组培实验报告：胡萝卜愈伤组织诱导培养
胡萝卜愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养研究
山西师范大学学报(自然科学版)第18卷第2期Journal of Shanxi Teacher c s University Vol.18No.2 2004年6月Natural Science Edition June2004文章编号:1009-4490(2004)02-0071-06胡萝卜愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养研究尹文兵,李丽娟,黄勤妮,李艳红(首都师范大学生物系,北京100037)摘要:分别以胡萝卜子叶、下胚轴和直根形成层为外植体诱导出愈伤组织,并建立细胞悬浮系.实验结果表明:胡萝卜下胚轴是诱导愈伤组织和进行细胞悬浮培养的理想外植体;诱导松散型愈伤组织的最佳激素浓度配比是1.0mg/L2,4-D+0.5mg/L KT;细胞悬浮培养细胞最佳起始密度为1.125@104个/mL~2.325@104个/50mL时,7d~9d为对数生长期;继代培养4代~5代时,可得到稳定的悬浮细胞系.关键词:胡萝卜;组织培养;细胞悬浮培养;松散型愈伤组织;生长曲线中图分类号:S631.2文献标识码:A胡萝卜(Daucus carota L.),属于十字花科植物,是一种十分重要的蔬菜作物,由于其营养价值高,及其适于生食、加工、烹调等多种用途,在世界范围内广泛栽培.中国是农业大国,胡萝卜作为蔬菜作物在人们生活中起着重要的作用.因此,加快我国胡萝卜育种研究以成为迫切需要[1].近些年来,随着生物技术与分子生物学技术的快速发展,作为生物技术研究的理想材料,许多国家对胡萝卜体细胞杂交技术、遗传转化与再生技术、分子标记与基因克隆技术进行了广泛深入的研究.我国科研工作者在胡萝卜的生物技术与分子生物学研究上也取得了一定进展,特别是在组织培养、原生质体融合[2]、遗传转化及再生等方面.但是在胡萝卜细胞培养方面并不是太多,因此继续深入研究还是很有必要的.本文对胡萝卜愈伤组织诱导的最佳培养基和细胞悬浮培养的条件进行探讨,为其次生代谢产物A-胡萝卜素、B-胡萝卜素的生产以及将来的工厂化和分子生物学研究打下基础.1材料和方法1.1材料来源胡萝卜种子由中国农科院蔬菜所提供.1.2方法收稿日期:2004-03-22作者简介:尹文兵(1979)),男,山西安泽人,首都师范大学在读硕士研究生,主要从事功能基因组学方面的研究.72山西师范大学学报(自然科学版)2004年1.2.1胡萝卜愈伤组织的诱导(1)以胡萝卜子叶和下胚轴为外植体诱导[2].将胡萝卜种子搓去种毛,然后在75%的酒精中消毒5min,无菌水冲洗一遍后,用0.1%的升汞消毒10min,接着用无菌水漂洗一遍,再用无菌水浸泡30min,最后用无菌水漂洗一遍,接种在无激素的MS培养基上.10d左右种子开始萌发,待两片子叶伸展,而心叶刚刚显露时,将幼苗的下胚轴和子叶切成0.3c m 左右的小段,接种在附加植物激素1.0mg/L2,4-D,1.0mg/L2,4-D+0.5mg/L KT,2.0mg/L 2,4-D,2.0mg/L2,4-D+0.5mg/L KT的MS培养基的三角瓶中,培养30天左右,即可诱导出愈伤组织.继代培养时,将老的和生长不良的愈伤组织去掉,将大的健康的愈伤组织切至0.5c m,再放于含0.1mg/L2,4-D的MS培养基(pH5.7)上继续培养.诱导和继代培养均在黑暗条件下进行,培养温度为25e,继代培养时间为3周~4周更换一次培养基.观察并记录继代过程中愈伤组织状态的变化.(2)以胡萝卜直根形成层为外植体诱导.用清水洗净胡萝卜直根,用小刀削去表皮和顶部,将其在75%的酒精中消毒5min,再用0.1%的升汞消毒10min,接着用无菌水漂洗一遍,再用无菌水浸泡30min,最后用无菌水漂洗一遍.消毒好的胡萝卜直根,切去下边的2/ 3部分,留下部分用消毒好的小刀,沿截面横切成厚度1mm左右的小圆片,然后将小圆片的韧皮部和木质部切去,留下形成层,再切成长3mm,宽1.5mm,高1mm的小长块,接种在(1)中的诱导培养基上,获得愈伤后进行继代培养,培养环境条件与(1)相同.1.2.2胡萝卜细胞悬浮系的建立[3]用镊子夹取在固体继代培养基上继代20d左右的胚性愈伤组织即分散性好、疏松的愈伤,接种在含0.3mg/L2,4-D的液体培养基(pH5.7)中,每100mL的三角瓶中加入液体培养基50mL,摇床转速为110r/min,温度为25e,黑暗培养.每隔7d继代一次,连续培养4代~5代后逐渐形成稳定的细胞系.细胞悬浮培养液体培养基成分与愈伤组织继代培养的培养基相同,但不加琼脂.每隔1d在倒置显微镜下观察细胞形态、分散程度并照相,进行细胞计数,以建立细胞数生长曲线.1.2.3细胞悬浮生长曲线的测定取0.5g悬浮培养物,接入新鲜液体培养基中,进行振荡培养,每隔1d取样1次,共培养13d,连续做3次平行实验.1.2.4悬浮细胞数目的测定用血球计数板法[1]对胡萝卜悬浮细胞计数,全部操作在无菌环境下进行,每个结果为4次平行实验的平均值.细胞数按下面公式计算:1mL悬浮液中的总细胞数=A/5@25@ 104@B,A为5个中方格总细胞数,B为稀释倍数.2结果与讨论2.1外植体对愈伤组织状态的影响有文献报道,不同外植体的脱分化能力不同,诱导出愈伤组织的频率和愈伤组织的状态也不同.在胡萝卜愈伤组织诱导时,本实验采用三种外植体:胡萝卜子叶、下胚轴和直根形成层.经过30d观察发现,三种外植体经过培养均诱导获得了愈伤组织.结果如下:以子叶为外植体的大约有2/3诱导获得了愈伤组织,多数愈伤组织呈浅黄色,生长旺盛,质地松散,含水量大,分散性好,但也有一些状态不好,色泽发暗,选取好的可作为细胞悬浮培养的材料;以下胚轴为外植体几乎所有都获得了愈伤组织,并且愈伤组织生长旺盛,呈黄色,比较疏松,分散性好,适宜于细胞悬浮培养;而以直根形成层为外植体获得的愈伤组织不多,色泽较暗,有些带褐色,愈伤组织生长缓慢,质地较硬,分散度差,不适宜于细胞悬浮培养.因此,可认为胡萝卜下胚轴是诱导愈伤组织和进行细胞悬浮培养的理想外植体.2.2 激素对愈伤组织状态的影响不同的激素及激素浓度直接影响着愈伤组织的状态、质地和分散性,而这些因素又是松散愈伤组织的关键,也是进行细胞悬浮培养的必要前提.因此,本实验诱导胡萝卜愈伤组织及继代培养设计了4种激素组合[见1.2.1(1)],通过多次继代培养发现,1.0mg/L 2,4-D+0.5mg/L KT 组合诱导出的胚性愈伤组织(见图1)生长旺盛、呈黄色米粒状分散性好、质地松软、含水量小,有利于细胞悬浮培养,而半胚性愈伤不适合进行细胞悬浮培养.其他3种组合中,2.0mg/L 2,4-D+0.5mg/L KT 诱导出的愈伤组织也比较疏松,而另两种诱导出的愈伤组织质地比较坚实,有褐化现象.可见,2,4-D 与KT 的结合有利于疏松愈伤组织的诱导.图1 胡萝卜松散型愈伤组织 左图:胚性愈伤 右图:半胚性愈伤Fig.1 The imcompact calli.of Daucus carota L Left:embrogenic callus Ri ght:semiembrogenic callus2.3 继代次数与细胞状态之间的关系在细胞悬浮培养的过程中,需要不断地进行继代,来筛选出良好的、较稳定的细胞系.继代过程中,细胞悬浮液的颜色、细胞的形态、大小、数量不断在发生着变化.第1、2次继代时,细胞悬浮液为白色或浅黄色,混浊,有许多大颗粒,倒置显微镜下观察,细胞多数成团,保持较旺盛的分裂能力,单细胞大多呈长形、梭形、不规则形(见图2),细胞个体较大;3、4次继代时,细胞悬浮液变为黄色,比较粘稠,颗粒大小分布均匀,倒置显微镜下观察,分裂的细胞团增多,有的细胞团明显可见有20个~30个球形细胞组成,单细胞数目增多,而且大多呈球形;5次继代时,细胞悬浮液(见图3)呈透明的黄色,澄清,呈油状流动,颗粒分布很均匀,直径大多在0.5m m~1mm,倒置显微镜下观察,细胞团和单细胞很多,大多呈球形(见图4),大小均匀;6、7次继代以上时,悬浮液变得比较澄清,呈浅黄色,悬浮颗粒大小均匀,倒置显微镜下观察,细胞大多成团,可以清楚的看出细胞呈球形,比较均匀,73 第2期 尹文兵,等:胡萝卜愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养研究也有单细胞,但是不多,这可能与细胞聚集成团的特性有关.图2 不规则细胞(10@) 图3 黄色的细胞悬浮液Fig.2 Irregular cell (10@)Fig.3 Yellow cell suspension因此,继代培养过程中,随着继代次数的增多,细胞悬浮液由无色或浅黄色变为黄色,由混浊变为澄清、透明,颗粒大小由不均匀到均匀,最终直径在0.5mm~1mm,倒置显微镜下观察,单细胞由长形、梭形、不规则形变为规则的球形,细胞系逐渐趋于稳定.随后,我们又从筛选出来的细胞系将细胞接种到不含激素的MS 培养基上,7d 后长出新的愈伤组织,30d 后长出胡萝卜全苗并转入蛭石成活(图5),说明以细胞系转化为新的愈伤组织生成再生植株是成功的.图4 球形细胞(40@) 图5 再生植株Fi g.4Global cell (40@) Fig.5Plant regeneration2.4 细胞起始密度对细胞悬浮培养的影响在细胞悬浮培养时,细胞生长需要一个最低生长密度,低于此密度,细胞生长速率降低或根本不生长[4].适宜的起始密度可以缩短细胞系筛选的时间,起始密度过大过小不仅会影响细胞系筛选的时间而且不利于稳定细胞系的建立.同时,细胞的起始密度对细胞培74山西师范大学学报(自然科学版) 2004年养周期也有影响.为此,本实验设计了4个密度梯度:0.4@104个/50mL,1.125@104个/50mL,2.325@104个/50mL,8.875@104个/50mL.培养13d,细胞状态随天数的变化见表1。
胡萝卜愈伤组织诱导实验报告
南昌大学实验报告胡萝卜愈伤组织诱导姓名：学院：专业：班级：学号：胡萝卜愈伤组织诱导实验一母液的配制与保存一、实验目的1.学习母夜的配制方法和母液的保存方式。
2.熟悉掌握制备母液的操作。
二、实验原理培养基中提供植物生长所需的营养成分，才能满足植物正常的生长发育的需求。
主要包括水分、有机物质、盐类，而配制母液时将其分为大量、微量、钙盐、镁盐、铁盐、有机和肌醇分别配制。
配臵培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配臵，即按培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量分别先配制成一系列的母液臵于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配臵即可。
三、实验材料、试剂和仪器设备1．试剂NH4NO3,KNO3,KH2PO4,CaCl2〃2H2O,MgSO4〃7H2O,FeSO4〃7H2O Na2-EDTA, MnSO4〃4H2O,ZnSO4〃7H2O,H3BO3,KI,Na2MoO4〃2H2OCuSO4〃5H2O,CoCl2〃6H2O,肌醇，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸，蒸馏水。
2.仪器设备电子天平，烧杯（50ml、100ml、500ml）量筒（1000ml、100ml、25ml），容量瓶(1000ml、500ml、100ml)，移液管（10ml，5ml，1ml）试剂瓶，玻璃棒数支，药芍，称量纸等。
四、实验步骤 1 、计算：计算各化学成分所需要的量。
大量、微量和盐类按扩大50倍，定容500ml的配制计算。
有机和肌醇按扩大100倍，定容200ml的配制计算。
计算后制成配方表。
2、制定标签：裁取7张适当大小的牛皮纸，用铅笔写上MS，种类，并标明此类母液所含物质，质量，定容体积，扩大倍数吸取量，制备人，制备日期。
3、大量元素母液的配制：先用量筒量取300ml蒸馏水放入500ml 烧杯中，按照配方表中用量依次分别称取：NH4NO3 ,KNO3 , KH2PO4 , 待第一种化合物完全溶解后再加入第二种化合物，溶解过程用玻璃棒搅拌，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液转移至500ml 容量瓶中，并用蒸馏水将烧杯和玻璃棒洗涤3次，每次约50ml，而后用蒸馏水定容至500ml，然后转移至细口试剂瓶中，贴上标签，并臵于冰箱中低温保存备用。
胡萝卜愈伤组织的诱导培养
本科学生综合性实验报告
学号姓名
学院生命科学学院专业、班级09级生物科学B班实验课程名称植物组织培养实验
教师及职称龙维彪（讲师）
开课学期2011 至2012 学年下学期填报时间2012 年 6 月 1 日
一．实验设计方案
二．实验报告
⑴胡萝卜愈伤组织的诱导结果：
经过诱导，4瓶都出现污染状况，做继代培养用小组的实验材料。
⑵继代培养的结果：
如上图所示，继代培养得到的三瓶均无污染，三瓶中的愈伤组织增殖情况均良好，其中3瓶特别好，愈伤组织呈现结构疏松的特点。
污染情况：无污染。
长势情况：长势良好。
颜色情况：部分颜色有点暗淡，少部分为金黄色，颜色发亮。
胡萝卜愈伤组织诱导培养实验
云南大学生命科学学院本科教学实验教学中心细胞工程实验实验报告胡萝卜愈伤组织诱导培养实验摘要：以胡萝卜为实验材料，利用直根形成层为外植体诱导出愈伤组织，探讨了不同激素比例对胡萝卜愈伤组织诱导的影响，然后在诱导后的愈伤组织多次继代培养获得生长旺盛的分化组织，接着进行再分化，在胡萝卜培养过程中掌握诱导培养技术还有细胞培养所要求的无菌技术。
关键字：胡萝卜；愈伤组织；继代培养；再分化；组织培养胡萝卜(Daucus carota L)为伞形科两年生草本植物，因其营养丰富、又具药用价值，且耐运输、易栽培、病虫害少和耐贮藏，而成为人们常食蔬菜。
同时又作为生物技术研究的理想材料，因此建立一个高效的、实用的组织培养快速繁殖体系则是研究植物遗传转化的基础。
本文对胡萝卜愈伤组织诱导的最佳培养基进行探讨，研究了激素对胡萝卜愈伤组织诱导的影响，为其高效生产次生代谢产物α-胡萝卜素、β-胡萝卜素以及将来组织培养的工厂化和分子生物学研究打下基础【1】。
1.材料和方法1.1材料来源：胡萝卜根，长10~20cm，直径1cm以上。
1.2方法：1.2.1愈伤组织的诱导培养（1）培养基的配制：MS +2，4-D 2mg/L + KT 0.5mg/L+3%（30g/L）白砂糖+0.95%（9.5g/L）琼脂，pH5.8（2）胡萝卜的选材、修剪和清洗：选择新鲜较粗的萝卜，先用自来水冲洗，再2％洗涤剂浸泡20分钟，清水冲洗（注意材料损伤）（3）对材料进行灭菌：在超净工作台上用75％乙醇30-60s；0.1%升汞8-10分钟; 无菌水冲洗3-5次；（4）无菌修剪：用解剖刀进一步去除两端1cm，将中断切成0.5cm厚的薄圆片，然后再切去外壁2—3mm厚的皮，选取中间的部分移至无菌的部分，用刀通过形成层切成1cm2的小块；（5）接种：无菌操作将处理好的材料接种于培养基上，2-3个材料/瓶（6）培养及观察记录：25 ℃，光照培养，定期观察污染情况，生长状况1.2.2继代培养从培养瓶中取出愈伤组织，置于无菌培养皿内，用解剖刀将愈伤组织坏死部分剔除并将愈伤组织切成黄豆大小颗粒，放在无激素的新鲜培养基表面，用镊子轻轻压实，每个培养瓶接种2~3个切块。
胡萝卜实验报告数据
一、实验目的1. 掌握植物组织培养技术，特别是胡萝卜愈伤组织的诱导培养方法。
2. 了解胡萝卜愈伤组织诱导过程中各因素对愈伤组织生长的影响。
3. 熟悉无菌操作技术，提高实验操作的规范性和准确性。
二、实验材料1. 胡萝卜（品种：心里美）2. MS培养基母液3. 常用试剂：琼脂、蔗糖、硝酸铵、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素B1、氯化钙、氢氧化钠、盐酸、酒精等4. 实验器材：超净工作台、高压蒸汽灭菌器、移液器、剪刀、镊子、培养皿、培养瓶等三、实验方法1. 胡萝卜外植体的选取与消毒选取胡萝卜根尖部位作为外植体，用70%酒精消毒30秒，再用无菌水冲洗3次。
2. 胡萝卜愈伤组织的诱导培养将消毒后的胡萝卜外植体接种到MS培养基中，添加适量的植物生长调节剂（如2,4-D、NAA等），在恒温培养箱中培养。
3. 胡萝卜愈伤组织的继代培养当愈伤组织生长到一定阶段后，将其转移到新的培养基中进行继代培养，继续观察愈伤组织的生长情况。
4. 胡萝卜愈伤组织的诱导效果分析通过观察愈伤组织的生长速度、颜色、质地等特征，分析不同植物生长调节剂对愈伤组织诱导的影响。
四、实验结果1. 胡萝卜愈伤组织的诱导培养在MS培养基中添加2,4-D浓度为0.5mg/L时，胡萝卜愈伤组织诱导效果最佳，诱导率可达90%。
2. 胡萝卜愈伤组织的继代培养在继代培养基中，胡萝卜愈伤组织的生长速度较快，颜色逐渐变浅，质地逐渐变软。
3. 不同植物生长调节剂对愈伤组织诱导的影响在实验中，我们发现2,4-D、NAA、IAA等植物生长调节剂对胡萝卜愈伤组织的诱导效果有一定影响。
其中，2,4-D浓度在0.5mg/L时，诱导效果最佳。
五、实验结论1. 胡萝卜愈伤组织诱导培养是一种有效的植物组织培养方法，可用于植物繁殖、基因转化等研究。
2. 在胡萝卜愈伤组织诱导过程中，植物生长调节剂2,4-D对愈伤组织的诱导效果最佳。
3. 通过实验，我们掌握了胡萝卜愈伤组织诱导培养的基本操作技术，为进一步研究植物组织培养提供了实验基础。
实验：胡萝卜愈伤组织的培养
C1-愈伤组织 C2-形成层
四、实验结果
• 计算：
• 污染率=污染的材料数/总接种材料数 ×100% • 诱导率=形成愈伤组织的材料数/总接种材料 数×100%
3-4周后完全形成愈伤组织状态（脱分化） 组织块失去色素
把脱分化后的愈伤组织转移到培养基上
7~8周左右开始再分化，长出幼苗
一、实验背景及目的
• 3.实验分组
• 2-3人一组，每组做4个样品
二、实验仪器、材料及试剂的配制
• 1.实验仪器
• 生化培养箱，高压灭菌锅，超净工作台，医 用解剖刀，镊子，三角瓶，烧杯，平皿，灭 菌滤纸
二、实验仪器、材料及试剂的配制
• 2.材料及试剂 • ⑴实验材料：胡萝卜
二、实验仪器、材料及试剂的配制
一、实验背景及目的
植 外植 物 体脱 组 分化 织 培 养 基 本 步 骤 愈 伤 组 织 芽 根 器官发生 愈 伤 组 织 胚 状 体 植 物 体 植 物 体
人参愈伤组织
胚状体发生
一、实验背景及目的
• 2.实验目的 ⑴ ⑵ ⑶
熟练掌握植物组织培养的方法及其要点 熟练掌握培养基的配制 学会将胡萝卜根培养成愈伤组织
细胞分裂素
三、实验内容
• 2.培养基灭菌
三、实验内容
• 3.取材与消毒 • ⑴取材
P-木质部 C-形成层 X-韧皮部
三、实验内容
• ⑵消毒
• 切片经70%乙醇浸泡
5min，用20%次氯酸钠液
消毒20min。移入无菌 室，用无菌水洗3~5次。
将灭菌材料放在灭菌的滤 纸上，吸干水分。
三、实验内容
大量元素
微量元素
铁盐 有机物质
胡萝卜愈伤组织的诱导
本科学生综合性实验报告
学号074120219 姓名吕师留
学院生命科学学院专业、班级07级应生A班实验课程名称植物组织培养实验
教师及职称龙维彪（讲师）
开课学期2009 至2010 学年下学期
填报时间2010 年 5 月11 日
云南师范大学教务处编印
一．实验设计方案
1．实验现象与结果
1.1我们小组负责配制有机成分母液的配制，配好后透明澄清，配制完成，下一星期再用时也没有产生沉淀。
1.1.2胡萝卜块根接种经两个星期培养的结果为所示：
由于我的图片没有，所以只能写下记录结果本次实验形成愈伤组织的效率是100%每一瓶的接种量为5块。
有两瓶比较好，一瓶被烫伤一点，主要的原因是接种时胡萝卜块大小适中，且无菌操作好。
1.1.3胡萝卜愈伤组织接种后，经两个星期培养的结果为如下图所示：
此次实验圆满成功，愈伤组织多，且多，色泽鲜艳，质地疏松，都过60ml的刻度线。
3．实验总结
此次实验获得圆满成功，学会了无菌操作，且其他操作技能也得到锻炼。
教师评语及评分：
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胡萝卜愈伤组织实验报告
北京师范大学珠海分校实验报告姓名：实验名称：胡萝卜愈伤组织的诱导学院（系、所）：工程技术学院学科专业：生物技术导师姓名：报告时间：2012.2.15—2012.3.20实验序号01实验名称胡萝卜愈伤组织的诱导实验时间2012.2.15—2012.3.20实验室工程技术学院1206 1209 1．研究背景1.1 胡萝卜胡萝卜（Daucus carrot），属于十字花科植物，是一种十分重要的蔬菜植物。
由于其营养价值高,及其适于生食、加工、烹调等多种用途,在世界范围内广泛栽培。
中国是农业大国,胡萝卜作为蔬菜作物在人们生活中起着重要的作用.因此,加快我国胡萝卜育种研究以成为迫切需要。
近些年来,随着生物技术与分子生物学技术的快速发展，作为生物技术研究的理想材料，许多国家对胡萝卜体细胞杂交技术、遗传转化与再生技术、分子标记与基因克隆技术进行了广泛深入的研究。
我国科研工作者在胡萝卜的生物技术与分子生物学研究上也取得了一定进展，特别是在组织培养、原生质体融合、遗传转化及再生等方面。
但是在胡萝卜细胞培养方面并不是太多。
因此继续深入研究还是很有必要的。
此外，由于市面上的胡萝卜价格比较便宜，材料易得，而且在组织培养方面容易诱导发生，我们可以通过这个实验熟悉植物组培。
1.2 组织培养植物组织培养概念（广义）又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织。
器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。
植物组织培养概念（狭义）指用植物各部分组织，如形成层。
薄壁组织。
叶肉组织。
胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。
2．实验设备与材料2.1 实验设备冰箱、普通天平、分子天平、试剂瓶（棕色和白色）、量筒、烧杯、容量瓶、药勺、称量纸、玻棒、标签纸、三角瓶、吸管、玻璃棒、精密pH试纸（5.4～7.0）、PH试纸（5.4～7.0）、封口膜、橡皮筋、微波炉、高压蒸汽灭菌锅、已灭菌滤纸、手术剪、解剖刀、已灭菌培养皿、酒精灯、大烧杯、小烧杯、50ml三角瓶、50ml 量筒、100ml量筒、10ml和5ml还有2ml吸管、200ml定容瓶。
胡萝卜愈伤组织诱导
3、接种：左手拿装有培养基的三角瓶，接 近酒精灯，用右手揭去盖，将瓶外部在灯 焰上燎数秒钟，并旋转使充分灼烧灭菌， 右手用镊子夹取材料小片送入瓶内，平放 于培养基表面，轻按一下，使其紧密接触 培养基。每瓶3块，均匀分布，封好瓶口。 4、培养：放入25℃温箱中暗下培养一个月。
实验结果
记录时间 污染数量 外植体形态变化 愈伤组织分化情况
2、外植体材料消毒：取6—8cm长的胡萝卜一段进行以下
操作： 1）清洗：（流水冲洗）以下各步在超净台上进行； 2）将材料转入无菌烧杯或罐头瓶，加入75%酒精浸泡1—2min； 3）倒去酒精用0.1%升汞浸泡10—15min，不断搅拌； 4）倒去升汞用无菌水洗涤3—5次； 5）转入吸水纸上； 6）用解剖刀切去两端各1cm部分，将中断切成0.7cm厚的薄圆 片； 7）将圆片移至无菌的部分，用刀切去外皮和中柱部分，将形 成层切成1cm2的小片。
大量元素、微量元素、铁盐、有机物、植物激素
1）从母液中取出（移液管）所需的大量元素、微量元素、铁盐、有 机成分，注意计算清楚各种物质在所须配制总体积下的加入量，将其放 入小烧杯中； 2）在洁净的搪瓷缸里加入一定量的水（3/4）及所需要的琼脂，加热 并不时搅拌，注意防止琼脂沉底焦糊； 3）待琼脂溶解（呈透明状，即无固体条状或丝状物，均匀而透亮） 后，加入（1）中所取的各种母液及糖，并不断搅动使其混合均匀。 4）用1N HCl or NaOH 调整PH值到所须值（一般为5.8） 5）加水至所须刻度； 6）趁热将培养基分装到培养用的容器（三角瓶等）中，注意不要把 培养基黏附到瓶口或瓶口附近的内壁上，以免今后引起污染； 7）将分装好培养基的容器盖上盖子； 8）高压灭菌后取出，放于室温中冷却备用。 培养基及无菌用品的灭菌，121℃，30min。
生物胡萝卜实验报告
一、实验目的1. 掌握植物组织培养的基本原理和方法。
2. 学习胡萝卜愈伤组织的诱导、继代培养和细胞悬浮培养技术。
3. 了解胡萝卜体细胞胚胎发生培养的过程。
二、实验原理植物组织培养技术是利用植物细胞的全能性，通过人工控制培养条件，使植物细胞或组织在体外发育成完整植株的技术。
胡萝卜愈伤组织诱导、继代培养和细胞悬浮培养是植物组织培养技术中的重要环节。
三、实验材料与仪器材料：- 胡萝卜- MS培养基- 营养液- 消毒剂- 玻璃器皿- 移液器- 高压蒸汽灭菌器- 恒温培养箱四、实验步骤1. 胡萝卜外植体消毒- 将胡萝卜洗净，切成小块，用70%酒精消毒30秒，然后用无菌水冲洗3次。
- 将消毒后的胡萝卜小块接种于MS培养基中。
2. 愈伤组织诱导- 将接种后的胡萝卜小块放入恒温培养箱中培养，温度控制在25℃左右，光照时间为12小时/天。
- 观察胡萝卜小块的愈伤组织形成情况。
3. 愈伤组织继代培养- 将形成的愈伤组织转移到新的MS培养基中进行继代培养。
- 继代培养过程中，每隔一段时间更换一次培养基。
4. 细胞悬浮培养- 将继代培养后的愈伤组织切成小块，接种于营养液中。
- 将接种后的细胞悬浮培养于恒温培养箱中，温度控制在25℃左右，光照时间为12小时/天。
- 观察细胞悬浮培养过程中细胞生长和繁殖情况。
5. 胡萝卜体细胞胚胎发生培养- 将细胞悬浮培养获得的细胞转移到新的培养基中进行胚胎发生培养。
- 观察胚胎发生培养过程中胚胎的形成情况。
五、实验结果与分析1. 愈伤组织诱导- 在适宜的培养条件下，胡萝卜小块逐渐形成愈伤组织。
2. 愈伤组织继代培养- 经过继代培养，愈伤组织数量增加，体积增大。
3. 细胞悬浮培养- 细胞悬浮培养过程中，细胞生长和繁殖良好，形成了大量悬浮细胞。
4. 胡萝卜体细胞胚胎发生培养- 胚胎发生培养过程中，部分细胞形成了胚胎，进一步发育成胡萝卜植株。
六、实验结论1. 通过本实验，成功诱导了胡萝卜愈伤组织。
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本科学生综合性实验报告
学号姓名
学院专业、班级
实验课程名称植物组织培养实验
教师及职称
开课学期2013 至2014 学年第二学期填报时间2014 年06 月20 日
云南师范大学教务处编印
一、实验设计方案
二、实验报告
愈伤组织诱导结果图片：
（4）胡萝卜愈伤组织继代培养基的配制 按照步骤，正确配制出继代培养基
（5）胡萝卜愈伤组织的继代培养
污染情况及 原因分析
五瓶中污染了三瓶，都是细菌污染，有一瓶污染较严重，整个瓶子呈棕黄色，上面长了黄色原点菌落。
这个是因为在接种期间最后用薄膜封口时，因为瓶口温度太高，将薄膜烫破了，我另外找了其他未消过毒的薄膜封口，导致污染。
其他两瓶情况较轻，有一瓶只污染了一块胡萝卜。
估计是自己在接种过程中操作不当，镊子碰到瓶口导致材料污染了。
胡萝卜愈伤组织继代培养结果图片：增值培养基上长出的愈伤组织：
继代培养基上长出的愈伤组织图片：
2．对实验现象、实验结果的分析及其结论
在第一次实验，配制MS培养基的母液时，我们组配制的是“有机成分”的部分，在配制的过程中，由于PH的调节不到位，没有准确的调至6.2，导致最后培养基在灭菌后没有凝固，所以又重新做了一次。
第二次进行培养愈伤组织诱导培养基的实验，我们吸取了第一次的经验，很认真的按照要求配制，所以一次性配制好所需培养基。
第三次是进行胡萝卜愈伤组织的诱导，从最后的结果来看自己做的不太好，污染了三瓶，其中有一瓶是自己在封口时将瓶口的温度加热的过高，将封口膜烫破，导致最后只能用其他未消毒的封口膜代替，所以污染严重。
其他两瓶，可能是在接种过程中，对已消毒的镊子和解剖刀操作不当，导致材料被污染。
第四次继代培养基的配制还算顺利。
最后将愈伤组织继代后的结果还算好，四瓶都没有被污染，但是由于自己的材料继代后培养的时间不长，所以长势一般。
从上面的图片中可以明显看出6-1即增值培养基中继代的较好，愈伤组织很疏松。
在6-2即继代培养基中的愈伤组织呈现很紧实的状态，颜色较深。
3．实验总结。