邻二氮菲法测定微量Fe指导书(精)
邻二氮菲分光光度法测定微量铁_6
实验二邻二氮菲分光光度法测定微量铁试验目的1.掌握紫外可见分光光度计的基本操作。
2.掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的原理和方法。
3.掌握吸收曲线绘制及最大吸收波长的选择。
4.掌握标准曲线的绘制及应用。
实验原理邻二氮菲（1,10-邻二氮杂菲）是一种有机配位剂，可与Fe离子形成红色配位离子：在pH=3~9范围内，该反应迅速完成，生成的红色配位离子在510nm 波长附近有一吸收峰，摩尔吸收系数为1.1*104，反应十分灵敏，Fe2+离子浓度与吸光度符合光吸收定律，适合于微量铁的测定。
实验中，采用pH=4.5~5的缓冲溶液保持标准系列溶液与样品溶液的酸度，采用盐酸羟胺还原标准液及样品溶液中的Fe3+离子并防止测定过程中二价铁离子被空气氧化。
实验仪器与试剂1.V-1100D型可见分光光度计2.标准铁储备溶液（1.00×10-3mol/L）3.邻二氮菲溶液（0.15%，新鲜配制）4.盐酸羟胺溶液（10%，新鲜配制）5.醋酸盐缓冲液6.50ml容量瓶7个7.5ml移液管4只8.1cm玻璃比色皿2个9.铁样品溶液实验步骤1.标准系列溶液及样品溶液配制：按照下表配制标准系列溶液及样品溶液。
2.吸收曲线绘制：用1cm的比色皿，以1号溶液作为参比溶液，测定4号溶液在不同波长下的吸光度，以吸光度为纵坐标，波长为横坐标制图，绘制吸收曲线，并从吸收曲线上找出最大吸收波长。
3.标准曲线制作：在选定的最大吸收波长处，用1cm比色皿，以1号溶液作为参比溶液，分别测定2~7号溶液的吸光度，以吸光度值为纵坐标，系列标准溶液的浓度为横坐标绘制标准曲线。
实验数据处理与结果1.吸收曲线：2.标准曲线：样品铁溶液中铁含量计算：Cx=C 读取值×50.200.50=9.9×10-4mol/L摩尔系数计算：ε=1212C C A A --=1.219×104 实验思考与讨论1.标准曲线的线性不好的原因：所选标准溶液的浓度可能只有一部分在线性范围内，该实验5、6号之间的线性不是很好，很大的原因可能是它们之间的某一浓度之后便超出了线性的范围。
实验___邻二氮菲分光光度法测定微量铁
邻二氮菲分光光度法测定微量铁实验目的：1.学习如何选择分光光度法分析的条件。
2.学习绘制标准曲线，掌握分光光度法测铁的操作方法。
3．掌握721型或722型分光光度计的正确使用方法。
实验原理：邻二氮菲（又名邻菲罗啉）是测定铁的一种良好的显色剂在pH = 1.5～9.5的溶液中,Fe2+与邻二氮菲生成稳定的橙红色配合物，配合物的配位比为3:1。
Fe3+与邻二氮菲作用形成蓝色配合物，稳定性较差，因此在实际应用中常加入还原剂盐酸羟胺或对苯二酚使Fe3+还原为Fe2+。
测定时，溶液酸度控制在pH 3～8较为适宜，酸度高，则反应进行缓慢；酸度太低，则Fe2+离子易水解，影响显色。
Bi3+、Cd2+、Hg2+、Zn2+及Ag+等离子与邻二氮菲作用生成沉淀，干扰测定。
CN-存在将与Fe2+生成配合物，干扰也很严重。
以上离子应事先设法除去。
实验证实，相当于铁量40倍的Sn2+、Al3+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、SiO32-，20倍的Cr3+、Mn2+、VO3-、PO43-，5倍的Co2+、Ni2+、Cu2+等离子不干扰测定。
本法测铁灵敏度高，选择性好，稳定性高。
实验仪器及试剂：721型分光光度计、容量瓶(50mL)7只、吸量管(10mL)2只；铁标准溶液(100μg/mL)、铁标准溶液(10μg/mL)、10%盐酸羟胺溶液（临用时配制）、0.1%邻二氮菲溶液（临用时配制）、NaAc溶液0.1mol/L。
实验步骤：1.显色溶液的配制：取50mL容量瓶7只,分别准确加入10.00μg/mL的铁标准溶液0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL及试样溶液5.00mL,再于各容量瓶中分别加入10%盐酸羟胺1mL、0.1mol/L NaAc溶液5mL及0.1%邻二氮菲溶液3mL,每加一种试剂后均摇匀再加另一种试剂,最后用水稀释到刻度,充分摇匀,放置5min待用。
2.测绘吸收曲线及选择测量波长：选用加有6.00mL铁标准溶液的显色溶液,以不含铁标准溶液的试剂溶液为参比,用2cm比色皿,在721型分光光度计上从波长450～550nm间,每隔10nm测定一次吸光度A值在最大吸收波长左右,再每隔5nm各测一次。
邻二氮菲分光光度法测定微量铁
一． 实验名称：邻二氮菲分光光度法测定微量铁 二． 实验目的1. 通过分光光度法测定铁的条件实验，学会选择和确定分光光度分析的适宜条件。
2. 了解光栅分光光度计的构造和使用方法。
3. 掌握邻二氮菲分光光度法测定铁的原理和方法。
三． 实验原理邻二氮菲使铁的一种优良的显色剂，在pH2～9的溶液中，Fe 2+能与其生成1：3的橙红色配合物，3lg 21.3β= 最大吸收波长510nm 处的摩尔吸光系数为4111.110L mol cm --⨯•• 。
在一定浓度范围内，Fe 2+的浓度范围内，Fe 2+的浓度与配合物吸光系数的关系遵循朗伯-比尔定律。
有关反应如下：NNFe2+33Fe2++该显色反应选择性很高，形成的配合物较稳定，在还原剂的存在下，颜色可保持数月不变。
由于Fe 3+也可与邻二氮菲生成1：3的淡蓝色配合物，3lg 14.1β=，所以，在显色反应前，需将Fe 3+全部还原成Fe 2+。
四． 实验用品1．仪器 721或722型分光光度计。
2．试剂(1)0.1 mg ·L-1铁标准液 准确称取0.702 0 g NH 4Fe(S04)2·6H 20置于烧杯中，加少量水和20 mL 1:1H 2S04溶液，溶解后，定量转移到1L 容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。
(2)100 g ·L-1盐酸羟胺水溶液 用时现配。
(3)1.5 g ·L-1邻二氮菲水溶液 避光保存，溶液颜色变暗时即不能使用。
(4)1.0 mol ·L-1 乙酸钠溶液。
(5)1 mol ·L-1氢氧化钠溶液。
五． 实验步骤1.准备工作。
打开分光光度计开关，预热。
2.确定最大吸收波长。
取50 mL容量瓶（1#），用吸量管加入1 mL 100 g·L-1盐酸羟胺溶液，再各加入2 mL 1.5 g·L-1邻二氮菲溶液、5 mL 1.0 mol·L-1乙酸钠溶液，以水稀释至刻度，摇匀（参比溶液）。
实验一邻二氮菲分光光度法测定微量铁的条件
实验一邻二氮菲分光光度法测定微量铁的条件、实验目的1、掌握分光光度计的原理、构造和使用方法。
2、学习分光光度计分析中如何确定最佳实验条件。
、实验原理在可见光区分光光度法测量中，通常是将被测物质与显色剂反应，使之生成有色物质，然后测其吸光度，进而求得被测物质的含量。
显色反应的程度受显色剂用量、显色时间，显色液酸度等条件的影响，通过实验，确定合适的显色条件。
三、仪器及试剂分光光度计；1cm 吸收池；10mL移液管；25mL 容量瓶,100ml 容量瓶1．铁标准溶液100μg·mL -1（即0.01 mg·mL-1）铁标准溶液：准确称取0.3511g（NH 4）2 Fe（SO4）2·6H 2O 于烧杯中，用2 mol ·L-l盐酸15 mL 溶解，移入500 mL 容量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀。
用前，准确稀释10 倍成为含铁10 ug·mL -1标准溶液。
2. 1g.L -1邻二氮菲：1.0 g 邻二氮菲于小烧杯中，加入5-10ml 95%乙醇溶液溶解，再用水稀释到1000 mL 。
3. 10％盐酸羟胺水溶液：10％水溶液（现用现配，避光保存）4. 醋酸钠溶液1mol/L5. 0.8 mol/L 氢氧化钠溶液四、实验步骤1、吸收曲线的制作和测量波长的选择用移液管吸取0.0ml、2.0mL 10 ug ·mL -1标准溶液，分别注入二个25 mL 容量瓶中，加入1.0mL10% 的盐酸羟胺溶液，摇匀后放置2 min ；再加2 mL 邻二氮菲溶液，2.5mL 醋酸钠溶液溶液，用水稀释至刻度，摇匀。
放置5min 后，用1cm 比色皿，以试剂空白为参比，在440~560nm 之间，每隔10nm 测一次吸光度，其中在500-520 nm 之间，每隔5nm 测一次吸光度。
然后以波长为横坐标，吸光度A 为纵坐标，绘制吸收曲线，找出最大吸收波长。
2、显色剂用量影响在7 只25mL容量瓶中，各加2.0 mL 10 ug·mL -1铁标准溶液和1.0 mL 盐酸羟胺溶液，摇匀后放置2 min。
邻二氮菲分光光度法测定微量铁的条件试验
⑹10－3mol·L－1邻二氮菲：称取0.1983g邻二氮菲，加少许酒精溶解，定容至1L。
⑺1mol·L－1NaAc。
⑻1mol·L－1NaOH。
四、实验步骤
1．绘制吸收曲线
⑴吸取0.5mL 100mg10－3mol·L－1铁标准溶液于25mL容量瓶中，加0.5mL10%盐酸羟胺，摇匀，放置2min。加入1.0mL0.15%邻二氮菲溶液和2.5mL1mol·L－1NaAc，用水稀释至刻度，混匀。
⑵10－3mol·L－1铁标准溶液（Ⅱ）：用吸量管准确吸取55.85mL铁标准溶液（Ⅰ）至1L容量瓶中，
加入70mL1:1HCl，用去离子水稀释至刻度。
⑶100mg·L－1铁标准溶液（Ⅲ）：用吸量管准确吸取10.00mL铁标准溶液（Ⅰ）至100.0mL容量瓶中，
用去离子水稀释至刻度。
⑷10%盐酸羟胺：10g盐酸羟胺溶于100mL水中。
在建立一个新的吸收光谱法定量测定时，为了获得较高的灵敏度和准确度，必须进行一系列条件试验，包括显色化合物的吸收光谱曲线（简称吸收光谱）的绘制、选择合适的测定波长、显色剂用量和溶液pH值的选择及显色化合物影响等。此外，还要研究显色化合物符合朗伯－比尔定律的浓度范围、干扰离子的影响及其排除的方法等。
三、仪器与试剂
1．仪器
分光光度计(附1cm比色皿4个)，25mL容量瓶，镜头纸，广泛pH试纸，洗耳球，烧杯，洗瓶。
2．试剂
⑴1000mg·L－1铁标准溶液（Ⅰ）：准确称取7.021g(NH4)2Fe(SO4)2·6H2O，放入烧杯中，
加入少量水和180mL（1:1）HCl，溶解后移入1L容量瓶中，用去离子水稀释至刻度，混匀。
邻二氮菲分光光度法测定微量铁(精)
测定时控制溶液的酸度为pH≈5较为适宜。用邻二氮菲可测定试样中铁的总 量。
实验预习
❖预习邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理。 ❖了解TU-1901紫外-可见分光光度计的主要构造和使用方法。
仪器和试剂
仪器
TU-1901紫外-可见分光光度计，1 cm吸收池，10 mL 吸量管，50 mL 比色管 （或容量瓶）
注意事项和问题
1. 邻二氮菲分光光度法测定微量铁时为何要加入盐酸羟胺溶液？ 2. 吸收曲线与标准曲线有何区别？在实际应用中有何意义？ 3. 透射比与吸光度两者关系如何？测定条件指哪些？ 4. 邻二氮菲与铁的显色反应，其主要条件有哪些？ 5. 加各种试剂的顺序能否颠倒？
谢谢观赏
勤能补拙，学有成就！
2021/11/11
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实验步骤
1. 吸收曲线的绘制和测量波长的选择： 2. 用吸量管吸取2.00 mL1.0×10-3mol.L-1标准溶液，注入50mL比色管中， 加入1.00mL 10%盐酸羟胺溶液，摇匀，加入2.00 mL0.15%邻二氮菲溶液， 5.0 mL NaAc溶液，以水稀释至刻度。在光度计上用1 cm比色皿，采用试 剂溶液为参比溶液，在440-560 nm间，每隔10 nm测量一次吸光度，以波 长为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制吸收曲线，选择测量的适宜波长。
2. 工业盐酸中铁含量的测定：
(1)标准曲线的制作: 在5支50 mL比色管中，分别加入0.20、0.40、0.60、 0.80、1.00 mL 100 g/mL铁标准溶液，再加入1.00 mL10%盐酸羟胺溶液， 2.00 mL0.15%邻二氮菲溶液和5.0 mL NaAc溶液，以水稀释至刻度，摇匀。
邻二氮菲分光光度法测定微量铁教学提纲
邻二氮菲分光光度法测定微量铁邻二氮菲分光光度法测定微量铁一、实验原理邻二氮菲（1, 10—二氮杂菲），也称邻菲罗啉是测定微量铁的一个很好的显色剂。
在pH2—9范围内（一般控制在5—6间）Fe2+与试剂生成稳定的橙红色配合物Fe（Phen）32+|gK=21.3，在510nm下，其摩尔吸光系数为1.1104L/moL.cm, ）Fe3+与邻二氮菲作用生成兰色配合物，稳定性较差，因此在实际应用中常加入还原剂盐酸羟胺使Fe2+还原为Fe3+:2 Fe3++2NH2OHHCI=2 Fe2++N2+4H++2H2O+2C「二、试剂与仪器仪器：1. 721型分光光度计2. 50mL 容量瓶8 个,100mL1 个,500mL1 个3. 移液管：2 mL1支，10 mL1支4 .刻度吸管：10mL、5mL、1mL各1支试剂：1. 铁标准储备溶液100ug/mL：1000 mL （准确称取0.4317g铁盐NH4Fe（SO4）212H2O置于烧杯中，加入3moL/LHCI20mL和30ml水，然后加水稀释至刻度，摇匀。
）2. 铁标准使用液10ug/mL:用移液管移取上述铁标准储备液10.00 mL，置于100 mL容量瓶中，加入3moL/LHCI2.0mL和少量水，然后加水稀释至刻度，摇匀。
3. HCI3moL/L : 100mL4. 盐酸羟胺100g/L （新鲜配制）：100mL5 •邻二氮菲溶液1.5g/L （新鲜配制）：200mL6. HAc—NaAc缓冲溶液（pH=5）500 mL:称取136gNaAc,加水使之溶解，再加入120 mL冰醋酸，加水稀释至500 mL7 .水样配制（0.4ug/mL）:取2mL100ug/mL铁标准储备溶液加水稀释至500mL三、实验步骤1. 配置10.00ug/mL的铁标准溶液。
1. 绘制吸收曲线：用吸量管吸取铁标准溶液（10ug/mL）0.0、2.00ml、4.00mL、6.00mL、8.00mL、10.00ml 分别放入50 mL 容量瓶中，加入1 mL10% 盐酸羟胺溶液、2.0 mL1.5g/L邻二氮菲溶液和5 mL HAc —NaAc缓冲溶液，加水稀释至刻度，充分摇匀，放置5分钟，用3cm比色皿，以试剂溶液为参比液，于721型分光光度计中，在440—560nm波长范围内分别测定其吸光度 A 值。
邻二氮菲分光光度法测定微量铁
邻二氮菲分光光度法测定微量铁【任务分析】邻二氮菲分光光度法测定微量铁是属于可见分光光度法测定无机离子的范畴。
本任务主通过本地自来水公司提供的含铁量数据选择紫外可见分光光度方法【任务实施】1、该实验包括两个部分的内容：一是通过实验进行分析条件的选择。
二是在选择好的分析条件下采用工作曲线法测定微量铁。
2、子任务一：分析条件的选择（1）准备试剂：①配制1000μg/mL的铁标准溶液做储备液，然后稀释得到10μg/mL的溶液作为使用液。
②配制盐酸羟胺溶液100g/L现配现用。
③邻二氮菲溶液1.5g/L，先用少量乙醇溶解，再用蒸馏水稀释至所需浓度（避光保存）。
④醋酸钠溶液1.0mol/L。
⑤氢氧化钠溶液1.0mol/L。
(2)按仪器使用说明书检查仪器。
开机预热20min，并调试至工作状态。
检查仪器波长的正确性和吸收池的配套性。
(3)绘制吸收曲线选择测量波长取两个50mL干净容量瓶；移取10μg/mL铁标准溶液5.00mL于其中一个50mL容量瓶中，然后在两容量瓶中各加入1mL100g/L盐酸羟胺溶液，摇匀。
放置2min后，各加入2mL 1.5g/L邻二氮菲溶液，5mL1.0mol/L醋酸钠溶液，用蒸馏水稀至刻线摇匀。
用2cm吸收池，以试剂空白为参比，在440～540nm间，每隔10nm测量一次吸光度。
在峰值附近每间隔5nm 测量一次。
以波长为横坐标，吸光度为纵坐标确定最大吸收波长A max。
注意！每加入一种试剂都必须摇匀。
改变入射光波长时，必须重新调节参比溶液吸光度为零。
现在一些型号的分光光度计连接电脑使用的时候可以自动扫描产生吸收曲线，速度较快，有条件可以尝试。
(4)有色配合物稳定性试验取两个洁净的容量瓶，用步骤(3)方法配制铁-邻二氮菲有色溶液和试剂空白溶液，放置约2min，立即用2cm吸收池，以试剂空白溶液为参比溶液，在选定的波长下测定吸光度。
以后隔10min、20min、30min、60min、120min测定一次吸光度并记录吸光度和时间。
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用1cm比色皿，以不加铁标准溶液的试液即空白溶液为参比液，选择510nm为测定波长，依次测吸光值。以铁的质量浓度为横坐标，A值为纵坐标，绘制标准曲线。
4.样品的测定
分别加入5.00mL（或10.00mL，铁含量以在标准曲线范围内为宜）未知试样溶液，按实验步骤2的方法显色后，在510nm波长处，用1cm比色皿，以不加铁标准溶液的试液为参比液，平行测A值。求其平均值，在标准曲线上查出铁的质量，计算水样中铁的质量浓度。
标准溶液的配制
用吸量管分别移取铁标准溶液（20ug/mL）0.0、1.0、2.0、4.0、6.0和8.0mL依次放入6只50mL具塞比色管中，分别加入10%盐酸羟胺溶液1 mL，稍摇动，再加入0.1%邻二氮菲溶液2.0 mL及5 mL HAc-NaAc缓冲溶液，加水稀释至刻度，充分摇匀，放置10分钟
注意事项：
显色过程中，每加入一种试ຫໍສະໝຸດ 均要摇匀测定溶液之前，仪器调零
标准溶液和样品的测量应保持同一实验条件，最好同时显色，同时测定
溶液测量之前应先摇匀
《现代仪器分析技术》单项技能实训指导书
实训项目名称
邻二氮菲法测定微量Fe
学时
2学时
实训目的
1.掌握标准缓冲溶液的配制方法
2.掌握标准曲线法
3.学习分光光度法测铁的操作方法
20ug/mL铁标准使用液的配制
用移液管移取铁标准储备液5.00 mL，（5ml移液管）置于100 mL容量瓶中，加6mol/LHCl 2.0mL（2ml移液管）和少量水，然后加水稀释至刻度，摇匀。