不佳而需要进行辅助生殖治疗。
对精液进行有效处理以提高精子功能，已成为辅助生殖技术的重要课题之一。
密度梯度离心法和上游法是两种常用的精液处理方法，它们在精子分选和精子富集过程中起到了至关重要的作用。
本文将探讨密度梯度离心法联合上游法处理精液对精子功能的影响。
一、密度梯度离心法的原理和作用密度梯度离心法是一种通过不同密度梯度物质分离精子的方法。
其基本原理是利用不同密度的离心液制成梯度，通过高速离心浓缩和分离精子，从而提高精子的纯度和活力。
常用的密度梯度离心液包括Percoll和Silane-coated silica particles等。
在离心过程中，较轻的正常精子会上浮到离心液上层，而形态异常和尾部异常的精子则会沉淀到离心液下层。
这样可以对精子进行有效分选和富集，提高精子的质量和活力。
上游法又称渗透法，是一种通过精子对离心液内成分的渗透选择作用来提高精子质量的方法。
上游法的原理是利用精子对离心液内渗透剂的渗透率不同，借此分选和富集精子。
常用的上游法渗透剂包括DMSO（二甲亚砜）、Glycerol（甘油）和Sodium citrate（柠檬酸钠）等。
通过上游法，可以有效选择出形态正常、活力高的精子，提高精子质量。
三、密度梯度离心法联合上游法的优势密度梯度离心法和上游法都是常用的精子处理方法，它们分别通过离心和渗透的方式对精子进行选择和富集。
而将两者结合起来使用，则可以发挥它们各自的优势，提高精子的分选效果。
密度梯度离心法可以有效分离出纯度较高的精子，而上游法则可以进一步提高精子的质量。
密度梯度离心法联合上游法处理精液可以更全面地提高精子功能。
四、对精子功能的影响通过密度梯度离心法联合上游法处理精液，可以对精子功能产生积极影响。
三种精液处理法对体外受精-胚胎移植后胚胎结局的影响对比
·论著·三种精液处理法对体外受精-胚胎移植后胚胎结局的影响对比张涤娟，阮 健，胡卫华（皖南医学院弋矶山医院生殖医学中心，安徽 芜湖 241000）[摘要]目的：比较用密度梯度离心法、上游法、先密度梯度离心后上游法处理精液对体外受精-胚胎移植后胚胎结局的影响。
方法：回顾性地分析在皖南医学院弋矶山医院生殖中心实施体外受精-胚胎移植的172例不孕症患者的临床资料。
在这些患者中，采用密度梯度离心法处理男方精液的患者有33例（A组），采用上游法处理男方精液的患者有74例（B组），采用先密度梯度离心后上游法处理男方精液的患者有65例（C组）。
使用经过处理的精液实施体外受精-胚胎移植后，比较三组患者卵子的正常受精率、正常卵裂率、优质胚胎率、可利用胚胎率、囊胚形成率、MⅡ卵受精率、卵子补救率和胚胎滞育率。
结果：三组患者卵子的正常受精率、正常卵裂率、优质胚胎率、可利用胚胎率、囊胚形成率相比，P＞0.05。
C组患者的MII卵受精率高于A组患者和B组患者，P＜0.05；其卵子补救率、胚胎滞育率均低于A组患者和B组患者，P＜0.05。
结论：在对不孕症患者实施体外受精-胚胎移植期间，与用密度梯度离心法、上游法处理男方精液相比，用先密度梯度离心后上游法处理男方精液，不但可以明显提高不孕症患者MⅡ卵的受精率，还可以增加其优质胚胎的数量，降低其卵子补救率和胚胎滞育率。
[关键词]密度梯度离心法；上游法；先密度梯度离心后上游法；体外受精-胚胎移植；胚胎结局；精液处理方法[中图分类号]R321 [文献标识码]A [文章编号]2095-7629-（2021）12-0001-02目前，不孕不育问题影响着8%～15%的育龄期夫妇。
越来越多的不孕症患者选择实施体外受精-胚胎移植。
男方的年龄及精子的总数、活动能力、形态及DNA的完整性可影响不孕症患者实施体外受精-胚胎移植的效果。
在对不孕症患者进行体外受精-胚胎移植的过程中，密度梯度离心法和上游法是两种处理精液的常用方法。
人类x和Y精子的分离密度梯度离心法
人类x和Y精子的分离密度梯度离心法(一)原理x、Y精子尽管由平衡沉淀作用获得的密度是相似的，但在分离介质中的沉降速度不等，x精子沉降速度比Y精子快；这样在一个由低到高的密度梯度中，通过适当的离心力作用下，经过一定时间离心，可在不同密度梯度中分离出富含x或Y精子的标本。
(二)试剂与器材(1)lOxEaI"le's液；(2)l×Earle's液；(3)：Percoll液；(4)Nycoprep(密度为1．15g／mL，渗透压为290mOsm／kg)；(5)14mL离心管。
(三)方法100％Percoll液制备：9份Percoll+1份10×．Earte's液+100IU／mL青霉素+1．89g ／L Nat_IC03，密度为1．11g／mL，渗透压280mOsm／kg。
在使用前一天，将100％Percoll液放在5％c02培养箱中平衡8～10 min，贮存于4cC冰箱；在使用当天，将100％Perc0儿液1000g离心10 min，以沉淀任何二氧化硅颗粒凝集物。
然后用l×Eaile's液将100％：Pel，coll液稀释成各种所需浓度。
(1)8层Percoll梯度离心法在14mL离心管中，由下至上从84％到35％Percoll液，按7％递减，各加1．0mL，形成7层：Pelcoll梯度；取1．OmL液化精液加入Percoll梯度的最上层，250g离心30 min，移去各层液体，沉淀层用1×Ealile's液(含10％胎儿脐带血清)洗涤，300g离心10 min，去上清，最后沉淀用适量Eat-le's液悬浮。
(2)8层Percoll+Nycoprep分离法在一支14mL离心管中先加入1．0mI．Nyco[Irep 液，然后在其上层依次加入各1．OmI．的100％～40％Percoll液共7层，最后，最上层再加入1．0mL的液化精液，250g离心25 min，移去各层液体，沉淀用1~2mLEal·le's 液洗涤，离心，去上清，沉淀再用适量Ear-le's液悬浮。
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密度离心法是样品在一定惰性梯度介质中进行离心沉淀或沉降平衡，在一定离心力下把颗粒分配到梯度中某些特定位置上，形成不同区带的分离方法。
该法的优点是：①分离效果好，可一次获得较纯颗粒；②适应范围广，既能分离具有沉淀系数差的颗粒，又能分离有一定浮力密度的颗粒；③颗粒不会积压变形，能保持颗粒活性，并防止已形成的区带由于对流而引起混合。
缺点：
① 离心时间较长；②需要制备梯
度；③操作严格，不宜掌握。
等密度离心法
1．原理
等密度离心法是在离心前预先配制介质的密度梯度，此种密度梯度液包含了被分离样品中所有粒子的密度，待分离的样品铺在梯度液或和梯度液先混合，离心开始后，当梯度液由于离心力的作用逐渐形成底浓而管顶稀的密度梯度，与此同时原来分布均匀粒子也发生重新分布。
当管底介质的密度大于粒子的密度，粒子上浮；在弯顶处粒子密度大于介质密度时，则粒子沉降，最后粒子进入到一个它本身的密度位置即粒子密度等于介质密变，此时dr／dt 为零粒子不再移动，粒子形成纯组分的区带，与样品粒子的密度有关，而与粒子的大小和其他参数无关，因此只要转速、温度不变，则延长离心时间也不能改变这些粒子的成带位置。
2．注意点：
①离心时间要长
②可用角式转头或水平式转头
③粒子密度相近或相等时不宜用
④密度梯度溶液中要包含所有粒子密度
⑤不能用刹车
四、梯度溶液的制备
(一)梯度材料的选择原则：
1．与被分离的生物材料不发生反应，且易与所分离的生物材料分开。
2．可达到要求的密度范围，且在所要求的密度范围内，粘度低，渗透压低，离子强度和pH 变化较小。
3．不会对离心设备发生腐蚀作用。
4．容易纯化，价格便宜或容易回收。
5．浓度便于测定，如具有折光率。
6．对于分析超迷离心工作来说，它的物理性质，热力学性质应该是己知的。
(二)梯度材料的应用范围下面简单介绍几种常用的密度梯度材料的性质及其应用范围。
1．蔗糖：水溶性大，性质稳定，渗透压较高，其最高密度可达1．33g/ml，且由于价格低，容易制备，是现在实验室里常用于细胞器、病毒、RNA分离的梯度材料，但由于有较大的渗透压，不宜用于细胞的分离。
2．聚蔗糖：商品名Ficoll，常采用Ficoll—400也就是相对分子重量为400000，Ficoll渗透压低，但它的粘度却特别高，为此常与泛影葡胺混合使用以降低粘度。
主要用于分离各种细胞包括血细胞、成纤维细胞、肿瘤细胞、鼠肝细胞等。
3．氯化铯：是一种离于性介质、水溶性大，最高密度可达1.91g／nd。
由于它是重金属盐类，在离心时形成的梯度有较好的分辨率，被广泛地用于DNA、质粒、病毒和脂蛋白的分离，但价格较贵。
4．卤化盐类：KBr和NaCI可用于脂蛋白分离，KI和NaI可用于RNA分离，其分辨率高于铯盐。
NaCl梯度也可用于分离脂蛋白，NaI梯度可分离天然或变性的DNA。
5．Percoll: 是商品名，它是一种SiO2胶体外面包了一层聚乙烯吡咯酮(PVP)，渗透压低，它对生物材料的影响小，而且颗粒稳定，在冷却和冻融情况下还是稳定的。
其粘度高，在酸性pH和高离子强度下不稳定。
它可用于细胞、细胞器和病毒的分离。
分离外周血中的单个核细胞（PBMC）
1．抽取正常人静脉血加到肝素抗凝管中，加等量含5～10IU/ml肝素的无血清缓冲液悬浮细胞。
将细胞悬液小心加在与血液等量的淋巴细胞分离液上，室温中，水平离心500×g 20分钟。
此时离心管中形成5层：最上面是血浆，血浆层和淋巴细胞分离液之间是PBMC，淋巴细胞分离液层和最下面的红细胞层之间是粒细胞层，又成为棕黃层。
2．吸去最上层的血浆，收集血浆层和淋巴细胞分离液交界面的单个核细胞，尽量全部吸出PBMC。
加1～2倍量含5IU/ml肝素、2％灭活小牛血清的Hanks液（洗涤液），混匀后离心200×g 10分钟，低速离心有利于去除细胞悬液中留存的血小板，去上清液。
3．再用同样洗涤液洗涤细胞2次，每次离心500×g 10分钟，洗去残留的淋巴细胞分离液。
用1％台盼蓝染色检测细胞活力（应>95％）并计数细胞。
再用含10％小牛血清的细胞培养液将细胞配成适当浓度。
通常，每毫升外周血可得1×106～2×106PBMC。
2）用尼龙毛分析T细胞
尼龙毛柱的制备（注意无菌操作）
1．取直径3D，长度约10cm的尼龙毛，用0.2mol/L HCl浸泡处理过夜。
用双蒸水洗净HCl，置37℃烘干备用。
2．称取50mg尼龙毛，均匀分散后置Hanks液中浸泡。
取1ml注射器，出口接塑料管并夹住。
将尼龙毛均匀填塞入注射器中，排净空气，柱高约5～6cm。
此柱可分离约2×107细胞。
将柱置－20℃可保存2～3个月。
分离细胞
1．取PBMC，用含10％小牛血清的RPMI-1640培养液将细胞配成2×107/0.5ml。
2．融化冻存的尼龙毛柱，以每分钟5～7滴的速度放出Hanks液。
用5ml预温至37℃的细胞培养液洗涤尼龙毛柱。
将0.5ml上述PBMC悬液加入尼龙毛柱中，待细胞悬液全部进入尼龙毛柱后，立即加0.2ml细胞培养液，夹住塑料管。
3．在37℃5％CO2饱和水汽二氧化碳培养箱中培养1小时，使细胞与尼龙毛充分粘附。
用5ml预温至37℃的细胞培养液洗脱尼龙毛柱。
洗脱液中含有纯的T细胞。
1000×g离心洗脱液10分钟，去上清液。
再用细胞培养液洗涤细胞1次。
计数细胞，用细胞培养液将细胞配成适当浓度。
室温下将25 mL的富含白细胞的血液成分与等量淋巴细胞分离液混合,使用Ficoll-Hypaqu密度梯度离心法,室温3000 r/min,离心20 min后收集单个核细胞. 调节细胞浓度为106 /mL,然后在6孔板上贴壁,每孔加2 mL, 3 h后吸去悬浮细胞,并用37℃预温新鲜培养液轻轻洗去未贴壁的细胞。