ELISA试剂盒
用Elisa试剂盒检测人血清血浆中VEGF血管内皮生长因子的浓度

用Elisa试剂盒检测人血清血浆中VEGF血管内皮生长因子的浓度引言VEGF (Vascular Endothelial Growth Factor,血管内皮生长因子) 是一种重要的血管生成调节因子,在多种生理和病理状态下发挥着重要的作用。
测定血清血浆中VEGF的浓度可以为许多疾病的诊断和治疗提供有价值的参考依据。
本文将介绍如何使用Elisa试剂盒来定量检测人血清血浆中VEGF的浓度。
实验准备材料1.试剂盒:Elisa试剂盒 (VEGF检测)2.样本:人血清血浆样本3.校准曲线标准品:不同浓度的VEGF标准品仪器和设备1.Elisa酶标仪2.微量移液器和相应的移液枪尖3.微量离心机实验步骤1.将试剂盒中的标准品取出并溶解。
2.准备一系列不同浓度的标准品,包括0 pg/mL,10 pg/mL,20pg/mL,50 pg/mL,100 pg/mL,200 pg/mL和400 pg/mL。
标准品的浓度根据试剂盒的说明书进行稀释。
3.将标准品和待测样本加入已涂有VEGF抗体的微孔板中。
4.混合孔板中的标准品和样本,并在37°C的恒温孵育箱中孵育一段时间。
5.将孵育后的孔板倒置,用洗涤缓冲液洗涤孔板,去除未结合的物质。
6.加入带有酶标记的VEGF抗体,并在37°C的恒温孵育箱中孵育一段时间。
7.再次倒置孔板并洗涤,去除未结合的物质。
8.加入底物溶液,并在室温下孵育一段时间。
9.加入停止液,停止反应。
10.使用Elisa酶标仪测量各孔的吸光度。
11.利用标准曲线,根据各孔的吸光度读数来计算出样本中VEGF的浓度。
数据分析根据测得的吸光度读数,通过标准曲线可以计算出待测样本中VEGF的浓度。
将各样本的浓度数据进行统计分析,计算出平均值和标准差,以及样本之间的相关性。
通过使用Elisa试剂盒,我们可以方便、快速地检测人血清血浆中VEGF的浓度。
这对于疾病的诊断和治疗提供了有价值的参考依据,同时也为相关生物学研究提供了重要的数据支持。
elisa试剂盒原理

elisa试剂盒原理ELISA试剂盒(Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay,又译作免疫夹配酶联免疫吸附测定法)是一种常用的生物化学技术,它能够快速、灵敏地检测固定量的抗原或抗体。
它的原理建立在具有特异性的抗原与抗体发生免疫反应的基础上,并且利用酶联免疫吸附测定法将其特异性特性发挥到极致。
ELISA试剂盒的原理实际上是利用一种可用来衡量两种特定分子结合情况的“酶联免疫反应”,即抗体可以特异性地结合抗原(如病毒、细菌、细胞、植物体等),然后会把这种特异性关联变成数量上的增加。
这种数量上的增加是金属蛋白酶(enzyme)所带来的。
当抗原被特异性抗体结合时,同时伴随着金属蛋白酶在抗原上的结合,而金属蛋白酶又被某些特定物(如丙二醛或氯仿等)所诱导,从而使抗原上的特异性结合物产生数量上的增加。
ELISA试剂盒的工作原理以上就是ELISA试剂盒的基本原理,它主要利用酶联免疫吸附测定的特异性原理,将特定的抗原或抗体酶联到具有特异性的样品上,最后检测数量上的增加。
ELISA技术具有高灵敏度、简便快捷、操作可靠等优点,被广泛应用于疾病诊断、抗原定性与定量检测、免疫活性评价以及生物体病原学研究等诸多领域。
ELISA试剂盒的工作原理主要包括抗原与抗体的结合、酶的结合与产物的检测等环节。
首先呈现的是抗原及抗体的结合,抗原及抗体在液体相中可以特异性地结合;其后的酶的结合是将抗原及抗体结合后,利用具有特异性的金属蛋白酶,将酶与抗原结合,从而使得结合物数量上有所增加;最后一步是检测,也就是检测酶结合物产生的数量上的增加,从而获取结果。
ELISA试剂盒的优势如下:1、ELISA试剂盒测定结果灵敏,且能够进行大规模检测;2、较快,能将一个检测过程缩短到几个小时;3、机器操作简单,操作步骤以及参数设置较为容易;4、一次可进行大量检测,可降低成本;5、器具配置简单,耗材容易获得,操作较为方便;6、安全性较高,可大幅减少辐射风险;7、节省时间和成本,跨学科的分析。
ELISA检测试剂盒操作流程

ELISA检测试剂盒操作流程1.准备实验材料和试剂-检验样本:例如血清、尿液、细胞上清液等。
-ELISA试板:根据样本数量选择96孔或384孔的板。
- 试剂盒:包括标准品、washes缓冲液、检测抗体、底物等。
2.样本处理-对于血清等生物液体样本,可用离心将固体物质沉淀并分离下清液。
-样本需储存或运输途中应避免反复冻融。
3.实验板的板液处理-将实验板从包装中取出,将不需要的孔进行盖膜封闭。
- 根据试剂盒说明书,添加适量的板液(Coating Buffer)到每个孔中,使其充分覆盖孔内壁。
-封闭板液的孔,将实验板在2-8℃下放置静置一夜或在37℃下1-2小时孵育。
4.样本添加-倒掉盘液,用PBS或TBST洗板3次,去除残留物。
-将样本加到每个孔中,根据需要添加正样本、负样本和待测样本。
-注意每个样本的剂量和添加的体积,通过试剂盒说明书和实验设计标准控制。
5.抗体添加-清洗步骤同上,将洗板缓冲液加到孔中,重复3次。
-加入检测抗体,根据试剂盒说明书的建议将其添加到孔中。
-要确保抗体的浓度和添加的体积适宜。
6.洗涤-洗涤步骤同上,用洗涤缓冲液洗板,重复3次。
-每次洗涤时,将洗液完全加满孔,静置1分钟,然后倒出洗液。
-注意洗涤时间和洗涤次数的准确控制,以将非特异性结合物质彻底清除。
7.底物添加-清洗步骤同上,将洗液加到孔中,重复3次。
-加入底物,根据试剂盒说明书的建议将其添加到孔中。
-底物液体应完全覆盖孔底,防止反应过程中氧化。
8.反应停止-根据试剂盒说明书,将反应停止液加入到孔中,停止底物的反应。
-注意反应停止液的体积和浓度,以保证反应的准确停止。
9.色谱分析-用ELISA板读板仪读取各个孔的OD值。
-根据试剂盒说明书和实验设计的标准曲线确定样本中目标物质的含量。
-注意设置适当的控制组和标准曲线来保证测量结果的准确性。
总结:ELISA检测试剂盒的操作流程主要包括实验板处理、样本添加、抗体添加、洗涤、底物添加、反应停止和色谱分析。
人血管内皮生长因子 ELISA 试剂盒说明书

产品说明书人血管内皮生长因子ELISA试剂盒(Human VEGF ELISA KIT)产品货号:H6139S, H6139M, H6139L产品规格:24T, 48T, 96T产品内容:注:终止液和显色剂具有腐蚀性,一旦接触到液体,请尽快用大量清水冲洗。
储存条件4℃避光保存,有效期见外包装。
开封后,保存温度详见说明书。
产品介绍Human VEGF ELISA Kit (Human Vascular Endothelial Cell Growth Factor Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ,即人血管内皮生长因子ELISA试剂盒,可以定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液等样本中的天然和重组VEGF浓度。
人VEGF是由两个相同亚基以二硫键交联组成的二聚体糖蛋白,基因定位于第6号染色体长臂,由8个外显子和7个内含子交替构成,约14 kb。
由于mRNA剪接方式不同,产生了单链分别含121,145,165,183,189和206个氨基酸的不同变异体。
VEGF 121分子量约为34-46 kDa,是可溶性分泌型蛋白质,以游离状态存在,不能与肝素结合;VEGF 165分子量为45 kDa,30-50%以可溶性形式分泌于细胞外基质,其余部分与细胞膜、基底膜或细胞外基质含有肝素的糖蛋白结合。
VEGF 145存在于胎盘细胞和女性生殖道肿瘤细胞。
VEGF 189及VEGF 206分泌后完全结合于细胞膜或基底膜含有肝素的糖蛋白上。
骨骼肌,心肌,肝细胞,成骨细胞,中性粒细胞,巨噬细胞,角质形成细胞,血小板,褐色脂肪组织,CD34+细胞,星形细胞,神经元和内皮细胞等多种细胞和组织均可产生VEGF。
血清和血浆样本均可检测到VEGF,由于血小板可释放VEGF,因此血清中VEGF含量较高。
VEGF是一种特异作用于血管内皮细胞的多功能细胞因子,可增加血管通透性、促进血管形成、引起细胞外基质成分改变等。
人脂肪炎症因子(Apelin)ELISA检测试剂盒简介说明

人脂肪炎症因子(Apelin)ELISA检测试剂盒简介说明人脂肪炎症因子(Apelin)ELISA检测试剂盒说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。
往预先包被脂肪炎症因子(Apelin /APLN)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻di洗涤。
用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的脂肪炎症因子(Apelin /APLN)呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1. 酶标仪(450nm)2. 高精度加样器及枪头:0.510uL、220uL、20200uL、2001000uL3. 37℃恒温箱操作注意事项试剂盒保存在28℃,使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶wan全溶解后再使用。
实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,最终结果乘以5才是样本实际浓度。
严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成名称 96孔配置 48孔配置备注微孔酶标板 12孔×8条 12孔×4条无标准品 0.3mL*6管 0.3mL*6管无样本稀释液 6mL 3mL 无检测抗体HRP 10mL 5mL 无20×洗涤缓冲液 25mL 15mL 按说明书进行稀释底物A 6mL 3mL 无底物B 6mL 3mL 无终止液 6mL 3mL 无封板膜 2张 2张无说明书 1份 1份无自封袋 1个 1个无注:标准品(S0S5)浓度依次为:0、0.5、1、2、4、8 ng/mL试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
elisa试剂盒原理

elisa试剂盒原理elisa(外来酶联免疫吸附)试剂盒是一种以酶联技术为基础的免疫检测方法。
其原理是通过抗原-抗体间的特异性结合作用,构成抗原-抗体复合物,利用酶的特异性而形成的酶-抗体复合物,使得复合物具有了酶的催化效应,在定比浓度的颜料中产生一定吸光度(A 值),根据不同比例的抗原抗体分子以及酶反应产物,表现出不同程度的吸光度,通过比较试验吸光度与对照吸光度,计算出试验项目的质量,从而进行免疫诊断。
elisa试剂盒包含了抗原、抗体、活性介质和酶等组分,当抗原抗体相互结合时,就会形成抗原抗体复合物。
当复合物中含有活性介质时,它可以使一种特定的酶有活性,这种酶可以将抗原和抗体中的某一物质催化变成另一物质,产生具有一定的吸光度的产物,这就是elisa试剂盒的基本原理。
由于elisa试剂盒的容易操作、易于对药物反应性能进行管理和检测,以及检测准确、结果可靠等优点,它成为目前应用最为广泛的免疫学技术之一,是诊断疾病和检测抗原抗体的有力工具。
elisa技术主要包括抗原和抗体合成、夹心板绘制、抗体复合物检测、抗原抗体结合度测定、夹心板读数以及抗原抗体关系分析等步骤。
抗原和抗体合成是elisa试剂盒的基础,抗原的合成需要通过特定的生物学方法,进行生化合成抗原。
例如,采用抗原特异性酶联反应,利用酶联酶/核酸复合物,将酶联酶与酶联荧光物质连接,形成目标抗原,即抗原-酶联物,而抗体则是通过免疫学方法合成,一般有外源抗体和内源抗体。
夹心板绘制是elisa试剂盒的重要步骤,一般有二层夹心板和三层夹心板。
在elisa试剂盒中,夹心板上先用特定抗原和抗体涂敷,然后用供试物质涂及其他化学反应的物质,当抗原与抗体结合时,夹心板上就会形成抗体复合物,对比定比浓度中的抗原抗体,产生一定的吸光度信号,并检测出病毒抗原或抗体存在的情况。
抗原抗体结合度测定和夹心板读数是elisa试剂盒最重要的步骤,其测定抗原抗体复合物的程度,从而计算出试验项目的质量。
达优 人 IgE ELISA试剂盒说明书

产品信息和操作指南Human IgE预包被 ELISA kit Cat# : DKW12-1820-048 / DKW12-1820-096本试剂盒专用于科研,而非用于诊断Human IgEDKW12-1820目录产品简介 (1)知识背景 (1)试剂盒提供的试剂 (2)需要实验者自行准备的试剂与仪器 (2)注意事项 (3)试剂的配制 (5)操作过程 (7)结果分析 (9)试剂盒的保存 (9)操作步骤一览表 (10)参考文献 (11)ELISA测定中可能会出现的问题及解决方法 (12)预包被ELISA 试剂盒系列产品 (15)1、产品简介:达优®人IgE ELISA试剂盒是通过酶联免疫吸附技术,体外定量检测人血清、血浆、缓冲液或细胞培养液中的IgE,可同时检测天然的和重组的IgE。
本试剂盒为预包被板,整个过程孵育时间不超过4小时,洗涤9次。
本试剂盒专用于科研,而非用于诊断。
使用前请仔细阅读说明书并检查试剂盒组分,若有任何疑问请与达科为生物工程有限公司联系,E-mail:*************.检测范围:32-0.5 ng/mL灵敏度:0.1ng/mL重复性:板内、板间变异系数均<10%。
2、知识背景:抗体根据抗原性和抗体重链分为IgG、IgA、IgM、IgE和IgD 五种。
IgE是介导I型变态反应的重要抗体,在支气管哮喘、鼻炎、食物过敏、药物、病原体等特应性疾病的发病过程中发挥着关键作用。
而抗IgE单克隆抗体可以与血液中IgE结合,降低血清总IgE水平,并下调肥大细胞、嗜碱性粒细胞表面的IgE高亲和力受体FcεRI的表达,从而抑制了IgE介导的免疫反应(1-6)。
3、试剂盒提供的试剂:试剂规格配制Cytokine standard 2/1瓶* 干粉状,按瓶上说明操作Biotinylated antibody 2/1瓶* 1:100用Dilution buffer R(1×)稀释Streptavidin-HRP 2/1瓶* 1:100用Dilution buffer R(1×)稀释Dilution buffer R(1×) 3/2瓶* 即用型Washing buffer(50×)1瓶 150∶用蒸馏水稀释TMB 1瓶即用型Stop solution 1瓶即用型Precoated ELISA plate 8×12或8×6*即用型封板膜 2/1张* 即用型说明书1份*:96/48 Tests4、需要实验者自行准备的试剂与仪器:1.酶标仪(建议参考仪器使用说明提前预热)2.微量加液器及吸头:P10,P50,P100,P200,P1000 3.蒸馏水或去离子水4.全新滤纸5.旋涡振荡器和磁力搅拌器5、注意事项:1.试剂应按瓶上标签说明储存,使用前室温平衡20-30分钟。
elisa试剂盒检测原理

elisa试剂盒检测原理以elisa试剂盒检测原理为标题,本文将介绍ELISA(酶联免疫吸附实验)试剂盒的工作原理及其在生物医学领域的应用。
ELISA是一种常用的免疫学实验技术,也是一种高度敏感和特异性的方法,用于检测和定量分析体内外的抗原或抗体。
ELISA试剂盒通常由多个组分组成,包括固相载体(通常是微孔板)、酶标记的抗体或抗原、底物和检测试剂。
ELISA的工作原理基于抗原与抗体的特异性结合。
首先,将待测样品加入到涂有特定抗原或抗体的微孔板孔中,使抗原或抗体与固相载体表面结合。
然后,洗涤孔中未结合的物质,以去除非特异性结合。
接下来,添加酶标记的抗体或抗原,使其与待测样品中的目标物质结合。
再次洗涤,去除未结合的物质。
最后,添加底物,使其与酶标记的抗体或抗原发生反应,产生可测量的信号。
通过测量底物的反应产物的光学密度,可以定量分析待测样品中目标物质的浓度。
ELISA试剂盒在生物医学研究和临床诊断中有广泛的应用。
它可以用于检测病原微生物、肿瘤标志物、激素、抗体等多种生物分子。
例如,在感染性疾病的诊断中,ELISA可以检测病原微生物的抗原或抗体,帮助医生准确判断病原体的种类和感染程度。
在肿瘤标志物的检测中,ELISA可以定量分析血液中特定蛋白质的浓度,从而判断肿瘤的存在和发展情况。
此外,ELISA还可以用于血液筛查、药物监测、食品安全等领域。
ELISA试剂盒的优点在于其灵敏度高、特异性强、操作简便、结果可靠等。
但同时也存在一些局限性,如可能受到样品中其他成分的干扰,需要对样品进行预处理等。
因此,在使用ELISA试剂盒进行实验时,需要仔细选择合适的试剂盒类型、优化实验条件,并结合其他检测方法进行确认。
ELISA试剂盒是一种重要的免疫学实验技术,具有广泛的应用前景。
通过了解其工作原理和应用领域,我们可以更好地理解和利用ELISA在生物医学研究和临床诊断中的作用,为疾病的早期诊断和治疗提供有力的支持。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
影响试剂盒质量的因素 试剂盒的选用 试剂盒的质检方法 目前试剂盒存在的问题
影响试剂盒质量的因素
1.原材料
(1)固相材料 商品ELISA试剂盒中基本上都使用 聚苯烯塑料微孔板,其对 ELISA 试剂盒的影响 在于孔间的显色差异。
(2)抗原 --自然抗原、合成抗原和基因重组抗原。
纯 度:纯度不高可致试剂盒的特异性不强。
在实际工作中,其它实验室对某种试剂盒的实际 使用效果,往往具有很强的说服力。
综合的使用评价
对一种试剂盒的综合使用评价,是指多个实验室 对这种试盒实际应用效果的综合分析。
ELISA试剂盒的质检
1.包装、储存状态
内外包装、效期、试剂瓶是否漏液,真空包装 是否破损,试剂是否齐全等等
2.采用血清盘 (panel)质检
单克隆抗体 (单抗):可无限大量的得到针对单一决定簇 的抗体,缺点是结合的单一性。当建立双抗夹心 ELISA 测定方法时,如包被和指示抗体使用同一单抗,则由于 结合位点的缺乏,很容易造成假阴性结果,尤其是在使 用一步法时“钩状”效应 (Hookeffect)的出现。因此, 在使用单抗建立双抗夹心 ELISA方法时,包被和指示抗 体常使用针对抗原的不同决定簇的单抗,包被抗体可为 混合单抗,从而使得固相抗体在免疫测定中能更为完全 地结合待测物中的特异抗原。
29 +*
+
30 +*
+
31 +
+
32 +
+
33 +*
+
34 +
+
35 +
+
36 +*
+*
37 +
?
38 +
?
39 +
+
40 +*
+
ELISA试剂盒的质检
3.采用弱阳性定值质控血清进行质检
对不同厂家或同一厂家不同批号试剂盒采用同 一弱阳性定值质控血清检测,可比较出不同厂 家或不同批号试剂盒的检测灵敏度 (测定下限 ) 的差异,对判断试剂盒的质量及其稳定性具有 重要的参考价值。
F半乳糖甘酶
影响试剂盒质量的因素
(5)色原底物: HRP最常用的色原底物有邻苯二胺 (OPD)和四甲基联苯胺 (TMB) 。
邻苯二胺(OPD):OPD被认为是HRP最为敏感的色原底 物之一,当pH值降为1.0时,最大吸收波长为492nm, 显色加深,因而常用强酸如硫酸或盐酸终止反应。 OPD的缺点是其对机体具有致突变作用。
待测 抗原
酶标
E
抗体
E
E
底物
显色
固相 抗体
温育
E
E
E
温育
E
E
E
影响试剂盒质量的因素
双抗体夹心法测抗原-一步法
待测 抗原
酶标
E
E
E
抗体
底物
显色
固相 抗体
E
E
E
E
洗板
温育
E
E
E
E E E
影响试剂盒质量的因素
3.试剂盒的运输和贮存
ELISA试剂盒的效期一般为 6个月,这是指 在贮存温度为 2~8oC的情况下,但一个 试剂盒从出厂至用户手中,均要经历运 输(如送检、检定、发货等)及运输中的贮 存,某一环节的不当,均会影响试剂盒 的临床使用质量。
试剂盒的选用
1.根据可能影响试剂盒质量的因素,从以下几 个方面来判断该试剂盒是否符合我们的要求 效期 固相材料的来源 包被抗体或抗原的性质 (单抗、多抗或合成多 肽或重组多肽 ) 显色底物 (是TMB还是 OPD) 测定模式(一步法或二步法 )
试剂盒的选用
2.同行对有关试剂盒的使用效果
个别的使用效果
+++ ++++ ++++ ++++
ELISA试剂盒的质检-TP
样本 初 筛 确 认 编号 (RPR/TRUST) (EIA/TPPA)
17 +
+
18 ?
+
19 ?
+
20 +
+
21 ?
+
22 +
+
23 ?
+
24 ?
+*
25 ?
+
26 +
+
27 +*
+
28 ?
+
样本 初 筛 确 认 编号 (RPR/TRUST) (EIA/TPPA)
++ +++ +++ ++ 37 +
+
25 +
++++ +++ +++ +++ 38 +
+++ +++ ++++ +++
26 +
++++ ++++ ++++ +++ 39 +
++++ +++ ++ +
27 +
++++
40 +
++ +++ ++++ +
28 + +++ +++++ ++++ ++++
29 +
影响试剂盒质量的因素
2.试剂盒的方法学设计 双抗原夹心法测抗体(抗HIV、Tp)
待测 抗体
酶标
抗原
E
E
E
底物
显色
固相 抗原
洗板
洗板
E E
E
温育
E
E
E
影响试剂盒质量的因素
间接法测抗体(抗HCV、Tp)
待测 抗体
固相 抗原
洗板
E
E
E
酶标 抗体
底物
显色
洗板
E
EБайду номын сангаас
E
温育
E
E
E
影响试剂盒质量的因素
双抗体夹心法测抗原-两步法
立体结构:合成抗原一般都是多肽抗原,缺乏完 整抗原所具有的立体结构决定簇,用于相应的 抗HCV 和抗 HIV抗体的检测有可能导致结合上 述决定簇的抗体漏检。
影响试剂盒质量的因素
(3)抗体
多克隆抗体 (多抗):制备简单,含针对抗原的多种决定 簇,但抗体的亲和力和特异性相对要低于单抗,且每次 制备的抗体在其亲和力和特异性上均有区别。
四甲基联苯胺(TMB):氧化产物联苯醌在波长450nm处 有最大消光系数。试剂盒中常为已配好的 A、B两种液 态试剂,即一定浓度双氧水溶液和 TMB。它们在溶液 中相对不稳定,因此在使用 ELISA试剂盒时,如底物 A·或/和B出现颜色,或各取一滴混合后显色,说明该 试剂盒的底物溶液已变质或已受污染,必须废弃。 ·
血清盘由一定数量的阴、阳性样本组成,可用 来判断试剂盒的灵敏度、特异性和符合率,如 HBsAg、抗HCV和抗HIV等血清盘。
ELISA试剂盒的质检-抗HCV
编号 结果 确认结果
编号 结果 确认结果
NS4 NS3 C
NS5
NS4 NS3 C
NS5
17 +
++
30 +
+
++ +++ +
18 +
+++
31 +
+/- ++
19 + ++++ +++ +++ ++ 32 +
+
+++ +++ +
20 +
++ +++ +++ +++ 33 +
+
+
21 +
+/-
+
34 +
+++ ++++
+
22 +
++ +++ +++ +
35 +
+/- ++
23 + +
++++ ++++ +
36 +
+++ ++++
+/-
24 +
影响试剂盒质量的因素
(4) 酶结合物 ELISA 试剂盒的核心部分,通常 ELISA 试剂盒的有效使用期限即是根据酶结合 物的稳定性而定的。