开题报告牛耳大黄醇提物
总黄酮提取的开题报告
总黄酮提取的开题报告总黄酮提取的开题报告一、研究背景总黄酮是一类具有广泛生物活性的天然化合物，广泛存在于植物中，尤其是蔬菜、水果和豆类中。
研究表明，总黄酮具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、降血脂、降血糖等多种生理活性，对人体健康具有重要意义。
因此，提取和研究总黄酮成为了当前的热点课题之一。
二、研究目的本研究旨在开发一种高效、低成本的总黄酮提取方法，并对提取得到的总黄酮进行分离纯化和生物活性评价，为总黄酮的应用研究提供基础数据。
三、研究方法1. 样品收集与处理：选择富含总黄酮的植物材料，如柑橘皮、苦荞茶等作为研究对象，进行样品收集和处理。
2. 总黄酮提取方法的优化：采用超声波辅助提取、酶法提取、水热法提取等不同方法进行总黄酮的提取，通过比较提取效果和成本，确定最佳的提取方法。
3. 总黄酮的分离纯化：采用柱层析、高效液相色谱等技术对提取得到的总黄酮进行分离纯化，得到纯度较高的总黄酮样品。
4. 总黄酮的生物活性评价：通过体外实验，评价总黄酮的抗氧化、抗炎、抗肿瘤等生物活性，探究其对人体健康的潜在影响。
四、研究意义1. 提供总黄酮提取技术：通过对总黄酮提取方法的优化，提供一种高效、低成本的总黄酮提取技术，为相关产业的发展提供技术支持。
2. 探索总黄酮的生物活性：通过对总黄酮的生物活性评价，揭示其在抗氧化、抗炎、抗肿瘤等方面的作用机制，为总黄酮的应用研究提供理论依据。
3. 促进食品安全与健康：总黄酮具有多种生理活性，其应用于食品工业可以提高食品的营养价值和功能性，对促进食品安全与健康具有积极意义。
五、研究计划1. 样品收集与处理：选择柑橘皮、苦荞茶等植物材料作为研究对象，进行样品的收集和处理，包括干燥、粉碎等步骤。
2. 总黄酮提取方法的优化：采用超声波辅助提取、酶法提取、水热法提取等不同方法进行总黄酮的提取，通过比较提取效果和成本，确定最佳的提取方法。
3. 总黄酮的分离纯化：采用柱层析、高效液相色谱等技术对提取得到的总黄酮进行分离纯化，得到纯度较高的总黄酮样品。
黄酮素提取的开题报告
黄酮素提取的开题报告黄酮素提取的开题报告摘要：黄酮素是一类具有广泛生物活性的天然化合物，被广泛应用于医药、食品、化妆品等领域。
本研究旨在探索黄酮素的提取方法，以及其在不同领域的应用前景。
通过文献综述和实验研究，我们将深入探讨黄酮素的提取工艺、提取效率、生物活性及其潜在的应用价值。
1. 引言黄酮素是一类具有多种生物活性的天然化合物，被广泛分布于植物中。
其具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生物活性，因此引起了广泛的关注。
目前，黄酮素的提取方法主要包括溶剂提取、超声波提取、微波辅助提取等。
2. 黄酮素的提取工艺2.1 溶剂提取法溶剂提取法是最常用的黄酮素提取方法之一。
通过选择适当的溶剂，将植物材料浸泡于溶剂中，然后进行浸提和浓缩，最终得到黄酮素。
常用的溶剂包括乙醇、丙酮、乙酸乙酯等。
溶剂提取法具有简单、易操作的特点，但提取效率较低。
2.2 超声波提取法超声波提取法是一种利用超声波的机械作用将黄酮素从植物材料中释放出来的方法。
超声波具有高频振动和剧烈的液体剪切作用，能够破坏细胞壁，加速黄酮素的释放。
超声波提取法具有提取效率高、时间短的优点，但对设备要求较高。
2.3 微波辅助提取法微波辅助提取法是利用微波辐射加热植物材料，使其内部产生热效应，从而促进黄酮素的释放。
微波辅助提取法具有提取效率高、时间短、对环境友好的特点，但对设备的选择和操作要求较高。
3. 黄酮素的提取效率黄酮素的提取效率受多种因素的影响，包括植物材料的种类、提取方法、提取温度、提取时间等。
不同的提取方法对黄酮素的提取效率有不同的影响。
通过实验研究，我们可以优化提取工艺，提高黄酮素的提取效率。
4. 黄酮素的生物活性黄酮素具有多种生物活性，包括抗氧化、抗炎、抗肿瘤、抗菌等。
这些生物活性使得黄酮素在医药、食品、化妆品等领域有着广泛的应用前景。
通过研究黄酮素的生物活性，我们可以进一步挖掘其潜在的应用价值。
5. 黄酮素的应用前景黄酮素在医药领域被广泛应用于抗肿瘤药物的研发、心血管疾病的治疗等。
大黄的提取实验报告
大黄的提取实验报告一、实验目的本实验旨在探究从大黄中提取有效成分的方法，并对提取产物进行定性和定量分析，以了解大黄中活性成分的含量和性质。
二、实验原理大黄中含有多种化学成分，如蒽醌类化合物（大黄酸、大黄素、芦荟大黄素等）、鞣质、多糖等。
本次实验主要针对蒽醌类化合物进行提取，利用其在不同溶剂中的溶解性差异，通过溶剂萃取和柱层析等方法进行分离纯化。
三、实验材料与仪器1、材料大黄药材：干燥的大黄根茎。
试剂：乙醇、乙醚、盐酸、氢氧化钠、乙酸乙酯、硅胶等。
标准品：大黄酸、大黄素等标准对照品。
2、仪器粉碎机回流装置旋转蒸发仪层析柱紫外可见分光光度计高效液相色谱仪四、实验步骤1、大黄药材的预处理将干燥的大黄根茎用粉碎机粉碎，过 40 目筛，得到大黄粉末，备用。
2、提取称取一定量的大黄粉末，加入适量的乙醇，在回流装置中加热回流提取 2 小时。
提取液过滤，收集滤液，减压浓缩至无醇味，得到粗提物。
3、酸水解在粗提物中加入适量的盐酸溶液，加热水解 1 小时，使结合型蒽醌转化为游离型蒽醌。
水解液冷却后用氢氧化钠溶液中和至中性。
4、萃取将水解后的溶液用乙醚萃取多次，合并乙醚萃取液，减压浓缩至干，得到乙醚提取物。
5、柱层析分离将乙醚提取物用硅胶柱层析进行分离，以乙酸乙酯石油醚为洗脱剂，梯度洗脱，收集含有大黄酸、大黄素等成分的洗脱液。
6、浓缩与干燥将收集的洗脱液减压浓缩至干，得到纯化的大黄提取物。
五、实验结果与分析1、定性分析采用薄层色谱法（TLC）对提取物进行定性分析。
以大黄酸、大黄素等标准品为对照，在相同的展开条件下，观察提取物的斑点与标准品斑点的位置和颜色是否一致。
结果显示，提取物中含有与标准品相同的成分。
2、定量分析采用高效液相色谱法（HPLC）对提取物中的大黄酸、大黄素等成分进行定量分析。
根据标准曲线计算出提取物中各成分的含量。
六、实验讨论1、提取方法的选择本次实验采用乙醇回流提取法，该方法操作简单，提取效率较高。
大黄萃取的实验报告
一、实验目的1. 了解大黄的化学成分及其提取方法；2. 掌握液-液萃取法提取大黄中有效成分的原理及操作步骤；3. 评价不同萃取剂对大黄中有效成分的提取效果。
二、实验原理大黄是一种传统的中药材，主要成分为蒽醌类化合物。
液-液萃取法是一种常用的分离和提纯方法，其原理是利用两种互不相溶的溶剂，使待提取物质在两相之间分配，从而实现分离。
三、实验器材与药品1. 实验器材：分液漏斗、烧杯、移液管、玻璃棒、电子天平、烘箱等；2. 药品：大黄粉末、乙醇、乙酸乙酯、石油醚、氯仿、无水硫酸钠等。
四、实验步骤1. 准备大黄粉末：将大黄粉末过60目筛，备用；2. 样品制备：取一定量大黄粉末，加入适量乙醇，搅拌溶解，静置30分钟；3. 萃取：将上述溶液倒入分液漏斗中，加入等体积的乙酸乙酯，充分振荡，静置分层；4. 分离：将有机层与水层分离，收集有机层；5. 浓缩：将有机层倒入烧杯中，在水浴上加热蒸发，直至浓缩至一定体积；6. 干燥：将浓缩液转移至烘箱中，干燥至恒重；7. 称重：称取干燥后的大黄提取物，计算提取率。
五、实验现象1. 样品制备过程中，大黄粉末逐渐溶解；2. 萃取过程中，有机层与水层分层明显；3. 浓缩过程中，有机层体积逐渐减小；4. 干燥过程中，大黄提取物逐渐干燥。
六、实验结果与分析1. 大黄提取物的得率：根据实验结果，大黄提取物的得率为5.2%；2. 不同萃取剂对大黄中有效成分的提取效果：通过比较乙醇、乙酸乙酯、石油醚、氯仿等萃取剂对大黄中有效成分的提取效果，发现乙酸乙酯的提取效果最佳。
七、实验结论1. 液-液萃取法是一种有效的大黄提取方法，适用于提取大黄中的蒽醌类化合物；2. 乙酸乙酯是大黄中蒽醌类化合物提取的最佳溶剂；3. 本实验成功提取了大黄中的有效成分，为后续研究提供了基础。
八、实验注意事项1. 在实验过程中，注意安全操作，防止溶剂挥发和火灾；2. 萃取过程中，充分振荡，确保两相充分接触；3. 浓缩过程中，注意控制加热温度，防止溶剂过度挥发；4. 干燥过程中，注意烘箱温度，防止大黄提取物变质。
大黄的提取分离
大黄的提取分离实验报告一．背景和目的大黄，又名黄良、火参、将军等，为我国传统常用中药材。
大黄(Radixe RhiZomaRhei)为寥科植物掌叶大黄 (RheumPalmatumL)，唐古特大黄(Rheum tangutieumMaxim.exBal勺或药用大黄 (RheumoffieinaleBaill)的干燥根和根茎。
掌叶大黄和唐古特大黄药材称北大黄，主产于青海、甘肃等地。
药用大黄药材称南大黄，主产于四川。
于秋末茎叶枯萎或次春发芽前采挖。
除去须根，刮去外皮切块干燥，生用，或酒炒，酒蒸，炒炭用。
味苦、性寒。
归脾、胃、大肠、肝、心包经。
1.1天然产物提取、分离和纯化技术概述植物的化学成分比较复杂，种类很多，因此在着手研究一个植物的有效成分时，首先要大致知道有哪些类型的化学成分，这就需要对各类化学成分的进行简单的定性预试验。
通常先用几种不同极性的溶剂分别进行提取，进行生物活性筛选，确定哪一个溶剂提取部位有效后，再对该部位进行各类化学成分的预实验。
另外在植物资源化学研究工作中，常常根据工作需要，定向的寻求某类化学成分，这就要进行某类化学成分的单项预实验。
根据预实验的结果，判断可能含有哪些类型的化学成分，然后按照所含化学成分的性质，设计有效成分分离的具体方法。
通常将植物分别用石油醚、95%乙醇和水提取。
这样便可以把绝大部分植物成分提取出来，假使我们不着重研究挥发油，一般经过酒精和水两种溶剂的提取就可以进行预实验。
预实验往往只能提供初步的线索。
1.1.1.水提液取植物粉末5g，加50mL蒸馏水，在50-60℃的水浴上加热约1小时后过滤，此滤液即可在试管及滤纸上作糖、多糖、有机酸、皂苷、苷类、酚类、鞣质、氨基酸、生物碱等项的预试验。
1.1.2.酒精提取液取植物粉末5g，加50mL95%的酒精，在水浴上加热回流约1小时后过滤，滤液即可进行酚类、鞣质、有机酸等项的预实验。
其后将滤液浓缩至浆状，置于研钵中，用少量5%盐酸溶解，取盐酸水溶液进行生物碱的预实验。
中草药中乙醇脱氢酶抑制剂的靶向筛选与分离的开题报告
中草药中乙醇脱氢酶抑制剂的靶向筛选与分离的开题报告一、研究背景中草药是我国独特的资源，具有广泛的药理活性和丰富的生物活性成分。
其中许多化合物具有很高的医药价值。
但是，传统的中草药提取方法具有提取效率低、提取时间长和提取的成分不纯等缺点。
因此，开发新的高效提取技术来提高提取效率和成分纯度是十分必要的。
一种常用的中草药提取方法是醇提法。
醇提法通常使用乙醇等有机溶剂来提取药材中的活性成分。
但是，近年来的研究显示，在中草药中存在着一些化合物，如黄酮、类黄酮和苯酚等，它们可以通过乙醇脱氢酶催化反应产生苯酚类化合物并降低活性成分的含量。
因此，寻找能够抑制乙醇脱氢酶活性的天然化合物具有重要的意义。
二、研究目的本课题旨在通过对中草药中抑制乙醇脱氢酶活性的天然化合物进行靶向筛选与分离，最终获得用于提高中草药提取效率和成分纯度的化合物，从而提高中草药利用价值。
三、研究方法1. 中草药样品的提取与分离：选取具有抑制乙醇脱氢酶活性的中草药材料（如黄芪、枸杞、当归等），采用醇提法进行提取，然后用TLC、HPLC等方法分离和纯化化合物。
2. 乙醇脱氢酶的活性测定：采用比色法或荧光法等方法检测乙醇脱氢酶的活性，以评估化合物的抑制作用。
3. 抑制剂筛选：通过对中草药提取物中分离得到的化合物在乙醇脱氢酶抑制实验中的作用进行评估，筛选出具有较高抑制效果的化合物。
4. 靶向分离：通过一系列化学技术，如分光镜法、纯化柱法等，以及质谱技术对乙醇脱氢酶抑制剂进行分离、鉴定结构，并揭示它们与乙醇脱氢酶之间的相互作用机制。
四、研究意义本课题研究的抑制乙醇脱氢酶活性的天然化合物，不仅有望提高中草药的提取效率和成分纯度，而且还有可能为寻找抑制其他酶活性的天然化合物提供新的思路和方法。
因此，本研究具有重要的科学意义和应用价值。
大黄提取物对建鲤抗菌能力及生长影响的研究的开题报告
大黄提取物对建鲤抗菌能力及生长影响的研究的开题报告一、研究背景随着养殖业的快速发展，水产养殖面临着多种疾病的威胁，其中细菌性疾病是影响水产养殖产能的主要因素之一。
传统的化学药物治疗虽然具有一定的效果，但是副作用大，长期使用容易导致抗药性的出现，对养殖环境和消费者健康也造成了一定的安全隐患。
因此，对养殖过程中的疾病进行生物治疗已经成为了养殖业发展的趋势之一。
大黄提取物作为一种天然的植物提取物，已经在多个领域表现出了显著的抗菌作用。
特别是在生物治疗领域，大黄提取物已经被证明具有治疗鱼类细菌性感染的作用。
然而，目前对于大黄提取物应用于建鲤养殖中的抗菌效果及生长影响的研究还较为有限。
因此，本研究将针对大黄提取物在建鲤养殖中的双重作用进行探究，从而为养殖业提供一种天然、安全、有效的生物治疗方法。
二、研究目的本研究旨在分析大黄提取物对建鲤在养殖过程中的抗菌能力以及生长影响，为大黄提取物在养殖业中的应用提供科学依据。
三、研究内容1. 大黄提取物的提取与纯化本实验将使用超声波辅助浸提的方法提取大黄中有效成分，再通过柱层析法对其进行纯化，获得具有一定抗菌活性的大黄提取物。
2. 建鲤细菌性感染模型的建立采用人工感染法建立建鲤的细菌性感染模型，观察细菌病毒在建鲤体内的生长情况。
3. 大黄提取物的抗菌活性检测通过巨细胞吞噬实验测试大黄提取物对建鲤体内细菌病毒的杀菌作用，研究其最佳抑菌浓度和时间。
4. 建鲤生长实验将实验组和对照组建立在相同的养殖环境下，在观察建鲤生长速度的同时，分析大黄提取物对建鲤生长影响的差异性。
四、研究意义本研究可以为开发适用于建鲤细菌性疾病的天然药物提供科学的依据。
同时，将对传统化学抗生素对养殖环境的侵害带来的安全隐患进行有效的缓解，给建鲤及其相关产业的稳定发展做出贡献。
大黄中药材及其醇,水提取物中大黄素成分分析标准物质研究
大黄中药材及其醇,水提取物中大黄素成分分析标准物质研究51900419690825****摘要：通过“单个组件→复合材料组件“该技术开发了一系列测定大黄中大黄素、大黄95%乙醇提取物和大黄水提取物的标准物质。
采用国家一级大黄素标准物质进行定量传递，采用高效液相色谱协同校准法测定各基质中大黄素组分的标准值；通过建立数学模型建立了不确定度评定模型，对各不确定度分量进行了分析，得出了不确定度值。
大黄、大黄95%乙醇提取物和大黄水提取物中大黄素的含量分别为/。
所建立的量值传递技术路线成功地解决了中药复方体系中化学成分的量值溯源问题。
关键词：大黄；大黄95%乙醇提取物；大黄水提取物；大黄素；标准物质；不确定度1材料HPLC：美国安捷伦1200，Dad检测器，安捷伦测试工作站；量表：XS105型，METTLER，灵敏度0.01mg（0≤m≤5g，0.01mg）；5<20g，0.02mg）三电加热恒温箱：北京京科华瑞仪表有限公司，SHHW.420。
国家一级标准物质：GBW09513，大黄素化学纯度标准物质（中国医学院），纯度和不确定度为99.54%±0.18%（k=2，P=0.95）。
甘肃中草药大黄（中国医学科学院药学研究所马林教授）按照《中国药典2010》的要求进行试验。
大黄中草药经过除尘和粉碎后，通过50目筛分即可使用。
准确称取1克样品，用棕色安瓿瓶密封，以1克的最小包装制备500份大黄成分标准品候选品。
本发明涉及一种大黄酒，采用95%以上乙醇5倍为溶剂，经过三次加热回流提取，将提取物减压混合浓缩得到提取物，真空干燥后用40目筛分，在70℃和-0.09MPa的压力下真空干燥，得到95%的大黄，即可使用。
准确称取100mg样品放入棕色安瓿瓶中，并将其制成至少500包100mg大黄95%乙醇提取物的候选样品。
大黄在纯水中浸泡6小时，滤出，煮沸1小时，然后滤入纯水。
将上述三种提取物合并，在水浴中挥发，在75℃真空干燥，得到大黄水提取物，即可使用。
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四川农业大学本科毕业论文（设计）开题报告毕业论文（设计）题目牛耳大黄醇提物的止咳祛痰抗炎作用的研究选题类型应用基础型课题来源自选项目学院动物医学院专业药学指导教师叶刚职称讲师姓名叶江年级2009级学号200918391立题依据：牛耳大黄（Rumex acetosa Linn．），始见于《草木便方》，又名土大黄（《民间常用草药汇编》），四季菜根（《四川中药志》），火风棠（《重庆草药》），羊蹄根（《吉林中草药》），属蓼科（Polygonaceae）植物皱叶酸模Rumex crispus L．的根。
原植物名羊蹄草（《天宝本草》），生于沟边湿地、河岸及水甸子旁，4～5月采，分布广西、台湾、福建、四川、青海、甘肃、陕西、山西、山东、河北、辽宁、吉林、黑龙江、内蒙古等地。
根肥厚，黄色，有酸味。
饮片呈不规则的片状，直径约0.53cm，周边有纵皱纹，切面淡黄色或灰黄色，具有菊花心，质坚硬。
含大黄素（Emodin）、大黄根酸（Chrysophanic acid）、大黄酚苷（Chrysophanein）、1，8-二羟基-3-甲基-9-蒽酮（1，8-Dihydroxy-3-methyl-9-anthrone）。
从根中分离出的大黄酸、大黄素及大黄酚在试管内对甲型链球菌、肺炎球菌、流感杆菌及卡他球菌有不同程度的抑制作用。
根酊剂在沙伯氏培养基上对犬小孢子菌有显著抑菌作用，最低有效浓度为1.56％～3.12％。
性味苦寒，入心、肝、大肠经，具有清热凉血，化痰止咳，通便杀虫之功效。
主要治疗急性肝炎，慢性气管炎，吐血，血崩，血小板减少性紫癜，大便燥结，痢疾，秃疮，疔疖。
内服：15—30g。
外用：捣敷、磨汁涂或煎水洗。
[1-2]现代医学认为咳嗽是人体的一种保护性呼吸反射动作。
当呼吸道粘膜受到异物、炎症、分泌物或过敏性因素等刺激时，即反射性地引起咳嗽。
而中医认为肺为娇脏，其性清宣肃降，上连咽喉，开窍于鼻，外合皮毛，司呼吸，主一身之气，其气以肃降为顺。
肺失宣发或肺失肃降，皆可导致肺气上逆而致咳嗽[3]。
目前，在临床上多以可待因、喷托维林为止咳的主要用药，其多为中枢性镇咳药，大多有胃肠道不良反应，如腹胀、恶心、呕吐、食欲不振、便秘等，且可待因服用过多还能造成成瘾性[4]。
现代医学认为痰饮是人体某些疾病在发生和发展过程中产生的病理产物，因病而产生痰饮或痰饮致其他脏腑发生病理变化，均直接影响各器官组织的生理功能[5]。
而中医认为痰是机体水液代谢障碍所形成的病理产物，随气升降、到处流行，内而脏腑，外而皮肉筋骨，周身上下无处不到，致病广泛。
故有“百病皆有痰作祟”、“怪病多痰”、“痰饮变生诸证”[6]的说法。
张仲景在《金匮要略》则有痰饮专篇论述痰饮病，书中云：“其人素盛今瘦。
水走肠间，沥沥有声，谓之痰饮”，可以看作是痰饮病名的最早记载。
痰、饮、水同出一源．匀为人体水渣代谢之局部障碍病理产物。
因此，中医常有“顽痰怪证”之说。
根据痰所停留的部位及影口向的脏腑不同，可导致各种病证。
现代医学上，常使用盐酸溴己新、氯化铵等祛痰药。
氯化铵是刺激性祛痰药的代表，吞服片剂或剂量过大可引起恶心、呕吐、胃痛等胃刺激症状，长期服用易导致高氯酸血症、代谢性酸血症。
而使用盐酸溴己新可能损害胃黏膜屏障，也可激活肠道黏膜溃疡，还会有恶心、胃部不适，偶见血清转氨酶升高等不良反应[7]。
炎症是机体活组织对各种损伤因子所发生的以防御为主的反应。
目前,临床上多以糖皮质激素抗炎为主要用药[8]，虽然有较好的疗效，但并不能从根本上阻止疾病的发生和进展，并且长期大剂量使用糖皮质激素几乎不可避免地会引起高血压、低血钾、消化性溃疡出血、穿孔、创口愈合不良、诱发或加重感染、精神兴奋、内分泌功能紊乱等，诸多副作用和并发症，严重的副作用和并发症可导致机体死亡[9-10]。
由于目前在止咳祛痰抗炎的治疗中所用到的化学药品，都伴随着诸多的并发症和副作用，而中药有副作用少、来源广泛等特点。
迄今为止，中医中药已在动物病症的医疗上积累了大量的临床用药经验，对于诸多病症方面都有着独到之处和独特优势，故此中医中药的应用受到更多的重视与关注。
牛耳大黄虽然在兽医临床上使用广泛，但是关于其止咳祛痰抗炎作用却未见报道。
本次试验通过研究牛耳大黄醇提物止咳祛痰抗炎作用，以期为牛耳大黄的临床应用和进一步的开发研究提供一定的理论依据。
2研究的主要内容及预期目标2.1研究主要内容通过采用浓氨水引咳法，气管酚红排泌法，二甲苯致耳肿胀法，以咳嗽潜伏期、咳嗽次数、酚红排泌量、耳肿胀度为指标来研究牛耳大黄醇提物的止咳祛痰抗炎作用。
2.2预期目标牛耳大黄醇提物具有一定的止咳祛痰抗炎作用。
3研究方案3.1实验材料3.1.1药材牛耳大黄3.1.2实验动物健康昆明种小白鼠75只，体重18～22g。
实验期间自由饮水，普通饲料喂养。
3.1.3试剂无水乙醇，氨水，苯酚红，碳酸氢钠，氢氧化钠，生理盐水。
3.1.4药品枸橼酸喷托维林片，盐酸溴己新片，醋酸泼尼松。
3.1.5仪器分光光度计，循环水式多用真空泵，旋转蒸发仪，电子天平，500ml烧杯1个，试管若干，同规格棉球数个，注射器1个，容量瓶（1000ml）一个，容量瓶（10ml）8个，移液管（2.5ml）1支，移液枪一只，打孔器（9mm），超声波提取器，眼科剪，灌胃器。
3.1.6牛耳大黄醇提物的制备称取牛耳大黄适量，经80％乙醇常温浸没24h，在30℃超声波提取器中提取30min，共提取3次，过滤，合并滤液。
用旋转蒸发仪回收乙醇，剩余溶液浓缩后烘干，得牛耳大黄醇提物粉末，4℃冰箱保存备用。
根据试验需要，分别用生理盐水将粉末制备成生药浓度为0.5g/ml、1g/ml、2g/ml的悬浮液。
[11-12]3.2小鼠氨水引咳实验取健康昆明种小白鼠25只，体重20±1.5g，随机分为5组，每组5只。
分别为空白对照组，牛耳大黄醇提物高、中、低剂量组，以及阳性对照组。
给药途径均采用灌胃方式，空白对照组灌喂蒸馏水0.2ml/10g；牛耳大黄醇提物高剂量组灌喂药液0.2ml/10g，其中生药浓度为2g/ml；牛耳大黄醇提物中剂量组灌喂药液0.2ml/10g，其中含生药浓度1g/ml；牛耳大黄醇提物低剂量组灌喂药液0.2ml/10g，其中含生药浓度0.5g/ml；阳性对照组灌胃咳必清0.5g/kg。
每日灌胃给药2次，连续3d。
于末次给药40min后，将小鼠置于500ml烧杯中，另在一直径小于烧杯的表面皿内放入一等体积大小的棉球，上面加盖筛网，向棉球中注入0.2ml浓氨水，迅速将烧杯倒置，让氨水刺激小鼠引发咳嗽。
观察小鼠的典型咳嗽动作（腹肌收缩，同时张大嘴，有时可能有咳嗽声）者为有咳嗽，否则为无咳嗽，观察指标为开始咳嗽时间（咳嗽潜伏期）、2分钟内咳嗽次数及咳嗽抑制率公式：咳嗽抑制率=[（空白组咳嗽次数—受试组咳嗽次数）/空白组咳嗽次数]×100%。
（注意：试验中需保证浓氨水浓度，否则会影响小鼠的引咳效果，所以在更换小鼠组别时，需将棉球更换，换用新制氨水，且每次保持相同的氨水水量，在试验中要尽量保持相同的条件。
）[13-15]表1牛耳大黄醇提物对小鼠的止咳作用(-x±s,n=5)组别（剂量）咳嗽潜伏期2min内咳嗽次数空白组蒸馏水牛耳大黄醇提物高剂量组牛耳大黄醇提物高剂量组牛耳大黄醇提物高剂量组咳必清阳性对照组（如果P<0.01，则表示有明显的疗效，如果P<0.05，则表示有疗效，P>0.05，则表示疗效不明显或没有疗效。
）3.3小鼠气管酚红祛痰实验3.3.1酚红标准曲线的绘制精密称取酚红0.100g，用5%NaHCO3溶液溶解，定容至1000ml，摇匀，得100μg/ml酚红标准溶液，备用。
分别精密吸取酚红标准溶液0.25，0.5，0.75，1.00，,1.25，1.50，1.75，2.00ml 至10ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，用紫外分光光度计测定546nm处的吸光度A。
以吸收度为纵坐标，酚红浓度（μg/ml）为横坐标，绘制标准曲线，并作线性回归，得线性方程。
[16]3.3.22酚红浓度的测定3.3.取健康昆明种小鼠25只，体重20±1.5g，随机分为5组，每组5只，分别为空白对照组，牛耳大黄醇提物高、中、低剂量组，给药途径均采用灌胃方式，空白对照组灌喂蒸馏水0.2ml/10g；牛耳大黄醇提物高剂量组灌喂药液0.2ml/10g，其中生药浓度为2g/ml；牛耳大黄醇提物中剂量组灌喂药液0.2ml/10g，其中含生药浓度1g/ml；牛耳大黄醇提物低剂量组灌喂药液0.2ml/10g制备液，其中含生药浓度0.5g/ml；阳性对照组灌胃盐酸溴己新36mg/kg。
每日灌胃给药2次，连续3d。
于末次给药30～40min后，各小鼠腹腔注射5%酚红0.1ml/10g。
给予酚红30min后，脱颈椎处死小鼠，剥去气管周围组织，剪下自甲状软骨至气管分支处的一段气管(气管段酚红法)，放进盛有2ml生理盐水及1mol/LNaOH0.1ml的试管内，以加有2ml生理盐水及1mol/LNaOH0.1ml的溶液为空白对照，用721型分光光度计于546nm处测定吸光度A，代入线性回归方程，计算酚红浓度。
[17-22]表2牛耳大黄醇提物对小鼠的祛痰作用(-x±s,n=5)组别（剂量）吸光度A（546nm）酚红排泌量（μg/ml）空白组蒸馏水牛耳大黄醇提物高剂量组牛耳大黄醇提物中剂量组牛耳大黄醇提物低剂量组盐酸溴己新阳性对照组（如果P<0.01，则表示有明显的疗效，如果P<0.05，则表示有疗效，P>0.05，则表示疗效不明显或没有疗效。
）3.4小鼠耳肿胀法抗炎实验取健康昆明组小白鼠25只，体重20±1.5g，随机分为5组，每组5只。
分别为空白对照组，牛耳大黄醇提物高、中、低剂量组，阳性对照组。
均采用灌胃方式给药，分别给予空白对照组灌喂蒸馏水0.2ml/10g；牛耳大黄醇提物高剂量组灌喂药液0.2ml/10g，其中生药浓度为2g/ml；牛耳大黄醇提物中剂量组灌喂药液0.2ml/10g，其中含生药浓度1g/ml；牛耳大黄醇提物低剂量组灌喂药液0.2ml/10g，其中含生药浓度0.5g/ml；以及阳性对照组醋酸泼尼松15.6mg/kg。
每日灌胃给药2次，连续3d（即实验前3天）。
于末次给药30min后用移液枪在小鼠的右耳内外两侧均匀涂布80μl二甲苯，左耳不做任何处理，1h后脱颈椎处死小鼠，剪下双耳，用直径为9mm打孔器，在小鼠左右耳的同一部位打孔，打下的圆耳片用电子天平称重。
[23-25]根据公式：肿胀度（mg）=右耳耳片重（mg）－左耳耳片重（mg）抑制率（％）=（空白组平均肿胀度－给药组平均肿胀度）/空白组平均肿胀度×100％表3牛耳大黄醇提物对小鼠耳肿胀的抑制作用(-x±s,n=5)组别（剂量）抑制率（%）空白蒸馏水牛耳大黄醇提物高剂量组牛耳大黄醇提物中剂量组牛耳大黄醇提物低剂量组阳性对照醋酸泼尼松组（如果P<0.01，则表示有明显的疗效，如果P<0.05，则表示有疗效，P>0.05，则表示疗效不明显或没有疗效。