系统性红斑狼疮患者STAT4基因mRNA和血清中IL-12、IFN-γ的表达

ＴｈｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＬｅｖｅｌｓｏｆＳＴＡＴ４ｍＲＮＡａｎｄＳｅｒｕｍＬｅｖｅｌｓｏｆ
ＩＬ－１２ａｎｄＩＦＮ－ｉｎＰａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＳｙｓｔｅｍｉｃＬｕｐｕｓＥｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ
ｍＲＮＡ的表达．
［关键词］系统性红斑狼疮；ＳＴＡＴ４；ＳＬＥＤＡＩ；ＩＬ一１２；ＩＦＮ一［中图分类号］Ｒ７５８．６３［文献标识码］Ａ［文章编号］１００３ — ４７０６（２０１３）０４ —００３５ —０８
杨小蕾，邓丹琪（昆明医科大学第二附属医院皮肤科，云南昆明６５０１０１）
［摘要］目的研究ＳＬＥ患者ＳＴＡＴ４的表达与患者血清中细胞因子ＩＬ一１２、ＩＦＮ一的关系，探讨它们在ＳＬＥ应用ＱＰＣＲ检测患者血液中ＳＴＡＴ４的表达．应用ＥＬＩＳＡ方法
发病中的作用与狼疮疾病活动程度的关系．方法
检测正常对照组与ＳＬＥ患者血清中ＩＬ一１２、ＩＦＮ一的水平．所有数据资料用Ｐｌｉｎｋ１．０６及ＳＰＳＳ１６．０软件进行统
计分析．结果（１）ＳＬＥ病人ＳＴＡＴ４ｍＲＮＡ的相对表达量高于正常对照组（Ｐ＜０．０１），ＳＴＡＴ４表达水平与ＳＬＥＤＡＩ评分成正相关（ｒ＝Ｏ．３８５，Ｐ＜０．０５）；（２）ｒｓｌＯ１８１６５６Ｇ等位基因的突变与ＳＴＡＴ４ｍＲＮＡ的表达水平升高有关；（３）ＳＬＥ组ＩＦＮ — ｒ、ＩＬ一１２含量高于正常组（Ｐ＜０．０１）；ＩＦＮ — ｒ、ＩＬ一１２含量与ＳＬＥＤＡＩ评分呈正相关（Ｐ＜０．０５）；（４）ＳＴＡＴ４ｍＲＮＡ的表达与ＩＦＮ一（ｒ＝０．３３５，Ｐ＜０．０５）、ＩＬ一１２（ｒ＝０．４０１，Ｐ＜０．０５）显著正相关，与其他临床及实验室指标蝶形红斑（ｒ＝０．４７１，Ｐ＜０．０００）、粘膜溃疡（ｒ＝０．５５２，Ｐ＝０．０００）、浆膜炎（ｒ＝０．３１１，Ｐ＝０．０１４）、肾损害（ｒ＝０．２４７，Ｐ＝０．０４２）、血液损害（ｒ＝０．２５６，Ｐ＝０．００３７）成正相关（Ｐ＜０．０５）．结论（１）ＳＬＥ患者中ＳＴＡＴ４基因的表达水平增高并与ＳＬＥ疾病活动相关，可以作为监测病情活动性的检测指标；（２）ＳＬＥ患者的ＩＦＮ一＾ｙ、ＩＬ一１２异常高表达，而且与ＳＬＥＤＡＩ评分呈正相关，ＩＦＮ一、ＩＬ一１２可以作为判断ＳＬＥ疾病活动的参考指标．ＳＴＡＴ４对ＩＬ一１２、ＩＦＮ一的表达有正相调节作用，在基因水平上调控ＩＬ一１２、ＩＦＮ一并促进其
ＳＬＥ．ＭｅｔｈｏｄｓＳＴＡＴ４ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＳＬＥｐａｔｉｅｎｔｓａｎｄｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｓｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｗｉｔｈＱＰＣＲｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．ＥＬＩＳＡ
ＹＡＮＧＸｉａｏ—ｌｅｉ，ＤＥＮＧＤａｎ—ｑｉ
（Ｄｅｐｔ．ｏｆＤｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｔｈｅ２ｎｄＡｆｌｉｆａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｆＫｕｏｎｍｉｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，
昆明医科大学学报
２０１３，（４）：３５ —４２
ＣＮ５３ —１２２１／Ｒ
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＫｕｎｍｉｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
系统性红斑狼疮患者ＳＴＡＴ４基因ｍＲＮＡ和血清中ＩＬ一１２、ＩＦＮ —ｙ的表达
ＩＦＮ一ｉｎｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｏｆｐａｔｉｅｎｔｓａｎｄｎｏｒｍａｌｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ，ａｎｄｔｏｅｘｐｌｏｒｅｉｔｓｐｏｓｓｉｂｌｅｒｏｌｅｉｎｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓｏｎ６５０１０１，Ｃｈｉｎａ）
ｌＡｂｓｔｒａｃｔＯｂｌｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅＳＴＡＴ４ｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓ，ｔｈｅｓｅｒｕｍｌｅｖｅｌｓｏｆＩＬ一１２ａｎｄ

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IFN-γ研究进展与临床应用

IFN-γ研究进展与临床应用作者：李靖，董文学，杨美盼，等来源：《卫生职业教育》 2019年第23期李靖1，董文学2，杨美盼1，马利锋1，康龙丽1（1.西藏民族大学医学部高原相关疾病分子遗传机制与干预研究重点实验室，陕西咸阳712082；2.西藏民族大学医学部基础医学院，陕西咸阳 712082）摘要：干扰素是细胞被病毒感染时产生的一类细胞因子，调控感染后固有免疫和获得性免疫反应。

干扰素γ作为干扰素家族的一员，已被广泛应用于自身免疫疾病的治疗中。

本文概述IFN-γ的定义、结构、理化特性、来源、生物学活性、临床应用等，讨论IFN-γ的应用前景。

关键词：干扰素；IFN-γ；分子结构；作用机制；临床应用中图分类号：R593.2文献标识码：A文章编号：1671-1246（2019）23-0157-03干扰素（Interferon）由英国病毒学家Alick Isaacs和瑞士研究者Jean Lindenmann在研究病毒的干扰现象时发现，他们在鸡胚绒毛膜尿囊膜的培养液中加入流感病毒，发现产生了一类抗病毒物质，并命名为干扰素[1]。

干扰素是细胞被病毒感染时产生的一类细胞因子，调控感染后固有免疫和获得性免疫反应[2]。

国际干扰素命名委员会按干扰素的抗原特异性将其分为3型：IFN-α、IFN-β和IFN-γ，各型又因氨基酸序列的不同分为若干个亚型，IFN-γ可能有4个亚型[3]。

IFN-α和IFN-β属于Ⅰ型干扰素，为病毒或人工合成的聚核苷酸诱导白细胞产生，IFN-γ为特异性抗原（细菌、LPS）、PHA和卡介苗（BCG）等刺激T细胞产生。

因此，干扰素γ（IFN-γ）作为干扰素家族的一员，也是一类多功能、活性高的细胞因子。

1 IFN-γ概述1.1 IFN-γ的分子结构ISG（干扰素基因）为编码IFN-γ的基因，位于人类12号染色体（12q24.1），长6 kb，基因中包含3个内含子和4个外显子。

IFN-γ由146个氨基酸组成，其活性形式为二聚体结构，由两个完全相同的多肽链组合而成，多个内部螺旋（螺旋E、螺旋F）将两部分紧密地连在一起，保持其生物学活性，并确保Ⅱ型干扰素与Ⅰ型干扰素有最低程度的同源性。

TRAF4 mRNA在系统性红斑狼疮患者外周血白细胞中的表达

取外周静脉血，ＥＤＴＡＫ２抗凝，离心后获得白细胞；采用
Ｔｒｉｚｏｌ总ＲＮＡ一步法提取细胞￣，ＲＮＡｌ用Ｍ— ＭＬＶ逆转录酶合成第
一
链ｃＤＮＡ｛ＴＲＡＦ４、０一ａｃｔｉｎ￣ｆ物设计、合成由上海生物工程公司设计并合成。ＴＲＡＦ４￣Ｊｉ物序列为ＡＣＡＣＣＡＴＣＣＡＧＡＧＣＣＡＣＣＡＧ
断标准，ＳＬＥＤＡＩ评分在４￣２６分之间；以健康献血者１５例为对照组。取外周静脉血，分离外周血白细胞，提取细胞总ＲＮＡ，以ｐ肌动
蛋白（Ｄ — ａｃｔｉｎ）为内参照，采用逆转录一聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术半定量检测ＴＲＡＦ４ｍＲＮＡ在外周血白细胞中的相对表达水平。
小为４６１ｂｐ；Ｄ — ａｃｔｉｎ：ＧＧＧＡＣＣＴＧＡＣＴＧＡＣＴＡＣＣＴＣ（ｓｅｎｓｅ）和ＧＣＡＴＴＴＧＣＧＧＴＧＧＡＣＧＡＴＧＧ（ａｎｔ￣ｓｅｎｓｅ）。产物大小为５７５ｂｐ；
加，致自身抗原增加，与疾病的活动程度正相关，其发生机制与Ｆａｓ／
ＦａｓＬ复合物有关口］，而ＴＲＡＦ４过表达可以抑制由Ｆａｓ介导的细胞凋亡。ＴＲＡＦ４是ＴＲＡＦｓ家族成员之一，在正常人外周血中只有粒细胞和单核细胞表达ＴＲＡＦ４，所以我们选用外周血白细胞作为研究对象分析ＳＬＥ

MicroRNA在系统性红斑狼疮T细胞中的表达研究的开题报告

MicroRNA在系统性红斑狼疮T细胞中的表达研究的开题报告一、研究背景系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）是一种以免疫系统异常为主的自身免疫病，临床表现多样，包括乏力、低热、皮疹、关节痛、肝、肾、肺、心脏等多系统性病变。

SLE的病因尚不明确，但是已经确认免疫因素是导致该病发生的主要原因之一。

在SLE患者体内，T细胞被认为是起关键作用的免疫细胞，主要表现为T细胞发生代谢异常和活化，导致免疫系统失控反应，其中一些T细胞会产生大量炎性因子，引发多个脏器的损伤。

因此，对SLE免疫细胞中的分子机制进行深入探究，是治疗SLE疾病的重要方向。

微小RNA（microRNA, miRNA）是一类长度约为21至23个核苷酸的非编码RNA分子，其可以维持细胞功能的平衡，通过调控靶基因的翻译和降解而发挥生物学调节作用。

在SLE中，已经发现部分miRNA与该病发生、进展和预后的关系密切。

因此，通过分析SLE T细胞中miRNA 的表达变化，可以为SLE的发病机制和治疗靶点提供新的思路。

二、研究目的本研究旨在探究在SLE T细胞中存在的miRNA，核心目的包括：1. 鉴定SLE T细胞中miRNA的表达模式及差异。

2. 找出miRNA在SLE T细胞中的作用机制，是否与病变进程存在相关性。

3. 探讨SLE T细胞中miRNA作为潜在靶点的治疗效果。

三、研究方法本研究将使用实时荧光定量PCR （qRT-PCR）对人体SLE患者血液中的T细胞中miRNA进行分析。

详细步骤如下：1. 随机选择12例来自不同临床中心的SLE患者和12例来自同样的地区、同年龄段、同性别、健康人群的T细胞作为对照组，检测他们T 细胞中miRNA的表达水平。

2. 提取血液中T细胞的总RNA，采用miRcute PCR™（TIANGEN，中国）分析miRNA的表达水平，对基因表达差异进行计算：delta Ct = miRNA Ct - U6 Ct。

系统性红斑狼疮患者miRNA异常在TLR79-IFN通路中的作用机制

中国免疫学杂志2022年第38卷系统性红斑狼疮患者miRNA异常在TLR7/9-IFN通路中的作用机制张汉清邬秀娣①（宁波大学医学院，宁波315211）中图分类号R593.24文献标志码A文章编号1000-484X（2022）10-1278-05［摘要］系统性红斑狼疮（SLE）是一种复杂的以自身抗体大量产生为特点的慢性系统性自身免疫性疾病，发病机制尚未明确。

近年来研究发现miRNA可通过多种方式参与SLE发病机制。

本文重点阐述SLE患者miRNA异常对TLR7/9-IFN通路的影响，以利于进一步探讨SLE发病机制，为寻找新型靶向治疗药物提供思路。

［关键词］系统性红斑狼疮；微小RNA；Toll样受体；干扰素Mechanism of miRNA dysregulation in TLR7/9-IFN signaling pathway in patients with systemic lupus erythematosusZHANG Hanqing，WU Xiudi.School of Medicine，Ningbo University，Ningbo315211，China ［Abstract］Systemic lupus erythematosus（SLE）is a complex chronic systemic autoimmune disease characterized by produc⁃tion of a large number of autoantibodies，but exact pathogenesis is not clear.In recent years，it has been found that microRNA（miRNA）can participate in pathogenesis of SLE in many ways.This paper focuses on influence of miRNA dysregulation on TLR7/9-IFN signaling pathway in patients with SLE，in order to further explore pathogenesis of SLE and provide a theoretical basis for finding new targeted therapeutic drugs.［Key words］Systemic lupus erythematosus；microRNA；Toll-like receptor；IFN系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）是一种典型自身免疫性疾病，可累及多个器官与系统。

系统性红斑狼疮患者6种细胞因子的血清水平

系统性红斑狼疮患者6种细胞因子的血清水平作者：尹志华等来源：《风湿病与关节炎》2014年第03期【摘要】目的：通过液相芯片法同时检测IFN-γ、IL-6、IL-8、IL-10、IP-10和TNF-α 6种细胞因子在系统性红斑狼疮患者和健康对照者中的血清水平，探讨细胞因子在系统性红斑狼疮中的作用及其与临床特征的关系。

方法：选取系统性红斑狼疮患者79例设为系统性红斑狼疮组，健康人群40例作为对照组。

取其外周血分离血清，按MILLIPLEX MAP人细胞因子检测试剂盒的说明进行操作，在Luminex液相芯片平台上机检测6种细胞因子。

结果：狼疮患者和TNF-α 6种细胞因子的血清水平比正常对照者高，且差异有统计学意义（P < 0.01）。

结论：炎性细胞因子在系统性红斑狼疮发病过程中发挥一定的作用。

【关键词】红斑狼疮，系统性；IFN-γ；IL-6；IL-8；IL-10；IP-10；TNF-α；液相芯片SLE）是一种常见的自身免疫性疾病，主要特点是自身反应性T细胞活化以及Th细胞辅助的自身反应性B细胞多克隆激活，导致大量自身抗体产生，循环免疫复合物增多。

目前，对于SLE 自身免疫异常的机制尚不明确。

以往的研究证实：SLE 患者体内存在细胞因子谱的偏移，无论是作为Th2 细胞因子的白细胞介素（IL）-6和IL-10，还是作为Th1 型细胞因子γ干扰素（IFN-γ）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α），都可能从不同的角度参与了SLE发病的病理机制。

本研究利用液相芯片技术一次同时检测6种细胞因子[IFN-γ、IL-6、IL-8、IL-10、γ干扰素诱导蛋白（IP）-10和TNF-α]在SLE患者中的血清水平，并分析了其与SLE的临床特征如抗dsDNA抗体、抗核小体抗体、C3、C4、蛋白尿及系统性红斑狼疮疾病活动性指数（SLE disease activity index，SLEDAI）的相关性。

1 临床资料1.1 一般资料选取在本院就诊的诊断为SLE的患者79例设为SLE组，其中女76例，男3例；平均年龄（34.41±9.41）岁；平均病程（6.91±6.19）年。

系统性红斑狼疮

系统性红斑狼疮旳诊疗
• 美国SLE诊疗原则(美国风湿病学会1982年修订)
• 颊部红斑 • 盘状红斑 • 光过敏 • 口腔溃疡 • 关节炎 • 浆膜炎 • 肾脏病变 • 神经系统异常 1)癫痫 2)精神病 • 血液学异常 • 1)溶血性贫血伴网织红细胞增多；2)白细胞降低,<4 000/mm3；3)淋巴细
Erythematous raised patches with adherent keratotic scaling and follicular plugging: atrophic scarring may occur in older lesions
Photosensitivity
Skin rash as a result of unusual reaction to sunlight, by patient history or physician observation
心血管
以心包炎最多见。严重者可有心肌炎、心力衰竭。周围血管病变如血栓性静脉炎亦多见。
肺
胸膜炎约35%，多为中档量胸腔积液，双侧多见。间质性肺炎最多见。严重者可出现出神经系统最多见。精神障碍及行为异常，可出现幻觉、猜疑、妄想等。癫痫发作。其他如偏瘫、脊髓炎、颅神经及周围神经病变等。
Oral ulcers
Oral or nasopharyngeal ulceration, usually painless, observed by a physician
Nonerosive arthritis
Involving 2 or more peripheral joints, characterized by tenderness, swelling, or effusion

系统性红斑狼疮抗体谱各项意义

系统性红斑狼疮抗体谱各项意义抗rRNP抗体：高滴度的抗rRNP抗体是混合性结绨组织病（MCTD，夏普综合征）的标志，阳性率95-100%，抗体滴度与疾病活动性相关。

在30-40%的系统性红斑狼疮患者中也可检出抗U1-rRNP抗体，但几乎总伴有抗Sm抗体。

抗Sm抗体：系统性红斑狼疮的特异性抗体，与抗dsDNA抗体一起，是系统性红斑狼疮的诊断性指标，但阳性率仅为5-10%。

抗SS-A抗体：与各类自身免疫性疾病相关，最常见于干燥综合征（40-80%）、也见于系统性红斑狼疮（30-40%）和原发性胆汁性肝硬化（20%）中，偶见于慢性活动性肝炎。

此外，在100%的新生儿红斑狼疮中抗SS-A抗体阳性。

该抗体可经胎盘传给胎儿引起炎症反应和新生儿先天性心脏传导阻滞。

抗SS-B抗体：几乎仅见于干燥综合征（40-80%）和系统性红斑狼疮（10-20%）的女性患者中，男女比例为1：29。

在干燥综合征中抗SS-A抗体和抗SS-B抗体常同时出现。

抗Scl-70抗体：见于25-75%的进行性系统性硬化症（弥散型）患者中，因实验方法和疾病活动性而异（Scl硬化症）。

在局限型硬化症中不出现。

抗Jo-1抗体：见于多肌炎，阳性率为25-35%。

常与合并肺间质纤维化相关。

抗dsDNA抗体：对系统性红斑狼疮具有很高的特异性。

除抗Sm抗体外，抗dsDNA抗体也可作为该病的一个血清学标志，阳性率为40-90%，并且抗dsDNA抗体滴度与疾病的活动度相关，可用于疗效监控。

抗核小体抗体：在系统性红斑狼疮患者血清中的阳性率为50-95%，特异性几乎为100%。

核小体是细胞染色体的功能亚单位，由DNA和组蛋白以特殊的方式组成。

抗核小体抗体比抗dsDNA抗体、抗组蛋白抗体更早出现于系统性红斑狼疮的早期，在系统性红斑狼疮的诱导和致病中有重要作用。

临床资料显示，有15-19%的抗dsDNA抗体阴性的SLE患者中抗核小体抗体阳性。

因此联合检测抗dsDNA及抗核小体抗体可提高SLE血清学检出率。

系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞CX3CR1趋化因子受体mRNA的表达

第ｌ９卷第１期
２００９年１月
江苏大学学报（学版）医
ＪｕａｏｉｇｕＵｉｒｔ（ｄｃｅＥｉｏ）ｏｒｌｆＪｎｓｎｖｓｙＭｅｉｉｄｉｎａｅｉｎｔｎ
Ｖｏ１９Ｎｏ．．１１
Ｊｎ０９ａ．２０
系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞Ｃ３ＲＸＣ１趋化因子受体ｍＲＡ的表达Ｎ
李遇梅姚煦敏李安生，，陈，，高建明，杨桂兰，陈志强
（．１江苏大学附属医院皮肤科，江苏镇江２２０；．中国医学科学院、１０１２中国协和医科大学皮肤病研究所，江苏南京２０４３１０２；．北京市海
［关键词］趋化因子受体，ＸＣ１红斑狼疮，Ｃ３Ｒ；系统性－夕周血单一核细胞［中图分类号］Ｒ９．４５３２１［文献标志码］Ａ［文章编号］１７ — ７３２ｏ）１— ００— ４６１７８（０９００１０
＝
０４５ｔ４５３Ｐ＜．０）．４，＝．２，００１。③不具有血管炎、肌炎、肾损及血小板减少的患者与具有上述相应临床特征的高，Ｃ３ＲｍＮ差异具有统计学意义。结论：ＸＣ１ＮＣ３ＲｍＲＡ表达水平在活动期ＳＥ比非活动期增Ｌ高，与疾病的活动性（ＬＤＩ呈正相关。Ｃ３Ｒ１ＳＥＡ）ＸＣ可能反映疾病的活动性、参与特异器官受累的发生。
ＡａｅｙｏｅｉｌｃｅｃｓＰｋｎｎｏｄｃｌｏｅｅａｊｇＪｎｓ１０２３ｅａｔｎｆｅｍａｌｙａｉｎＨｏｐｔ，ｃｄｍｆＭｄｃｉｅ＆ｅｉｇＵｉｎＭｅｉｌｇ，Ｎｎｉｉｇｕ２０４，．Ｄｐｒｔｒｔｏ，ＨｉａｓｉａＳｎａＣｌｎａｍｅｏＤｏｇｄｌａＢｉｎ０００４ｅａｍｎｆｅｍａｌｇ，ＰＪＧｎｒｓｉｌａｚｏｌａｙＣｍｍｎ，ａｚｏａｓ３０，ｈｎ）ｅｉｇ１０８；．Ｄｐｒｅｔｒｔｏｙ『ｅｅａＨｏｐｔ，ＬｎｈｕＭｉｔｏａｄＬｎｈｕＧｎｕ７￣５ＣｉａｊｔｏＤｏＡｌａｉｒ

IRF7表达与系统性红斑狼疮的相关性

IRF7表达与系统性红斑狼疮的相关性缪倩;唐元家;黄新芳;钱晓霞;黄秀琴;沈南【摘要】探讨了干扰素调节因子7(IRF7)的表达与中国汉族人群系统性红斑狼疮(SLE)的相关性.运用实时荧光定量聚合酶链式反应的方法分别测定疾病患者与正常对照组外周血IRF7 mRNA的表达水平,并与血清中干扰素水平、干扰素积分以及SLEDAI积分作相关性分析.结果发现,患者外周血IRF7 mRNA的表达水平较正常对照组的明显增高,且其与血清中干扰素水平、干扰素积分以及SLEDAI积分均呈正相关.由此可知,IRF7表达的增高可能促使干扰素通路异常激活,从而导致系统性红斑狼疮的发生.【期刊名称】《华东师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2010(000)004【总页数】7页(P111-117)【关键词】系统性红斑狼疮;干扰素调节因子7;表达【作者】缪倩;唐元家;黄新芳;钱晓霞;黄秀琴;沈南【作者单位】华东师范大学,生命科学学院,上海,200062;上海交通大学医学院附属仁济医院,风湿病科,上海,200001;中国科学院,上海生命科学研究院健康科学研究所,分子风湿病学研究组,上海,200025;上海交通大学医学院附属仁济医院,风湿病科,上海,200001;中国科学院,上海生命科学研究院健康科学研究所,分子风湿病学研究组,上海,200025;华东师范大学,生命科学学院,上海,200062;中国科学院,上海生命科学研究院健康科学研究所,分子风湿病学研究组,上海,200025;上海交通大学医学院附属仁济医院,风湿病科,上海,200001【正文语种】中文【中图分类】R593.241Abstract:To exp lo re the relationship between the exp ressions of interferon regulato ry factor 7(IRF7)and the pathogenesis of SLE in Chinese Han coho rt,the IRF7 m RNA exp ression levels in peripheral blood of patients and no rmal individuals were tested by using real-time quantitative PCR technique,and then were compared with the IFN level in serum,IFN sco re and SLEDA I score.It is demonstrated that the exp ression levelof IRF7 m RNA in SLE patients is significantly increased,and is positively correlated with the IFN level in serum,IFN sco re and SLEDA I score.So it is concluded that the increase of IRF7 exp ression may excessively activate the inter-feron pathway and lead to SLE.Key words:systemic lupus erythematosus; interferon regulation facto r 7; exp ression系统性红斑狼疮(Systemic Lupus Erythematosus,SLE)作为一种多病因的异质性疾病,因其自身免疫异常,表型丰富,且多器官受累,几乎覆盖整个免疫系统,故而被认为是自身免疫病的原型.现有研究显示,干扰素调节通路在系统性红斑狼疮发病中起了重要的作用,该通路异常激活是SLE一个主要的分子表型.干扰素(interferon,IFN)是一类能够抵抗病毒感染,抑制细胞周期和行使免疫调节功能的细胞因子.而干扰素调节因子(interferon regulation factor,IRF)则是一类能对干扰素基因表达进行调控的多功能转录因子[1].目前已发现参与多种生物学过程的 IRF家族有9个成员,即IRF1,IRF2,IRF3,IRF4/Pip/ICSA T,IRF5,IRF6,IRF7,IRF8/ICSBP和IRF9/ISGF3γ.其中 IRF4和 IRF8在 SLE患者外周血存在异常表达[2],且IRF5与疾病发病相关[3,4].因此,对诱导IFN表达最主要的调节因子——IRF7的研究将有助于进一步探索其在SLE发病机制中的作用.1.1 研究对象本研究中国人群中,110例散发性SLE患者样本均来源于上海市风湿病研究所的DNA标本库,患者的诊断均符合美国风湿病协会(ARA)1982年修订的分类标准,其中男12例,女98例,年龄12～74岁,平均年龄(38±3)岁.39例正常对照样本均来自仁济医院体检正常、年龄性别相匹配的正常人群.1.2 实验方法1.2.1 RNA抽提及逆转录反应正常对照与患者均采集1 mL外周血,以枸橼酸葡萄糖(acid citrate dextrose,ACD)抗凝,经草酸胺法裂解红细胞后收集白细胞.根据 Trizol Reagent(Invitrogen公司)的酚氯仿法抽提RNA后,使用Superscrip tⅡ逆转录酶试剂盒(Invitrogen公司)逆转录为cDNA.逆转录过程为:RNA 8μL,oligo d T 1μL,dN TP 4μL混合液于65℃反应5 min;快速置冰上后加入5×FSBuffer 4μL,0.1 mol/L DTT 2μL,于42 ℃反应2 min;再加入1μL的SSRT Ⅱ,于42℃反应50 min,70℃反应15 min.1.2.2 引物设计IRF7基因 TaqM an表达分析引物由AB I公司设计并合成(编号为 Hs0*******_g1).4个干扰素调节基因:淋巴细胞抗原6(lymphocyte antigen 6 comp lex,locus E,Ly6e)、黏液病毒抗性因子1(myxovirus resistance 1,M X1)、干扰素诱导蛋白1(interferon-induced p rotein w ith tetratricopep tide repeats 1,IFIT1)和干扰素诱导蛋白4(IFIT4),其 m RNA序列由NCBI(http:∥www.ncbi.nlm.ni /)网站查得,并以Oligo 6.0软件设计引物.内参照基因核糖体蛋白L13a(Ribosomal Protein L13a,RPL 13a)的引物序列由Quantitative PCR Primer Database(QPPD)网站查得.干扰素调节基因及内参照基因引物由上海生工生物技术有限公司合成.引物保存浓度为100 pmol/μL,工作浓度为10 pmol/μL.各基因引物序列见表1.1.2.3 实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative PCR)反应体系总体积为5μL,其中SYBR Green M aster M ix 2.5μL,ROX 0.1μL,正向引物0.1μL,反向引物0.1μL,cDNA模板1μL,去离子水1.2μL.实时荧光定量PCR于AB I Prism 7 900测序仪(App lied Biosystem s公司)上进行,循环设置为95℃15 s;95℃5 s,60℃30 s(共40个循环).1.3 数据分析1.3.1 m RNA表达水平应用SDS 2.1软件对测序仪收集检测的荧光信号进行分析,获得CT值,并以计算所得标准化后的2-ΔΔCT[ΔΔCt=(各样本 CT值 -内参照基因 RPL13a的 CT值)-板间对照ΔCT值]表示m RNA的相对表达含量.1.3.2 血清中干扰素水平运用酶联免疫吸附实验(EL ISA)的方法对SLE患者血清中干扰素的水平进行检测.1.3.3 干扰素积分(IFN score)与狼疮活动积分(SLEDA I score)根据已知公式[5],选用Ly6e,M X1,IFIT1和IFIT4四个干扰素诱导基因来计算IFN 积分.公式如下:公式中,i为Ly6e,M X1,IFIT1及IFIT4四个干扰素诱导基因之一,Gene iSLE为每一SL E患者该基因的表达水平,Gene ictr为正常对照组该基因的表达水平.根据医院常规方法测定的各项生理生化指标,以评分标准量化评分可得SLEDA I积分[6].该积分可作为SLE疾病活动性判断的依据.1.3.4 统计学分析应用 GraphPad Prism 4.03软件对所得数据进行统计分析.数据以 x-±s表示,两组独立样本间数据比较运用非参数检验,变量间的相关分析运用Spearman相关性检验,且以P<0.05为差异有统计学意义.2.1 SLE患者与正常对照组IRF7 m RNA表达水平比较SLE患者外周血 IRF7 m RNA表达水平0.84±1.30明显高于正常对照组0.27±0.35,差异具有统计学意义(P=0.011 8)(见图1).2.2 IRF7 m RNA表达水平与血清中干扰素水平通过对SLE患者血清进行检测,发现其中干扰素的表达水平为368.82±211.85.患者外周血IRF7 m RNA表达水平与血清中干扰素水平呈正相关性r=0.3518,P=0.004 4(见图2).2.3 IRF7 m RNA表达水平与干扰素积分的相关性通过对SLE患者以及正常对照组外周血4个干扰素诱导基因m RNA表达水平的检测,得出干扰素积分.SLE患者中IFN积分为14.95±27.95,正常对照组中则为0±3.50.患者外周血 IRF7 m RNA表达水平与IFN积分呈正相关性(r=0.4306,P=0.000 4)(见图 3).2.4 IRF7 m RNA表达水平与SLE疾病活动度的相关性通过依照评分标准对医院常规方法测定的相关生理生化指标进行量化评分,得出可作为疾病活动性依据的狼疮活动积分.SLE患者中,SLEDA I积分为4.47±5.30.患者外周血IRF7 m RNA表达水平与SLEDA I积分呈正相关性(r=0.325 5,P=0.010 5)(见图4).系统性红斑狼疮是一种以免疫性炎症为突出表现、以血清中出现大量针对自身组织成分的抗体为显著特征的弥漫性结缔组织病.由于该疾病自身免疫异常表型丰富,几乎覆盖整个免疫系统,包括:免疫耐受缺损,淋巴细胞凋亡障碍,T、B细胞功能调节障碍,N K细胞功能缺损,补体缺陷,免疫复合物清除障碍,细胞因子分泌调节障碍等等,故而被认为是自身免疫病的原型.虽然系统性红斑狼疮这一代表性自身免疫病的发病机制多年来仍未完全阐明,但越来越多的研究结果显示:系统性红斑狼疮患者血清中Ⅰ型干扰素表达水平明显增高,且与抗双链DNA抗体滴度、补体、免疫复合物水平及面部红斑、发热等提示疾病活动的指标密切相关;一些本身不伴有自身免疫性疾病的患者在经过IFN-α治疗后可能也会出现抗核抗体、抗双链DNA抗体,甚至SLE综合症;狼疮动物模型中,多个狼疮候选基因位点为干扰素诱导相关基因;系统性红斑狼疮病人存有的独特的干扰素标签现象,即患者血细胞内一组干扰素调节基因在狼疮中表达异常升高,且其与狼疮疾病的活动也有一定关联.这些证据皆有力地提示了干扰素调节通路在系统性红斑狼疮发病中起了重要的作用,该通路异常激活是SLE一个主要的分子表型[7,8].干扰素(interferon,IFN)是一类能够抵抗病毒感染,抑制细胞周期和行使免疫调节功能的细胞因子.而干扰素调节因子(interferon regulation factor,IRF)则是一类能对干扰素基因表达进行调控的多功能转录因子.干扰素调节因子家族已发现有9个成员,即 IRF1,IRF2,IRF3,IRF4/Pip/ICSA T,IRF5,IRF6,IRF7,IRF8/ICSBP 和I RF9/ISGF3γ,参与多种生物学过程,在干扰素转录调控、病原体免疫反应、细胞因子信号转导、细胞增殖调控和造血干细胞的发育、淋巴细胞的分化、自稳平衡过程,以及先天性免疫和适应性免疫调控等方面都有着重要的作用,而IRF7则被证实是诱导IFN表达的最主要的调节因子[9,10].现今,对于 Toll样受体(Toll like recep tor,TLR)-Ⅰ型干扰素信号通路的研究已成为热点[11,12].关于pDC表面的 TLR9亚家族成员(TLR7-9)激活后诱导产生高水平IFN-α/β的机制受到普遍关注[13],而在 TLR7/TLR9介导的 IFN-α/β高水平表达的通路,即依赖于髓样分化因子88(M yeloid differentiation factor 88,M yD88)的经典途径中 IRF7可能起着重要的作用[14,15].同时,IRF7是病毒感染时诱导IFN-β产生的必要成分,由此推测 IRF7参与视黄酸诱导基因Ⅰ(Retinoic Acid-Inducible GeneⅠ,RIG-Ⅰ)的信号转导途径诱导 IFN-β的表达[16,17].IRF7信号传导途径具有细胞特异性:TLR主要在pDC中诱导 IFN-α/β的高表达,可能与全身性IFN产生有关;RIG-Ⅰ主要在非免疫细胞如成纤维细胞和cDC中诱导IFN-α/β,可能与局部IFN的产生有关.此外,研究也证实细胞在未受刺激时可表达低水平的IRF7,诱导产生一定水平的IFN.而其在pDC中以及病毒感染时均存在一定的正反馈调节途径,即通过信号转导途径激活IRF7后诱导表达的IFN-β可进一步诱导IRF7表达,进而继续参与 IFN-α/β的产生分泌[18].本研究通过测定、比较系统性红斑狼疮患者组与正常对照组人群中IRF7 m RNA 的表达水平,发现其在患者组中明显升高,由此推测IRF7 m RNA表达的上升与系统性红斑狼疮疾病的发生之间有关联.进而通过将所测定的患者血清中干扰素水平与IRF7 m RNA的表达水平进行相关性分析,发现两者间呈一定的相关性.图2中所表现的趋势不甚明显,可能是由于个别患者存在的个体差异较大,使得结果中有些数据偏离较大;并且 IRF7基因实际上存有3种剪切体形式,而不同剪切体的表达可能对血清中干扰素水平的影响程度不同或者相互干扰,使得所测IRF7总的表达水平不能很好地反映与血清中干扰素水平的相关程度.另外,通过测定患者与正常对照组人群的4个干扰素调节基因的表达水平,计算干扰素积分,并将其与IRF7的表达水平进行相关性分析.发现IRF7 m RNA的表达水平与干扰素积分之间均呈正相关性.现有的研究结果已经发现,干扰素诱导基因在系统性红斑狼疮患者中的表达水平显著上升,依此计算得出的干扰素积分在患者中也显著升高,且其升高程度与疾病的活动度和脏器受累的损害程度之间呈正相关性[19,20].由此进一步验证了IRF7表达的上升使得干扰素通路异常过度活化,从而促使了系统性红斑狼疮的发生.此外,通过将IRF7 m RNA的表达水平与SLEDA I积分进行相关性分析,发现其与SLEDA I积分之间也呈正相关性.SLEDA I积分是医院常规方法测定的各项相关生理生化指标,根据一定的评分标准,进行量化评分所得到的,该积分能够在一定程度上反映疾病的活动度.由此可知,IRF7基因m RNA表达水平的异常不仅影响着系统性红斑狼疮的发生与否,也影响着疾病的严重程度.对于系统性红斑狼疮这一自身免疫病代表的研究日趋完善.在不断探索导致该疾病发生的种种因素中,人们逐渐关注于干扰素通路.干扰素通路中已有部分基因被发现与系统性红斑狼疮有关联,例如IRF5至少有2种单核苷酸基因多态性与SLE的高发相关;TLR7及干扰素通路参与SLE病理过程等.基于此,本研究在干扰素通路中首次选择了被认为是干扰素表达最主要调节因子的IRF7基因作为目标基因,将该基因的表达直接与系统性红斑狼疮这一疾病的病程相关联,结果发现两者间具有一定的相关性,由此在理论上进一步完善了IRF7基因所在干扰素通路的具体形态,证实了其对SLE发病有着举足轻重的作用,也为SLE这一自身免疫病的临床治疗提供了又一个可能的切入点.但是,由于IRF7基因本身序列比较复杂,相信今后对该基因本身存在的多态性的研究会进一步揭示其对于系统性红斑狼疮发生发展所起的重要作用.【相关文献】[1]PAUN A,PITHA PM.The IRF family,revisited[J].Biochimie,2007,89(6-7):744-753.[2]钱捷,沈南,郭桂梅,等.系统性红斑狼疮患者干扰素调节因子IRF1 IRF4 IRF8基因表达的研究[J].中华风湿病学杂志,2006,10(9):513-516.Q IAN J,SHEN N,GUO G M,et al.The exp ression of interferon-regulato ry facto r genes in patients w ith systemic lupuserythematosus[J].Chinese Journal of Rheumatology,2006,10(9):513-516.[3]GRAHAM R R,KOZYREV SV,BAECHLER E C,et al.A common hap lotype of interferon regulato ry facto r 5(IRF5)regulates splicing and exp ression and is associated with increased risk of systemic lupus erythematosus[J].Nat Genet,2006,38(5):550-555.[4]KELL Y J A,KELLEY JM,KAUFMAN K M,et al.Interferon regulato ry factor-5 is genetically associated w ith systemic lupus erythematosus in African Americans[J].GenesImmun,2008,9(3):187-194.[5]FENGB,WU H,HAHN B H,et al.Association of increased interferon-inducible gene exp ression w ith disease activity and lupus nephritis in patients w ith systemic lupus erythematosus[J].A rthritis Rheum,2006,54(9):2951-2962.[6]BOMBARD IER C,GLADMAN D 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nlrc4基因名

NLRC4基因名引言NLRC4基因是人类基因组中的一个基因，它在免疫系统中起着重要的作用。

本文将深入探讨NLRC4基因的功能、调控机制以及与疾病的关联。

NLRC4基因的功能NLRC4基因编码NOD样受体（NLR）家族的一员，它是一种细胞内受体，能够感知细胞内的病原体和异常信号。

NLRC4蛋白含有一个NACHT结构域和多个LRR结构域，这些结构域使其能够与其他蛋白相互作用，从而启动免疫反应。

NLRC4基因主要通过激活炎症信号通路来发挥作用。

当细胞内出现异常信号或病原体时，NLRC4蛋白会聚集形成一个复合物，该复合物能够激活半胱氨酸蛋白酶CASPASE-1，进而引发炎症反应。

这种炎症反应有助于清除病原体和异常细胞，维护机体的健康状态。

NLRC4基因的调控机制NLRC4基因的表达受到多种调控机制的影响。

其中，转录因子NF-κB在NLRC4基因的表达中起着重要的作用。

NF-κB可以结合到NLRC4基因的启动子区域，促进其转录。

此外，一些miRNA分子也能够通过与NLRC4 mRNA结合来调控其稳定性和翻译。

此外，一些环境因素也能够影响NLRC4基因的表达。

例如，炎热的环境温度可以促进NLRC4基因的表达，从而增强免疫反应。

研究还发现，饮食中的一些成分，如多不饱和脂肪酸和维生素D，也可以调节NLRC4基因的表达。

NLRC4基因与疾病的关联NLRC4基因的突变与多种疾病的发生发展密切相关。

研究发现，NLRC4基因突变可导致家族性冷凝集素相关性综合征（FCAS）的发生。

FCAS是一种遗传性炎症性疾病，患者常常出现周期性发作的发热、关节疼痛和皮肤病变等症状。

NLRC4基因突变导致NF-κB信号通路的异常激活，从而引发炎症反应。

此外，NLRC4基因突变还与其他一些自身免疫性疾病的发生相关。

例如，风湿性关节炎和系统性红斑狼疮等疾病患者中NLRC4基因突变的频率明显增加。

这些突变可能导致免疫系统的失衡，从而引发慢性炎症和组织损伤。

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