免疫组化常用标记物[参照材料]
免疫组化标记物
免疫组化常用抗体标记物（一）上皮源性标记物1、一般性标记物（1）CK（角蛋白）CK亚型：CK5/6、CK7、CK8、CK10/13、CK18、CK19、CK20（2）EMA（上皮膜抗原）2、特异性和（或）相对特异性上皮标记物（1）CEA（癌胚抗原，标记胃肠道癌、肺腺癌等）（2）CA242（肿瘤相关粘液抗原、标记胰腺癌、结、直肠癌等）（3）TG（甲状腺球蛋白，标记甲状腺癌）（4）PSA（前列腺特异性抗原，主要用于前列腺癌和转移性前列腺癌的诊断）（5）PSAP（前列腺特异性酸性磷酸酶，主要用于前列腺癌和转移性前列腺癌的诊断）（6）34βE12（高分子量细胞角蛋白，标记前列腺基底细胞）（7）AFP（甲胎蛋白，标记肝癌、内胚窦癌等）（8）Hepatocyte（标记肝细胞癌）（9）β-HCG（β绒毛膜促性腺激素，标记胎盘滋养叶细胞肿瘤、生殖细胞肿瘤）（10）CA125（卵巢癌抗原）（二）间叶源性标记物肌源性标记物1、Desmin（Des，结蛋白）2、Actin（肌动蛋白）3、SMA（平滑肌肌动蛋白）4、MSA（肌特异性肌动蛋白）5、Myosin（肌球蛋白）6、Myoglobin（MG，肌红蛋白）7、Myogen（肌浆蛋白）8、MyoD1（肌调节蛋白）（三）血管源性标记物1、FVⅧRAg（第8因子相关抗原）2、CD314、UEA-15、BNH9（四）组织细胞源性标记物1、CD68/KP-12、Lysozyme（溶菌酶）3、α-AT（α1-抗胰蛋白酶）4、α1-ACT（α1-抗胰糜蛋白酶）5、Mac387（五）淋巴造血组织源性标记物1、全淋巴细胞（1）CD45/LCA（白细胞共同抗原）（2）TdT（末端脱氧核苷酸转移酶）（3）CD30/ki-12、全B细胞（1）Igκ（2）Igλ（3）CD20/L26（4）CD79α（5）BLA36（B淋巴细胞抗原）（6）Pax-5（B细胞系特异性激活蛋白）3、B细胞亚型（1）CD10（2）CD21（标记滤泡性树突状细胞）（3）CD23（4）CD35（标记滤泡性树突状细胞）（5）CD384、全T细胞（1）CD3（2）CD5（4）CD45RO/UCHL-15、T细胞亚型（1）CD1α（2）CD4（3）CD86、NK细胞（1）CD56（2）CD57/Leu-7（3）CD16/Leu-117、粒细胞和单核细胞（1）CD11c/LeuM5（2）CD15/LeuM5（3）Lysozyme（溶菌酶）（4）α-AT（α1-抗胰蛋白酶）（5）α1-ACT（α1-抗胰糜蛋白酶）（6）CD68（7）S-100蛋白（8）Mac3878、其他（1）EMA（上皮细胞膜抗原）（2）CD99（尤因肉瘤标记物）（3）ALK-1（间变性淋巴瘤激酶）（4）HLA-DR（5）Bcl-2（6）Bcl-6（7）Bcl-10（8）Ki-67（9）CyclinD1（周期素D1）（10）CD25（六）神经源性标记物1、S-1002、NSE（神经原特异性烯醇化酶）3、Leu-74、Neurofilament（NF，神经微细蛋白）5、GFAP（胶质纤维酸性蛋白）（七）神经内分泌源性标记物1、激素标记物（1）CA（儿茶酚胺）（2）5-HT（5-羟色胺）（3）垂体激素GH（促生长素）PRL（催乳素）ACTH（促肾上腺皮质激素）TSH（促甲状腺素）FSH（促滤泡素）LH（促黄体素）（4）甲状腺TG（甲状腺球蛋白）CT（降钙素）（5）甲状旁腺PTH（甲状旁腺素）（6）胰岛Insulin（胰岛素）Glucagon（胰高糖素）VIP（舒血管肠肽）PP（胰多肽）Someitostatin（生长抑素）Gastrin（胃泌素）2、非激素标记物（1）NSE（神经原特异性烯醇化酶）（2）CgA（嗜铬素A）（3）SY（突触素）3、激素受体（1）ER（雌激素受体）（2）AR（雄激素受体）（3）PR（孕激素受体）（八）细胞增殖标记物1、PCNA（细胞增殖核抗原）2、Ki-67（九）黑色素标记物1、S-100蛋白2、HMB453、Melanoma（十）癌基因和（或）抑癌基因1、Bcl-22、C-erbB-23、P534、P16（多肿瘤抑制基因）5、nm23（十一）病原体标记物1、Myocobacterium Bovis（分枝杆菌，抗卡介苗）2、HBsAg（乙型肝炎病毒表面抗原）3、HBcAg（乙型肝炎病毒核心抗原）4、HPV（人乳头状瘤病毒）5、HTLV-1（人类T细胞白血病病毒）免疫组化套餐泌尿与男性生殖系统肿瘤1.前列腺癌：CK、P63、34ßE12、PSA、P504S(9AMAC)、AR2.前列腺增生/腺瘤：CK、P63、34BE12、P504S3.肾癌：CK、EMA、Inhibin、Melan-A、CK7、Vimentin、PAX2、CD104.肾母细胞瘤：WT-1、CK、P53、Ki-675.膀胱尿路上皮癌：CK7、CK20、P53、Ki-67、P636.精原细胞瘤：CK、PLAP、CD117、LCA、OCT3/4淋巴造血系统肿瘤7.胸腺肿瘤：CK、CD3、CD5、CD20、TdT、EBV*8.霍奇金淋巴瘤：CD30、CD15、ALK-1、EMA、CD3、CD20、EBV*、PAX-59.非霍奇金淋巴瘤：CD3、CD20、CD45RO、CD79α、TdT、CD4310.间变大细胞淋巴瘤：CD30、CD15、ALK-1、EMA、CD3、CD20、EBV*11.弥漫性大B细胞淋巴瘤：CD3、CD20、CD45RO、CD79α、CD43、CD30、Ki-6712.小B细胞淋巴瘤：CD3、CD5、CD10、CD20、CD23、CD79α、CyclinD1、TdT13.T细胞淋巴瘤：CD3、CD20、CD43、CD45RO、CD79α、TdT、TiA-1、Perforin14.套细胞淋巴瘤：CD3、CD5、CD20、CD79α、CyclinD1、TdT、Bcl-2、Ki-6715.T/NK细胞淋巴瘤：CD3、CD20、CD45RO、CD79α、CD56、TiA-1、Perforin、粒酶B16.淋巴上皮病变/癌：CK、EMA、S-100、Ki-67、P53、EBV*、P63、CD30、CD2017.Burkitt淋巴瘤：CD3、CD20、CD79α、CD10、Bcl-2、Bcl-6、Ki-67、EBV*、TdT18滤泡性淋巴瘤：CD3、CD20、CD45RO、CD79α、CD10、Bcl-2、Bcl-6、Ki6719.脂膜炎样T细胞淋巴瘤:CD2、CD3、CD7、CD20、CD43、Perforin、TiA-1、EBV *20.浆细胞瘤：CD3、CD20、CD38、CD138、CD79α、EMA、κ*、λ*21.坏死性淋巴结炎：CD3、CD20、CD45RO、CD79α、CD43、CD68、Mac387、C D16322.粘膜相关淋巴瘤：CK、CD3、CD5、CD10、CD20、CD23、CD43、CD79a、Cy clinD123.血管免疫母细胞性淋巴瘤：CD3、CD20、CD45RO、CD43、CD79α24.组织细胞肉瘤：S100、CD10、CD21、CD35、CD68、Lysozyme、MPO、CD33、CD34、CD11c、CD14、CD45RO25.朗格罕氏细胞增生症/肉瘤：S100、CD1α、CD68、CD35、HMB45、CK、EMA、Ki67、CD4526.指状突树突细胞肉瘤/肿瘤：S100、CD1α、CD68、CD21、CD35、CD3、CD20、CD30、CK、EMA、Ki67、CD4527.滤泡树突细胞肉瘤/肿瘤：CD21、CD35、S100、CD1α、CD68、CD3、CD23、E MA、VIM、MPO、CD34、CD79α、CK、HMB4528.肥大细胞肿瘤：CD117、CD45、CD33、CD68、CD15、CD3、CD20消化系统肿瘤29.胃癌：CK7、CK20、Villin、CEA、P53、Ki-67、CDX-2、GST-π、AB/PAS**30.肠癌：CK7、CK20、Villin、CEA、P53、Ki-67、CDX-2、GST-π、AB/PAS**31.肝细胞癌：AFP、CD34、CEA、CK8/18、CK19、Ki-67、P53、HbsAg、Hepatoc yte32.肝胆管细胞癌：CK7、CK20、Villin、AFP、CD34、CEA、CK8/18、CK19、Ki-67、Hepatocyte、HbsAg33.食道癌：P53、Ki-67、CDX-2、GST-π、P6334.胰腺癌：CEA、P53、Ki-67、CDX-2、GST-π、Villin、CK7、CK20、35.胰岛细胞瘤：CD56、Syn、CgA、Ki-67、Insulin、CK8/18、CK1939.肝炎病毒：HbsAg、HbcAg、HCV涎腺肿瘤37.涎腺粘液性囊腺癌：CK、P63、SMA、Vimentin、Myosin-heavy chain38.上皮肌上皮癌：CK、P63、SMA、Vimentin、S-100、Myosin-heavy chain39.导管腺癌：CK、P63、SMA、AR、HER2、Myosin-heavy chain40.多形性腺瘤：CK、P63、SMA、S-100、GFAP、Myosin-heavy chain神经内分泌肿瘤41.神经内分泌癌：CD56、CD57、Syn、CgA、CK、CK8/1842.肺神经内分泌癌：CD56、CD57、Syn、CgA、CK、CK8/18、CD99、TTF-1、P6 3、Sp-B43.甲状腺乳头状癌：Tg、TTF-1、CK19、HMBE-1、Gelactin-3、Ki-67、TPO44.甲状腺髓样癌：Tg、CT、CD56、CD57、Syn、CgA、CEA45.肾上腺皮质癌：CK、CEA、Inhibin、Melan-A、CD10、CgA、Syn、S10046.肾上腺嗜铬细胞瘤：Syn、CgA、S-100、CK、EMA、Inhibin、Melan-A、47.肾上腺外副神经节瘤：Syn、CgA、S-100、CK、EMA、Inhibin、Melan-A、GFAP48.Merkel细胞癌：CK7、CK20、Syn、CgA、CK、CD99软组织肿瘤49.促纤维增生性小圆细胞肿瘤：CK、EMA、CD99、S-100、Des、Syn、CgA、50.尤文/PNET/视/嗅/髓母细胞瘤：CD99、S-100、Syn、CgA、CD56、CD57、GFAP、Vimentin51.上皮样血管平滑肌脂肪瘤：HMB45、S-100、Melan-A、CD34、CK、SMA、Vime ntin52.上皮样血管瘤：CK、CD34、CD31、CD68、EMA53.孤立性纤维性肿瘤：CD34、Bcl-2、CD99、S-100、CK、Vimentin、SMA54.间皮瘤：CK5/6、HMBE-1、Calretinin、TTF-1、D2-40、CK、WT155.横纹肌（肉）瘤：MyoD1、Myogenin、Desmin、SMA、CK、S100、CD9956.滑膜肉瘤：EMA、CK、CD34、CD99、CD68、S-100、Bcl-2、Vimentin57.皮隆突/恶纤组：CD34、CD68、S-100、SMA、Vimentin58.血管球瘤：EMA、CK、CD34、SMA、S-10059.血管周肌细胞瘤：EMA、CK、CD34、SMA、S-100、Desmin60.梭形/多形性脂肪：CD34、SMA、S-100、HMB45、CK、CD31、CD6861.脊索/副脊索瘤：SMA、S-100、EMA、CK、GFAP、CD6862.腱鞘巨细胞瘤：SMA、MSA、Desmin、CK、Vimentin63.平滑肌（肉）瘤：SMA、MSA、Desmin、CK、S-100、CD34、Vimentin64.软骨母细胞瘤：CD99、S-100、CK、Vimentin65.结节性筋膜炎：CK、SMA、MSA、DES、CD68、S100、Vimentin66.缺血性筋膜炎：VIM、SMA、CD68、DES、S100、CD34、Vimentin67.肌纤维瘤/肌纤维瘤病：VIM、SMA、Actin、S100、EMA、CK、Vimentin68.硬化性纤维母细胞瘤：VIM、SMA、CK、DES、EMA、S100、CD3469.乳腺型肌纤维母细胞瘤：DES、CD34、EMA70.钙化性腱膜纤维瘤：VIM、SMA、MSA、CD99、S10071.血管肌纤维母细胞瘤：DES、SMA、Actin、ER、PR、CD34、S100、CK、fast myosin72.富于细胞性血管纤维瘤：VIM、CD34、DES、Actin、SMA、MSA73.项型纤维瘤：VIM、CD34、CD99、DES、Actin74.Gardner纤维瘤：VIM、CD34、SMA、MSA、DES、ER、PR75.钙化性纤维性肿瘤：Vim、VⅢ因子、XⅢa因子、Des、Actin、S100、CD31、CD 34、CK76.巨细胞血管纤维瘤：CD34、CD99、Bcl-277.韧带样型纤维瘤：Vim、SMA、Des、S10078．脂肪纤维瘤病：CD34、Bcl-2、S100、Actin、EMA、CK、Des、CD9979.炎症性肌纤维母细胞性肿瘤：Vim、SMA、Des、CK、S100、ALK、CD11780.低度恶性肌纤维母细胞瘤：Actin、Des、CD34、CD99、S100、CK81.黏液炎症性肌纤维母细胞瘤：Vim、CD34、CD68、SMA、CK、LCA、CD30、T and B转移性肿瘤鉴别82.转移性肺/肝癌：CK7、CK20、Villin、CEA、TTF-1、CK、AFP、CD34、Hepatoc yte83.转移性肺/胃肠癌：CK7、CK20、Villin、CEA、TTF-1、Sp-B、CDX-284. 转移性肺/前列腺癌：CK7、CK20、Villin、TTF-1、CK、Sp-B、PSA、PSAP85. 转移性肺/甲状腺癌：CK7、CK20、Villin、TTF-1、CK、Sp-B、TG86. 转移性腺/鳞癌：CKAE1、CKAE3、CK8/18、CK5/6、EMA、CD15、P6387. 转移性肺/鼻咽癌：CK7、CK20、Villin、TTF-1、CK、Sp-B、EMA、EBV*88.食道低分化癌/神经内分泌癌：Syn、P63、CgA、CD56、CD99、CKAE3、CK5/689.转移性卵巢粘液/浆液性癌：CK7、CK20、Villin、CEA、TTF-1、CA125、CDX-2神经系统肿瘤90.垂体瘤：TSH、FSH、GH、LH、ACTH、PrL、P5391.胶质瘤：GFAP、MBP、Vim、EMA、S-10092.少突胶质细胞瘤：Pax-5、GFAP、MBP、Vim、EMA、S-100、CD5793.胶质肉瘤：GFAP、CD68、Vim、S-100、Ki-6794.节细胞胶质瘤：Syn、CgA、GFAP、S-100、CD68、Vim、Ki-6795.神经束膜瘤：S-100、EMA、GFAP、CK、Vim96.恶性外周神经鞘瘤：S-100、CK、HMB45、Desmin、SMA、MyoD1、CD57、MB P97.脑膜瘤：GFAP、EMA、Vim、S-10098.神经纤维/神经鞘瘤：GFAP、EMA、Vim、S-100、CK99.中枢神经细胞瘤：GFAP、S-100、Syn、CD57、MBP、EMA、CgA、Calretinin100.室管膜瘤：EMA、CK、S-100、GFAP、Syn、CD57、MBP、101.脉络丛乳头状瘤：GFAP、CK、S-100、Syn、EMA、Ki-67、CgA102.颅咽管瘤：CKAE1、EMA、GFAP、CKAE3、Ki-67103.颅内血管母细胞瘤：CD34、CD31、EGFR、CK、EMA、VEGF乳腺及女性生殖器官104.浸润性乳腺癌：P53、Bcl-2、ER、PR、HER2、E-Cadherin、Ki-67、CK7、GC DFP-15105.浸润性筛状癌/腺样囊性癌：ER、PR、HER2、P63、Laminin106.实性神经内分泌癌：ER、PR、HER2、GCDFP-15、CK7、CK20、CgA、Syn 107.子宫内膜样肿瘤/宫颈腺癌：Vim、CK、ER、PR、Inhibin、P16、CEA108.子宫内膜间质肿瘤：Vim、CD10、SMA、Inhibin109.移行细胞癌:CA125、CK7、CK20、P63110.颗粒细胞瘤：CD99、Inhibin、Vim、S100、SMA、CK、CK7、EMA111.卵泡膜瘤-纤维瘤：Vim、Inhibin112.硬化性的间质瘤：Vim、Des、SMA、Inhibin113.Sertoli-间质细胞瘤：Vim、Inhibin、EMA、Ker、ER、PR114.无性细胞瘤：Vim、CD117、PLAP、CK、Des、CEA、S100115.卵黄囊瘤：AFP、CK、CD30、ER、PR116.胚胎性癌：AFP、CD30、CK117.非妊娠绒毛膜癌：CK、hPL、ß-Hcg恶性肿瘤预后与耐药监测指标P53、Bcl-2、PCNA、Ki67、P-gp、TOPOⅡα、GSTπ宫颈CIN病变分级检测指标P16、P53、Ki-67、CD68、Pro-EXC1.前列腺癌：CK、P63、34ßE12、PSA、P504S(AMACR)、AR25.朗格罕氏细胞增生症/肉瘤：S100、CD1α、CD68、CD35、HMB45、CK、EMA、Ki67、CD45、CD20750.尤文/PNET/视/嗅/髓母细胞瘤：CD99、S-100、Syn、CgA、CD56、CD57、GFAP、Vimentin、Fli-1104.浸润性乳腺癌：P53、Bcl-2、ER、PR、HER2、E-Cadherin、Ki-67、CK7、GC DFP-15、P120-catenin108.子宫内膜间质肿瘤：Vim、CD10、SMA、Inhibin-α109.移行细胞癌:CA125、CK7、CK20、P63、uroplakin III110.颗粒细胞瘤：CD99、Inhibin-α、Vim、S100、SMA、CK、CK7、EMA111.卵泡膜瘤-纤维瘤：Vim、Inhibin-α112.硬化性的间质瘤：Vim、Des、SMA、Inhibin-α113.Sertoli-间质细胞瘤：Vim、Inhibin-α、EMA、Ker、ER、PR114.无性细胞瘤：Vim、CD117、PLAP、CK、Des、CEA、S100、OCT3/4115.卵黄囊瘤：AFP、CK、CD30、ER、PR116.胚胎性癌：AFP、CD30、CK、OCT3/4。
常用免疫组化试剂介绍
常用免疫组化试剂介绍一、用于鉴别诊断(一)上皮源性：1. 细胞角蛋白/cytokeratin.CK：目前，商品化的细胞角蛋白有20多种，不同的分子量代表不同类型的上皮标志。
通常将C K分为两大类型：Ⅰ型〔低分子量〕；Ⅱ型〔高分子量〕。
理论上讲，大多数单层上皮表达低分子量的CK；复层上皮多表达高分子量的CK；移形上皮〔膀胱〕和假复层上皮〔呼吸道的被覆上皮〕既表达低分子量的CK，也表达高分子量的CK。
在癌组织中，低分子量的CK多在腺癌中表达，高分子量的CK多在鳞癌中表达。
目前为止，未发觉任何一种上皮只含有一种CK，某些上皮可含2-10种不同分子量的CK。
因此，目前试图应用单一的CK免疫表型来确定某种特定的上皮性肿瘤是不可能的。
同样，应用CK来区别腺癌、类癌和间皮瘤也是困难的。
因此，CK的免疫组化结果推断是一个较为复杂的问题，在应用这类标记物作为腺癌和鳞癌的鉴别应特别注意。
有必要时，应联合用多种CK加以综合推断。
CK的阳性表达还包含有间变癌、双向分化的滑膜肉瘤、脊索瘤、胚胎癌、间皮瘤、上皮样肉瘤、胸腺瘤等。
CK的阴性表达有：副节瘤单向分化的滑膜肉瘤、软骨〔肉〕瘤、精原细胞瘤、淋巴瘤、脑膜瘤、恶黑、恶纤组、软组织肉瘤〔除特别类型外〕。
在推断CK免疫组化结果时应注意几点：〔1〕 CK的单克隆抗体优于多克隆抗体；〔2〕 CK常出现斑点状的假阳性反响，应注意识别；〔3〕虽然大多数CK多在胞浆表达，但CK17多在胞核表达；〔4〕绝大多数CK抗体需用胰酶消化，可增加阳性表达率和染色强度；〔5〕局部非上皮性肿瘤〔平滑肌肉瘤〕可见有CK表达，在诊断时应注意；〔6〕淋巴结、扁桃体和脾组织中的滤泡外的网织细胞含有CK8和18以及desmin,在推断淋巴结转移癌和肌源性肉瘤转移时应依据组织学综合推断。
2.上皮膜抗原〔epithelial membrane antigen/EMA〕：EMA是上皮细胞分泌的一种乳脂小球膜糖蛋白，广泛存在于人体各种上皮细胞中〔也存在于间皮细胞、浆细胞、组织细胞和T细胞淋巴瘤中〕，其分布与角蛋白相似，但对内脏腺上皮优于细胞角蛋白，尤其是分化差的癌EMA有时可呈强阳性表达。
常用免疫组化标记物
常用免疫组化指标的意义Ki-67为细胞增值的一种标记，在细胞周期G1、S、G2、M期均有表达，G0期缺如，其和许多肿瘤分化程度、浸润、转移、预后密切相关。
PCNA(增埴细胞核抗原)。
多数腺癌表达CEAP53在免疫组化中均为突变型，阳性率越高，预后约差。
野生型半衰期很短Nm23是转移抑制基因，其阳性表达和肿瘤转移呈负相关。
E-Ca，E钙粘附蛋白，介导细胞间粘连作用的跨膜糖蛋白，其功能丧失引起细胞之间连接的破坏，主要用于肿瘤侵袭和转移方面的研究。
PS2（雌激素调节蛋白），其表达和ER表达有关，可作为内分泌治疗和预后判断的指标之一。
CK18，低分子量角蛋白，主要标记各种单层上皮包括腺上皮，而复层鳞状上皮常阴性，主要用于腺癌诊断。
CK19，分布于单层上皮和间皮，常用于腺癌诊断，肝细胞不表达，而胆管为阳性反应CK20，用于胃肠道腺癌、卵巢黏液性肿瘤、皮肤Merkel细胞癌诊断。
鳞癌、乳腺癌、肺癌、子宫内膜和卵巢非黏液性肿瘤常阴性。
CK7 卵巢、肺和乳腺上皮常阳性，结肠、前列腺、胃肠道上皮阴性。
Villin 绒毛蛋白，正常组织中，villin通常只表达于有刷状缘的细胞上，如胃肠道上皮细胞、胰腺和胆管上皮细胞以及肾实质的上皮细胞中（特别是近曲小管）。
Villin在胃肠道癌、胰腺癌、胆囊癌和胆管癌组织中有很高的表达率，具有明显腺样结构的肿瘤上没有villin表达，则这个肿瘤为胃肠道、胰腺、胆囊或胆管来源的可能性极低。
乳腺癌也经常成为女性患者未知原发部位转移癌要鉴别排除的一种疾病。
因为在转移癌组织上观察到明显的villin免疫组化阳性染色，则这个肿瘤就极不可能为乳腺来源。
其他villin 免疫组化染色通常为阴性表达的肿瘤还有：如卵巢浆液性癌、尿道移行细胞癌和前列腺癌。
间皮瘤也经常为villin阴性表达，因此在一些情况下Villin还可以作为鉴别间皮瘤和腺癌使用抗体的一种。
但是也有一些非胃肠道来源的肿瘤可表达villin，如子宫内膜样腺癌、卵巢粘液性癌、肾细胞癌和小部分肺癌。
(整理)免疫组化知识
免疫组织化免疫组织化学免疫组织化学（Immunohistochemistry）又称免疫细胞化学。
它是组织化学的分支，它是用标记的特异性抗体（或抗原）对组织内抗原（或抗体）的分布进行组织和细胞原位检测技术。
1．发展简史——1941年Coons首先用荧光素标记抗体一检测肺组织内的肺炎双球菌获得成功。
60年代Nakane建立酶标抗体技术铁蛋白标记Ab技术。
——70年代Stemberger改良上述技术，建立辣根过氧化物酶——抗体过氧化物酶（PAP）技术，使免疫细胞化学得到广泛应用。
——80年代Hsu等建立了抗生物素一生素（ABC）法之后，免疫金一银染色法、半抗原标记法、免疫电镜技术相继问世。
——90年代分子杂交技术、原位杂交技术、免疫细胞化学分类方法迅速发展。
——2000年各种免疫组化技术更加成熟，使免疫组化技术成为当今生物医学中形态、功能代谢综合研究的一项有力工具。
其应用范围深达医学各个学科，是目前生命科学工作者应该掌握的基本技术之一。
2．免疫组织化学的技术分类（1）根据染色方式分成：①贴片染色；②漂浮染色。
（2）根据Ag—Ab结合方式分成：①直接法；②间接法；③多层法。
（3）按标记物的性质分成：①免疫荧光技术（免疫荧光法）；②免疫酶技术（酶标抗体法、桥法、PAD法、ABC法）；③免疫金属技术（免疫铁蛋白法、免疫金染色法、蛋白A金法）。
3．标记物（1）必要性：组织细胞内Ag—Ab结合反应一般是不可见的，若在镜下检测，则必须具有可视性标记物。
（2）常用标记物①荧光素：最常用的是异硫一氰酸荧光素（Fluoresceinisothiocyanate，FITC）荧光显微镜下呈绿色荧光四乙基罗达明（rho—damineRB200）——荧光显微镜下发橙红色荧光；②酶：辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶。
③生物素：（Biotin）④铁蛋白金等：主要应用于免疫电镜。
其他：如同位素（因涉及污染和防护难一般不用）4．应用凡是组织细胞内具有抗原性的物质，如肽类、激素、神经递质、细胞因子、受体、表面抗原等等均可用免疫组织化学方法显示，因而目前在基础与临床科研中被广泛应用。
常用免疫组化标记物
常用免疫组化指标的意义Ki-67 为细胞增值的一种标记，在细胞周期G1、S、G2、M 期均有表达， G0 期缺如，其和很多肿瘤分化程度、浸润、转移、预后亲密有关。
PCNA(增埴细胞核抗原 )。
多半腺癌表达CEARb (retinoblastoma 视网膜母细胞瘤 )基因是肿瘤克制基因，调理细胞周期。
P53 在免疫组化中均为突变型，阳性率越高，预后约差。
野生型半衰期很短 Nm23 是转移克制基因，其阳性表达和肿瘤转移呈负有关。
E-Ca， E钙粘附蛋白，介导细胞间粘连作用的跨膜糖蛋白，其功能丧失惹起细胞之间连结的损坏，主要用于肿瘤侵袭和转移方面的研究。
PS2（雌激素调理蛋白），其表达和 ER表达有关，可作为内分泌治疗和预后判断的指标之一。
CK18，低分子量角蛋白，主要标记各样单层上皮包含腺上皮，而复层鳞状上皮常阴性，主要用于腺癌诊疗。
CK19，散布于单层上皮和间皮，常用于腺癌诊疗，肝细胞不表达，而胆管为阳性反响Hep par 1,肝细胞抗原，正常肝细胞和高分化肝细胞癌阳性，低分化肝细胞癌多弱阳性或阴性。
CK20，用于胃肠道腺癌、卵巢黏液性肿瘤、皮肤 Merkel 细胞癌诊疗。
鳞癌、乳腺癌、肺癌、子宫内膜和卵巢非黏液性肿瘤常阴性。
CK7卵巢、肺和乳腺上皮常阳性，结肠、前列腺、胃肠道上皮阴性。
Villin 绒毛蛋白，正常组织中，villin 往常只表达于有刷状缘的细胞上，如胃肠道上皮细胞、胰腺和胆管上皮细胞以及肾本质的上皮细胞中（特别是近曲小管）。
Villin 在胃肠道癌、胰腺癌、胆囊癌和胆管癌组织中有很高的表达率，拥有显然腺样构造的肿瘤上没有 villin 表达，则这个肿瘤为胃肠道、胰腺、胆囊或胆管根源的可能性极低。
乳腺癌也常常成为女性患者未知原发部位转移癌要鉴识清除的一种疾病。
由于在转移癌组织上察看到显然的 villin 免疫组化阳性染色，则这个肿瘤就极不行能为乳腺根源。
其余 villin 免疫组化染色往常为阴性表达的肿瘤还有：如卵巢浆液性癌、尿道移行细胞癌和前列腺癌。
病理科免疫组化常用抗体
免疫组织化学常用抗体标记谱系第一节上皮细胞标志1.细胞角蛋白Cytokeratin(CK)CK是一种中间丝蛋白，是上皮细胞及其肿瘤较特异标志物。
CK分子量为40～60KD，根据其分子量不同分为20余种，并粗略划分为高分子CK（HCK）和低分子CK（LCK）。
2.广谱细胞角蛋白PCKPCK标记所有单层上皮、复层上皮、移行上皮细胞，各种上皮细胞来源的良恶性肿瘤、滑膜瘤和间皮瘤等少部分间叶源性肿瘤亦可阳性。
3.高分子角蛋白HCKHCK主要标记复层鳞状上皮及鳞状细胞癌，HCK（34βE12）常用于标记前列腺基底细胞，观察基底细胞存在与否有助于前列腺癌的诊断。
4.低分子细胞角蛋白LCKLCK主要存在于单层上皮及腺上皮细胞，因此，LCK主要用于内脏腺上皮肿瘤的诊断与鉴别诊断。
5.细胞角蛋白7 CK 7CK7分子量为54KD。
主要标记腺上皮和移行上皮细胞，卵巢、肺和乳腺上皮为CK7阳性，而结肠、前列腺和胃肠道上皮为CD7阴性，因此可用于卵巢癌（CD7＋）和结肠癌（CK7－）的鉴别。
6.细胞角蛋白8 CK8CDK8分子量为52.5KD，主要标记非鳞状上皮，因此主要用于腺癌和导管癌的诊断，鳞癌一般不表达CK8。
有报道肝细胞癌主要表达CK8和CK18。
7.细胞角蛋白10 CK10CK10分子量为56.5KD。
主要标记上皮的基底上层和颗粒细胞层，同时CK10表达与细胞的分化程度呈正比，高分化者常阳性，主要用于鳞癌的诊断。
8.细胞角蛋白13 CK13CK13分子量为53KD。
标记所有的复层上皮，包括角化和非角化上皮。
主要用于高分化鳞状细胞癌的诊断。
9.细胞角蛋白18 CK18CK18分子量为45KD，属低分子量A型细胞角蛋白。
主要标记各种单层上皮包括腺上皮，而复层鳞状上皮常为阴性。
主要用于腺癌的诊断。
10.细胞角蛋白19 CK19CK19分子量为40KD，分布于各种单层上皮包括腺上皮，主要用于腺癌的诊断。
肝细胞不表达CK19，因此可用于肝癌和转移性腺癌的鉴别。
病理科免疫组化常用抗体
免疫组织化学常用抗体标记谱系第一节上皮细胞标志１.细胞角蛋白Cｙtokｅraｔin(ＣK)CＫ就是一种中间丝蛋白,就是上皮细胞及其肿瘤较特异标志物。
CＫ分子量为4０~6０KD,根据其分子量不同分为２０余种,并粗略划分为高分子CK(HCK)与低分子CK(LＣK)。
2.广谱细胞角蛋白PCＫPCK标记所有单层上皮、复层上皮、移行上皮细胞,各种上皮细胞来源得良恶性肿瘤、滑膜瘤与间皮瘤等少部分间叶源性肿瘤亦可阳性、3。
高分子角蛋白HCＫHCK主要标记复层鳞状上皮及鳞状细胞癌,ＨCK(34βE１2)常用于标记前列腺基底细胞,观察基底细胞存在与否有助于前列腺癌得诊断。
4、低分子细胞角蛋白LＣKＬCK主要存在于单层上皮及腺上皮细胞,因此,LＣK主要用于内脏腺上皮肿瘤得诊断与鉴别诊断。
5。
细胞角蛋白7 CＫ 7CK7分子量为54ＫD。
主要标记腺上皮与移行上皮细胞,卵巢、肺与乳腺上皮为CK7阳性,而结肠、前列腺与胃肠道上皮为CD７阴性,因此可用于卵巢癌(CD7+)与结肠癌(CK７—)得鉴别。
6。
细胞角蛋白8 CＫ8ＣDK8分子量为５2、５KD,主要标记非鳞状上皮,因此主要用于腺癌与导管癌得诊断,鳞癌一般不表达CＫ8。
有报道肝细胞癌主要表达CＫ8与CK１8、７、细胞角蛋白10 ＣK10CK１0分子量为56。
５ＫD、主要标记上皮得基底上层与颗粒细胞层,同时CK10表达与细胞得分化程度呈正比,高分化者常阳性,主要用于鳞癌得诊断。
8。
细胞角蛋白１3 CK1３CK１3分子量为５3ＫD。
标记所有得复层上皮,包括角化与非角化上皮。
主要用于高分化鳞状细胞癌得诊断、9、细胞角蛋白18 CK18CK1８分子量为4５KD,属低分子量Ａ型细胞角蛋白。
主要标记各种单层上皮包括腺上皮,而复层鳞状上皮常为阴性。
主要用于腺癌得诊断。
10、细胞角蛋白19 ＣK19CK19分子量为40ＫD,分布于各种单层上皮包括腺上皮,主要用于腺癌得诊断。
肝细胞不表达ＣK1９,因此可用于肝癌与转移性腺癌得鉴别。
免疫组化常用标记物
免疫组化常用标记物一、常用标志物1、ＣD15(LeuM1)---(阳性部位:细胞膜)。
就是一种由半乳糖、岩藻糖与N－乙酰葡萄糖组成得碳水化合物抗原,又称半抗原χ,就是粒／单核细胞相关抗原、免疫组织化学表达:成熟粒细胞、激活得淋巴细胞(主要就是T淋巴细胞)、R－S细胞、大多数腺癌等。
2、癌胚抗原(carcｉｎoeｍbrｙonic antigen,ＣEA)(CD６6e)——-(阳性部位:细胞膜／浆)、癌胚抗原就是表达于胎儿上皮细胞得一种糖蛋白,分子量为18０kＤａ。
存于某些恶性肿瘤组织尤其就是内胚层来源发肿瘤中,大多数胃肠道(包括胰腺)与肺腺癌均有表达,少量成人上皮细胞与良性肿瘤亦可表达、ＣＥA主要用于标记上皮性肿瘤,尤其就是腺上皮来源得腺癌。
3。
嗜铬素A(chｒomｏｇraｎiｎA,CgＡ)－－—(阳性部位:细胞浆)。
嗜铬素就是位于神经分泌颗粒内得酸性糖蛋白家族,就是一组可溶性酸性蛋白,分子量为７6～120 ｋDａ,分布广泛。
含量最丰富得就是嗜铬素A,另两个就是嗜铬素B与嗜铬素C。
几乎所有得神经内分泌肿瘤中均可检测到嗜铬素、嗜铬素A不仅存在于神经内分泌细胞得分泌颗粒中,也广泛分布于所有含有颗粒得内分泌细胞与神经内分泌细胞来源得肿瘤细胞、此抗体可以识别嗜铬素A 抗原羧基末端得片段,而不与氨基末端得片段反应,主要用于标记神经内分泌细胞及其来源得肿瘤、对小细胞癌进行抗原修复可提高检测得敏感性、4。
细胞角蛋白(cytokeratｉｎpan,广谱CK)－--AＥ1/AE3(阳性部位:细胞浆)。
此抗体可以识别绝大部分酸性细胞角蛋白(Ⅰ型/低分子量)与碱性细胞角蛋白(Ⅱ型/高分子量)、用于标记上皮及上皮来源得肿瘤,特别就是对鉴别与判断转移性肿瘤就是否为上皮源性具有一定得意义、５.细胞角蛋白5/6(cytokeratｉn 5／6,CK5/6)—－－(阳性部位:细胞浆)、在正常组织中,鳞状上皮与导管上皮得基底细胞以及部分得鳞状上皮生发层细胞、肌上皮细胞与间皮细胞阳性,腺上皮细胞阴性。
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免疫组化常用标记物免疫组化常用标记物一、常用标志物1. CD15(LeuM1)---（阳性部位：细胞膜）。
是一种由半乳糖、岩藻糖和N-乙酰葡萄糖组成的碳水化合物抗原，又称半抗原χ，是粒/单核细胞相关抗原。
免疫组织化学表达：成熟粒细胞、激活的淋巴细胞（主要是T淋巴细胞）、R-S细胞、大多数腺癌等。
2. 癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）(CD66e)---（阳性部位：细胞膜/浆）。
癌胚抗原是表达于胎儿上皮细胞的一种糖蛋白，分子量为180kDa。
存于某些恶性肿瘤组织尤其是内胚层来源发肿瘤中，大多数胃肠道（包括胰腺）和肺腺癌均有表达，少量成人上皮细胞和良性肿瘤亦可表达。
CEA主要用于标记上皮性肿瘤，尤其是腺上皮来源的腺癌。
3.嗜铬素A（chromogranin A，CgA）---（阳性部位：细胞浆）。
嗜铬素是位于神经分泌颗粒内的酸性糖蛋白家族，是一组可溶性酸性蛋白，分子量为76～1 20 kDa，分布广泛。
含量最丰富的是嗜铬素A，另两个是嗜铬素B和嗜铬素C。
几乎所有的神经内分泌肿瘤中均可检测到嗜铬素。
嗜铬素A不仅存在于神经内分泌细胞的分泌颗粒中，也广泛分布于所有含有颗粒的内分泌细胞和神经内分泌细胞来源的肿瘤细胞。
此抗体可以识别嗜铬素A抗原羧基末端的片段，而不与氨基末端的片段反应，主要用于标记神经内分泌细胞及其来源的肿瘤。
对小细胞癌进行抗原修复可提高检测的敏感性。
4.细胞角蛋白（cytokeratin pan，广谱CK）--- AE1/ AE3（阳性部位：细胞浆）。
此抗体可以识别绝大部分酸性细胞角蛋白（Ⅰ型/低分子量）和碱性细胞角蛋白（Ⅱ型/高分子量）。
用于标记上皮及上皮来源的肿瘤，特别是对鉴别和判断转移性肿瘤是否为上皮源性具有一定的意义。
5.细胞角蛋白5/6（cytokeratin 5/6，CK5/6）---（阳性部位：细胞浆）。
在正常组织中，鳞状上皮和导管上皮的基底细胞以及部分的鳞状上皮生发层细胞、肌上皮细胞和间皮细胞阳性，腺上皮细胞阴性。
因此，可用于鳞癌和腺癌、间皮瘤和腺癌的鉴别诊断。
支气管上皮基底细胞、间皮；鳞癌、大细胞癌、移行细胞癌、间皮瘤阳性。
大多数腺癌为阴性。
6. 细胞角蛋白7（cytokeratin 7，CK7）---（阳性部位：细胞浆）。
CK7是分子量为54 kDa的一种碱性细胞角蛋白，存在于大多数正常组织的腺上皮和移行上皮细胞中，一般非上皮来源的细胞无表达。
在卵巢、乳腺和肺的腺癌呈阳性反应，而胃肠道的腺癌阴性。
7. 细胞角蛋白20（cytokeratin 20，CK20）---（阳性部位：细胞浆）。
CK20（46kDa）存在于正常的胃肠道上皮、移行上皮、Merkel细胞及其来源的肿瘤，而乳腺癌、肺癌和神经内分泌肿瘤不表达。
CK7positive CK7 negative CK20 positive uninformative colorectum CK20 negative lunguninformative8. 细胞角蛋白（高分子量）（cytokeratin，HMW）---（阳性部位：细胞浆）。
高分子量细胞角蛋白抗体（34βE12）可以识别68kDa、58kDa、56.5kDa和50kD a的细胞角蛋白。
9.上皮膜抗原（epithelial membrane antigen，EMA）(MUC1)---（阳性部位：细胞浆）。
上皮膜抗原是一种高分子量（400 kDa）跨膜糖蛋白，广泛分布于各种上皮细胞及其来源的肿瘤。
癌细胞过表达MUC1与肿瘤侵袭有关，有意义的免疫反应性为膜阳性，如为纯粹的胞浆着色则为假阳性。
此抗体可以用于标记上皮及上皮源性肿瘤，EMA阳性表达的肿瘤包括大多数的癌、间皮瘤、滑膜肉瘤和上皮样肉瘤等，淋巴瘤、黑色素瘤和软组织肿瘤阴性表达。
10.HBME1---（阳性部位：细胞膜）。
该抗体与间皮细胞表面的抗原反应，染色方式呈现一种特殊的“厚膜”方式，在鉴别间皮瘤与腺癌时有一定的参考价值：间皮瘤为厚膜型，腺癌为薄膜型或胞浆着色。
11.突触素（synaptophysin，Syn）---（阳性部位：细胞浆）。
突触素是分子量为38kDa的糖蛋白，主要存在于神经元突触前囊泡膜，是神经性和上皮性神经内分泌肿瘤的特异性标志之一，用于标记神经内分泌肿瘤。
12.甲状腺转录因子1（thyroid transcription factor-1，TTF-1）---（阳性部位：细胞核）。
TTF-1表达于甲状腺腺上皮和肺的上皮细胞中。
大多数肺的小细胞癌、腺癌、少部分大细胞癌、大多数非典型神经内分泌肿瘤免疫组化结果显示TTF-1阳性，而肺鳞癌及绝大多数典型类癌TTF-1阴性。
13.波形蛋白（Vimentin，Vim）---（阳性部位：细胞浆）。
波形蛋白分子量为57 kD，是原始的中间丝，分布极广，所有间(充)质细胞均有表达，此抗体的免疫原为猪的晶体，但可与人、大鼠和鸡的波形蛋白反应。
波形蛋白是正常间叶细胞及其来源的肿瘤的特异性标志，在许多上皮细胞及其肿瘤中可与细胞角蛋白共表达。
诊断用途：是一个有用的“对照标记”，即：如果波形蛋白未能较易地在非肿瘤性内皮细胞、纤维母细胞和其他间叶成分中检测到，则总的说来组织的免疫反应性未能得到适当的保存。
在间皮瘤与腺癌的鉴别诊断中，波形蛋白在间皮瘤的上皮细胞中更常见与细胞角蛋白共表达。
14.Cam 5.2---分子量45 kD和52 kD的人角蛋白抗原决定簇。
与正常分泌上皮而不是复层鳞状上皮反应。
15.MNF-116---该抗体识别许多细胞角蛋白共同的抗原决定簇，是上皮性肿瘤的一线标记。
免疫组织化学表达：正常组织有复层鳞状上皮和单纯腺上皮、平滑肌、淋巴结树突状细胞、浆细胞等；肿瘤主要有鳞癌、小细胞癌、肉瘤样癌/梭形细胞癌、腺癌、间皮瘤（纤维状细胞）、滑膜肉瘤、血管肿瘤、平滑肌肿瘤和浆细胞瘤等。
16.Desmin---结蛋白分子量为53 kD的中间丝（骨骼蛋白），有三种单克隆抗体（D33, DER-11和DEB-5），与其他中间丝无交叉反应。
在平滑肌和横纹肌可检测到结蛋白，在肌纤维母细胞中亦有少量结蛋白。
在平滑肌组织中结蛋白含量要多于血管平滑肌。
诊断用途：识别平滑肌和横纹肌肿瘤。
17. MOC-31---为识别上皮细胞中一种功能未知的38 kDa 糖蛋白的单克隆抗体。
大多数腺癌为阳性，而间皮瘤通常为阴性。
18.表面活性蛋白（Surfactant proteins，SP）。
肺表面活性物质含有许多蛋白，包括10 kD的Clara细胞蛋白和表面活性蛋白A、B、C、D 。
作为细支气管肺泡癌的标志。
19.α1-AT---细支气管肺泡癌Clara细胞型呈阳性表达。
二、恶性上皮性肿瘤1、鳞癌---发生于支气管上皮，有角化和/或细胞间桥的恶性上皮性肿瘤。
有四个亚型：①乳头状；②透明细胞型；③小细胞型；④基底细胞样绝大多数表达高分子角蛋白（34βE12），CK5/6和CEA，许多鳞癌表达低分子角蛋白（35βH11），较少表达TTF-1或CK7。
2、小细胞癌---由圆形、椭圆形或梭形小细胞组成的恶性上皮性肿瘤。
胞质很少，边界不清；核内可见细颗粒状染色质，核仁不明显或缺如；细胞核变形很明显；常有大量坏死和许多核分裂。
绝大多数小细胞癌CD56、Cg、SY阳性，神经内分泌标志表达率≥90%；小细胞癌常见TTF-1和CK阳性。
鉴别诊断：①淋巴瘤---小细胞癌显示为神经内分泌标志、TTF-1和CK阳性，LCA阴性。
②PNET---小细胞癌与PNET均可表达MIC-2（CD99），但小细胞癌TTF-1和CK阳性，而PNET则为阴性。
③Merkel细胞瘤---本瘤CK20阳性，CK7、TTF-1阴性可与小细胞癌鉴别。
3、腺癌---具有腺样分化和产生黏液的恶性上皮性肿瘤。
呈腺泡样、乳头状、细支气管肺泡细胞样或实性伴有黏液的生长方式，可混合存在。
有下列亚型：①腺癌，混合亚型；②腺泡样腺癌；③乳头状腺癌；④细支气管肺泡细胞癌包括非粘液型、粘液型、混合性非粘液性与粘液性或中间型。
非粘液型细支气管肺泡癌又包括Ⅱ型肺泡细胞型和Clara细胞型，前者SP、TTF-1等阳性，后者C lara蛋白及α1-AT阳性，有助于与其它腺癌鉴别诊断。
⑤实性腺癌伴有粘液产生⑥胎儿型腺癌⑦黏液性（“胶样”）腺癌⑧黏液性囊腺癌⑨印戒细胞腺癌⑩透明细胞腺癌腺癌的免疫组化特征与其亚型和分化程度有关，典型的上皮性标志为：AE1/AE3，CAM5.2，EMA和CEA。
CK7阳性高于CK20，TTF-1阳性率较高，尤其是在分化好的腺癌（在TTF-1阳性病例中，甲状腺球蛋白阴性有助于排除甲状腺癌）。
表面活性蛋白（Surfactant apoprotein，SP）较TTF-1为低，但要注意的是转移性肿瘤细胞也可能吸附一些SP。
在黏液性肿瘤中，尤其是黏液型B AC可能有例外，即TTF-1阴性，而CK7和CK20往往阳性。
鉴别诊断：①转移性腺癌---有原发灶病史，在肺内常为多个病灶。
如为单个病灶，则鉴别较为困难。
肺腺癌有组织学亚型的异质性，尤其是存在BAC成分时可明确诊断；60%表达表面活性蛋白（SP-A，pro-SP-B，pro-SP-C），70%表达T TF-1；CK7（+）/CK20（－），仅黏液性BAC为TTF-1（－）/ CK20（+）。
转移性腺癌多为均质性，TTF-1阴性（除外甲状腺癌：黏液染色阴性，甲状腺球蛋白阳性）。
肾细胞癌：AE1/AE3、CK7弱阳性，Vim强阳性。
结肠腺癌：CK7（－）/ CK20（+），CDX-2阳性。
乳腺癌：ER（+）。
卵巢癌：雌二醇受体、CA125、Vim、钙粘蛋白、抑制素（+）；CEA（－）。
前列腺癌：PSA（+）。
②上皮型恶性间皮瘤---根据临床、巨检、镜检、免疫组化和电镜特点进行鉴别。
免疫组化方面主要包括腺癌特异标志TTF-1、普通标志CEA、CD15或MOC31；间皮瘤标志calr etinin（钙视网膜蛋白）和CK5/6。
③不典型腺瘤样增生---发生于肺周边部的局灶性病变，通常＜5mm，表现为衬覆肺泡或呼吸性细支气管的不典型细胞呈轻—中度局限性增生，无间质炎症和纤维化。
不典型腺瘤样增生表达SPA，CEA，MMPs，E-钙粘蛋白，β-catenin，CD44v6和TTF-1。
一般认为，不典型腺瘤样增生是细支气管肺泡细胞癌的癌前病变，TP53阳性是细支气管肺泡细胞癌的早期标志之一。
④非粘液型细支气管肺泡细胞癌---一般大于5mm，明显的细胞分层，细胞密集，柱状细胞排列拥挤，微乳头丛生；细胞核重叠，染色质较粗，可见核仁。
4、大细胞癌---未分化的非小细胞肺癌，缺乏小细胞癌、腺样或鳞状分化的细胞和结构特征。
大细胞癌的分化表型并无特征性，大多表现为腺分化，也可为鳞分化。