活细胞核染料-绿菁syto结构式
分子生物学常用荧光核酸染料
由于只需简单温和的物理方法（光照）激发和检测，荧光染料是研究生物学微观世界特别是核酸时最常用的示踪工具之一。
这里的荧光核酸染料主要指能特异结合核酸并改变发光特性的化合物，DNA电泳后检测凝胶的EB大概是最为人熟知的荧光核酸染料吧。
除了染胶，荧光核酸染料还可用于荧光原位杂交中作为常见的复染剂，它们能以非共价键的方式与DNA/RNA结合从而显示原位杂交中的细胞背景信息。
根据它们能否穿透细胞膜进入活细胞体内，还可分为两大类：通透性核酸染料和非通透性核酸染料。
生物通在此简单比较一下在分子生物学实验和细胞学实验中常用的荧光染料。
分子生物学常用荧光核酸染料荧光核酸染料在分子生物学最常见的应用无疑是电泳凝胶染色，以及定量PCR。
EBEB（溴化乙锭）本身在紫外下不发光，能与单链、双链甚至三链DNA高效结合并发出明亮的橙色荧光。
因其廉价且灵敏度高，一直是琼脂糖核酸电泳最常用的荧光染料。
EB的使用非常简单方便，电泳结束后染色可获得最佳效果，也可以在制胶时加入进行前染。
前染有利于节约时间，但是易出现条带变形拖尾等问题。
EB-DNA结合物会导致染料的光漂白和DNA单链断裂，且具有潜在的诱变作用。
虽说以前的实验室里总会有个别做起实验来“精神可嘉，行为可怕”的家伙，一时找不到手套他们敢徒手拿EB胶，但大多数人对EB还是“敬而远之”的，没事谁都不愿靠近实验室里跑胶、看胶那一块地方。
偏偏对于搞分子生物学的人来说，跑胶就像吃饭一样平常，于是大家只能硬着头皮天天和EB打交道，盼望EB的替代品早点出现在实验室。
生物通在此简单回顾一下这几年纷纷登场的EB替代品。
SYBR系列染料说到EB的替代物，首先想到的是Invitrogen旗下Molecular Probes专利持有的SYBR系列。
自1993年SYBR核酸染料推出以来，就因其灵敏度和易用性而迅速大受欢迎，成为明星产品之一。
这一系列包括4种染料：SYBR Safe、SYBR Gold、SYBR Green I和SYBR Green II。
细胞染色方法大全
之杨若古兰创作Hoechst染色:hoechst可以穿过活细胞膜与细胞核结合(次要为凋亡活细胞)在紫外光下将核染为蓝色. Hoechst染细胞核会影响共聚焦显微镜对该样本其他荧光的观察后果.hoechst 有hoechest33342和hoechst33258两种hoechsts33258，hoechst33342二者区别不大，但是hoechst33342对细胞的毒性感化更小一些，所以普通来说hoechsts33258用于细胞固定后再染色，而hoechst33342则可以对活细胞直接进行染色！染色步调PI(Propidium Iodide碘化丙啶)染色:是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，经常使用于细胞凋亡检测. 碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料(红色），它不克不及透过完好的细胞膜，但凋亡中初期的细胞和坏死细胞因为细胞膜通透性的添加，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红.用PI单一染色观测培养细胞，只能暗示细胞的坏死情况，而不是凋亡（当然初期凋亡PI亦可着色）.但是如果您只是想晓得细胞的死亡情况，而不是细心区分坏死或凋亡，那么PI单一染色也能够.但是如果您必定要认定细胞的凋亡，那么PI单一染色明显不敷！annexin-v染色细胞凋亡初期,细胞膜标记发生改变.其中,磷脂酰丝氨酸(Annexin-V,PS)外翻 ,Annexin-V 在Ca+存在的条件下与其高亲和力特异性结合.如许,Annexin-v 染色阳性,暗示细胞处于初期凋亡形态.Annexin-V结合分歧的荧光抗体,就可以利用流式细胞仪、荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生.Annexin V用FITC标识表记标帜发绿色荧光；如果用PE标识表记标帜就发红色荧光.JC-1染色 JC-1是一种阳离子染料，可以在线粒体内聚集，低浓度时次要以单体(monomer)存在，发射光以绿光(～525nm)为主；而在高浓度时则可以构成多聚体(aggregation)，发射光以红光(-590nm)为主.线粒体本人存在必定的极性(polarization)，其外膜为负极，内膜为正极.电位差由Ca2+、Na+和H+流调控.当线粒体形态良好时对JC-l摄取量少，因此在线粒体内次要以单体的方式存在绿光强度/红光强度的比值较高.在线粒体发生去极化(depolarization)时，线粒内JC-l的浓度较高，多以多聚体的方式存在，绿光强度/红光强度的比值降低.JC-1染色的绿光强度/红光强度仅取决于线粒体的膜电势(membrane potential)，而与线粒体的形状、体积和密度都有关，因此能更好地反映线粒体的功能形态.因为凋亡发生的初期存在线粒体的去极性，是以，JC-1染色被用于检测凋亡的初期发生.其实验方法如下.JC-l染色非常简单.首先可将成品JC-1以DMSO配成储存液(1～5mg/ml)，储存于-20℃，用时以培养液浓缩至10ug/ml 终浓度.对贴壁细胞可以直接弃去培养液，漂洗细胞后直接加入染色液，10-30min后在荧光显微镜下或者激光共聚焦下观察.线粒体形态好时细胞以绿色为主，当红光旌旗灯号加强时，红绿相叠，以橙色为主.该染色应用于悬浮细胞时还可以通过流式细胞仪进行检测，收集红/绿旌旗灯号强度，计算其强度比.钙黄绿素-AM(Calcein-AM):Calcein -AM本人其实不是荧光分子，但通过活细胞内的酯酶感化，Calcein -AM能脱去AM 基，发生的Calcein能发出强绿色荧光（激发：490 nm，发射：515 nm）.是以Calcein -AM仅对活细胞染色细胞活力鉴定——台盼蓝染色法道理：细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解体的DNA 结合，使其着色.而活细胞能禁止染料进入细胞内.故可以鉴别死细胞与活细胞.用品：1. 4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4度保管.使用时.用PBS浓缩至0.4%.2. 吸管、血细胞计数板、显微镜步调：1、制备单细胞悬液.并作适当浓缩（106细胞/ml）2、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀.3、计数：在三分钟内，用计数板分别计数活细胞和死细胞结果统计：镜下观察，死细胞被染成淡蓝色，而活细胞拒染.根据下式求细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100留意事项：台盼蓝染细胞时，时间不宜过长.否则，部分活细胞也会着色，会干扰计数.台盼蓝染色道理通常认为细胞膜丧失完好性，细胞即可被认为曾经死亡.台盼蓝(Trypan Blue)是检测细胞膜完好性最经常使用的生物染色试剂.健康的正常细胞能够排斥台盼蓝，而死亡的细胞，膜的完好性丧失，通透性添加，细胞可被台盼蓝染成蓝色.根据此道理，细胞经台盼蓝染色后，可通过显微镜，直接镜下计数或拍照后计数，实现对细胞存活率比较精确的定量分析.试述台盼蓝染发鉴别死活细胞的道理，试分析染色时间过长本来是活细胞也被染色的缘由死细胞的细胞膜无屏障感化，台盼蓝马上进入细胞而显蓝色.活细胞细胞膜有选择透性，对台盼蓝的透性小，进入细胞慢.若染色时间过长，台盼蓝可能通过胞吞或胞饮感化进入细胞.。
常见细胞核荧光染料
细胞核常用荧光染料有：吖啶橙（Acridine Orange，AO）、溴化乙锭（Ethidium Bromide，EB）和碘化丙啶（Propidium Iodide，PI），DAPI、Hoechst染料、EthD III、7-AAD、RedDot1、2 等等。
透膜的染料如下：AO：具有膜通透性，能透过细胞膜，将核DNA和RNA分别染成绿色和红色，因此使细胞核呈绿色或黄绿色荧光。
EB：一种高度灵敏的荧光染色剂，在标准302nm处激发出橙红色信号。
DAPI：蓝色一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，其与DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光，而与单链DNA结合无荧光的增强。
DAPI对双链DNA的染色灵敏度要高于EB和PI，荧光强度比Hoechst低，但光稳定性高于Hoechst。
Hoechst染料：蓝色一类在显微观察中标记DNA的荧光染料，最常见的两种是Hoechst33342和Hoechst33258。
这两种染料都在紫外350nm处被激发，在461nm处最大发射光附近发射青/蓝色荧光。
与DAPI相比，Hoechst33342加有乙基，具有更强的亲脂性，因此能更好的透过完整的细胞膜，并且细胞毒性更小。
RedDot 1染料：红色，超强的细胞核选择性，其光谱相似于Draq?5 和Draq?7。
RedDot?染料可被几种常见的激光激发并可在远红外区激发荧光。
RedDot? 的红色近红外荧光有效的与其他常用荧光探针区分开来。
不透膜的染料，如下：PI：不同通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。
PI作为红色荧光复染剂首选，PI经常与Calcein-AM或者FDA等荧光探针合用，区分死/活细胞。
EthD III、7-AAD、RedDot 2：不能透过细胞膜，但能将坏死细胞区分开来；更适合凋亡坏死实验的检测；细胞核荧光染料（PI DAPI Hoechst33342）细胞核荧光染料PI碘化丙啶（简称PI）是一种常用的细胞核荧光染色剂。
台盼蓝染色实验原理和步骤之欧阳学创编
台盼蓝染色实验原理
台盼蓝（Trypan Blue) 是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，还常用于检测细胞是否存活。
活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。
分子式：
C34H24N6O14S4Na4，分子量: 960.82，可溶于水
（10mg/ml)。
实验原理：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。
通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。
因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。
台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。
注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。
台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。
台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。
实验步骤：
1、配制4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4℃保存。
使用时用PBS稀释至0.4%。
2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。
3、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。
（终浓度0.04%）
4、计数：在3分钟内，分别计数活细胞和死细胞。
5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而活细胞拒染呈无色透明状。
6、统计细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100%
注意：
1.保存条件：室温保存。
2.有潜在致癌危险，实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。
细胞染料
精心整理SYTOX系列染料Invitrogen的SYTOX系列染料也很受欢迎，它们是非通透性的花菁染料，尤其适合于死细胞的染色。
使用起来也比较简单，只需要加到细胞，然后观察即可，不需要额外的洗涤，因为它们在水溶液中没有荧光。
SYTOX染料适用于多个平台，包括荧光显微镜、流式细胞仪和酶标仪。
整个系列目前有红、橙、黄、绿四种颜色。
SYTOX绿色染料与核酸的亲和力是整个系列中最高的。
一旦与核酸结合，荧光会增强500倍以上。
哇，立马把PI比了下去。
且它的碱基选择性最小，不像DAPI和PI那么挑剔，只认AT。
SYTOX绿色染料可由常用的488nm激光或其他的450-490nm光源激发。
它能轻松地透过质膜受损的细胞，但不能穿过活细胞膜。
它还特别适合于革兰氏阳性菌、阴性菌及某些病毒粒子的染色，因为它很亮。
SYTOX绿色染料能与红色、蓝色染料一起，进行多色分析。
它还能与SYTO17红色染料进行死细胞和活细胞的共同染色。
SYTOX蓝色染料也是一种高亲和力的核酸染料，只能渗透质膜受损的细胞。
它与核酸结合后的最大吸收峰约为445nm，能被汞弧灯的436nm谱线所激发。
与许多蓝色荧光染料不同，SYTOX蓝色染料还能被卤钨灯有效激发。
在定量膜受损的细菌细胞上，SYTOX蓝色染料与绿色染料效果相当，同样也不会干扰细菌细胞的生长。
不过蓝色和绿色的发射光谱有些重叠，因此SYTOX蓝色染料还是与橙色或红色探针一起使用，效果更佳。
SYTOX橙色染料能清晰分辨死的细菌、酵母或哺乳动物细胞。
它与PI相比，发射波长更短，它的光谱则更接近罗丹明的滤光片。
此外，SYTOX橙色染料的消光系数比PI要高得多，在结合DNA时荧光显着增强，表明它作为死细胞染料或核酸复染剂，有着更高的灵敏度。
SYTOX橙色染料还是利用流式细胞仪进行DNA片段筛选时的最佳染料。
活细胞的染色Hoechst荧光染料大家耳熟能详的Hoechst系列染料是一种双苯甲亚胺（bisbenzimide）染料，主要有Hoechst33258和Hoechst33342等。
活细胞核染料-绿菁syto结构式
活细胞核染料-绿菁syto结构式绿菁（Syto）是一种细胞核染料，用于活细胞和固定细胞的荧光染色。
它可以与DNA结合并发出绿色荧光，因此广泛应用于细胞生物学研究和实验室检测中。
绿菁染料的结构式如下：结构式绿菁染料是一种流动性迷走目标选项有机染料，具有较高的亲水性和生物相容性。
它能够穿过细胞膜，与细胞内的DNA结合，并产生荧光信号。
这使得绿菁成为一种非常有用的细胞标记工具，可以用于观察和分析活细胞的核酸结构和功能。
绿菁染料具有许多优点。
首先，它是一种非毒性染料，对细胞的生理功能没有明显的影响。
这使得绿菁成为一种可靠的选择，用于研究和分析活细胞的核酸相关过程。
其次，绿菁染料具有较高的灵敏度和选择性。
它可以以快速和可靠的方式与DNA 结合，并产生明亮的荧光信号。
这意味着研究人员可以使用低浓度的绿菁来标记细胞，而不会对细胞的正常功能产生负面影响。
此外，绿菁可以通过多种方法进行检测。
例如，可以使用荧光显微镜观察染色细胞，或者使用流式细胞术对细胞进行高通量筛选。
这些方法使得绿菁成为一种非常灵活和多功能的细胞标记工具。
最后，绿菁还可与其他细胞染料进行共染。
例如，研究人员可以使用绿菁与红菲沙染料同时染色细胞，这样就可以同时观察细胞的核酸和蛋白质组成。
这种共染技术可以提供更全面、准确的细胞信息。
绿菁染料的应用非常广泛。
例如，在细胞生物学中，研究人员可以使用绿菁标记染色体来观察染色体在细胞周期中的位置和运动。
此外，绿菁还可用于检测细胞的凋亡和坏死，以及研究细胞核酸代谢和DNA损伤修复过程。
在临床应用中，绿菁可以用于诊断和治疗相关疾病。
例如，绿菁荧光检测技术可以用于癌症早期诊断和治疗效果评估。
此外，绿菁还可以与药物载体结合，形成荧光标记的纳米颗粒，用于跟踪药物在体内的分布和组织靶向性。
总之，绿菁（Syto）是一种非常有用的细胞核染料，广泛应用于细胞生物学研究和临床实践中。
它具有优异的亲水性和荧光性能，可以可靠地标记细胞核酸，并提供关于活细胞结构和功能的信息。
活细胞核染料-绿菁syto结构式 -回复
活细胞核染料-绿菁syto结构式-回复题目：活细胞核染料绿菁syto的结构与应用引言：生命的奥秘一直是人们探索的焦点之一，而活细胞的核是细胞最重要的组成部分之一。
为了研究细胞核的结构和功能，科学家们发明了许多核染料，其中绿菁syto成为了一种常用的活细胞核染料。
本文将一步一步地介绍绿菁syto的结构和应用，以期帮助读者更好地了解这一核染料的价值和意义。
一、绿菁syto的结构绿菁syto是一种荧光活细胞核染料，其分子结构由苯并合吲哚环、丙二酰亚胺和乙烯基基团组成。
其中苯并合吲哚环为主体结构，丙二酰亚胺和乙烯基基团则使其具有荧光性质。
绿菁syto分子结构的合理设计使其能够与DNA发生特异性的相互作用，并能够进入活细胞的核内，从而实现对细胞核的染色与成像。
二、绿菁syto的应用1. 活细胞核染色绿菁syto可通过荧光显微镜对活细胞核进行高亮度的染色，其可见光激发和发射峰位于480-500 nm和500-520 nm。
通过绿菁syto染色，科学家们能够观察到细胞核的形态、结构以及基因组DNA的分布情况，从而进一步研究细胞核的功能和变化。
2. 细胞周期研究细胞周期是细胞生命活动的重要过程之一，对于理解细胞增殖、发育和恶性肿瘤等疾病发生机制具有重要意义。
绿菁syto染色技术可通过荧光信号的强度和形态特征，判断细胞处于细胞周期的不同阶段，从而研究细胞周期的调控与异常。
3. 细胞凋亡研究细胞凋亡是细胞自身引发的有序死亡过程，对于维持组织的正常结构和功能具有重要作用。
绿菁syto与DNA发生特异性的结合，可用于检测细胞凋亡的发生情况。
凋亡细胞的核内DNA会发生片段化，绿菁syto染色后，能够观察到核内有明显的减少和片段化的DNA，从而确定细胞是否发生凋亡，并进一步研究凋亡机制。
4. 肿瘤研究绿菁syto能够与细胞核内全部的DNA发生结合，因此在肿瘤细胞的研究中也有广泛应用。
通过绿菁syto染色技术，科学家们能够观察到肿瘤细胞核的形态和数量的变化，进而研究肿瘤细胞的增殖、凋亡和转移等过程，为肿瘤的预防和治疗提供理论基础。
细胞核相关染料
Organelle - Nuclear envelopeThe nuclear envelope acts as a barrier, separating the cytoplasm from the nucleus.It consists of a lipid bilayer that contains nuclear pores and key nuclear membrane proteins.产品目录号 发射颜色*Ex/Em† 活细胞‡固定细胞§可固定性** 主要特征Organelle Lights™ NE-GFPO36213 485/520(paraformaldehyde)Targeted specifically to nucleus via the nesprin-1α C-terminal transmembrane domain* Gray represents fluorescence emission that is beyond the limit of human vision.† Ex/Em = 荧光激发和发射波长最大值，单位 nm 。
‡ 活细胞染色。
§ 固定细胞染色。
** 染色模式是可固定的。
NA = 不适用。
View Nuclear Envelope, Nucleoli, and Nucleus Antibodies（返回页首）Organelle - NucleoliThe nucleoli of the cell are non-membrane bound bodies found within the nucleus of the cell and are the site where ribosomal RNA is transcribed. 产目录号Ex/Em†活固定可固主要特征品发射颜色* 细胞‡细胞§定性**SYTO® 81Orange nucleic acid stainS1*******/544 NucleolarSYTO® RNASelect™ Green S3*******/530(boundto RNA)RNA selective, exhibiting increasedfluorescence with RNA binding, prominentnucleolar staining, weak mitochondrialstaining* Gray represents fluorescence emission that is beyond the limit of human vision.† Ex/Em = 荧光激发和发射波长最大值，单位 nm。
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活细胞核染料-绿菁syto结构式
活细胞核染料绿菁（Syto）是一类用于荧光染色活细胞核的结构化合物。
其结构式如下：
活细胞核染料绿菁（Syto）的主要作用是通过与DNA相互作用而染色细胞的核。
绿菁是一种具有强荧光的化合物，可以被细胞膜透过并与细胞核内的DNA相互作用，从而实现核染色的目的。
与传统的核染色剂相比，绿菁具有以下优点：
1. 高亲和力：绿菁与DNA结合能力强，可以稳定地结合在细胞核内，不易被洗脱。
2. 低细胞毒性：绿菁对细胞的毒性较低，可以在活细胞中使用，不会对细胞的形态和功能产生明显影响。
3. 宽波长范围：绿菁可以在不同波长的刺激下发射荧光信号，适用于不同的荧光显微镜技术。
4. 多色标记：通过与其他荧光染料结合使用，可以实现多色标记和观察多种细胞结构和分子的同步动态变化。
使用绿菁进行细胞核染色通常需要以下步骤：
1. 考虑细胞的类型、培养条件和实验目的，选择合适的绿菁染色体系。
2. 向细胞培养基中加入适量的绿菁染料，并与细胞充分接触。
染料的浓度和作用时间需要根据实验要求进行优化。
3. 洗涤：在染色完成后，通过洗涤细胞培养基的方式去除未结合的染料。
4. 观察：使用荧光显微镜观察染色后的细胞核荧光。
根据实验需要，也可以使用流式细胞术等技术进行进一步的分析和观察。
活细胞核染料绿菁（Syto）的应用非常广泛，包括但不限于以下几个方面：
1. 细胞活力和增殖：通过观察绿菁染色后的细胞核形态和数量变化，可以评估细胞的活力和增殖能力。
例如，可以用于细胞凋亡检测和细胞周期分析。
2. 荧光显微镜成像：通过绿菁染色可以实现细胞核的荧光显微镜成像，进一步观察细胞核的形态、结构和位置等信息。
同时，也可以与其他荧光染料结合使用，标记不同的细胞器或分子，实现多色标记成像。
3. 纳米材料研究：绿菁染料可以用于纳米材料的功能化修饰和细胞内定位研究。
通过将绿菁染料修饰在纳米材料表面，可以实现纳米材料对细胞核的高亲和力和选择性标记。
这在纳米药物输运、细胞纳米探针和纳米生物传感器等领域具有重
要应用价值。
总之，活细胞核染料绿菁（Syto）是一种常用的荧光染料，用于细胞核染色和观察。
它具有高亲和力、低细胞毒性、宽波长范围和多色标记等优点，在细胞活力检测、荧光显微镜成像和纳米材料研究等领域具有重要的应用潜力。