应用PCR技术快速检测马铃薯环腐病菌

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马铃薯病毒的RT-PCR检测技术评述

马铃薯病毒病是马铃薯上非常重要的一类病害，
马铃薯病毒检测的方法主要是酶联免疫吸附法（ＬＳ，虽然ＥＩＡ比传统的生物学检测方法灵ＥＩＡ）ＬＳ
分布于世界各马铃薯种植区，病毒的侵染除直接引起马铃薯病毒病外，更重要的是导致种质退化，引起产量的急剧下降。在我国各马铃薯主产区均有马铃薯病毒病的发生，成为制约马铃薯生产的主要因素之一。目前已报道的感染马铃薯的病毒多达３５种，类病毒１，以马铃薯命名的病毒就有１种。种５
关键词：马铃薯病毒；Ｒ－Ｃ；ＴＰＲ检测；问题与对策
ＲＴ— ＰＣＲｔｃｉｎＴｅｈｏｏｙｆｒｔｔｒｓｓＤｅｅｔｃｎｌｇｏａｏＶｉｅｏＰｏｕ
ＷＵＸｉｇａ仙，ｎｑｕｎＳＨＩｎ，Ｙａ ’ＹＡＮＧｎｄｎＬｉｇＱｉｇｏｇ，ＩＧｕｌ ’ ｉｎ
（．ｏ￣ｅｏｉｔｃｎｌｇ，ｅａｎｖｒｉｆｅｈｏｏｙＺｅｇｈｕＨｎｎ４００，ｉａ２ＧｒａｏｔｅｎＷｉｅｎｓｏａｏ１ＣｌｆｏｅｈｏｏｙＨｎｎＵｉｓｙｏｃｎｌｇ，ｈｎｚｏ．ｅａ５０１Ｃｈｎ；．ｅｔｒｒｌｒｅｓＰｔｔＢｅｔＴＮｈｄ
率，而且降低检测成本，因此ＨＲ－Ｃ卜ＴＰＲ技术将是Ｒ－ＣＴＰＲ检测技术真正投入实际应用的发展方向。
铃薯样本带毒，反之，为健康样本，从而完成对待测样本带毒情况的判断。马铃薯病毒的常规Ｒ — ＣＴＰＲ检测一般包括：待测马铃薯样本中病毒ＲＡ的提取、反转录合成ＮｃＮ、ＰＲ扩增靶ｃＮＤＡＣＤＡ片段和ＰＲ产物的电泳Ｃ

RT-PCR技术及其在马铃薯病毒检测中的应用

南
方
Agricultu re
第1卷第6期
V ol.1 N o .6
2007 年11 月
Nov. 2007
S o u th C h in a
专题论述
同时检测多个目的片段。多重RT-PCR一次反应即可以检测出多个不同的病原物，效率要比普通PCR 高得多。但
保守序列，对于株系间分子变异大的病毒应注意。如对同种病毒的不同株系进行检测，则应选择该株系的特异
专题论述
南
方
农
业
第1 卷第6期
V o l.1 N o .6
2007 年 11 月
Nov . 2007
South China Agriculture
RT-PCR 技术及其在马铃薯病毒检测中的应用
冯众‘ 何建2 聂振朋3，于莉娟‘ ，，桑有顺’ (‘ 成都市农林科学院作物研究所，成都611130; 2 四川省农业科学院园艺研究所
黑条矮缩病毒，结果显示RT-PCR是斑点杂交法灵敏度的10倍。陈建军等[3 ]比较RT-PCR, IC-RT-PCR和DAS究进展很快。吴兴泉[ 1 [ 等利用RT-PCR技术扩增得到了 6
PVX cp基因，并进行序列测定，同时采用RT-PCR 方法 ELISA (Double antibody sandwich enzyme-linked 和核酸斑点杂交(NASH)方法对PVX进行了分子检测， immunosorbent assay) 3种测萄叶毒I 的检葡卷病 II 方建立快速、灵敏、特异的PVX分子鉴定与检测技术。俞法，显示RT-PCR可用来检测病毒含量极低的或其它两键[7等对传统的马铃薯病毒RNA苯酚提取法进行改进， 1 种方法无法检测出的病毒，在灵敏性和可靠性上均为最同时设计优化单管RT-PCR方法，依据PVY和PVS的基佳。唐科志等(4利用一步法RT-PCR技术检测柑橘裂皮因组保守序列设计2套特异性引物， 1 对染病的马铃薯叶病类病毒，经过与生物学鉴定和聚丙烯酞胺凝胶电泳片组织进行检测，结果证明这种新型马铃薯病毒诊断方 (PAGE)方法的比较，表明RT-PCR方法检测周期短、灵法具有可靠、快速、便等简特点。关翠萍 1 [8运用一步法敏度高，有利于对类病毒在春季和冬季浓度低时进行快 RT-PCR对马铃薯和烟草中的PVX, PVY和PLRV进行了速准确的检测。检测，其灵敏度较两步法RT-PCR高100倍左右，建立了

马铃薯六种主要病毒通用RT-PCR检测体系的建立

马铃薯六种主要病毒通用RT-PCR检测体系的建立张威;白艳菊;景芝;范国权;高艳玲;申宇;张抒;孟宪欣;王军【摘要】马铃薯X病毒（PVX）、马铃薯Y病毒（PVY）、马铃薯S病毒（PVS）、马铃薯卷叶病毒（PLRV）、马铃薯M病毒（PVM）和马铃薯A病毒（PVA）是马铃薯生产田中发生率较高、危害较严重的病毒，因此，建立特异性强、灵敏度高、检测速度快的RT-PCR分子检测体系对保障马铃薯种薯质量具有非常重要的意义。

试验筛选了6种病毒的特异引物、优化了PCR部分的试剂以及确定了退火温度。

结果表明，当Mg2+浓度为2.6 mmol/L、dNTPs浓度为0.1mmol/L、Taq DNA聚合酶浓度为0.03 U/μL，以及退火温度为55.5℃时反应体系最稳定。

最终，建立了一套通用RT-PCR检测体系，只需要变换每种病毒的引物，就可以实现对PVX、PVY、PVS、PLRV、PVM和PVA病毒的RT-PCR检测。

每种病毒检测灵敏度均能达到pg以上。

%The higher incidence and more serious viruses in potato fields are potato virus X (PVX), potato virus Y (PVY), potato virus S (PVS), potato leafroll virus (PLRV), potato virus M (PVM), and potato virus A (PVA), so it is very important to guarantee the quality of seed potato by establishment of RT-PCR molecular detection system with specificity, high sensitivity and fast detection speed for these viruses. In this research, the primer for each virus was screened, PCR reagents were optimized, and annealing temperature was determined. The results indicated that when the concentration of Mg2 + was 2.6 mmol/L, dNTPs was 0.1 mmol/L, Taq DNA polymerase was 0.03 U/μL, and annealing temperature was 55.5℃, the reaction system was the most stable. Finally, a universal RT-PCR detection system was established, which only need tochange primer for each virus when the RT-PCR detection for PVX, PVY, PVS, PLRV, PVM and PVA was needed. The detection sensitivity of each virus could reach the level of pg.【期刊名称】《中国马铃薯》【年(卷),期】2015(000)004【总页数】6页(P222-227)【关键词】马铃薯;PVX;PVY;PVS;PLRV;PVM;PVA【作者】张威;白艳菊;景芝;范国权;高艳玲;申宇;张抒;孟宪欣;王军【作者单位】黑龙江省农业科学院植物脱毒苗木研究所，黑龙江哈尔滨 150086;黑龙江省农业科学院植物脱毒苗木研究所，黑龙江哈尔滨 150086;东北农业大学农学院，黑龙江哈尔滨 150030;黑龙江省农业科学院植物脱毒苗木研究所，黑龙江哈尔滨 150086;黑龙江省农业科学院植物脱毒苗木研究所，黑龙江哈尔滨150086;黑龙江省农业科学院植物脱毒苗木研究所，黑龙江哈尔滨 150086;黑龙江省农业科学院植物脱毒苗木研究所，黑龙江哈尔滨 150086;黑龙江省农业科学院作物育种研究所，黑龙江哈尔滨 150086;北大荒垦丰种业股份有限公司，黑龙江哈尔滨 150090【正文语种】中文【中图分类】S532马铃薯是世界上最重要的粮食作物之一，具有分布范围广、适应性强、产量高、用途广等特点。

免疫试纸条结合RT-PCR法快速检测马铃薯Y病毒

免疫试纸条结合RT-PCR法快速检测马铃薯Y病毒摘要：利用马铃薯Ｙ病毒免疫试纸条，对ＰＶＹ进行了快速检测，结果表明，试纸在２ｍｉｎ内，可特异性检出ＰＶＹ，而健康的叶片无反应。

刮下试纸条上显示的检测带，进行ＲＴ－ＰＣＲ，能扩增到与预期大小相同的ＤＮＡ条带，是对快速检测试纸条检测结果的验证。

关键词：马铃薯Ｙ病毒；免疫试纸条；ＲＴ－ＰＣＲ中图分类号：Ｓ４３２．４＋１；Ｑ５０３文献标识码：Ａ文章编号：0439－８11405－1056-02ＴｈｅＲａｐｉｄＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＰｏｔａｔｏＶｉｒｕｓＹｂｙＩｍｍｕｎｏｓｔｒｉｐＡｓｓａｙａｎｄＲＴ－ＰＣＲＺＨＵＹｕｎ－ｆｅｎ１，ＣＨＥＮＧＱｕｎ１，ＳＨＥＮＹａｎ－ｆｅｎ１，ＭＡＺｕｏ－ｊｉａｎｇ１，ＷＡＮＧＥｒ－ｈｕｉ１，ＷＥＩＫａｉ２Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＰｏｔａｔｏｖｉｒｕｓＹｗａｓｒａｐｉｄｌｙｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｉｍｍｕｎｏｓｔｒｉｐaｓｓａｙ，ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅＰＶＹｃｏｕｌｄｂｅｔｅｓｔｅｄｂｙｉｍｍｕｎｏｓｔｒｉｐｗｉｔｈｉｎ２ｍｉｎｕｔｅｓａｎｄｎｏ－ｓｐｅｃｉｆｉｃｒｅａｃｔｉｏｎｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｒｄｆｏｒｈｅａｌｔｈｙｌｅａｖｅｓ．ＲＴ－ＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｃｏｕｌｄｐｒｏｄｕｃｅａｓｐｅｃｉｆｉｃＤＮＡｂａｎｄｗｉｔｈａｎｅｘｐｅｃｔｅｄｓｉｚｅ，ｗｈｉｃｈｗａｓａｖａｌｉｄａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｉｍｍｕｎｏｓｔｒｉｐ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｐｏｔａｔｏｖｉｒｕｓＹ；ｉｍｍｕｎｏｓｔｒｉｐ；ＲＴ－ＰＣＲ我国是世界上马铃薯生产第一大国，近年来，马铃薯产业发展迅速，在国民经济增长中占有重要比重，但现阶段马铃薯整体生产水平低于世界平均水平［１］，其主要原因是受马铃薯病毒的影响。

马铃薯为营养体繁殖，病毒在寄主体内随继代繁殖而逐渐积累，导致马铃薯种性退化，产量严重降低，块茎大小、形状、口感等原有品质下降，影响马铃薯的商品性。

马铃薯软腐病菌的16SrDNA PCR检测

（）骤２步
① 培养５ｍＬ的细菌培养物至饱和状态，取
１Ｌ培养物离心２ｍｉ；．ｍ５ｎ
② 沉淀物加入５７Ｉ６Ｌ的Ｔ缓冲液，用吸管反ｘＥ
复吹打使之重悬。加入３Ｌ，１％的ＳＳ和３，０ｔｘ０ＤＬ２ｇｍＬ’ ０ｍ・－的蛋白酶Ｋ，混匀，于３ ℃温育ｌｈ７；
１方法
１供试菌株．１
③ 加入１０Ｉ，５ｍｌＬａ１０Ｌｏ・—ＮＣ，充分混匀，ｘ再加入８ＬＣＡ／ａＩ０ＩＴＢＮＣ溶液，混匀，于６℃温育ｘ５
１ｎ；０ｍｉ
供试菌株由甘肃农业大学植保系李金花老师提供。
收稿日期：２０ — ３００７０－９
从这一步开始可以除去多糖和其他污染的大分
子物质。．
基金项目：教育部国际合作项目：应用基因工程提高马铃薯加
工型品种的抗逆性作者简介：王敏（９０）１８一，女，研究实习员，主要从事植物生物技术育种。
④ 加入等体积的氯仿／异戊醇，混匀，离心４～５ｍｎｉ；将上清液转入一个新管中，如果难以移出
ＣＡＢＮＣ溶液；Ｔ／ａＩ２：的氯仿／醇；４１异戊
异丙醇；
７％乙醇。０
空间、灵敏度或特异性以及检测所需的时间等因素的限制，因此难以推广应用。随着聚合酶链式反应技术在ＤＡ水平上检测病菌方法的发展，本试验Ｎ应用１ＳＤＡＰＲ技术检测马铃薯软腐病菌，证６ｒＮＣ明其是有效、可靠的，本文将对这一研究方法及其结果作一个介绍。

【CN110129474A】一种利用多重PCR技术检测三种马铃薯病原菌的方法【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910380509.6(22)申请日 2019.05.08(71)申请人福建农林大学地址 350002 福建省福州市仓山区上下店路15号(72)发明人詹家绥　詹芳芳　王甜　汤一凡　(74)专利代理机构福州元创专利商标代理有限公司 35100代理人饶文君　蔡学俊(51)Int.Cl.C12Q 1/6895(2018.01)C12Q 1/686(2018.01)C12Q 1/04(2006.01)C12N 15/11(2006.01)C12R 1/645(2006.01)(54)发明名称一种利用多重PCR技术检测三种马铃薯病原菌的方法(57)摘要本发明公开了一种利用多重PCR技术检测马铃薯上三种病原菌的方法，属于生物检测技术领域。

该方法采用多重PCR一次性同时扩增致病疫霉、茄链格孢菌和立枯丝核菌AG3融合群三种病原菌的特异基因，再通过琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物。

包括如下步骤：（1）提取三种病原菌的基因组DNA；（2）分别设计三对扩增引物；（3）进行多重PCR反应；（4）电泳检测。

本方法采用多重PCR技术同时检测三种病原菌，具有高效、快速、节约时间、降低成本的优点。

权利要求书1页说明书6页序列表2页附图5页CN 110129474 A 2019.08.16C N 110129474A权　利　要　求　书1/1页CN 110129474 A1.一种利用多重PCR技术检测三种马铃薯病原菌的方法，其特征在于，采用多重PCR一次性同时扩增致病疫霉、茄链格孢菌和立枯丝核菌AG3融合群三种病原菌的特异基因，再通过琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物。

2.根据权利要求1所述的一种利用多重PCR技术检测三种马铃薯病原菌的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）模板的准备：分别提取致病疫霉、茄链格孢菌和立枯丝核菌AG3融合群三种病原菌的DNA；（2）设计扩增引物：分别设计三对用于扩增三种病原菌特异基因的引物；（3）多重PCR反应：利用步骤（1）的模板和步骤（2）的引物进行多重PCR反应；（4）琼脂糖凝胶电泳检测：对多重PCR反应的产物进行电泳，根据电泳图中目的条带的有无和目的条带的大小来判断样品中是否含有一种或多种病原菌。

应用PCR技术快速检测马铃薯环腐病菌

应用PCR技术快速检测马铃薯环腐病菌胡林双;何云霞;郭梅;王晓丹;闵凡祥【期刊名称】《中国马铃薯》【年(卷),期】2006(20)4【摘要】根据马铃薯环腐病菌16S rDNA基因片段核苷酸序列设计引物(引物1:5'-TGTACTCGGCCATGACGTTGG-3'和引物2:5'-TACTGGGTCATGTTGGT-3'),进行马铃薯环腐病菌PCR特异性扩增试验.合成的引物能从马铃薯环腐病菌总基因组DNA和细菌纯培养,以及人工接种和自然发病的马铃薯块茎中特异性扩增环腐病菌16S rDNA基因片段1046 bp.该试验结果为马铃薯环腐病的鉴定、检测及病害流行学研究提供了新的技术和方法.【总页数】3页(P197-199)【作者】胡林双;何云霞;郭梅;王晓丹;闵凡祥【作者单位】黑龙江省农业科学院植物脱毒苗木研究所,黑龙江,哈尔滨,150086;黑龙江省农业科学院植物脱毒苗木研究所,黑龙江,哈尔滨,150086;黑龙江省农业科学院植物脱毒苗木研究所,黑龙江,哈尔滨,150086;黑龙江省农业科学院植物脱毒苗木研究所,黑龙江,哈尔滨,150086;黑龙江省农业科学院植物脱毒苗木研究所,黑龙江,哈尔滨,150086【正文语种】中文【中图分类】S532【相关文献】1.应用RT-PCR技术快速检测马铃薯纺锤块茎类病毒 [J], 康哲秀;金顺福;姜成模;玄春吉;刘宪虎2.应用微滴数字PCR技术快速检测食用菌中沙门氏菌 [J], 赵新;兰青阔;陈锐;朱珠;刘娜;王永3.PCR技术在快速检测沙门氏菌中的应用分析 [J], 杨玲4.PCR技术在快速检测沙门氏菌中的应用 [J], 沈兰;王锐萍;史海涛;庞贤鹏5.食源性沙门氏菌Real-time PCR技术快速检测方法的建立及初步应用 [J], 李莉莉;单宏;张瑞英;黄翠因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

马铃薯三种主要病毒的ELISA和RT-PCR检测技术的研究

马铃薯三种主要病毒的ELISA和RT-PCR检测技术的研究马铃薯是世界上重要的食物作物之一，也是我国主要的经济作物之一。

然而，马铃薯生产中常常受到病毒的威胁。

病毒感染会导致马铃薯产量下降、品质降低甚至全面减产。

因此，准确快速地检测病毒感染对于指导马铃薯的种植和防控病害具有重要意义，可以提供科学依据、减少经济损失和保证农作物的质量安全。

马铃薯主要受到三种病毒的感染，分别是马铃薯病毒Y (Potato Virus Y, PVY)、马铃薯块茎坏死病毒 (PotatoVirus X, PVX)和马铃薯花叶病毒 (Potato Leafroll Virus, PLRV)。

传统的病毒检测方法包括生物学观察法、传统PCR等。

然而，这些方法存在耗时、复杂、低灵敏度等问题。

因此，研究人员对使用ELISA和RT-PCR等技术进行马铃薯病毒检测进行了深入研究。

ELISA法是一种高效的酶联免疫吸附法，利用抗原与特异抗体结合，通过比色反应检测样品中是否存在目标病毒。

ELISA方法具有高度敏感性和特异性，且结果易于观察和分析。

针对马铃薯病毒检测，研究人员首先制备了目标病毒的抗原，并将其与马铃薯样品中的病毒结合，然后添加酶标记的二抗，形成抗原-抗体-酶标记-底物复合物。

最后，通过添加酶底物，观察是否有颜色反应产生。

ELISA法不仅操作简便、检测速度快，而且可以批量检测多个样品。

但是，ELISA法的敏感性对样品前处理和样品质量要求较高。

与ELISA法相比，RT-PCR法可以在基因水平上对目标病毒进行检测。

RT-PCR法首先需要提取马铃薯样品中的总RNA，然后通过反转录将RNA转化为cDNA，再进行聚合酶链反应扩增。

PCR反应中使用特异引物，使得目标病毒的RNA序列扩增得到特异性产物，经过电泳分析可以确定是否存在目标病毒。

RT-PCR法具有快速、准确、高灵敏度和高特异性等优点，可以在较短的时间内对多个样品进行检测。

但是，RT-PCR法技术门槛较高，操作复杂，需要专业的实验室和设备。

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应用ＰＲ技术快速检测马铃薯环腐病菌— —胡林双，何云霞．郭Ｃ
梅，等
・９・１７
中图分类号：￥３５２
文献标识码：Ａ
文章编号：１７ — ６５２０）４０９ — ３６２３３（０６０ — １７０
马铃薯环腐病（ｏｔｒｇｒ）由ＬｖａｔＰｔｏｉｔ是ａｎｏａｉｃｒｂｅ
ｍｉｉａｅｓｕｓ．ｅｅｏｉｕ起的细菌性病ｃｇｎｎｉｓｂｐｓｐｄｎｃｓ引ｈｓ
收稿日期：２０ — ２２０６０— ２
害，它是马铃薯生产上危害最大的病害之一，在全国各地都有分布，每年都造成重大损失。近几年来，在全国马铃薯主产区环腐病普遍发生，危害日
Ａｂｔａｔｓｒｃ：ＲｅｉａｃｏｐｔｔｏｔｒｔｃｕｅｙＥｒｎａｃｒｔｖｒｓｔｓｅｏｕｅｓｏｅｒｐｏｄｓｓｎｅｔｏａｏｓｆｏａｓｄｂｗｉｉａｏｏｏａｗａｅｔｄｆｒｔｂｒｆｔｔａｌｉｔｐｔｔｅｅｖｄｆｏｌａｓｕｕｔｒｆｓｍａｉｙｒｄｅｗｅｎｔｔａｌｉｕｔａｅｏａｏａｄｄｐｏｄｗｉｏａｏｓｄｒｅｒｍｅｆｔｓｅｃｌｅｏｏｔｈｂｉｓｂｔｅｅｒｐｏｄｃｌｖｔｄｐｔｔｎｉｌｉｌｉｉｕｃｉｄｐｔｔｏａｕｂｅｉｅｓｎｅｔｐｏｄｐｔｔｅｅｉｅｏｂｃｃｏｓｏｈｏｔｙｒｓａｄｔｔａｌｉｏａｏＳｌｎｍｒｖｄｎ，ａｄｐｎａｌｉｏａｏｓｄｒｄｆｍａｋｒｓｆｔｅｓｍａｉｈｂｉｎｅｒｐｏｄｖｒｃｄｐｔｔｅ．ｈｅｕｔｈｗｄｔａｈｌｎｉｅＳ７ｒｇｎｒｔｄｆｏｌａｓｕｕｔｒｆｓｍａｉｙｒｓｈｄｏａｏｓＴｅｒｓｌｓｏｅｈｔｅｐａｔｎＣ１ｅｅｅａｅｍｅｆｔｓｅｃｌｅｏｏｔｈｂｄａｓｔｌ０ｒｉｕｃｉｈｇｅｅｉｔｎｅｔｏａｏｓｆｒｔＭｏｔｏｅｂｃｃｏｓｄｐｏｅｉｓｄｖｌｐｄｆｏｃｏｓｏｏｔｙｒｄｎｉｈｒｒｓｓｃｏｐｔｔｏｔｏ．ｓｆｔａｋｒｓｅｒｇｎｅｅｅｏｅｍｒｓｆｓｍａｉｈｂｓａｄａｈｒｃｉａｓｓｅｔｌｕｔａｅｏａｏｓｏｅｉｈｅｅｓｏｕｅｏｏｅｉｔｎｅｈｒｓｌｅｎｔａｅｈｔｕｃｐｉｅｃｌｖｔｄｐｔｔｈｗｄｈｇｌｖｌｆｔｂｒｓｆｒｔｒｓａｃ．ＴｅｅｕｔｄｍｏｓｒｔｄｔａｂｉｔｓｓｒｓｓａｃｏｐｔｔｏｏａｒｎｆｒｅｏＳｌｎｍｒｖｄ１ｏｔｅｃｌｖｔｄｐｔｔｅ．ｅｉｔｎｅｔｏａｏｓｆｒｔｗｓｔｓｅｒｄｆｍｏａｕｂｅｉｅ８ｔｈｕｔａｅｏａｏｓｔａｒ２ｉ
作者简介：胡林双（９７）１７一，男，硕士研究生，助理研究员，
从事马铃薯病害检测技术研究。
ＴｒｎｆｒｏｂｒＳｆｔＲｅｉｔｎｅｆｏｏａｕａｓｅｆＴｕｅｏｔＲｏｓｓａｃｒｍＳｌ：ｍｎｂｅｉｅｓｉｔｌｉａｅｔｔｙＳｍａｉｙｒｄｚｔｏｒｖｄｎｎｏＣｕｔｖｔｄＰｏａｏｂｏｔｃＨｂｉｉａｉｎ
应用ＰＲ技术快速检测马铃薯环腐病菌Ｃ
胡林双，何云霞，郭梅，王晓丹，闵凡祥
（龙江省农业科学院植物脱毒苗木研究所，黑龙江黑哈尔滨１０８５０６）
摘要：根据马铃薯环腐病菌１ＳｒＮ６ＤＡ基因片段核苷酸序列设计引物（引物ｌ：＇ＴＴＣＣＧＣＴ５－ＧＡＴＧＣＡ — ＧＣＴＧ一ＡＧｒＧ３和引物２：ｔＴＣＧＧＣＴＩＧ一，进行马铃薯环腐病菌ＰＲ特异性扩增试验。合成的引物５＿ＡＴＧＴ础研究发展规划（７）９３资助项目
（０１Ｃ０９０）２０ＣＣ２０
趋严重。环腐病主要通过种薯传播蔓延，而种薯带菌又是马铃薯环腐病历年发病和远距离传播的主要
侵染源，由此可见，控制种薯病原菌是防治环腐病蔓延的重要措施。马铃薯环腐病菌侵染在马铃薯块
Ｓ日配配。Ｚａｇ＾，，ＷａｇＤｉＣｎｅＡＪｉｎ，ｈｎｎ２ｏｎｒ，
（１Ｃｌｇｆｉｃｅｃｎｅｈｏｇ，ａｓｇｉｌｒｌｎｖｒｉ，ａｚｏ，ａｓ３００Ｃｉａ．ｏｅｅｏｆＳｉｎｅａｄＴｃｎｌｙＧｎｕＡｒｕｔａｉｅｓｙＬｎｈｕＧｎｕ７０７，ｈｎ；ｌＬｅｏｃｕＵｔ
２Ｃｌｇｆｒｎｍ，ａｓｇｉｕｔｒｌｎｖｒｉ，ａｚｏ，ｎｕ７０７，ｈｎ；．ｉｃｌｎｖｒｉ，ｈｉｔｈｒｈＮｗＺａｎ．ｏｅｅｏｏｏｙＧｎｕＡｒｃｌａｉｅｔＬｎｈｕＧａｓ３００Ｃｉａ３ＬｎｏｎＵｉｅｔＣｒｃｕｃ，ｅｅａｄ）ｌＡｇｕＵｓｙｓｙｓｌ
能从马铃薯环腐病菌总基因组ＤＡ和细菌纯培养，以及人工接种和自Ｎ然发病的马铃薯块茎中特异性扩增环腐病菌
１ＳｒＮ６Ａ基因片段１６ｂ。该试验结果为马铃薯环腐病的鉴定、检测及病害流行学研究提供了新的技术和方法。Ｄ４０ｐ
关键词：马铃薯；环腐病；检测；ＰＲＣ