木香基因组DNA的提取方法
实验一植物基因组DNA提取
DNA的紫外分光光度计检测
原理：核酸在260nm处有最大吸收峰 蛋白质在280nm处有最大吸收峰 盐和小分子在230nm处有最大吸收峰
OD260/OD280>1.7 OD260/OD230>2.0 1OD260=50 μg/mL DNA
思考题:
1. 如何检测和保证DNA的质量？ 2. 基因组提取过程中注意事项有哪些？
植物基因组DNA的提取
பைடு நூலகம் 一、实验目的： 1. 了解真核生物基因组DNA提取的一般 原理。 2. 掌握DNA提取的方法和步骤。
二、一般原理
提取DNA的一般原理，是将分散好 的真核生物组织细胞在含SDS和蛋白酶K 的溶液中消化分解蛋白质，再用酚：氯仿： 异戊醇抽提的方法去除蛋白质，得到的 DNA经乙醇沉淀方法进一步纯化。
三、材料
玉米叶片
四、设备
移液器，冷冻高速离心机，台式高速离 心机，水浴锅，陶瓷研钵，1.5 mL 离心管。
五、试剂
1. 提取缓冲液： 100mmol/L Tris·Cl，20mmol/L EDTA，500mmol/L NaCl，1.5% SDS。
2. 氯仿：异戊醇：乙醇（80：4：16）。 3. TE缓冲液：10mmol/L Tris·Cl（pH8.0），
7.室温下12000rpm离心5 min。
8.吸取600ul上清液加入等体积的异丙醇，上下颠倒充 分混匀，观察絮状沉淀，后12000rpm离心5min。
9.倒去上清后用70%的乙醇清洗两次，每次在 12000rpm下离心1min。空气中干燥，后加入30ul 的TE（或ddH2O）缓冲液，充分溶解。
10.DNA用于后续实验研究或放于-20 ℃保存备用。
1mmol/L EDTA（pH8.0）。 4. 其他试剂：液氮，异丙醇，无水乙醇，70%乙醇，
DNA的提取方法
DNA的提取方法DNA提取是在分子生物学研究和临床诊断中非常重要的步骤。
DNA提取的目的是获取足够纯净的DNA样本，以供后续实验和分析使用。
这篇文章将介绍几种常用的DNA提取方法。
1.高盐法：高盐法是最常用的DNA提取方法之一、它通过加入高盐浓度的缓冲液来破坏细胞膜并释放DNA。
首先，待提取的细胞或组织样本被收集并转移到离心管中。
接下来，加入裂解缓冲液，通常含有高浓度的盐并对抗离子泵，从而使细胞膜破裂并释放DNA。
裂解后，使用酒精或酚/氯仿萃取法来分离DNA与其他细胞组分。
最后，通过旋转沉淀法或乙醇沉淀法从溶液中提取DNA。
2.CTAB法：CTAB法是一种适用于植物和真菌等高纤维、低DNA含量的样品提取方法。
CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）作为一种阴离子表面活性剂，可以结合在DNA和脂质上，并形成沉淀，从而使DNA分离出来。
首先，样本被粉碎并浸泡在CTAB缓冲液中，含有CTAB、盐和EDTA等。
接下来，DNA与其他细胞组分一起沉淀，通过聚乙二醇进行沉淀，并通过离心分离。
然后，洗涤DNA沉淀并通过乙醇沉淀法或旋转沉淀法提取DNA。
3.柱式纯化法：柱式纯化法是一种用于高质量DNA提取和纯化的流程。
该方法基于DNA与硅胶膜吸附和洗脱的原理。
首先，细胞或组织样品经过裂解后，溶液经过去蛋白酶和去RNA酶处理。
然后，将样品通过柱子，DNA与硅胶膜相互作用，并形成强烈的结合，同时其他细胞组分被清除。
接着，使用洗涤缓冲液去除杂质，最后使用低盐缓冲液来释放DNA。
这种方法可以提供高纯度的DNA样本，适用于大规模DNA提取和高通量分子生物学实验。
4.磁珠法：磁珠法是一种基于磁性珠子的DNA提取方法。
该方法使用特定大小和表面修饰的磁性珠子将DNA选择性地吸附到表面上。
首先，待提取的细胞或组织样本被裂解，并加入磁珠和DNA结合缓冲液。
接下来，通过磁力将磁珠与DNA结合物分离出来，并洗涤去除杂质。
最后，通过低盐缓冲液将DNA释放出来并收集。
植物基因组DNA的提取及分析
植物基因组DNA的提取及分析一、植物基因组DNA提取的步骤：1.样本的准备：从植物中选择健康和新鲜的组织样本，如叶片、茎、根等。
样本选择要避免含有大量的绒毛、叶色不正常等因素的部位。
2.细胞破碎：将样本放入液氮中迅速冷冻，然后用研钵和研钉对样本进行研磨，直至样本完全破碎。
3.细胞裂解：将研磨的样本加入裂解缓冲液，边振荡边研磨使样本均匀混合。
4.蛋白质去除：使用酚/氯仿提取法去除蛋白质。
加入等体积的酚/氯仿/异丙醇混合液，轻轻混合，然后离心离心管以分离上清和下层。
5.DNA沉淀：将上清转移至新的离心管中，加入等体积的冷乙醇进行DNA沉淀。
静置一段时间后，离心离心管以沉淀DNA。
6.DNA洗涤：将DNA沉淀物用70%乙醇洗涤一至两次，去除残留的盐和其他杂质。
7.DNA溶解：用适量的稳定缓冲液溶解DNA，使其达到一定浓度并避免降解。
二、植物基因组DNA分析的方法：1.PCR扩增：PCR技术可以通过放大DNA片段来研究特定基因或DNA 序列。
首先选择适当的引物，然后将DNA样本与引物、核酸酶、dNTPs等反应液混合，进行多次循环的变温扩增反应。
2.聚丙烯酰胺凝胶电泳：将PCR扩增的产物与DNA分子量标记物置于聚丙烯酰胺凝胶中，然后进行电泳。
电泳结束后，通过紫外线照射或染色剂染色，观察电泳图谱，可以得到DNA片段的大小和数量。
3.酶切电泳：使用限制性内切酶切割DNA片段，然后将切割后的DNA 片段进行电泳分析。
根据DNA片段的大小和相对迁移速度，可以进行DNA 的分析和比较。
4.南方杂交：将DNA样本与标记了放射性同位素或荧光染料的DNA探针进行杂交反应。
通过探针与目标DNA片段的互补配对，可以检测目标DNA的存在和数量。
5.DNA测序：通过测序技术获得DNA序列信息，可以揭示基因组的结构和功能。
通过以上方法，我们可以提取和分析植物基因组DNA，更好地了解植物基因组的组成和功能，为植物的遗传改良和研究提供重要的信息。
植物提取dna的步骤及原理
植物提取dna的步骤及原理以植物提取DNA的步骤及原理为标题，本文将介绍植物提取DNA 的基本步骤以及相关原理。
植物提取DNA是指从植物细胞中分离出DNA分子的过程。
植物细胞中的DNA包含了植物的遗传信息，因此提取植物DNA对于遗传研究和基因工程具有重要意义。
下面是植物提取DNA的基本步骤：步骤一：准备样品需要选择一种适合的植物样品。
可以选择新鲜的叶片、茎段或种子作为样品。
样品应该尽可能新鲜，并且避免受到污染或损伤。
步骤二：打碎细胞将样品放入冰冻细胞研磨器中，加入研磨缓冲液，并用研磨器将样品研磨成细胞悬浮液。
研磨缓冲液中的盐和洗涤剂有助于破坏细胞壁，并释放细胞内的DNA。
步骤三：溶解细胞膜将研磨后的细胞悬浮液转移到离心管中，并加入含有洗涤剂的细胞裂解液。
洗涤剂能够破坏细胞膜，使DNA从细胞中释放出来。
步骤四：沉淀DNA将细胞裂解液置于高速离心机中进行离心，离心过程中，DNA会被沉淀到离心管底部形成一个白色的沉淀物。
离心后，将上清液倒掉，只保留沉淀物。
步骤五：洗涤DNA使用75%乙醇溶液洗涤DNA沉淀物，以去除离心过程中残留的盐和洗涤剂等杂质。
洗涤后，用吸管或微量移液器将乙醇溶液完全抽尽，避免干燥过程中DNA沉淀物溶解。
步骤六：溶解DNA将洗涤后的DNA沉淀物用适量的溶解液溶解，常用的溶解液包括TE缓冲液或纯净水。
溶解后的DNA溶液可以用于后续的实验操作，如PCR扩增、酶切等。
以上就是植物提取DNA的基本步骤，下面将简要介绍相关的原理。
DNA提取的原理主要基于细胞的破坏和DNA的溶解。
在打碎细胞的过程中，使用研磨缓冲液破坏细胞壁，释放细胞内的DNA。
细胞裂解液中的洗涤剂能够破坏细胞膜，使DNA从细胞中释放出来。
离心过程中，DNA分子由于其较大的分子量而沉淀到离心管底部，而其他细胞碎片和杂质则在上清液中。
洗涤过程中使用的乙醇溶液能够去除离心过程中残留的盐和洗涤剂等杂质。
最后，将DNA沉淀物溶解在适当的溶解液中，得到DNA溶液。
植物基因组DNA提取步骤
植物基因组DNA提取实验操作步骤1 取植物新鲜组织约100 mg或干重组织约30 mg，加入液氮充分研磨。
（植物细胞有细胞壁,液氮可以让细胞冷冻起来,变得很脆,这样容易破细胞壁。
同时,液氮的超低温可以大大降低酶活性,防止降解。
注：1、液氮的温度是-196℃，不要冻伤自己的手，带上手套。
2、用一个保温杯，大一点的，把液氮取出来放在保温杯里，盖上盖子。
3、然后用液氮将研磨棒和研钵预冷。
4、将样品快速放入研钵中，快速研磨，在液氮挥发完之前再加入液氮，一定不要让液氮挥发完或者样品呈现那种黏糊的状态，这样样品中DNA容易降解。
5、等到样品呈现细粉末状态了基本就可以了，用药勺把样品迅速舀到1.5ml 离心管里。
）2 将研磨好的粉末迅速转移到预先装有700 μL 65℃预热缓冲液GP1的离心管中（实验前在预热的GP1中加入巯基乙醇，使其终浓度为0.1%），迅速颠倒混匀后，将离心管放在65℃水浴20 min，水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。
（水浴时间依实验具体情况而定，看样品裂解情况，具体看裂解液变得清澈透明为止）3 加入700 μL氯仿，充分混匀，12,000 rpm（~13,400×g）离心5 min。
注：若提取富含多酚或淀粉的植物组织，可在第3步前，用酚：氯仿/1:1进行等体积抽提。
4 小心的将上一步所得水层上相转入一个新的离心管中，加入700 μL缓冲液GP2，充分混匀。
5 将混匀的液体转入吸附柱CB3中，12,000 rpm（~13,400×g）离心30 s，弃掉废液。
（吸附柱容积为700μL左右，可分次加入离心。
）6 向吸附柱CB3中加入500 μL缓冲液GD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm（~13,400×g）离心30 s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
7 向吸附柱CB3中加入600 μL漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm（~13,400×g）离心30 s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
基因组dna提取流程 -回复
基因组dna提取流程-回复提取基因组DNA是生物学研究和分子生物学实验中的常见步骤之一。
DNA提取过程的主要目标是从细胞中分离纯净的DNA，这样可以进一步进行PCR扩增、测序、限制酶切等实验。
DNA提取的过程需要使用特定的试剂和仪器，并遵循一系列的步骤来确保高质量的DNA样品。
下面将分步介绍DNA提取的流程。
步骤一：准备样品在开始DNA提取之前，需要准备样品。
样品可以是从动植物组织、细菌或真菌中获得的样本。
根据样本的类型，准备的方法可能会有所不同。
对于动植物组织样品，通常需要将样品切碎或磨粉。
这可以通过使用刀具、搅拌器、研钵等实现。
对于一些特殊的组织或植物种类，可能需要优化样品的处理方法。
对于细菌样品，可以利用细菌培养物进行提取，或者直接收集细菌进行提取。
对于培养物，需要将其以高速离心的方式收集下来，并洗涤去除附着在细胞表面的其他物质。
步骤二：细胞破碎细胞破碎是提取DNA的关键步骤之一。
它的目的是破坏细胞膜和核膜，释放DNA。
有许多方法可以破碎细胞，常见的有以下几种：1. 物理破碎：通过高速离心或超声波处理来破坏细胞。
高速离心将沉淀细胞，超声波处理则通过施加强大的震荡来破坏细胞结构。
2. 化学破碎：使用洗涤剂来破坏脂膜和脂蛋白，使细胞破裂。
洗涤剂会溶解脂质双层，使DNA被释放到溶液中。
3. 酶解破碎：使用特定的酶来消化细胞壁或细胞膜，从而释放DNA。
例如，对于真菌样品，可以使用纤维素酶和壁脲酶来消化细胞壁。
步骤三：DNA纯化在细胞破碎后，需要将DNA与其他细胞组分分离。
这样可以去除蛋白质、RNA和其他污染物，使DNA样品更为纯净。
1. 蛋白质消化：可以使用蛋白酶来消化蛋白质。
蛋白酶会降解蛋白质，使其释放出来。
随后，可以使用盐溶液和有机溶剂提取DNA。
2. RNA消化：利用核酸酶消化RNA。
核酸酶将特异性地降解RNA，而不会对DNA产生影响。
消化后，可以使用盐溶液和有机溶剂进行DNA的提取。
3. DNA沉淀：通过向DNA溶液中添加盐和酒精，可以使DNA凝聚成可见的颗粒。
基因组dna提取流程
基因组DNA提取的流程
1. 样本选择：选择适合提取基因组DNA的样本类型，如细胞、组织或血液。
确保样本保存在合适的条件下，以保持DNA的完整性。
2. 细胞破碎：对于细胞样本，首先需要将细胞破碎以释放DNA。
可以使用物理方法，如机械剪切或超声波处理，或者使用化学方法，如洗涤溶解和细胞裂解酶处理。
3. DNA溶解：将细胞裂解提取物加入DNA溶解缓冲液中，以彻底溶解DNA。
4. 去除杂质：通过离心、过滤或沉淀等方法去除蛋白质、RNA 等杂质。
5. 纯化DNA：使用吸附剂、洗涤剂或沉淀剂等方法去除剩余的杂质，得到纯化的基因组DNA。
6. 检测与定量：通过电泳、荧光光谱等技术检测提取的DNA质量和浓度，确保提取的DNA满足后续实验的要求。
以上是基因组DNA提取的一般流程，具体操作可能会因实验条件、样本类型和目标DNA的不同而有所差异。
基因组dna提取的基本步骤
基因组dna提取的基本步骤嘿，咱今儿个就来唠唠基因组 DNA 提取的那些事儿！这可是个相当重要又有趣的过程呢！你想想看，就好像在一个巨大的宝库中寻找珍贵的宝藏一样。
首先呢，得把细胞给弄破，这就好比打开宝库的大门。
细胞就像是一个个装着宝贝的小箱子，咱得想办法把它们弄开。
然后呢，就是要把那些乱七八糟的杂质给去掉。
这就跟挑拣珍珠似的，把那些不是珍珠的沙石啊什么的都给剔除掉，只留下咱们想要的DNA。
这可不是个容易的事儿，得细心再细心。
接下来，就是让 DNA 沉淀下来啦。
就好像让那些珍贵的宝贝慢慢从溶液中显现出来，乖乖地聚集在一起。
再之后，把沉淀的 DNA 收集起来。
嘿，这可就像是把找到的宝贝小心翼翼地放进小口袋里，可不能弄丢了哦。
之后还得把它洗一洗，把那些可能还残留的杂质给洗掉，让 DNA 变得干干净净的。
提取基因组 DNA 可不比咱平时做个简单的手工活呀，这得非常认真才行。
要是不小心出了错，那可就前功尽弃啦！就好像你千辛万苦走到宝库门口，结果钥匙掉了，那多可惜呀！在这个过程中，每一步都得稳稳当当的，不能有丝毫马虎。
就像走钢丝一样，得时刻保持平衡，稍有不慎就会掉下去。
而且呀，不同的样本可能还会有不同的情况呢！这就好比有的宝库门好开，有的可就难开啦。
所以咱得根据具体情况来调整方法，可不能死脑筋哦。
提取基因组 DNA 这件事啊，真的是既充满挑战又充满乐趣。
当你成功地提取出纯净的 DNA 时，那种成就感，哇，真的是无与伦比！就好像你终于找到了传说中的宝藏，那种兴奋和喜悦简直无法用言语来形容。
所以呀，别小看了这基因组 DNA 提取，这里面的学问可大着呢！咱可得认真对待，好好钻研，说不定哪天你就能成为这方面的专家啦！嘿嘿，加油吧！。
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木 香 基 因 组 Ｄ Ａ 的 提 取 方 法 Ｎ
余 晓 丽
（ 汉 工 业 学 院 ， 汉 ，３ ０ ３ 武 武 ４０２ ）
范 喜梅
（ 焦作师范高等专科学校 ）
刘 实
（ 邑 县 高级 中学 ） 夏
摘 要 以木 香作 为实验材 料 ， 用简单提取 法 、 良 Ｃ Ａ 利 改 Ｔ Ｂ法、 良 Ｓ Ｓ法、 良 Ｃ Ａ 改 Ｄ 改 Ｔ Ｂ—Ｓ Ｓ法和 高盐低 Ｄ ｐ Ｈ值法对木香基 因组 Ｄ Ａ进行提取 ， Ｎ 并对其基 因组 Ｄ Ａ的纯度和含量进行 测定。结果表 明： Ｎ 利用 以上 ５种方 法 提取的木香基 因组 Ｄ Ａ。 Ｎ 在纯度和含量上 以改 良 Ｃ Ａ Ｔ Ｂ法效 果最好 ， 它依 次是改 良 Ｓ Ｓ法、 其 Ｄ 简单 法、 高盐低 ｐ Ｈ
Ｆｉｅ ｍｅ ｈ ｄｓ，ｉ ｌ ｉ ｉ ｐｅ ｅ ｔａ ｔｏ ｔ ｏ ｖ ｔｏ ｎｃｕｄｎｇｓｍ ｌ ｘｒ ｃ ｉｎ ｍｅ ｈ ｄ，ｉ ｍｐｒ ｖ ｄ ｏ ｅ ＣＴＡＢ ｔ ｏ ｍｅ ｈ ｄ，ｉ ｍｐｒｖｅ ＳＤＳ ｍｅ ｈ ，ｉ ｏ ｄ ｔｏ ｄ ｍｐｒ ｖ ｄ ＣＴＡＢ— ｏｅ
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第３ ５卷 第 ８期
２０ ０ ７年 ８月
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北
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后 ， 速倒入装有 ６０ Ｉ Ｎ 迅 ０ ＬＤ Ａ提 取液 （ 热 ６ ） ４ Ｌ 预 ５ 和 ｏ Ｂ一巯 基 乙 醇 于 １５ｍ ． Ｌ离 心 管 中 ， 分 摇 匀 后 ， 放 于 ６ 充 再 ５℃ 水浴保温 ６ ｎ １ ０ ｍ ｎ离心 ３ｍ ｎ ０ｍｉ，０００ｒ ｉ ／ ｉ。取上清液 ， 加入等 体 积 的 氯 仿 ： 戊 醇 （４ １ ， 分 摇 匀 后 １ ０ ｍｎ离 心 ３ 异 ２： ）充 ００ ０ｒ ｉ ／ ｍ ｎ取 上 清 液 ； 加 入 等 体 积 的苯 酚 ： 仿 ： 戊 醇 （５ ２ ： ） ｉ， 再 氯 异 ２ ：４ １ 重复抽提 ２次后 ， 次取 上清液 ， 再 加入 ２倍 体积预冷的无 水乙 醇， 在冰箱 中静置 ２ ｉ 后 ， ０ｍ ｎ 出现 白色絮状 物 ，２ ０ ｍｉ １ ０ ０ｒ ｎ离 ／ 心 ３ｍ ｎ ｉ。将所得沉 淀 用 ７ ％ 的 乙醇 洗 涤 ２次 ， ０ 风干 后溶 于 ４ ＬＴ ０ Ｅ中 。 改 良ＣＡ Ｔ Ｂ法 “ｊ称取 ００ ： ．５ｇ叶片 ， 用液氮 研磨 至细粉 状 后 ， 速 倒 入 装 有 ６０ ｐ 迅 ０ ， Ｌ的 Ｃ Ａ Ｔ Ｂ提 取 液 （ 热 ６ 预 ５℃ ） 和 ４ ， ０ｐ Ｂ一巯基乙醇的 １５ｍＬ离 心管中 ， 分摇 匀后 ，５℃水 Ｌ ． 充 ６ 浴保温 ６ ｎ １ ０ ｍｉ 心 ３ｍｉ。其余 步骤 与简 易提 ０ｍｉ，００ ０ｒ ｎ离 ／ ｎ
Ｓ Ｓ ｍｅｈ ｄ，ａ ｄ ｍｅｈ ｆ ｉｈ ｓｌ ａ ｄ ｌｗ ｐ ｖ ｌ ｅ ｅ ｅ ｕ ｅ ｘｒ ｃ ｅ ｏ ｃ ＤＮ ｆ ｍ ｓ ａ ｋ ｉｅ ｈ ｕ ． Ｄ ｔ ｏ ｎ ｔｏ ｏ ｇ ａｔｎ Ｈ ａｕ ．ｗ ｒ ｓ ｄ ｔ ｅ ｔ ｔ ｎ ｍｉ Ａ ｒ Ｒｏａ ｂ ｎ ｓａ ．Ｔ ｅ ｐ ｒ ｄ ｈ ｏ ｏ ａ ｇ ｏ ｉ
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