SEC工作站指南

SEC操作指南一、SEC概述体积排阻色谱（SEC）是被用来测定大分子和聚合物类分子量分布的一门色谱科技。

运行SEC（也可以叫做GPC）可以通过进入一个样品到由已知孔径的刚性聚合物凝胶构成的柱子里，小分子渗入到孔里并且比大分子保留时间长，在SEC里不包含柱吸附，是典型的分离色谱。

因为分子的大小与它们的分子量有关，洗脱时间因此能被用来估计分子的分子量。

大分子首先洗脱出来，小分子最后被洗脱。

在使用SEC分析天然组分时（通常是高分量聚合物），能碰到一个清楚的色谱图是比较少见的，在分离色谱里能出现基线分离的峰。

因此在计算时，通常被设置成产生分子量分布（MWD）或平均分子量，而不去估计分子量的值。

因为对分子量的分布感兴趣，所以结果通常不仅只是包含平均分子量的值，同时也列出了这个样品的面积片断值，连同与它相对应的平均分子量值。

这种类型的报告叫做“Slice Report”。

二、SEC校正EZChrom Elite SEC单元提供了三种SEC校正方法：标准窄分布校正（Narrow Standard s Calibration），宽范围分布校正（Broad Range Calibration，有两种类型）和通用校正（Universal Calibration）。

注意：为校正和分子量计算，时间单位被转换成秒。

三、标准窄分布校正（Narrow Standard s Calibration）通过运行一个由已知分子量组分组成的标准品来建立校正曲线。

这种校正的标准曲线是通过与保留时间相对应的分子量的对数来绘制的（Log M）。

四、宽范围分布校正（Broad Range Calibration）将要使用的Hamielec方法：他为宽范围分布校正提供了两种可用的计算方法。

Broad Range 1是一个线性校正方法并且需要一支SEC柱来提供一条线性的校正曲线。

它仅仅使用标准聚合物的平均MW值，但是却接近GPC校正曲线的线性（标准聚合物的Mn和Mw值必须是已知的并且能通过光散射和渗透压技术检测到）。

这个方法需要一个与未知样品有相同结构的宽分子量分布（Broad-MWD）的标准品。

它也应该尽可能地在任意组合的Mn和Mw里去使用两个不同的标准分子量与两个已知的MW值。

Broad Range 2是使用一个宽范围的标准品而没有线性校正的方法。

五、通用校正（Universal Calibration）通用校正允许用一个窄范围的聚苯乙烯标准校正曲线来校正一个宽范围的聚合物。

利用流体体积之间的关系（物质的分子量M与聚合物固有的粘度[ŋ]和它的洗脱体积），窄分布校正曲线能被调整倒最精密地应用于被分析的样品。

聚合物固有的粘度[ŋ]是通过直接测量聚合物溶液粘度的试验方法测定的。

通过的聚合物分子量与Mark-Houwink等式有关。

[η]=K m aK和a是一个随聚合物种类、溶剂和温度改变的常数。

表格里包含公共的K和a常数，使用于一般的聚合物种类。

因此，使用公共的K和a值，或者是已测定的聚合物的粘度，一样都能检测出样品的分子量信息。

六、SEC的应用SEC通常被用在高分子聚合物的质量控制上。

分子量分布表示的是聚合物的物理性质。

像这种性质包含有强度、柔韧性和粘性，等等其它。

因为宽范围SEC峰的图形是可以改变的，在大多数情况下，只是检测平均分子量是不能充分说明聚合物的特征的，如两种聚合物可能有相同的平均分子量但分子量分布却非常不相同。

因此它对计算不同范围的分子量非常重要，像检测一个有效的尖峰一样（在这里可以用重叠比较辅助）来得到一个正确的聚合物分子量信息。

各种不同的分子量数值被用来表示聚合物的不同特征，如下所示：M n 数均分子量，被用来测定样品的粘性和柔韧性，是一种低分子量物质均衡性的函数。

M w 重均分子量，表示为聚合物的强度，它给出了在样品里高分子量物质的比例。

M z Z均分子量，被用来检测易脆性，并且指示样品里非常高的分子量物质的均衡性。

M v粘均分子量，被用来说明样品的平均粘度与分子量之间的关系。

M w/M n聚合度，是一个用来表示样品是如何单一的。

一个小的数值表示的是最大的单一性，或者是窄分子量分布。

较高的数值表示的是大的合成聚合物。

七、使用EZChrom Elite SEC软件EZChrom Elite SEC软件是一个可选的附件包，可以在EZChrom Elite色谱数据系统里执行SEC计算。

一旦SEC可用，它能够让用户去为已与系统连接的任意一个（或多个）仪器配置一个SEC仪器。

当在另外一个仪器上执行SEC计算时，也可以在其它的仪器上执行正常的色谱分离计算。

（注意SEC和色谱分离是明显不同的技术，因此它们不能在一个仪器里同时执行）通常，执行一个SEC计算包含以下步骤：1、运行SEC标准校正并且利用它去为SEC样品设置校正信息（方法/SEC设置，Method/SEC Setup）;2、为您的分析创建一个包含您想要的图谱和SEC报告的自定义报告；3、创建一个批处理（如果需要的话）并且运行您的SEC样品。

八、运行SEC标准校正为了所有数据是正确地取样，在运行您的SEC标准校正之前，您首先必须设置采集参数并保存到您的磁盘。

您可以使用方法下的仪器设置进行操作（Method/Instrument Setup）或点击仪器设置按钮（Instrument Setup）。

九、仪器设置在方法的采集设置部分将告诉您如何从您的色谱仪上采集数据。

注意：默认1H z的数据采集频率已充分满足SEC的运行。

您可以在方法的SEC设置部分为独立的切片报告调整切片宽度（Slice Width）。

Detector 1 (x)为配置仪器上的每一个检测器通道，需要定义以下采集信息：采集通道ON（Acquisition Channel ON）选择这个单选框可以使这个通道的数据采集可用，如果这个复选框没有选择，那么这个通将不能采集数据。

采样（Sampling）这个是通过系统采集数据的频率。

您可以选择您想要的取样频率，当您选择一个取样频率时，一个说明在这个取样频率下可满足的最小峰宽的提示将会显示。

建议您为您的色谱图采用图形事件程序来测定最佳的取样频率。

频率（Frequency）这个选项的单位为H z（每秒采样数），它可以满足大多数的色谱应用。

点击下拉键头，从列表里选择可用的频率来配置您的系统。

周期（Period）当您选择这种采样方式时，您必须选择每个数据点之间的间隔秒（或毫秒）数。

确定一个数值，然后选择周期是在秒或毫秒（mSec）。

运行时间（Run time）运行时间用来确定将要取样的数据时间的长度。

采集延时（Acquisition Delay）采集延时是为这个通道在开始运行（触发器）和数据正式采集之间设置一个时间间隔。

触发（Trigger）为这个仪器从触发表单里选择一个触发类型。

触发类型（Trigger Type）确定数据采集如何开始。

没有（None）：在点击Start之后数据采集立即开始，在批处理运行期间没有暂停；手动（Manual）：操作者在按Enter键后开始采集数据，批处理运行期间会暂停等待确认；外部（External）：如果是从一个外部的触发器开始数据采集，选择这个触发类型。

这个触发器的类型在仪器配置时已经设定好。

当您完成了采集参数设置后，点击对话框右上角的X按钮关闭对话框，然后选择File/Method/Save命令保存设置。

十、单次运行采集（Single Run Acquisition）在EZChrom Elite Client/Server里有两种方法可以采集数据。

第一种是使用批处理（为重复多样品运行），而另外一种就是使用一个单次运行。

为了使用单次运行数据采集，您必须定义被用来分析的方法名和用来保存数据的文件名。

注意：确定用来采集数据的方法，在仪器设置时采集通道已打开，采样频率和运行时间以设置好。

为了使用单次运行，您可以点击Single Run按钮或者从主菜单上点击Control/Single Run命令，以下对话框将会显示。

运行信息（Run Information）在这一段允许您为运行指定文件。

样品ID（Sample ID）为运行输入一个样品ID，这里可以包含字符和数字，并且它将会被保存在数据文件里。

方法（Method）输入一个用来采集数据和将来处理数据的方法名。

如果方法不在默认的方法目录里必须包含输入路径。

您也可以点击输入框右边的文件按钮从您磁盘的可用方法列表里选择一个方法。

数据路径（Data Path）输入一个路径名指定这次运行采集的数据将被保存在哪。

也可以点击文件按钮从您的磁盘列表里选择一个路径。

数据文件（Data File）输入一个文件名用来将数据保存到磁盘上。

不能使用一个已存在的文件名，除非这个文件存在的目录路径里包含有“Public”。

例如，如果您保存数据文件的路径命名为“C:\Public\Data”，那么保存在个目录里的数据文件可以被覆盖。

打印方法报告（Print Method Report）当这个但选框被选中，在结束运行后，这个方法报告（或它的报告）将会被打印。

总量数值（Amount Values）在这一部分，您可以输入一些值对怎样计算浓度起作用。

如果您是在准备校正方法以前做单次数据采集，那么这些值可以保持默认的值。

样品量（Sample Amount）这个样品量的数值在计算浓度期间被当作一个除数。

它是被用来做不同样品之间的称量与当已经计算的样品总量的百分数值并非这次进样所检测到的值之间的补偿。

内标量（Internal Standard Amount）为校正运行，内标量的值取自于方法的峰组份表里。

为一个未知运行，在您的未知样品里输入内标量。

倍乘因子（Multiplication Factor）为这次运行输入一个倍乘因子，所有被测量的峰将与这个因子相乘。

校正（Calibrate）这个选项仅仅用在分离色谱样品的校正上，不能用在SEC运行。

当您完成了对单次运行采集对话框的设置后，点击Start按钮开始数据采集。

当前的数据将显示在谱图窗口上，随着采集并被保存在磁盘上。

在运行结束后，谱图将根据方法参数被分析，并且会产生一个报告（如果您已经设定好）。

如果在结束采集运行后，谱图没有被分析，如果您想查看结果，可以点击Analyze 按钮对谱图进行分析。

样品描述（Sample Description）当您点击Description按钮，您可以为这个样品输入一些描述文本，它会与数据文件一起保存。

从打开文件对话框里可以查看这个描述，或者当这个文件被打开并成为当前数据时，可以通过使用Data/Properties 命令查看。

提交（Submit）当正在使用一个批处理或单运行采集当前数据时，点击Run Single按钮，这个按钮将会显示。