第九章 血红蛋白病和免疫性溶血性贫血检查
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实验室检查
小细胞低色素性轻度贫血 血片可见25-75%靶型红细胞
异丙醇沉淀试验和热变性试验阳性
变性珠蛋白小体检测阳性
红细胞渗透脆性减低
血红蛋白电泳HbE占75-92%
血 红 蛋 白 病 M 病 （遗传性高铁血红蛋白病）
形成原因： 肽链中与血红素铁原子连接的组氨酸发生 替代，导致部分铁原子呈稳定的高铁状态，影响 Hb正常带氧功能 临床表现： 紫绀和继发性红细胞增多 遗传方式：非显性遗传 （AD）
2
Hb发育遗传控制
基因
2
1
转录 翻译
2
1
G
A
1
珠蛋白链
22
22
Hb
22
22 22 22
F Ａ２ Ａ 成人Hb
GowerⅠ GowerⅡ Portland
Hb类型
胚胎Hb
胎儿Hb
（五）影响血红蛋白结构和功能的因素
珠蛋白基因缺失或缺陷 酶缺陷 化学药物中毒
第四节 血红蛋白病的 ---检查及应用
一 、 概
（一）血红蛋白病定义
述
一组遗传性或基因突变导致生成Hb的珠蛋白 肽链的结构或合成速率改变，从而引起功能异常 所致的一种溶血性贫血。
（二）血红蛋白的组成
正常Hb的组成:
是一种结合蛋白： 血红素 ＋ 珠蛋白
每个Hb单体是由一条珠蛋白肽链和一个血红素组成的 ４个Hb单体 → 一个球形四聚体
二 、血红蛋白病
人类珠蛋白基因的组织特异性强，仅在RBC及前 体中才有大量表达。
由珠蛋白基因突变引起珠蛋白 质量畸变（异常Hb病）和 数量畸变（地中海贫血） 所致的疾病统称血红蛋白病
血红蛋白病分类
异常Hb病： 基因突变导致珠蛋白结构改变 例如：镰状细胞贫血
珠蛋白合成障碍性贫血：
基因突变导致珠蛋白肽链合成缺乏
Sickle Cell
Normal Cell
临床表现：
①程度不同的小或大细胞性贫血。
②颅骨发育畸形。 ③肝脾肿大。 ④溶血危象出现后，病人有腹痛、 腿痛、小腿溃疡、胆结石、肺
梗死及肝、肾功能不全等。
⑤易合并肺、骨、胃肠感染。
诊断依据
阳性家族史 外周血Hb电泳或Hb层析分析发现HbS（达80%）
4.血红蛋白电泳：
异常血红蛋白电泳条带出现,如HbF HbH等
小细胞低色素性贫血、靶形红细胞多见（重型10%35%）网织红细胞增加
三 、血红蛋白病的实验室检查
抗碱血红蛋白检测
血红蛋白电泳
血红蛋白F酸洗脱试验 异丙醇沉淀试验 热变性试验 红细胞包涵体试验
抗碱Hb测定
HbF具有比HbA更强的抗碱作用 HbF抗碱变性作用强，没有变性存在于上清液中，HbA变性沉淀， 取上清液于540nm处测定吸光度，检测出HbF的浓度。此试验也称 为碱变性试验，其检测的是抗碱血红蛋白 除HbF外，Hb Barts和部分HbH也具有抗碱能力，需通过电泳鉴别
地 中 海 贫 血
α 地中海贫血-α -珠蛋白合成障碍性贫血
是由于α 珠蛋白基因的缺失或缺陷使珠蛋 白链合成受到抑制则和β 链和γ 形成四聚体 （β 4 或γ 4）。其临床分型为： 1·静止型 2·标准型 3·HbH病 4·Hb Bart’s胎儿水肿综合症
α 地中海贫血-α -珠蛋白合成障碍性贫血
氧亲和力改变的血红蛋白病
形成原因：
由于珠蛋白基因突变致Hb肽链上氨基酸发生 置换，致使Hb分子与氧的亲和力增高或降低，运 输氧功能改变。 临床表现: 红细胞增多症和紫绀
(二)地中海贫血
——珠蛋白链合成障碍性贫血
概述
又称地中海贫血（ thalassemia ）、海洋性贫血。是
由于珠蛋白肽链合成减少或完全不能合成引起的遗传性疾
β α
链 链
减 过
少 剩 幼红细胞异常
α 链 聚 集
少数异常 红细胞存活 大多数幼红细胞在骨髓中死亡 （无效性红细胞生成） 食物铁 低色素性红细胞
含包涵体的红 细胞在脾破坏
铁吸收 增加
铁负荷增加 继发性血色病
骨髓膨胀
骨 骼 变 化
红细胞生成可以增加骨髓的量，并且增加骨髓存储 部位的骨髓量，如这里所见的头骨，头骨骨髓的增加 可以导致头骨形状变化，“前额隆起”或额头突出。
（三）血红蛋白的结构
一级结构： 氨基酸排列顺序 类α链：（α、 ζ ） 141个氨基酸 类β链:（β、δ、γ、ε） 146个氨基酸
二级结构： 肽链盘曲成的空间螺旋 α螺旋、 β折叠片层
血红蛋白α链， α螺旋结构。 血红蛋白 β链
血红蛋白的结构
三级结构：
整条多肽链的 三维结构
四级结构：
四聚体
（四）Hb发育演变与遗传控制组成、功能、 种类和珠蛋白的合成
缺失或突变
成人Hb F持续增 链和链合成受抑制 加，无症状 链合成明显增加
实验室检查
1.血象：
小细胞低色素性贫血、RBC大小不一、靶形红细胞 多见（重型>10%），网织红细胞增加。
2.骨髓象:
增生明显活跃，粒红比例倒置，呈无效性增生和 原位溶血
3.基因诊断：
southern 印记杂交分析和PCR方法检测基因缺失
病。按肽链合成减少的类型可分为α 地贫、β 地贫等。我 国南方发病比北方高，本病有家族史。
地 中 海 贫 血
α地中海贫血—由于珠蛋白基因的缺失或缺陷使
链的合成受到抑制而引起的溶血性贫血。
β地中海贫血—由于珠蛋白基因的缺失或缺陷使
链的合成受到抑制而引起的溶血性贫血。
特点：ＨbＡ↓ 都表现为低色素性贫血
Hb 发 育 演 变：
胚胎早期先合成和→Hb GowerⅠ（
2） 同时或稍后合成和→Hb GowerⅡ（ 2 2 ） Hb Portland（ 2 2） 12周时和逐渐消失， 链迅速增加，开始合成， HbF为主（ 2 2） 妊娠末期和出生不久， 链迅速降低，链迅速 增加，HbA为主（ 2 2 ） 成人Hb ：Hb A 22 97～98% Hb A2 22 2～3 %
α 地中海贫血-α -珠蛋白合成障碍性贫血
4.血红蛋白Barts病：又名胎儿水肿症，缺失4个基
因。胎儿常死于宫内或流产早产等。胎儿全身水肿， 皮肤苍白黄疸，肝脾大。Hb明显下降，红细胞中心淡 染，异形，靶形和有核红细胞增多。HbBarts大于90%， 可见少量的HbH和Hb Portland,抗碱血红蛋白增加。
或合成量异常
如α 、β 地贫
（一）异 常 血 红 蛋 白 病
由于珠蛋白基因突变导致珠蛋白肽链结构 异常,如有临床表现者称为异常血红蛋白病 主要类型：
（1）镰状细胞病 （2）不稳定血红蛋白病 （3）血红蛋白M病 （4）血红蛋白E病 （5）氧亲和力改变的血红蛋白病
镰状细胞贫血（HbS病）
常染色体显性遗传 最常见的Hb病 好发于非洲裔人群 β 链第6位谷氨酸被缬氨酸替代
溶血机制
α -珠蛋白合成减少，→β -珠蛋白过剩→聚集成β 4
（HbH）→不稳定，聚合形成HbH包涵体→红细胞变形性 下降→停留在脾索→血管外溶血。 游离β -珠蛋白不稳定， 易氧化→自由基产生增加 →氧化红细胞膜蛋白 脂质→红细胞膜结构破 坏→溶血。
α 型地中海貧血的症狀
正常人的第16對染色體帶有四個α 血紅蛋白的 基因，所以严重度可分成下列四級：
1·静止型：是缺失一个珠蛋白基因造成（／α －）即
α +地贫 。无症状，血象无特殊异常，唯一的异常是在出生 八个月时发现HbBart’s轻度增加（小于2%)，后消失。
2·标准型：缺失2个珠蛋白基因。（ ／－－）为α 0地
贫。无症状或轻度贫血。血象中有轻度低色素表现，MCV 可降低，可见少量的靶形红细胞，网织红细胞可轻度增高。 红细胞包涵体试验阳性，盐水渗透脆性下降，Hb电泳 HbBarts增高（3-15%）。
血细胞形态学改变---大小不一、有核/靶形/
嗜多色/异形红细胞，镰形红细胞不多见 HbS与其他Hb病的双重杂合子，如HbSC、HbSE、 Hb SD等，其临床表现可与镰状细胞贫血相似， 统称为镰形变综合征。
实验室检查
血红蛋白降低网织红细胞增加（>10%） 红细胞镰形变实验阳性 红细胞渗透脆性明显下降 血红蛋白电泳可见HbS(达80%)
0/0、+/0 + / A 、 0 / A 0/A +/+
链几乎不能合成 地中海贫血面容 链合成相对增加 溶血性贫血（需 HbF>30%和 HbA2增高 输血） 能合成适量的链 链部分合成 HbA2↑↑,HbF:N/轻度
↑
贫血不明显或轻 度贫血
介于重型和轻型 之间（不需输血）
患儿颅骨及面颊部骨骼增大，头颅变大， 额部隆起，颧高，鼻梁塌陷，两眼距离增 宽，眼睑浮肿，形成地中海贫血的特殊面 容。
β -地中海贫血临床分类
临 床 类 型 重型地贫 轻型地贫 中间型地 贫 遗传性胎儿 血红蛋白持 续增多症 基 因 型 基 因 产 物 临 床 表 现
+ / + 、 0 / 0
只有一個基因缺失 有兩個基因缺失 無症狀 輕微貧血，紅细胞变小，顏色也變淡 （血紅素不足）。 中度到嚴重貧血，患者往往需要輸血。 患者幾乎都以流產收場，或出生後立即 死亡。
有三個基因缺失
四個基因全部缺失
胎儿水肿
β -珠蛋白合成障碍性贫血
（1）发病机制
β -珠蛋白基因突变（90%为该原因） β -珠蛋白基因缺失
实验室检查
变性珠蛋白小体检测 阳性 异丙醇沉淀试验和热变性试验阳性
血片多为正细胞性贫血，大小不一，异形
碎片可见，
聚丙烯酰胺凝胶电泳可分离不稳定血红蛋
溶血性贫血的实验室检查
（三）酸溶血（Hams）试验
实验原理 PNH患者体内存在对补体敏感的红细胞。
Hams试验即红细胞在酸性（PH6.4-6.5）的 正常血清中孵育，补体被激活，PNH红细 胞破坏而产生溶血，而正常人RBC不被溶 解，无溶血现象。
试剂
1. 蔗糖 2. 3.8%枸橼酸钠溶液
样本要求
枸橼酸钠抗凝静脉血2ml（ 3.8%枸橼酸 钠与静脉血比为1：9）
操作程序
将一份枸橼酸钠全血加入9份新鲜配制 的糖水中（即0.5g蔗糖+4.5ml蒸馏水+0.5ml 抗凝血，或10%蔗糖水5ml+0.5ml抗凝血）， 混合后，置37℃温箱中孵育30分钟，离心 沉淀。
异丙醇沉淀试验阳性：提示有不稳定血红蛋白 存在
热变性试验 ：沉淀率增高 存在不稳定血红蛋 白，大于10%有诊断意义 镰变性试验阳性：Hbs病 冷热溶血试验阳性：PCH病
血管内和血管外溶血的鉴别
特征
血管内溶血（细胞外溶血） 血管外溶血（细胞内溶血）
病因
RBC破坏 场所
发病特征
红细胞内缺陷，外因素获得性 多见
临床意义
脆性增加
主要见于遗传性球形红细胞增多症，椭 圆形红细胞增多症和部分自身免疫性溶血 性贫血。
脆性降低
主要见于珠蛋白生成障碍性贫血，血红 蛋白C、D、E病，低色素性贫血，肝疾病 等。
（二）抗人球蛋白试验
（Coombs试验）
实验原理
抗人球蛋白试验（Coombs试验）
检测自身免疫性溶血性贫血的自身抗体 （IgG）。分为检测红细胞表面有无不完全抗体 的直接抗人球蛋白试验和检测血清中有无不完全 抗体的间接抗人球蛋白试验。直接抗人球蛋白试 验应用抗人球蛋白试剂（抗IgG和/或抗C3d）与 红细胞表面的IgG分子结合，如红细胞表面存在 自身抗体，出现凝集反应。间接试验应用Rh（D） 阳性O型正常人红细胞与受检血清混合孵育，如 血清中存在不完全抗体，红细胞致敏，再加入抗 人球蛋白血清，可出现凝集。
小儿自身免疫性溶血性贫血的实验室检查
小儿自身免疫性溶血性贫血的实验室检查自身免疫性溶血性贫血是由于免疫功能调节紊乱，体内产生了与红细胞自身抗原起反应的自身抗体，并吸附于红细胞表面，导致红细胞破坏的一种溶血性贫血。
本病在小儿时期并不少见，其发病数约占全部溶血性贫血的1/4左右。
1 抗人球蛋白试验此试验结果阳性是诊断本病的重要依据。
本试验分为直接试验和间接试验，前者是测定吸附于红细胞表面的不完全抗体，后者是测定血清中游离的不完全抗体。
这两种试验在AIHA患者大多呈阳性。
尤其直接试验为阳性是诊断AIHA强有力的证据。
但极少数患者(2％～4％)试验结果始终阴性。
这种情况的发生主要与抗人球蛋白试验的敏感性不够有关。
而专一性直接抗人球蛋白试验，既用抗IgG、抗 IgA、抗IgM、抗C3特异血清检测，提高Coombs试验的阳性率，并可据此进一步将温抗体型自身免疫性溶血性贫血分为IgG型+ C3型、IgG型、IgA型、IgG与IgA混合型。
下面介绍一下玻片凝集法抗人球蛋白试验。
1.1 原理不完全抗体不能使含有相应抗原的红细胞发生凝集，但能与其结合，这种结合了不完全抗体的红细胞称为致敏红细胞。
不完全抗体是球蛋白，致敏红细胞就是红细胞被球蛋白包裹，如在致敏红细胞的盐水溶液中，加入抗人球蛋白血清，由于球蛋白-抗球蛋白的特异反应，使致敏红细胞发生凝集，从而显示出不完全抗体的存在。
1.2 操作步骤(1)洗涤EDTA抗凝血3次：离心，去血浆，加入生理盐水洗血球三遍。
(2)配制10％红细胞悬液：弃掉最后一次洗涤红细胞液的上清。
准备一支新试管加生理盐水2ml，加200～1红细胞，混均。
(3)以IgG为例，其他抗体做法相同。
准备白色小瓷砖4块，划线。
在“1”、“2”格加50ml抗体。
在“3”～“8”格加生理盐水50ml。
再吸50μl生理盐水与“2”中的抗体混均，依次从“3”加到“7”作倍比稀释，“8”为空白对照。
在“1”至“8”各加50μl，10％红细胞悬液。
(4)混均，转板，观察凝集情况。
自身免疫性溶血性贫血诊断标准
自身免疫性溶血性贫血诊断标准
自身免疫性溶血性贫血是一种由于针对溶血因子、抗原颗粒或抗
体导致红细胞提前破坏而引起的贫血类型。
它具有不一样的诊断标准，目前普遍认为应用多方面诊断才能确诊自身免疫性溶血性贫血。
一、血液病理学检查
血液病理学包括血象检查、溶血试验：血象检查中，血红蛋白与血小
板偏低，红细胞分布宽度可增宽，血细胞抗凝试验可出现贫血紊乱；
溶血试验中，完全性溶血试验可显示红细胞减少；呈试可检出免疫性
抗体，表明出现免疫性溶血。
二、抗体检测
自身免疫性溶血性贫血的诊断可采用抗Nikolsky（NA）、反飞行抗体（FA）、反脆皮病毒抗体（CB）和反抗乙型肝炎病毒抗体（AV）的实
验检查，四者均有可能存在。
若其中任一项抗体检出异常，即表明该
患者可能患有自身免疫性溶血性贫血。
三、病理学检查
病理学检查可以提供初步诊断线索，尤其是处理组织标本后冰冻切片
上可见叠层脱落细胞和少量脱水细胞在原发性贫血中是间接但重要的
诊断证据。
自身免疫性溶血性贫血诊断标准主要涉及血液病理学，抗体检测
及病理学检查，从多方面综合考虑才能确诊。
但在确诊此类贫血症状前，应先排除其它原因性贫血，如心血管及消化系统病变，营养不良
甚至贫血病毒侵袭等。
溶血性贫血的诊断标准
溶血性贫血的诊断标准
溶血性贫血是一种由于红细胞寿命缩短、破坏速度增加而引起的贫血症状。
溶
血性贫血可以分为遗传性和后天性两种类型，临床上常见的有遗传性溶血性贫血、自身免疫性溶血性贫血、感染性溶血性贫血等。
针对不同类型的溶血性贫血，其诊断标准也有所不同。
首先，对于溶血性贫血的诊断，临床医生需要充分了解患者的病史，包括家族史、药物过敏史、疾病史等。
遗传性溶血性贫血患者往往有家族史，而自身免疫性溶血性贫血患者可能有自身免疫性疾病的病史。
此外，对于感染性溶血性贫血患者，需要了解患者的感染史，特别是对于曾经发生过溶血性贫血危象的患者，需要重点排查感染的可能。
其次，临床医生需要进行相关的实验室检查，以确定溶血性贫血的诊断。
常规
的血液检查包括血红蛋白浓度、红细胞计数、血小板计数、血涂片检查等。
此外，还需要进行网织红细胞检测、血清胆红素测定、血清LDH测定等实验室检查，以
评估溶血的程度和类型。
另外，对于遗传性溶血性贫血患者，还需要进行相关的遗传学检查，以确定病因。
例如，对于地中海贫血患者，可以进行地中海贫血基因突变的检测，以确定病因和遗传方式。
最后，临床医生还需要排除其他引起贫血的疾病，例如缺铁性贫血、再生障碍
性贫血等，以确保溶血性贫血的诊断准确性。
在进行诊断时，还需要考虑患者的临床表现、实验室检查结果以及病史等综合因素，以确定溶血性贫血的诊断。
总之，溶血性贫血的诊断需要综合考虑患者的病史、临床表现和实验室检查结果，排除其他引起贫血的疾病，以确保诊断的准确性。
针对不同类型的溶血性贫血，其诊断标准也有所不同，临床医生需要根据具体情况进行诊断，并进行个体化治疗。
血红蛋白病实验室检查
血红蛋白病实验室检查
……
我国北京、上海等大城市已建立先进的基因诊断技术，对多种遗传血液病如血友病，α海洋性贫血、β-海洋性贫血、异常血红蛋白病等成功地进行了基因诊断和产前基因诊断：
1．常用基因诊断方法为抽提全血、干纸片血、羊水细胞、绒毛细胞DNA作DNA点杂交，适用于诊断基因缺失的遗传病，如α海洋性贫血病人α珠蛋白基因不同程度的缺失。
2．限制性内切酶酶谱法，适用于诊断基因突变改变了限制酶切点或DNA缺失而改变酶解片段大小长短的遗传病。
3．限制性片段多态性分析（RFLP），RFLP按孟德尔方式遗传，如某种遗传病基因与特异的RFLP紧密相连，即可将这一多态片段作为"遗传标记"，通过RFLP连锁分析推测该家庭成员和胎儿是否携带遗传病基因，RFLP连锁分析适用于诊断任何一种单基因遗传病。
4．寡核苷酸杂交是一种直接基因诊断技术，对于基因突变部位的碱基序列已查明的遗传病，均可以直接检测和鉴定其突变的基因。
5．聚合酶链反应（PCR）DNA体外扩增，此种高效DNA分析技术可以直接通过PCR产物的电泳分析进行基因诊断，适用于诊断基因缺失或部分DNA缺失所致的遗传病。
6．对非缺失型突变基因可结合限制酶切位点的改变，如与RFLP 位点相连锁，则可用限制酶消化PCR扩增产物，直接电泳分析，不需应用基因探针进行分子杂交，大大简化实验操作，使基因诊断可在半天内完成。
溶血性贫血的实验室检测
四、珠蛋白生成异常的检测
（二）胎儿血红蛋白酸洗脱试验
1.原理 HbF抗酸能力较HbA强。把经固定后的血涂片置酸性缓冲液中保湿一定时间，只有含HbF 的红细胞不被洗脱，再用伊红染色而呈鲜红色。 2.临床意义 （1）脐带血、新生儿、婴儿阳性，成人小于1% （2）地中海贫血病人轻型者（杂合子）仅少数红细胞呈阳性，重型者阳性红细胞明显增多
二、红细胞膜缺陷的检测
（三）自身溶血试验及纠正试验
1.原理 红细胞内酶缺陷，葡萄糖酵解障碍，不能提供足量ATP，以维持红细胞内的钠泵作 用。病人红细胞无菌条件下在自身血浆中温育48小时，使ATP储备减少，钠泵作用减弱，导 致溶血增强。在孵育过程中，分别加入葡萄糖和ATP作为纠正物，并以氯化钠溶液为对照， 观察溶血是否能被纠正。 2.参考值 ➢ 正常人红细胞经孵育48小时后，仅轻微溶血、溶血度<3.5% ➢ 加葡萄糖和加ATP孵育，溶血明显纠正，溶血度均<1%
溶血性贫血的实验室检测
一、溶血性贫血的筛查检测
（一）血浆游离血红蛋白测定
1.参考值 <50mg/L（1～5mg/dl） 2.临床意义 （1）血管内溶血时血浆游离血红蛋白明显增高； （2）血管外溶血时血浆游离血红蛋白不增高； （3）自身免疫性溶血性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血可轻度增高。
一、溶血性贫血的筛查检测
二、红细胞膜缺陷的检测
（二）红细胞孵育渗透脆性试验
1.原理 红细胞孵育过程中，葡萄糖的消耗增加，贮备的ATP减少，导致红细胞膜对阳离子 的主动传递受阻，钠离子在红细胞内集聚，细胞膨胀，渗透脆性增加。 2.参考值 未孵育：50%溶血为4.00～4.45g/L NaCl 37℃孵育24h：50%溶血为4.65～5.9g/L NaCl 3.临床意义 （1）脆性增加：遗传性球形细胞增多症、遗传性椭圆形细胞增多症、遗传性非球形细胞溶 血性贫血等； （2）脆性减低：珠蛋白生成障碍性贫血、缺铁性贫血、镰形细胞贫血等。
溶血性贫血的实验室检查
第一节：溶血性贫血的实验室检查一、红细胞破坏过多的检查1.外周血液常规红细胞计数、血红蛋白含量减低，血涂片中可见破碎红细胞、异形红细胞等。
出现典型的异形红细胞或自身凝集现象时，可提供溶血原因的线索。
2.血浆游离血红蛋白测定意义正常血浆只有微量游离血红蛋白，>40mg/L是溶血尤其是血管内溶血的重要指标，如阵发性睡眠血红蛋白尿、血型不合输血反应等。
血管外溶血，如遗传性球形细胞增多症，一般不增高。
3.血清结合珠蛋白测定（Hp）意义1.血清结合珠蛋白降低见于：⑴各种溶血性贫血，包括血管内或血管外溶血；⑵肝细胞损害、传染性单核细胞增多症、先天性无结合珠蛋白血症等。
2.血清结合珠蛋白增高见于感染、组织损伤、肝外阻塞性黄疸、恶性肿瘤等。
4.血浆高铁血红素白蛋白试验意义本试验有助于鉴别血管内或血管外溶血，阳性表示严重血管内溶血。
如阵发性睡眠性血红蛋白尿时，出现一条高铁血红素白蛋白区带，而球形细胞增多症系血管外溶血则无此区带。
5.尿液检查⑴尿胆原排出增多；⑵隐血试验阳性，这是因为当血浆游离血红蛋白显著增高，超过结合珠蛋白的量和肾小管再吸收功能时，出现的血红蛋白尿；⑶尿含铁血黄素试验呈阳性反应，是反映慢性溶血，尤其是血管内溶血。
6.红细胞寿命测定是检测溶血的可靠指标，常用51Cr、3P-DFP或二异丙基氟磷酸标记红细胞法，能反映红细胞寿命的指数。
此项测定显示红细胞寿命缩短表明有溶血。
二、红细胞代偿性增生的检查1.网织红细胞增多在5%～20%以上。
2.外周血出现幼红细胞，主要是晚幼红细胞。
由于网织红细胞及幼红细胞的出现，故可表现大红细胞增多。
3.骨髓幼红细胞显著增生，以中幼红和晚幼红细胞增生为主，粒红比例常发生倒置。
三、红细胞膜缺陷的检查1.红细胞渗透脆性试验意义1. 红细胞渗透脆性增高见于：遗传性球形细胞增多症、自身免疫性溶血性贫血伴继发球形细胞增多等。
2.红细胞渗透脆性减低见于：缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血等。
溶血性贫血的试验检测
四、珠蛋白生成异常的检测
• 血红蛋白病：是由于血红蛋白分子结 构或珠蛋白肽链合成速率异常所引起 的一组遗传性血液病。
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（一）血红蛋白电泳
• 原理： 各种Hb的等电点不同，在一定的pH缓冲条件 下带电荷数不同，电泳速率不同，出现不同 的Hb区带。如HbA、HbA2、HbF、HbH等。 • 参考值：正常人电泳图谱显示4条区带： 从阳极开始依次为：HbA→HbA2→NH1→NH2 且含量也依次减少。
4
• 按原因分类：
膜缺陷 内在因素 酶缺陷 血红蛋白缺陷 免疫因素 物理因素 外在因素 化学因素 感染因素 脾功能亢进
5
一、溶血性贫血的筛查检测
（一）血浆游离血红蛋白检测 （二）血清结合珠蛋白检测 （三）血浆高铁血红素清蛋白检测 （四）含铁血黄素尿试验(Rous试验) （五）红细胞寿命测定
6
原
• 原理：红细胞中的G6PD催化G-6-P转化为6-磷酸葡萄糖 酸时，使氧化型辅酶（NADP）生成还原型NADPH， NADPH在340nm处有一吸收峰，在紫外线激发下可产生 荧光。 • 参考值：正常人有甚强荧光， 酶活性4.97±1.43U/gHb。 • 临床意义: G6PD缺乏者荧光很弱或无荧光。
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• 临床意义： HbA:96％－98％ 正常人 HbA2:1％－3% ↑地中海贫血/巨幼贫/HbS病
↓缺铁性贫血及铁粒幼细胞贫血HbA2减低
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（二）胎儿血红蛋白酸洗脱试验 （三）胎儿血红蛋白测定或HbF碱变性试验 （四）HbA2定量测定
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五、自身免疫性溶血性贫血检测
(一)抗人球蛋白试验(Coombs试验) • 原理：
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三、红细胞酶缺陷的检测
(一)高铁血红蛋白还原试验（MRT）—筛选试验 • 原理：
自身免疫性溶血性贫血及其实验诊断
自身免疫性溶血性贫血及其实验诊断一、自身免疫性溶血的检验及其应用1.免疫性溶血性贫血的定义和分类：免疫性溶血性贫血是由抗体参与的溶血反应所致的贫血。
这类免疫反应是由于红细胞表面抗原，或与外来的抗原（如药物等）相结合，在相应抗体（IgG或IgM）作用下，或激活补体的参与，导致红细胞凝集或破坏而发生溶血；或在脾或肝脏内的单核-巨噬细胞的吞噬作用下被破坏。
免疫性溶血性贫血的分类见下表。
免疫性溶血性贫血的分类2.抗人球蛋白试验：包括直接（DATG）和间接（IATG）法（1）原理：抗人球蛋白试验（Coombs试验）检测自身免疫性溶血性贫血的自身抗体（IgG）。
分为检测红细胞表面有无不完全抗体的直接抗人球蛋白试验（DAGT）和检测血清中有无不完全抗体的间接抗人球蛋白试验（IAGT），以前者最常用。
直接试验应用抗人球蛋白试剂【抗IgG和（或）抗C3d】与红细胞表面的IgG分子结合，如红细胞表面存在自身抗体，出现凝集反应。
间接试验应用Rh（D）阳性O型正常人红细胞与受检血清混合孵育，如血清中存在不完全抗体，红细胞致敏，再加入抗人球蛋白血清，可出现凝集。
结果：均为阴性。
（2）临床意义：阳性见于自身免疫性溶血性贫血、冷凝集素综合征、阵发性寒冷性血红蛋白尿、药物致免疫性溶贫、输血引起溶贫和新生儿同种免疫性溶贫。
阴性不能排除免疫性溶贫。
3.冷凝集素试验（1）原理冷凝集素为IgM类完全抗体，在低温时可使自身红细胞、O型红细胞或与受检者血型相同的红细胞发生凝集。
凝集反应的高峰在0℃～4℃，当温度回升到37℃时凝集消失。
参考值：正常人血清抗红细胞抗原的lgM冷凝集素效价小于1：32（4℃）。
（2）临床意义：阳性见于冷凝集素综合征（＞1：1000），支原体肺炎、传染性单核细胞增多症、疟疾、肝硬化、淋巴瘤及多发性骨髓瘤者亦可增高，但不超过1：1000。
4.冷热溶血试验（1）原理：阵发性寒冷性血红蛋白尿症患者血清中有一种特殊的冷反应抗体（Donath-Landsteiner抗体），在20℃以下（常为0℃～4℃）时与红细胞结合，同时吸附补体，但不溶血。
溶血性贫血的实验室检测(二)2024
溶血性贫血的实验室检测（二）引言：溶血性贫血是一种由于红细胞溶解增加引起的血液疾病。
实验室检测在诊断和评估溶血性贫血的病因时起着重要作用。
本文将介绍溶血性贫血的实验室检测方法，以便提供更准确的诊断和治疗指导。
正文：一、红细胞指标的测定1. 血红蛋白测定：通过测定全血或血清中的红细胞血红蛋白含量，评估溶血性贫血的程度。
2. 红细胞计数：通过计算单位体积内红细胞的数量，确定溶血性贫血患者红细胞的减少情况。
3. 红细胞体积分布宽度测定：反映红细胞体积的分布情况，帮助鉴别溶血性贫血与其他疾病。
二、血清标志物的测定1. 胆红素测定：通过测定血清中的胆红素水平来评估溶血性贫血的程度，可区分溶血性贫血的类型。
2. 血清乳酸脱氢酶测定：高乳酸脱氢酶水平提示溶血性贫血进展较严重，可协助评估疾病的严重程度。
3. 血清间接胆红素测定：通过测定血清中的间接胆红素水平，推测血红蛋白溶解释放的胆红素量。
三、血型与抗人球蛋白试验1. ABO血型与Rh(D)血型测定：确定患者血型，为输血提供参考依据。
2. 抗人球蛋白试验：通过检测患者血清对人类红细胞的球蛋白反应，判断溶血性贫血存在的机制。
四、外周血涂片与骨髓涂片检查1. 外周血涂片检查：观察红细胞形态，鉴别溶血性贫血与其他类型贫血的区别。
2. 骨髓涂片检查：观察骨髓中红细胞的生成情况和异常，评估溶血性贫血的病因。
五、其他辅助检查方法1. 血培养：筛查溶血性贫血与感染相关的细菌或寄生虫。
2. 自身抗体检测：检测患者血清中的自身抗体，帮助诊断自身免疫性溶血性贫血。
总结：溶血性贫血的实验室检测方法包括红细胞指标测定、血清标志物测定、血型与抗人球蛋白试验、外周血涂片与骨髓涂片检查以及其他辅助检查方法。
通过这些检测手段的组合使用，能够准确诊断溶血性贫血的类型和病因，为治疗方案的选择和疾病的监测提供依据。