人可溶性血栓调节蛋白sTM试剂盒ELISA
人可溶性血栓调节蛋白(sTM)试剂盒(ELISA)
使用说明书
●本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样
本中人可溶性血栓调节蛋白(sTM)的含量。
●有效期:6个月
●保存条件:2-8℃
●本试剂盒仅供体外研究使用,不用于临床诊断
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。
往预先包被人可溶性血栓调节蛋白(sTM)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的人可溶性血栓调节蛋白(sTM)呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
1. 血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2. 血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。
将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。
推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。
为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。
最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本:1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
1. 本公司只对试剂盒本身负责,不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责,请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量,预留充足的样本。
2. 实验前应预测标本含量,如果标本浓度过高,应对标本进行稀释,使稀释后的标本符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。
标本使用0.01mol/L的PBS稀释(PH=7.0-7.2)。
3. 若所检样本不包含在说明书所列样本之中,建议进行预实验验证其有效性,并注意留存样本。
4. 使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致ELISA实验结果偏差。
5. 若样本为细胞培养上清,因该类样本干扰因素较多,如:细胞状态、细胞数量、采样时间等,所以可能存在检测不出的情况。
6. 某些天然蛋白或重组蛋白,包括原核及真核重组蛋白,可能因为与本产品所使用的检测抗体及捕获抗体不匹配,而不被检测出。
7. 建议使用新鲜样本,保存时间过长可能会存在蛋白降解或变性导致实验结果偏差。
1.酶标仪(450nm)
2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒温箱
4.蒸馏水或去离子水
备注
1. 标准品浓度依次为:40、20、10、5、
2.5、0 ng/mL
2. 经过大量正常标本检验,标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内,实验过程中直接取50μL样本上样即可。
当有部分样本值超过最大标准品浓度时,可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。
1.严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。
所有试剂都必须在使用前达到室
温20-25℃。
使用后立即冷藏保存试剂。
2.洗板不正确可以导致不准确的结果。
在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。
温育过程中
不要让微孔干燥掉。
3.消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。
4.底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。
5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6.在储存和温育时避免强光直接照射。
7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
8.任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。
任何漂白成分都会破坏
试剂盒中反应试剂的生物活性。
9.不能使用过期产品。
10.如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置。
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。
20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3. 样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
以所测标准品的OD值为横坐标,标准品的浓度值为纵坐标,在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线,并得到直线回归方程,将样品的OD值代入方程,计算出样品的浓度。
1.检测范围:1.25 ng/mL – 40 ng/mL。
2.灵敏度:最低检测浓度小于0.1 ng/mL。
3.特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4.重复性:板内变异系数小于10% ,板间变异系数小于15% 。
1. 由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供的所有原料进行全面的鉴定与分析,本产品可能存在一定的质量技术风险。
2. 最终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及当时的实验环境密切相关,请务必准备充足的标本备份。
3. 不同批次的同一产品可能会有少许差别,如:检测限、灵敏度以及显色时间等,请依据试剂盒内说明书进行实验操作,网站电子版说明书仅作参考。
4. 只有全部使用本试剂盒配套试剂才能保证检测效果,不能混用其他制造商的产品。
只有严格遵守本试剂盒的实验说明才会得到最佳的检测结果。
若实验效果不好,请及时对显色结果拍照,保留所用板条及未使用试剂,并妥善保存,然后联系我公司技术支持为您解决问题。
同时您也可以参考以下资料:。
人血管内皮生长因子 ELISA 试剂盒说明书
产品说明书人血管内皮生长因子ELISA试剂盒(Human VEGF ELISA KIT)产品货号:H6139S, H6139M, H6139L产品规格:24T, 48T, 96T产品内容:注:终止液和显色剂具有腐蚀性,一旦接触到液体,请尽快用大量清水冲洗。
储存条件4℃避光保存,有效期见外包装。
开封后,保存温度详见说明书。
产品介绍Human VEGF ELISA Kit (Human Vascular Endothelial Cell Growth Factor Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ,即人血管内皮生长因子ELISA试剂盒,可以定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液等样本中的天然和重组VEGF浓度。
人VEGF是由两个相同亚基以二硫键交联组成的二聚体糖蛋白,基因定位于第6号染色体长臂,由8个外显子和7个内含子交替构成,约14 kb。
由于mRNA剪接方式不同,产生了单链分别含121,145,165,183,189和206个氨基酸的不同变异体。
VEGF 121分子量约为34-46 kDa,是可溶性分泌型蛋白质,以游离状态存在,不能与肝素结合;VEGF 165分子量为45 kDa,30-50%以可溶性形式分泌于细胞外基质,其余部分与细胞膜、基底膜或细胞外基质含有肝素的糖蛋白结合。
VEGF 145存在于胎盘细胞和女性生殖道肿瘤细胞。
VEGF 189及VEGF 206分泌后完全结合于细胞膜或基底膜含有肝素的糖蛋白上。
骨骼肌,心肌,肝细胞,成骨细胞,中性粒细胞,巨噬细胞,角质形成细胞,血小板,褐色脂肪组织,CD34+细胞,星形细胞,神经元和内皮细胞等多种细胞和组织均可产生VEGF。
血清和血浆样本均可检测到VEGF,由于血小板可释放VEGF,因此血清中VEGF含量较高。
VEGF是一种特异作用于血管内皮细胞的多功能细胞因子,可增加血管通透性、促进血管形成、引起细胞外基质成分改变等。
尿毒症血液透析患者血浆ADAMTS-13变化与动静脉内瘘血栓形成的关系
尿毒症血液透析患者血浆 ADAMTS-13 变化 与动静脉内瘘血栓形成的关系
孔祥静 肖达平 徐静琳 韩颖敏
关键词 尿毒症;维持性血液透析;血管性血友病因子裂解酶;自体动静脉内瘘;血栓
维 持 性 血 液 透 析 (maintenance hemodialysis, MHD) 是治疗尿毒症常用手段。自体动静脉内瘘 (arteriovenous fistula,AVF)是行 MHD 患者常用的血 管通路,但 AVF 血栓形成是影响血液透析(hemodialysis,HD)正常进行、AVF 失功的主要原因[1-2]。 AVF 血栓形成是多种因素参与的病理过程,其中凝 血系统异常、炎症反应有主要促进作用[3]。研究发现, 血管性血友病因子裂解酶 (von Willebrand factorcleaving protease,ADAMTS-13) 在糖尿病视网膜病 变微血栓形成中发挥重要作用[4]。本研究通过检测尿 毒症 MHD 患者血浆 ADAMTS-13 水平,旨在分析其 与 AVF 血栓形成的相关性。
表 3 Logistic 回归分析尿毒症 MHD 患者发生 AVF 血栓的 影响因素
指标
B SE W ald P OR 95%CI
低密度脂蛋白胆固醇 0.073 0.105 0.487 0.485 1.076 0.876~1.322
ADAMTS-13
-0.397 0.101 15.489 约0.001 0.672 0.551~0.819
病者;(3)合并视听功能障碍、严重认知功能障碍、精 据。以均数依标准差(x依s)描述符合正态分布的计量
神疾病、语言交流障碍者;(4)既往有肾移植、腹膜透 数据,组间数据比较行独立样本 t 检验;计数数据用
析、HD 史者。
人(Human)白蛋白(Albumin)ELISA试剂盒
本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断人(Human)白蛋白(Albumin)ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。
往预先包被白蛋白(Albumin)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的白蛋白(Albumin)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1.血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5.保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪(450nm)2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用前充分摇匀。
上海笃玛生物科技有限公司试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注:标准品(S0-S5)浓度依次为:0、15、30、60、120、240ng/mL试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
血栓调节蛋白化学发光免疫分析检测方法的建立
中国生物工程杂志China Biotechnology,2021,41 (4) :30-36DOI:10. 13523/j.cb.2101031血栓调节蛋白化学发光免疫分析检测方法的建立李帅鹏1任和1安展飞2杨艳坤1白仲虎W(1江南大学粮食发酵工艺与技术国家工程实验室无锡214122 2江苏拜明生物技术有限公司盐城224〇05)摘要目的:建立并评价基于板式化学发光免疫分析(CLIA)平台的血栓调节蛋白(TM)定量检测 方法。
方法:以链霉亲和素包被微孔板,加入待检血浆,偶联生物素和辣根过氧化物酶的配对抗体组成分析体系,采用双抗体夹心模式,建立T M抗原定量检测方法,并对其进行条件优化和性能评价。
结果:生物素化抗体和酶标抗体的工作浓度分别为0.5 |xg/m L和0.75 ixg/mL,加样后的脖育时间选为15 min,最低检测限为0.2 TU/mL,该检测方法的检测范围为1 ~200TU/mL,批间和批内精密度(C V)均小于8%,37 t10天稳定性良好,207份临床血浆测值与希森美康测值相关性较高(R2 >0.96)。
结论:建立了 TM板式化学发光定量检测方法,且各项性能指标良好,可满 足临床检测的需要。
关键词血栓调节蛋白化学发光免疫分析检测方法性能评估中图分类号Q819血栓调节蛋白(thrombomodulin,TM)是一种广泛 存在于血管内皮细胞的跨膜糖蛋白,由557个氨基酸 组成,同时N端有一段18个氨基酸组成的信号肽[1~。
完整的T M有五个结构域,分别为凝集素样(lectin-like)结构域(TM-D1),六个表皮生长因子样(EGF-like)重复序列(TM-D2),丝氨酸/苏氨酸富集区域(TM-D3),跨膜结构域(TM-D4)和胞质尾(TM-D5 )[4~。
在 凝血酶介导的酶原蛋白C转换为活化蛋白C的过程中 首次发现TM,当T M存在时,该转换速度会提高1 000 倍以上[7\T M通过与凝血酶结合形成复合物激活蛋白C,水解凝血因子V illa和V a同时下调凝血酶的生成 发挥抗凝作用[8],活化蛋白C还会激活羧肽酶原,抑制 纤维蛋白溶解[6],通过抑制体内白细胞的滚动粘附等机制发挥抗炎作用[9]。
血栓性疾病分子标志物的临床应用ppt医学课件
APC-PII
VIIa
X
V
Va
Xa
凝血酶原
凝血酶
纤维蛋白原
纤维蛋白单体
纤维蛋白聚合物(可溶性)
稳定性纤维蛋白
TAT
F1+2
fpA
SFMC
fpBβ1-42
fpBβ15-42
纤溶系统
蛋白C抑制剂(PCI)
磷脂Ca2+
Ca2+
磷脂Ca2+
Ca2+
Ca2+
(内源性机制)
(外源性机制)
凝血酶-抗凝血酶复合物(TAT)
TAT(凝血酶抗凝血酶复合物)
在血栓前产生,半衰期3-15分钟,最能反映当下的病人状态
TAT的临床应用
1.DIC早期诊断(90%升高), TAT正常可排除DIC2.部分房颤、二尖瓣狭窄合并房颤,血栓前状态TAT增高3.血栓性疾病(深静脉血栓形成、肺栓塞、急性白血病及一些恶性肿瘤如肺癌时),TAT可显著增高 抗凝治疗效果判定溶栓治疗的再栓监测。溶栓治疗后2小时,若TAT<6ng/mL ,表明溶栓治疗成功;若溶栓治疗后36h, TAT>6ng/mL,表示冠状动脉可能出现再梗死。
PIC
PIC高值就意味着血中产生纤溶酶,反映纤溶系统亢进。纤溶亢进型的DIC中显著增加,但败血症等出现合并症的纤溶抑制型的DIC中出现轻度上升的情况较多。下肢深部静脉血栓症、解离性大动脉瘤的血栓封闭型时显示高值。
TM
结缔组织疾病、糖尿病、TTP等造成血管障碍恶化时上升。DIC中多种器官功能衰竭时也显示高值。反映内皮细胞损伤标志,全身性血管障碍。
凝血抑制
(外源性机制)
血管内皮细胞
PS
AT
Elabscience 人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明
(本试剂盒仅供体外研究使用,不用于临床诊断!)产品货号:E-EL-H6127产品规格:96T/48T/24T/96T*5Elabscience®人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书Human NGAL(Neutrophil Gelatinase Associated Lipocalin) ELISA Kit使用前请仔细阅读说明书。
如果有任何问题,请通过以下方式联系我们:销售部电话************,************技术部电话************具体保质期请见试剂盒外包装标签。
请在保质期内使用试剂盒。
联系时请提供产品批号(见试剂盒标签),以便我们更高效地为您服务。
用途该试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆或其它相关生物液体中NGAL浓度。
检测原理本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。
用抗人NGAL抗体包被于酶标板上,实验时样品(或标准品)中的人NGAL会与包被抗体结合。
后依次加入生物素化的抗人NGAL抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素,抗人NGAL抗体与结合在包被抗体上的人NGAL结合,生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。
加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。
用酶标仪在450 nm波长处测OD值,NGAL浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中NGAL 的浓度。
试剂盒组成及保存未拆封的试剂盒可在2-8℃保存一周;如果一周以后才使用试剂盒,请拆开试剂盒并按照下表中的条件分别保存各组分。
试剂体积以实际发货版说明书为准。
相关试剂在分装时会比标签上试验所需自备物品1.酶标仪(450 nm波长滤光片)2.高精度移液器,EP管及一次性吸头:0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL3.37℃恒温箱,4.双蒸水或去离子水5.吸水纸6.加样槽样品收集方法(具体处理方法可参考官网:/List-detail-241.html) 1.血清:全血样品于室温放置1小时或2-8℃过夜后于2-8℃,1000×g离心20分钟,取上清即可检测。
人胃蛋白酶原A(PG-A)ELISA试剂盒使用步骤
人胃蛋白酶原A(PG—A)ELISA试剂盒使用步骤本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断人胃蛋白酶原A(PGA)ELISA检测试剂盒检测原理试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。
往预先包被人胃蛋白酶原A(PGA)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并*洗涤。
用底物TMB显色,TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。
颜色的深浅和样品中的人胃蛋白酶原A(PGA)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
样品收集、处理及保管方法1.血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避开任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞快速小心地分别。
2.血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5.保管:假如样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于20℃,避开反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品酶标仪(450nm)高精度加样器及枪头:0.510uL、220uL、20200uL、2001000uL37℃恒温箱操作注意事项试剂盒保管在28℃,使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶*溶解后再使用。
试验中不用的板条应立刻放回自封袋中,密封(低温干燥)保管。
预处理后的样本无需稀释,直接取10μL加样即可。
严格依照说明书中标明的时间、加液量及次序进行温育操作。
全部液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒构成名称 96孔配置 48孔配置备注微孔酶标板 12孔×8条 12孔×4条无标准品 0.3mL 0.3mL 无样本稀释液 6mL 3mL 无检测抗体HRP 10mL 5mL 无20×洗涤缓冲液 25mL 15mL 按说明书进行稀释底物A 6mL 3mL 无底物B 6mL 3mL 无停止液 6mL 3mL 无封板膜 2张 2张无说明书 1份 1份无自封袋 1个 1个无注:标准品浓度依次为:160、80、40、20、10、0ng/mL.试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
人可溶性转铁蛋白受体(sTfR)酶联免疫(ELISA)分析试剂盒使用说明书
人可溶性转铁蛋白受体(sTfR)酶联免疫(ELISA)分析试剂盒使用说明书樊克生物专业供应本试剂盒仅供研究使用。
检测范围:48T 25 ng/L -800 ng/L使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本可溶性转铁蛋白受体(sTfR)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人可溶性转铁蛋白受体(sTfR)水平。
用纯化的人可溶性转铁蛋白受体(sTfR)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入可溶性转铁蛋白受体(sTfR),再与HRP标记的可溶性转铁蛋白受体(sTfR)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的可溶性转铁蛋白受体(sTfR)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人可溶性转铁蛋白受体(sTfR)浓度。
试剂盒组成1 20倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7 终止液3ml×1瓶2 酶标试剂3ml×1瓶 8 标准品(1600ng/L)0.5ml×1瓶3 酶标包被板12孔×4条9 标准品稀释液1.5ml×1瓶4 样品稀释液3ml×1瓶 10 说明书1份5 显色剂A液3ml×1瓶 11 封板膜2张6 显色剂B液3ml×1/瓶12 密封袋1个标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
800 ng/L 5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液400 ng/L 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液200 ng/L l 3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液100 ng/L 2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液50 ng/L 1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。
血栓调节蛋白的临床研究进展
血栓调节蛋白的临床研究进展血栓调节蛋白(Thrombomodulin,TM)是一种存在于内皮细胞表面的糖蛋白,在维持血管内皮细胞的正常功能和调节凝血与抗凝血平衡方面发挥着关键作用。
近年来,随着对血栓调节蛋白研究的不断深入,其在临床疾病的诊断、治疗和预后评估中的价值日益受到关注。
一、血栓调节蛋白的结构与功能血栓调节蛋白由 557 个氨基酸组成,包括一个大的细胞外结构域、一个跨膜结构域和一个短的细胞质结构域。
其细胞外结构域包含多个结构域,能够与多种分子相互作用。
血栓调节蛋白的主要功能之一是作为凝血酶的受体。
当凝血酶与血栓调节蛋白结合后,其促凝活性受到抑制,同时激活蛋白 C 系统,发挥抗凝作用。
此外,血栓调节蛋白还参与调节炎症反应、维持血管内皮细胞的完整性以及促进纤溶等过程。
二、血栓调节蛋白在疾病中的作用1、心血管疾病在心血管疾病中,血栓调节蛋白的表达和功能异常与疾病的发生发展密切相关。
例如,在动脉粥样硬化病变中,内皮细胞受损导致血栓调节蛋白表达减少,促进了血栓的形成。
心肌梗死患者血浆中血栓调节蛋白水平升高,可作为评估心肌损伤程度和预后的指标之一。
2、脑血管疾病脑血栓形成和脑梗死等脑血管疾病的发生与血栓调节蛋白也有一定关联。
研究发现,脑血管内皮细胞损伤后血栓调节蛋白的表达改变,影响了凝血与纤溶平衡,从而增加了血栓形成的风险。
3、肾脏疾病肾脏疾病患者常存在内皮细胞功能障碍,血栓调节蛋白的异常表达可能参与了肾脏疾病的进展。
例如,在肾病综合征患者中,血浆血栓调节蛋白水平升高,与蛋白尿的严重程度和肾功能损害相关。
4、糖尿病糖尿病患者往往存在内皮细胞损伤和凝血功能异常。
血栓调节蛋白在糖尿病血管并发症的发生中可能发挥一定作用,其血浆水平的变化可作为评估糖尿病患者血管病变风险的指标。
三、血栓调节蛋白的检测方法目前,检测血栓调节蛋白的方法主要包括酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫荧光法、流式细胞术等。
ELISA 是常用的检测方法之一,具有操作简便、灵敏度高、特异性强等优点。
碧云天生物技术 Human Angiogenin ELISA Kit PA023说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology订货热线:400-168-3301或800-8283301订货e-mail:******************技术咨询:*****************碧云天网站微信公众号网址:Human Angiogenin ELISA Kit产品编号产品名称包装PA023 Human Angiogenin ELISA Kit 96次产品简介:碧云天的Human Angiogenin ELISA Kit (Human Angiogenin Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit),即人血管生成素酶联免疫吸附检测试剂盒,是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的Angiogenin的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高,特异性强,重复性好。
多次重复检测结果表明,最小检出量为4.75pg/ml,与EGF、GM-CSF、MIP-1α、MIP-1β、TGF-α、TGF-β1,小鼠 EGF、GM-CSF、MIP-1α等均没有交叉反应,板内、板间变异系数均小于10%。
人血管生成素(Angiogenin, ANG)是一种分子量为14kDa的单链非糖基化蛋白,属于核糖核酸酶中RISBASE家族。
该家族成员不仅具有核糖核酸酶活性,还具有一些特殊的生物学功能。
ANG氨基酸长度为123,包括3个链内二硫键。
人ANG与小鼠ANG具有75%的氨基酸同源性,且具有一定的种间交叉反应。
能够表达ANG的细胞主要有血管内皮细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞、结肠柱状上皮细胞、淋巴细胞和部分肿瘤细胞。
ANG主要参与血管的形成过程。
基底膜的降解是血管新生过程中内皮细胞发生迁移的先决条件。
ANG首先与肌动蛋白结合,随后肌动蛋白-ANG复合物发生裂解,激活组织血纤维蛋白溶酶原。
这一过程产生的血纤维蛋白溶酶会降解基底膜中的层粘连蛋白和纤连蛋白。
