核酸提取经验整理
核酸采集保存知识点总结
核酸采集保存知识点总结一、核酸采集的操作流程核酸采集的操作流程包括样本采集、核酸提取和保存三个主要步骤。
下面将对这三个步骤分别进行介绍。
1. 样本采集在进行核酸采集时，首先需要采集样本，常见的样本包括血液、唾液、鼻拭子、咽拭子、组织等。
在采集样本时，需要注意以下几点：(1) 样本采集前，需要严格遵循无菌操作，使用无菌手套，并保持工作区域的清洁。
(2) 样本采集时，要选择合适的采集器具，不同样本可选择不同的采集器具，比如血液可以选择采血管、鼻拭子可以选择鼻拭子采集器等。
(3) 样本采集后，应尽快进行保护性包装，避免样本受到外界污染。
(4) 不同样本的采集方法有所不同，比如采集血液时要用无菌注射器采集，采集鼻拭子时要注意插入深度和旋转操作等。
2. 核酸提取核酸提取是指从采集的样本中分离出核酸的过程。
常见的核酸提取方法包括化学法、机械法和离心法等。
在进行核酸提取时，需要注意以下几点：(1) 核酸提取试剂的选择要根据样本类型和需要的核酸纯度进行选择，比如采集全血样本时可选择通用的核酸提取试剂盒，采集唾液时可选择适用于唾液样本的提取试剂等。
(2) 核酸提取过程中，需要严格按照试剂盒说明书中的操作方法进行，不同的试剂盒可能有不同的提取步骤和操作要点。
(3) 核酸提取后，需要对提取得到的核酸进行保存，以便后续的分子生物学实验或临床诊断检测。
3. 样本保存样本保存是核酸采集过程中的关键环节，它直接关系到后续实验结果的准确性和稳定性。
常见的样本保存方法有干冰保存、-80°C冷冻保存和室温保存等。
以下是几种常见的样本保存方法及其注意事项：(1) 干冰保存干冰保存是一种常见的样本保存方法，它可以在短时间内将样本冷冻到极低温度，有利于核酸的保存。
在进行样本保存时，需要注意以下几点：- 样本保存前，应将核酸溶液均匀混合，并分装到干冰盒中。
- 样本保存后，需将干冰盒放置在干冰箱中，并保持在-70°C～-80°C的温度范围内。
第九章核酸的分离与提纯总结
第一节 核酸制备的基本原理
核酸的种类
脱氧核糖核酸（DNA）：细胞核，单链或双链 核糖体RNA
核糖核酸（RNA）
转运RNA
信使RNA
细胞质，
单链或双链
但无论哪核酸，在生物体中一般以核蛋白的形式存在， 因此，为了提取制备核酸，必须将核蛋白解联（即利 用接联剂将核蛋白裂解为核酸和蛋白）并去除蛋白， 同时必须维持核酸的天然性状，不使核酸发生变性或
降解.
–因此抽提介质的pH常以5.5-9.0为宜。
（2）减少物理因素对核酸的降解
– 物理因素主要是机械剪切力，包括强烈震荡、搅拌、
细胞突然置于低渗溶液中，以及让溶液快速通过狭
长的孔道；
– 其次是冻融、高温煮沸和辐射等，均将导致核酸的
降解。
– 机械剪切力主要破坏大分子量的线性 DNA 分子，而
对分子量小的环状质粒 DNA及RNA分子，破坏相对较 小。
(4)压榨法
是一种温和、彻底破碎细胞的方法。 即用高压迫使几十毫升细胞悬液通过一个小于 细胞直径的小孔，致使细胞被挤压破碎。
2．溶胀和自溶
(1)溶胀
概念：在低渗溶液，如低浓度的稀盐溶液中，由于存 在渗透压差，溶剂分子将大量进入细胞，致使细胞膜
膨胀破裂的现象称为溶胀。
步骤：将细胞置低温下冰冻一定时间，然后取出至室 温下 ( 或 40℃左右 ) 迅速融解。如此反复冻融多次，细 胞可在形成冰粒和增高胞液盐浓度的同时，发生溶胀， 以致破碎。
500mmol/L LiCl ； 10mmol/L EDTA ； 1%SDS ； 5mmol/L
DTT)压入微量移液管。
装有提取液的微量移液管被降低到叶片表面，微量移液 管顶点的那一小滴提取液在275kPa气压作用下被排出.
核酸提取步骤及注意事项
核酸提取步骤及注意事项---摘要核酸提取是生物学实验中常见的重要步骤，用于从样本中纯化和获得核酸。
本文将介绍核酸提取的基本步骤，并指出一些需要注意的事项。
---1. 核酸提取的基本步骤1. 样品准备：选择合适的样品进行核酸提取，如细胞、组织、血液等。
样品应保存在适当的条件下，以保持其完整性和稳定性。
在提取过程中，应保持样品的纯净度，避免污染和降解。
2. 细胞破碎：使用适当的方法破碎细胞膜，如机械破碎、化学溶解、超声波破碎等。
破碎时应注意温度控制、避免核酸降解，以及避免悬浮液的污染。
3. 溶解和脱脂：加入适量的溶解缓冲液和脱脂试剂，使核酸从其他杂质中分离。
溶解和脱脂过程应遵循规定的条件和比例，确保高效分离和纯化。
4. 酶解和消化：添加酶解缓冲液和酶解试剂，以去除蛋白质、RNA等杂质。
在酶解和消化过程中，应注意适当的时间和温度，以避免核酸的降解和损失。
5. 提取和纯化：通过离心、过滤、凝胶电泳等方法，将核酸从溶液中分离出来。
提取和纯化过程中，应注意操作的规范和准确性，以确保获得高质量的核酸。
6. 纯化和检测：使用柱层析、电泳、分光光度计等方法，对提取的核酸进行纯化和检测。
纯化和检测过程中，应遵循操作规程，进行准确的数据记录和结果分析。
---2. 注意事项1. 工作区域：核酸提取应在干净的实验室环境中进行，避免外界污染和其他干扰因素的干扰。
实验室应定期进行消毒和清洁，并保持适当的温度和湿度。
2. 工具和试剂：使用高质量的工具和试剂，避免因质量差的材料而导致实验出现问题。
试剂的保存条件和有效期限应按照说明书要求进行，避免使用已过期或变质的试剂。
3. 操作规范：在核酸提取过程中，应根据标准操作规程进行操作，严格遵守实验室安全和操作规范。
严禁接触裸露的皮肤、吸入有害气体，必要时应佩戴个人防护装备。
4. 试剂交叉污染：为避免试剂交叉污染，应使用干净的工具，确保每个步骤使用新的试剂和材料。
严禁在不同实验或样品中混用相同的工具，以避免导致污染和误差。
核酸提取的一些常规方法
1. 乙醇沉淀乙醇沉淀乙醇沉淀乙醇沉淀DNA原理是什么原理是什么原理是什么原理是什么？？？？乙醇能够消除核酸的水化层，使带负电荷的磷酸基团暴露出来。
Na＋之类的平衡离子能够与这些带电基团结合，在沉淀形成部位降低多核苷酸链之间的排斥作用。
因此只有在阳离子的量足以中和暴露的磷酸残基的电荷时才会发生乙醇沉淀。
最常用的阳离子：1）醋酸铵：贮存液10.0mol/L 终浓度 2.0~2.5mol/L 常用于减少多余的杂质（如DNTP及多糖）与核酸的共沉淀。
例如在2mol/L醋酸铵存在的情况下连续两次DNA沉淀可从DNA制品中除去>99％的dNTP。
在通过琼脂糖酶消化琼脂糖之后沉淀核酸时，使用醋酸铵也是最佳选择，这种阳离子可以减少寡糖消化产物共沉淀的可能性。
然而若用沉淀的核酸进行磷酸化时，就不要用醋酸铵沉淀核酸，因为铵离子能够抑制T4噬菌体多核苷酸激酶。
2）氯化锂：贮存液8.0mol/L 终浓度0.8mol/L 常用于需高浓度乙醇进行的沉淀（如沉淀RNA）。
LiCl在乙醇溶液中的溶解度很高而且不随核酸共沉淀。
小分子RNA（如tRNA及5S RNA）在高离子强度下（没有乙醇时）是可溶的，而大分子RNA则不溶。
可以利用这个差异在高浓度LiCl（0.8mol/L)中纯化大分子RNA。
3）氯化钠：贮存液 5.0mol/L 终浓度0.2 mol/L （0.2 mol/L）用于DNA样品中存在SDS时。
这种去污剂在70％乙醇中仍为可溶。
4）醋酸钠：贮存液 3.0mol/L（ph5.2）终浓度0.3 mol/L （0.3mol/L，ph5.2）在DNA和RNA的常规沉淀中最为常用。
2. 乙醇沉淀乙醇沉淀乙醇沉淀乙醇沉淀DNA和异丙醇沉淀和异丙醇沉淀和异丙醇沉淀和异丙醇沉淀DNA的区别是什么的区别是什么的区别是什么的区别是什么？？？？异丙醇和酒精都是有机溶剂，一般来讲，提取质粒的时候一开始都要用异丙醇沉淀，因为异丙醇沉淀的效果要好一些，如二楼所讲，但最后大多用酒精沉淀，因为酒精容易挥发，对下游的实验影响小。
核酸提取经典方法
核酸提取经典方法
核酸提取是分离和纯化生物样本中的核酸分子的过程。
经典的核酸提取方法通常包括以下步骤：
1. 细胞破碎和裂解：将细胞或组织样本破碎和溶解，以释放核酸。
常用的方法包括机械破碎、化学裂解和酶裂解等。
2. 蛋白质去除：将裂解后的样品进行蛋白酶处理，以去除蛋白质等杂质。
可使用蛋白酶K处理、苯酚/氯仿法或硅胶膜法等。
3. 酒精沉淀：通过加入适量的醇类，如乙醇或异丙醇，使核酸沉淀下来。
通常会加入盐类，如氯化钠或乙酸钠，以调节溶液的离子浓度。
4. 洗涤：将核酸沉淀物进行洗涤，以去除沉淀物中的杂质。
常用的洗涤方法包括乙醇洗涤法、酚/氯仿洗涤法或硅胶膜洗涤法。
5. 溶解：将洗涤后的核酸沉淀溶解于适当的缓冲液中，以得到高纯度的核酸。
常用的溶解缓冲液包括Tris-HCl缓冲液或无酶水。
上述方法是常见的经典核酸提取方法，但随着科学技术的发展，现代的核酸提取方法也在不断改进和更新，以提高提取效率和纯度。
如今，还有各种基于磁珠、
膜片、筛膜、电泳和自动化设备等的高通量、高效、自动化的核酸提取方法被广泛应用于科学研究和临床诊断。
核酸检测要点培训总结
核酸检测要点培训总结引言核酸检测是一种常见的生物学实验技术，用于检测细胞或组织中的核酸序列。
近年来，在疫情防控中，核酸检测成为了一项重要的工具，用于快速、准确地检测病原体的存在。
为了提高核酸检测的准确性和效率，培训成为了必不可少的环节。
本文将总结核酸检测培训中的要点，帮助读者更好地理解和掌握核酸检测技术。
1. 核酸提取核酸提取是核酸检测的第一步，也是非常关键的一步。
下面是一些核酸提取的要点：•样品准备：采集样品时应注意避免污染，使用无菌操作和消毒方法，确保样品的纯净性。
•细胞破裂：使用适当的细胞破裂方法，如酚酸或蛋白酶等，将细胞破裂释放核酸。
•核酸纯化：使用特定的核酸纯化试剂盒，按照说明书进行步骤操作，纯化核酸并去除杂质，确保提取的核酸质量优良。
•存储条件：提取好的核酸需要储存在-80℃的低温条件下，避免核酸降解。
2. PCR扩增PCR扩增是核酸检测的核心步骤之一，以下是PCR扩增的要点：•引物设计：选择合适的引物序列，使其与目标序列特异结合，避免与其他非目标序列发生交叉反应。
•PCR反应体系：根据指定的反应体系，准确配制反应溶液，包括DNA模板、引物、酶、缓冲液、dNTPs等。
注意体系的准确性和稳定性。
•PCR条件：设置合适的PCR条件，包括温度、时间、周期等参数。
根据目标序列的特性，优化反应条件，提高扩增效率和特异性。
•反应结果分析：对PCR反应得到的产物进行凝胶电泳或其他检测方法进行分析，判断扩增结果是否合理。
3. 真实时间荧光定量PCR真实时间荧光定量PCR是一种快速、准确测定PCR扩增产物的方法，以下是一些要点：•控制组设计：确定阳性对照组、阴性对照组和空白对照组，对各组给予标准条件处理和一致操作，确保结果的可靠性。
•荧光探针设计：选择合适的荧光探针，使其与目标序列特异结合，荧光探针可以提供更准确的扩增结果。
•PCR条件优化：根据目标序列的特性，优化PCR反应条件，包括温度、时间、周期等参数。
核酸提取经验及原理总结
核酸提取经验及原理总结核酸提取是分子生物学研究中的一项重要技术，它可以从生物样品中分离和纯化出目标的核酸分子，为后续的实验操作提供基础。
本文将对核酸提取的经验和原理进行总结，以帮助读者更好地理解和应用该技术。
核酸提取的经验总结：2.样品的预处理：在核酸提取前，需要对样品进行一些预处理，如细胞裂解、组织破碎等。
这些步骤有助于释放和保护核酸分子，促进提取效果。
3.溶解和裂解：核酸提取的第一步是将样品溶解和裂解，以释放核酸分子。
溶解缓冲液常用于裂解样品，并加入蛋白酶进行蛋白质降解。
此时需要考虑样品的特性和实验要求，选择合适的裂解缓冲液和裂解方法。
4.核酸分离：核酸分离是核酸提取的关键步骤，常用的分离方法有酚-氯仿法、硅胶柱法和磁珠法等。
在选择分离方法时需考虑样品的类型和实验要求，以及各种方法的特点和优势。
5.纯化和浓缩：提取的核酸分子中常含有杂质，需要进行纯化和浓缩。
常用的纯化方法有酚-氯仿法、琼脂糖凝胶电泳法和商用纯化试剂盒等。
纯化后的核酸可以进行浓缩，以提高其浓度和纯度。
6.质量检测：核酸提取后，需要对提取的核酸分子进行质量检测。
常用的检测方法有琼脂糖凝胶电泳、比色法和荧光分析等。
通过检测可以了解核酸的浓度、纯度和完整性，为后续实验提供准确的数据。
核酸提取的原理总结：1.细胞裂解和溶解：细胞裂解是将细胞壁和细胞膜破坏，使细胞内容物暴露在溶液中。
细胞溶解液中常含有裂解缓冲液和蛋白酶等物质，以促进细胞的裂解和蛋白质的降解。
2.核酸分离和纯化：核酸在细胞溶解液中可以与其他细胞成分分离，常用的方法有酚-氯仿法。
酚可溶于水，而氯仿可溶于有机溶剂，通过两相溶剂的分层，可以将核酸沉淀到有机相中，从而实现核酸的分离。
3.杂质去除和浓缩：通过纯化方法，可以将核酸与其他杂质分离。
如硅胶柱和磁珠法通过静电吸附和洗脱来除去杂质，商用纯化试剂盒则通过离心柱等固相材料来实现。
纯化后的核酸可以进行浓缩，以提高其浓度和纯度。
4.质量检测：核酸提取后，需要对提取的核酸进行质量检测。
核酸采集的技巧
核酸采集的技巧
核酸采集是指获取个体样本中的核酸（DNA或RNA）的过程。
以下是一些常用的核酸采集技巧：
1. 血液采集：通过抽取静脉或指尖血样，使用抗凝剂避免血液凝固，并将血样转移到含有抗凝剂的管子中。
2. 口腔拭子采集：使用棉签或刷子轻轻刷取舌苔、口腔黏膜或唾液中的细胞，然后将拭子放入含有保存液的管子中。
3. 咽拭子采集：将长棉签插入病人的咽部，向下刮取咽部细胞，然后将拭子放入含有保存液的管子中。
4. 鼻腔拭子采集：将长棉签插入病人的鼻腔，轻轻旋转收集鼻腔内的分泌物，并将拭子放入含有保存液的管子中。
5. 尿液采集：搜集晨尿或随机尿液样本，并将其转移到含有保存液的容器中。
6. 组织样本采集：通过手术或活检，采集生物组织样本，并将样本保存在离心管或冷冻管中。
在核酸采集过程中，需要注意严格的无菌操作，避免污染样品。
此外，选择合适
的保存液和容器以保护核酸的完整性和稳定性也是非常重要的。
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一、核酸核苷酸单体聚合而成的生物大分子，是生物细胞最基本和最重要的成分。
一般认为，生物进化即始于核酸，因为在所有生命物质中只有核酸能够自我复制。
今天已知核酸是生物遗传信息的贮藏所和传递者。
一种生物的蓝图就编码在其核酸分子中。
核酸是1869年米歇尔(F.Miescher)在脓液的白细胞中发现的。
他当时称之为核素。
阿尔特曼(R.Altmann)于1889年认识其酸性后，定名为核酸。
二、核酸的分类和功能核酸分为核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA)两大类。
这两类核酸有某些共同的结构特点，但生物功能不同。
DNA贮存遗传信息，在细胞分裂过程中复制，使每个子细胞接受与母细胞结构和信息含量相同的DNA；RNA主要在蛋白质合成中起作用，负责将DNA的遗传信息转变成特定蛋白质的氨基酸序列。
核酸的基本结构单元是核苷酸，核苷酸含有含氮碱基、戊糖和磷酸3种组分。
碱基与戊糖构成核苷，核苷的磷酸酯为核苷酸。
DNA和RNA中的戊糖不同，RNA中的戊糖是D-核糖；DNA不含核糖而含D-2-脱氧核糖(核糖中2位碳原子上的羟基为氢所取代)。
核酸就是根据其中戊糖种类来分类的，DNA和RNA的碱基也有所不同。
三、核酸的理化性质RNA和核苷酸的纯品都呈白色粉末或结晶，DNA则为白色类似石棉样的纤维状物。
除肌苷酸、鸟苷酸具有鲜味外，核酸和核苷酸大都呈酸味。
DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物，一般都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离核酸易溶于水，RNA钠盐在水中溶解度可达40g/L，DNA钠盐在水中为10g/L，呈黏性胶体溶液。
在酸性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性或弱碱性溶液中较稳定。
天然状态的DNA 是以脱氧核糖核蛋白(DNP)形式存在于细胞核中。
要从细胞中提取DNA 时，先把DNP抽提出来，再把P除去，再除去细胞中的糖，RNA 及无机离子等，从中分离DNA。
四、细胞裂解：（一）裂解原理在核酸提取过程中，细胞裂解是非常重要的。
经典的裂解液几乎都含有去污剂 (如 SDS、Triton X-100、NP-40、Tween 20 等) 和盐 (如 Tris、EDTA、NaCl 等)。
盐的作用，除了提供一个合适的裂解环境 (如 Tris)，还包括抑制样品中的核酸酶在裂解过程中对核酸的破坏 (如 EDTA)、维持核酸结构的稳定 (如 NaCl) 等。
去污剂则是通过使蛋白质变性，破坏膜结构及解开与核酸相连接的蛋白质，从而实现核酸游离在裂解体系中。
裂解体系中还可能加入蛋白酶，利用蛋白酶将蛋白质消化成小的片段，促进核酸与蛋白质的分开，同时，也便于后面的纯化操作以及获得更纯的核酸。
也有直接使用高浓度的蛋白质变性剂 (如 GIT、GuHCl 等) 裂解的，该方法已经成为了 RNA 抽提的主流，却不是基因组 DNA 抽提的主流。
（二）细胞的裂解方法细菌细胞破碎方法有以下几种：1）机械方法：超声波处理法、研磨法、匀浆法。
关于超声波处理法，要设定好超声时间和间隙时间，一般超声时间不超过5秒，间隙时间最好大于超声时间。
2）化学试剂法：用含SDS或CTAB的溶液处理细胞，在一定的pH环境和变性条件下,细胞破裂,蛋白质变性沉淀,核酸被释放到水相，pH环境则由加入的强碱(NaOH)或缓冲液( TE、STE等)提供，表面活性剂或强离子剂可使细胞裂解、蛋白质和多糖沉淀,缓冲液中的一些金属离子螯合剂( EDTA等)可螯合对核酸酶活性所必须的金属离子Mg2+ 、Ca2+ ,从而抑制核酸酶的活性,保护核酸不被降解。
3）反复冻融法：将细胞在-20度以下冰冻，室温融解，反复几次，由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。
个人经验一般情况，37℃,3min，液氮3min,反复三次即可以。
4）酶解法：加入溶菌酶或蜗牛酶、蛋白酶K等，都可使细胞壁破碎，核酸释放。
蛋白酶还能降解与核酸结合的蛋白质,促进核酸的分离。
其中溶菌酶能催化细菌细胞壁的蛋白多糖N-乙酰葡糖胺和N-乙酰胞壁酸残基间的β-(1 ,4) 键水解。
蛋白酶K能催化水解多种多肽键,其在65 ℃及有EDTA、尿素(1～4mol/ L) 和去污剂(0. 5 %SDS 或 1 %Triton X-100) 存在时仍保留酶活性,这有利于提高对高分子量核酸的提取效率。
在实际工作中,酶作用、机械作用、化学作用经常联合使用。
具体选择哪种或哪几种方法可根据细胞类型、待分离的核酸类型及后续实验目的来确定。
（三）裂解方法的评价含蛋白酶的裂解方法，可以认为是抽提基因组 DNA 的首选。
裂解包括膜蛋白的游离和与基因组 DNA 相连接的蛋白质的游离。
蛋白酶的作用是使蛋白质变小，故而对蛋白质的游离有巨大的促进作用；同时，巨大的基因组DNA 是很容易“缠”住大分子的东西的，蛋白质被蛋白酶消化变小后，则不容易被基因组DNA “缠”住，有利于蛋白质在纯化操作中的去除，使最终获得的基因组 DNA 的纯度更高。
另外一个思路是，如果基因组 DNA 与蛋白质“缠”在一起，在纯化的过程中有两种可能：如果基因组 DNA 的特性占优势，则纯化时以 DNA 的形式被保留下来，导致蛋白质的残留；如果蛋白质的特性占优势，则纯化时以蛋白质的形式被去除，导致 DNA 的损失。
当然去污剂裂解方法，仍然在细胞基因组 DNA 抽提方面有优势，尤其是当得率和纯度要求不是最高，而经济性及操作简单很重要时。
控制好裂解液/样品的比例是该方法成功的关键。
该方法结合高盐沉淀，可以实现最简单的操作，但纯度及得率的稳定性可能会比用PC抽提的差一些。
高浓度蛋白质变性剂 (如 GIT、GuHCl 等) 的裂解方法，是抽提 RNA 的首选。
总 RNA 的抽提，最重要的是快速裂解细胞膜，至于与基因组 DNA 相连接的蛋白质的裂解以及基因组与蛋白质“缠”住的问题，因为都不会对以后的纯化产生大的影响，可以不考虑。
高浓度蛋白质变性剂能快速破坏细胞膜，进而迅速抑制住细胞内的 RNA 酶，从而确保了 RNA 的完整性。
除了极少量不适用该方法的样品–主要是植物，其它绝大部分样品的 RNA 的抽提，都可以以高浓度的蛋白质变性剂为基础的。
当然有些样品，如肌肉，即使是 RNA 抽提，也强烈建议使用含蛋白酶的裂解液 (或者在操作中的某个时候使用蛋白酶消化蛋白质) ，原因在于这些样品中的蛋白质，是非常难以去除的。
该方法是获得最大得率和最高纯度的基础。
含 CTAB 的裂解液，几乎成为富含多糖的样品，如细菌、植物的基因组 DNA 抽提的首选裂解方法。
该方法成功与否与两个因素有关：一是CTAB 的质量，二是洗涤的彻底程度。
CTAB 的质量对裂解效率有很大的影响，而且，似乎还说不清楚原因，因为即使是同一公司生产的纯度一样的 CTAB，批号不同，效果就可能差别很大。
洗涤去除 CTAB 要比其它的盐难一些，同时，CTAB 的少量残留也会对酶活性有巨大影响，所以洗涤是否彻底也是该方法成功与否的关键。
裂解时的温度，多使用 65C；但如果发现降解严重或者得率太低，可以试一下 37C – 45C 这个相对低温的区域。
SDS 碱裂解法是质粒抽提的首选裂解方法，具有快速、得率高、几乎无基因组 DNA 污染的特点。
控制好裂解液/菌体的比例和操作的温和是该方法成功的关键。
蛋白质的沉淀效率在4℃会更好一些，所以，加入溶液后在 4℃静置一段时间以及采用 4℃离心去蛋白质，都可以提高质量。
该方法不一定要使用 PC 纯化，但结合 PC 纯化，可以获得纯度很高的质粒。
RNA 的去除可以靠在溶液中加入 RNase A (100ug/ml) 或者在最后的溶解液中加入 RNase A (25 ug/ml) 来实现。
总的感觉是，在溶液中使用 RNase A，RNA 的残留少一些。
不过，经典沉淀几乎没有办法彻底去除 RNA 残留。
另外，对大质粒 (50 kb 以上)，该方法可能会有问题。
PCR 模板的简易裂解方法，也是使用面很广的一类方法。
该方法的特点是无须纯化，样品被裂解后即可直接取裂解液用于 PCR，非常快速。
也正因为不纯化，所以，假阴性 (即没有扩增出来的阳性) 比例也比较高。
该方法最简单的就是反复冻融法，简便快捷，不需任何化学试剂，冻融离心，PCR检测就可以了。
如果使用裂解法，那么最简单的裂解液就是水，复杂一点的就会含有一些不会抑制后续的 PCR 反应，而且能提高裂解效率，甚至还可能部分消除样品内抑制 PCR 反应杂质的东西，如 Triton X-100、甲酰胺等。
再复杂一点的就会含有诸如 Chelex 100 之类的能吸附部分杂质的介质。
操作也非常简单，多使用温度的变化来实现样品的裂解，如煮沸、或者高温-低温的多次循环等。
该方法最适合从一大堆样品中找出阳性样品，但却不适合用于判断某一个样品是阳性还是阴性。
降低样品使用量可以提高阳性率，因为样品量的降低，同时意味着 PCR 的抑制物量的降低。
裂解液的用量原则是：确保能彻底裂解样品，同时使裂解体系中核酸的浓度适中。
浓度过低，将导致沉淀效率低，影响得率；浓度过高，去除杂质的过程复杂且不彻底，导致纯度下降。
另外，裂解液的用量是以样品中蛋白质的含量为基准的，而不是以核酸含量为基准，这一点务必牢记。
五、核酸纯化就个人所知，目前在科研领域广泛使用的核酸纯化技术主要可以分为两大类：使用介质的和不使用介质的，使用介质的，一次就将核酸与其它所有杂质分开；不使用介质的，一定是首先将核酸和盐与大分子杂质分开，再通过沉淀核酸使核酸与盐分开 (PEG 沉淀和 LiCl 沉淀除外)。
1）经典的使用苯酚/氯仿抽提的纯化技术：细胞裂解后离心分离含核酸的水相，加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇(25 ∶24 ∶1 体积) 混合液。
依据应用目的，两相经漩涡振荡混匀(适用于分离小分子量核酸) 或简单颠倒混匀(适用于分离高分子量核酸) 后离心分离。
疏水性的蛋白质被分配至有机相，核酸则被留于上层水相。
酚是一种有机溶剂，预先要用STE 缓冲液饱和，因未饱和的酚会吸收水相而带走一部分核酸。
酚也易氧化发黄,而氧化的酚可引起核酸链中磷酸二酯键断裂或使核酸链交联；故在制备酚饱和液时要加入一特殊物质，以防止酚氧化。
氯仿可去除脂肪，使更多蛋白质变性,从而提高提取效率。
异戊醇则可减少操作过程中产生的气泡。
核酸盐可被一些有机溶剂沉淀,通过沉淀可浓缩核酸,改变核酸溶解缓冲液的种类以及去除某些杂质分子。
典型的例子是在酚、氯仿抽提后用乙醇沉淀，在含核酸的水相中加入p H5. 0～5.5 ，终浓度为0.3M的NaAc 或KAc 后，钠离子会中和核酸磷酸骨架上的负电荷，在酸性环境中促进核酸的疏水复性。
然后加入2～2. 5 倍体积的乙醇,经一定时间的孵育，可使核酸有效地沉淀。
其他的一些有机溶剂（异丙醇、聚乙二醇( PEG) 等）和盐类(10. 0mol/ L 醋酸铵、8. 0mol/ L 的氯化锂、氯化镁和低浓度的氯化锌等) 也用于核酸的沉淀。