动物实验方法总结：组织研磨管的使用方法 临床样本或动物取材注意事项 动物模型

组织研磨管的使用方法

1.作用：只适用于蛋白提取、RNA提取、基因组DNA提取时的组

织裂解，不做他用；

2.组织研磨管：容量为1.5ml, 里面已经提前放置了研磨珠（有时也

不放置），研磨液（Trizol或RIPA裂解液，有时也不放置）一般在取回后才加入，如果已经加入了研磨液，请离心后才拧开管盖，以免研磨液溢出，对皮肤造成伤害，所以操作时，要小心注意！

3.组织：把收取的组织分切，用生理盐水或PBS缓冲液把分切的组

织上的血液漂洗干净，然后用医用纱布或滤纸把组织表面的水分吸干，然后放入研磨管（组织体积大小为1颗绿豆至2颗黄豆，根据实际情况决定）中，然后把放入的组织尽量剪碎；

4.存放：上述过程应尽量在最短的时间内操作完毕，立即用液氮冻

结，然后置于液氮或-80℃保存；

5.操作事项：操作时间尽可能短，做好一个，立马放置一个；

实验方法总结（3）：动物模型部分

1、研究肿瘤细胞增殖 (2)

2、研究肿瘤细胞转移 (3)

2.1. 体外(浸润模型) (3)

2.2. 体内(转移模型) (3)

3、研究肿瘤细胞耐药 (5)

3.1. 耐药细胞株的建立 (5)

3.2. 裸鼠移植瘤耐药模型的建立 (6)

从肿瘤起源分，肿瘤动物模型的分类如下：

从研究目的来分，可以从增殖、转移、耐药三个角度来分析：

1、研究肿瘤细胞增殖

细胞准备：GeneA敲减慢病毒感染细胞扩增至需要的细胞量。分为：空白对照组、阴性对照组、实验组。

取Balb/c裸鼠，雄性，6周龄，每组10只，适应一周后进行肿瘤细胞注射。

XXX细胞消化离心后制成单细胞悬液，计数后取适量的细胞用PBS悬浮，在Balb/c裸鼠侧腹部皮下接种。每只接种2×106个细胞，注射体积为100 μL。此后，每隔5天测量注射部位肿瘤的体积。30天后裸鼠小鼠腹腔注射80 mg/kg 戊巴比妥钠，小鼠麻醉后置蓝色背景布上拍照（侧卧位，接种部位朝上），小鼠颈椎脱臼处死，取出肿瘤称重，将肿瘤置蓝色背景布上拍照，肿瘤一分为二，一份4%多聚甲醛固定，待后续病理分析，一份-80℃冻存。

2、研究肿瘤细胞转移

肿瘤转移的模型包括两大类：体外(浸润模型)和体内(转移模型)。体外(浸润模型)：了解肿瘤细胞对周围相连组织的侵润性。体内模型主要研究肿瘤细胞的转移性即肿瘤细胞在远端组织形成病灶的能力。

2.1. 体外(浸润模型)

例：浸润型脑胶质瘤动物模型的建立

方法：取若干只Balb/c免疫缺陷裸鼠，将分离和鉴定并转染携带绿色荧光蛋白的脑胶质瘤干细胞立体定向法行小鼠颅内接种，每组10只。小鼠麻醉后头部正中切口，剥离骨膜后钻孔(坐标是冠状缝后0.5 cm，矢状缝右侧2.5 cm) 。取2 μL胶质瘤干细胞以1×104 cells /只小鼠的剂量，经微量注射器缓慢注射入鼠脑纹状体内(深度是2.5 ～3 mm) 。在确定的时间点处死一部分动物进行荧光( 立体荧光显微镜下) 病理证实和比较，同时检查脑胶质瘤干细胞的体内生长特征以及干细胞标志物等。

2.2. 体内(转移模型)