大鼠肌钙蛋白I (TnI )ELISA
仓鼠心肌肌钙蛋白I(TNNI3)ELISA试剂盒定量检测
仓鼠心肌肌钙蛋白I(TNNI3)ELISA试剂盒定量检测Quantitative detection of the hamster cardiac troponin I (TNNI3) ELISA Kit心肌肌钙蛋白I检测方法都可以通过标准酶标仪使用。
1. 标准品的稀释：ELISA试剂盒内附标准品一支，用户在小试管中进行稀释。
2. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育8. 洗涤9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 分钟.10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度。
测定应在加终止液后15 分钟以内进行产品特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的，且与其他相关蛋白无交叉反应。
产品实验设备：酶标仪，37℃恒温箱，自动洗板机，可调节移液器以及其吸头，蒸馏水，干净的试管，容量瓶等。
产品应用领域：本ELISA试剂盒限科研，严禁临床使用用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗HDL抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗HDL抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的HDL呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
心肌肌钙蛋白I试剂盒组成及试剂配制1.酶联板：一块（96孔）2.标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为100 ng/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释100 ng/ml，50 ng/ml，25 ng/ml，12.5 ng/ml，6.25 ng/ml，3.12 ng/ml，1.56 ng/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml，临用前15分钟内配制。
肌钙蛋白I(TnI)测定试剂盒(微流控免疫荧光法)产品技术要求深圳微点
2. 性能指标
2.1 外观与结构
试剂盒表面应整洁完整、无毛刺、无破损、无污染，无峰棱，上下盖附着应牢固，拔脱应轻松。
2.2 准确度
用校准溶液进行检测，在检测仪上的测试结果的平均值与标示浓度值的偏差应不超过±12%。
2.3 线性
2.3.1试剂盒在0.02ng/ml至50ng/ml的线性范围内，试剂盒的线性相关性系数应≥0.9。
2.3.2试剂盒在＜0.2ng/ml的范围内线性绝对偏差应不大于±0.05ng/ml，在0.2ng/ml～50ng/ml的范围内线性相对偏差应不大于±10%。
2.4 批内精密度
在检测仪上的测试结果的变异系数CV（%）应不超过12%。
2.5 批间精密度
用校准溶液对3个批号的试剂盒各5个进行检测，三个批号在检测仪上的测定均值的变异系数CV（%）应不超过15%。
2.6 分析灵敏度
应不高于0.02ng/ml。
2.7 分析特异性
2.7.1 浓度为5mg/ml的血红蛋白，对测定结果的影响应不大于±10%。
2.7.2 浓度为0.2mg/ml的胆红素，对测定结果的影响应不大于±10%。
肌钙蛋白I的检测方法进展
肌钙蛋白I的检测方法进展心肌肌钙蛋白(cardiactropnin，Tn)是1987年Cummins等诊断急性心肌梗塞(acute myocardial infarction，AMI)时首次报道的，肌钙蛋白(Troponin，Tn)是心肌的主要结构收缩蛋白，由三个亚单位组成：肌钙蛋白C(TnC)、肌钙蛋白T(TnT)和肌钙蛋白I(TnI), 其中TnI又分为3种亚型：快骨骼肌亚型(fTnI)、慢骨骼肌亚型(sTnI)和心肌亚型(cTnI)，个体出生9个月后，心肌中仅存cTnI,无任何亚型，其分子量24kDa，由209个氨基酸组成，有超过40%的氨基酸序列与其他亚型有异源性,且氨基端多延伸出一段32个氨基酸组成的序列,所以cTnI 具有高度的心肌特异性，已被临床广泛接受，不仅成为诊断急性心肌梗死的“金标准”，而且已成为心肌疾病病情监测、疗效观察及预后评估的最合适标志物。
本文就cTnI的实验室检测方法综述如下：1酶联免疫吸附试验法酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）法已成为一种经典的、被广泛应用于临床的免疫测定技术。
此种方法用于cTnI的检测最初是在80年代中期由Cummins等报道的，采用了多克隆抗体竞争抑制法，交叉反应无法消除，存在较大的局限性。
1992年Bodor等在此基础上对ELISA法进行了改良，筛选出一对与cTnI亲和力强的单抗，采用单克隆的双抗体夹心法，使灵敏度提高到0.5μg/L。
1993年Larue等在Bodor等的研究基础上，从28种纯化的单克隆抗体中筛选出一种特异性很强的抗体用于免疫分析，以辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase,HRP）取代碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP)，检测限精确至0.1～0.2μg/L，检测时间30min。
目前，ELISA法已成为检测cTnI较为成熟的方法。
肌钙蛋白(TNI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)质量浓度在心脏病诊断中的比较
肌钙蛋白(TNI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)质量浓度在心脏病诊断中的比较赵凤【期刊名称】《江汉大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2008(036)001【摘要】目的:通过对急性心梗(AMi),冠心病(CHD)、心率失常患者血清中的TNI、CK-MBM质量浓度及肌酸激酶同工酶(CK-MB)的测定,探讨其对临床心脏病诊断的意义.方法:利用荧光免疫方法,对急性心梗(AMI),冠心病(CHD)、心率失常的患者血清中的TNI,CK-MBM质量浓度及肌酸激酶同工酶(CK-MB)进行定量测定,并对结果进行统计学比较.结果:通过比较发现在检测的0～4 h结果中,冠心病组CK-MBM检出率为69%,TNI检出率为22%,有显著性差异;急性心梗组TNI检出率达58%,CK-MBM检出率59%,无显著性差异.结论:在冠心病和心律失常患者的早期诊断中,CK-MBM的敏感度优于TNI;而对于急性心梗患者的早期诊断,CK-MBM与TNI并无显著性的差异,但TNI持续时间相对CK-MBM较长,表明TNI在对于急性心梗的诊断中更有优势.【总页数】2页(P66-67)【作者】赵凤【作者单位】武汉市第一医院,检验科,武汉,430022【正文语种】中文【中图分类】R540.4【相关文献】1.肌钙蛋白I（cTnI）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌红蛋白（Mb）浓度监测在诊断急性心肌梗死（AMI）中的作用 [J], 肖华兰2.超敏肌钙蛋白T（HS-TNT）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌红蛋白（Mb）浓度监测在诊断急性心肌梗死（AMI）中的作用 [J], 李从凤3.肌钙蛋白I（cTnI）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌红蛋白（Mb）浓度监测在诊断急性心肌梗死（AMI）中的作用 [J], 梁志洪;邓家德;古文鑫;陈结贞4.血清肌钙蛋白(cTnI)、肌红蛋白(Mb)及肌酸激酶同工酶(CK-MB)联合检测早期诊断急性心肌梗死的临床价值 [J], 吕月5.血清肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸转氨酶(LDH)联合检测对诊断小儿手足口病(HFMD)的价值观察 [J], 李玉花因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
肌钙蛋白I测试标准操作流程
肌钙蛋白I测试标准操作流程一实验组成1 实验仪器及器具：Mini VIDAS全自动分析仪一台、洁净工作台、低速离心机、20~200µl加样器2 试剂盒组成：TNIU试剂条说明：试剂条上有 10 个孔，用贴有标签的铝箔密封二实验原理一步免疫夹心法和酶联荧光分析 (ELFA)仪器将样本滴入包含被碱性磷酸酶标记的抗心肌肌钙蛋白 I 抗体(结合)的孔中。
样本/偶联物被SPR多次吸取，使肌钙蛋白I结合固定在SPR的内壁的免疫球蛋白，偶联形成三明治。
未结合部分在清洗步骤被除去。
然后相继执行两个检测步骤，在每步中，底物 (磷酸4-甲基伞形酮) 循环进出 SPR。
酶将底物水解为荧光物质 (4-甲基伞形酮)，在 450 nm 处可被测出。
荧光的强度和样本中抗原的浓度成正比，结果由 VIDAS 根据储存在存储器中的对应两检测步骤的两条校准曲线自动计算。
荧光的阈值决定用于每个样本的校准曲线。
三标本1 检测样本：200µl血清或血浆 (肝素锂)2 影响因素没有发现下列因素对分析有显著影响：（1）溶血 (在样本中加血色素达 300umol/L 或2178mg/dL)（2）脂血症(在样本中加入脂类达 30g/L 甘油三酯或同等物)（3）胆血症(在样本中加入胆红素达 510 umol/L 或29mg/dL)但无论如何,建议不要使用明显溶血、脂血症、胆血症的样本，如可能的话，重新收集样本。
四操作程序1 标准曲线条码(MLE)输入在每使用新一批试剂前，必须用每一试剂盒中都有的MLE卡（规格单）将规格（或工厂主校正曲线数据）输入仪器。
步骤如下：（1）按Master Lot Menu（2）放入MLE卡片（3）按Read Master Lot（4）按A或B读取完成后，仪器会自动打印相应信息2 校准曲线当新一批试剂开启时，在主批次数据 (MLE卡片)输入后，应用试剂盒中的两种校准液执行校准，然后每 28 天应重新校正一次。
肌钙蛋白i正常值范围
肌钙蛋白i正常值范围摘要：一、肌钙蛋白I 的概述二、肌钙蛋白I 的正常值范围三、影响肌钙蛋白I 值的因素四、肌钙蛋白I 值在临床上的应用正文：肌钙蛋白I 是一种心肌特异性标志物，对于诊断和评估心肌损伤具有重要的临床价值。
在本文中，我们将详细介绍肌钙蛋白I 的正常值范围以及影响其值的因素，并探讨肌钙蛋白I 值在临床上的应用。
一、肌钙蛋白I 的概述肌钙蛋白I（Troponin I，简称TnI）是一种存在于心肌细胞中的蛋白质，主要参与调节心肌收缩和舒张过程。
当心肌细胞受损时，肌钙蛋白I 会被释放到血液中，因此，检测血液中肌钙蛋白I 的浓度有助于判断心肌是否受损以及受损程度。
二、肌钙蛋白I 的正常值范围肌钙蛋白I 的正常值范围受到多种因素的影响，包括年龄、性别、体重、心率、肾功能等。
一般来说，肌钙蛋白I 的正常值范围在0.01-0.1ng/ml 之间。
然而，由于各实验室检测方法和参考范围可能存在差异，因此，具体的正常值范围还需根据所在实验室的参考数据为准。
三、影响肌钙蛋白I 值的因素1.心肌损伤：心肌梗死、心肌炎、心肌病等心血管疾病会导致心肌细胞受损，从而使血液中肌钙蛋白I 的浓度升高。
2.肌肉损伤：肌炎、肌肉损伤等疾病也会导致肌钙蛋白I 水平升高，但通常不会超过正常值的2-3 倍。
3.肾脏功能：肾脏是肌钙蛋白I 的主要代谢器官，肾功能不全时，肌钙蛋白I 的清除速度减慢，可能导致其水平升高。
4.性别和年龄：男性和老年人的肌钙蛋白I 水平可能较年轻人略高。
四、肌钙蛋白I 值在临床上的应用1.心肌梗死的诊断：肌钙蛋白I 是诊断心肌梗死的重要指标，当肌钙蛋白I 水平升高时，提示可能存在心肌梗死。
2.心肌梗死的预后评估：肌钙蛋白I 水平越高，心肌梗死的死亡率越高，可用于评估患者的预后。
3.评估心脏手术风险：对于接受心脏手术的患者，检测肌钙蛋白I 水平有助于评估手术风险。
4.监测药物治疗效果：在治疗心肌梗死等疾病时，肌钙蛋白I 水平的动态变化可作为评估药物治疗效果的指标。
肌钙蛋白 I或T(Tn I T)测定的标准操作程序
肌钙蛋白 I或T（Tn I T）测定的标准操作程序【应用范围】体外检测血清、血浆肌钙蛋白测定。
【适用仪器】Olympus AU-2700全自动生化分析仪。
【程序改变】严格遵循仪器、试剂说明书及校准品使用说明。
【方法学原理】本方法是一种胶乳自动增强免疫比浊法。
将特意性抗体结合于乳胶颗粒表面，标本与乳胶颗粒在缓冲液中混合，标本中的cTnl与乳胶颗粒表面的抗体结合，使相邻的乳胶颗粒彼此交联，在600nm附近测量溶液浊度的增加，其增加的程度与标本中的cTnl含量相关。
【试剂】试剂1（R1）：乳胶试剂：含结合特意的抗体乳胶颗粒15ml试剂2（R2）反应缓冲液：含增敏剂和表面活性剂30 ml2.校准品：由加拿大Spetrat公司提供。
【标本收集与准备】1.血清或血浆标本根据实验室标准采集程序采集标本，适用标本为血清或肝素抗凝血浆（肝素钠抗凝结果高0.5mmol/l），不可从正在静脉滴注手臂上采血，上机标本不能有凝块，样品采集后2天内离心标本，分离血清，血清或血浆标本室温保存4天，冷藏7天，冷冻保存6个月。
血清或血浆肌钙蛋白结果高于线性建议稀释。
释。
【操作步骤】1.仪器测定参数设置Test Name:Sample: Volume L Dilutio LL Dilutio L Min OD Max ODLSec. ODMethod: First LLast LReaction Slope:Measuring Last LMeasuring LastLinearity ANo-Lag-Time:2.试剂准备：将准备好的试剂置仪器试剂盘中（8℃）。
3.校准校准物的准备：将校准物从冰箱取出，冻干校准物按说明书加入蒸馏水复溶，轻轻颠倒混匀3次，不可用力震摇，室温放置30分钟至完全溶解；液体校准物从冰箱取出，室温放置15分钟以平衡至室温。
校准物的选择尽可能选择配套仪器厂家校准品。
亦可将校准液复溶后分装保存于－20℃冰箱中，每周校准一次或更换试剂批次后进行校准。
两种方法测定cTnI的比较
两种方法测定cTnI的比较发表时间：2013-05-22T16:55:33.437Z 来源：《中外健康文摘》2013年第15期供稿作者：罗伟波[导读] 心肌肌钙蛋白I（cTnI）作为心肌损伤性疾病诊断的一项新指标，具有高度的敏感性和特异性。
罗伟波（柳州医学高等专科学校第一附属医院检验科广西柳州 545000）【摘要】目的比较胶乳增强免疫比浊法与化学发光法测定肌钙蛋白I（cTnI）的结果，评价两种方法的分析性能的差异及相关性，并讨论其临床应用价值。
结果我们的研究结果表明，胶乳增强免疫比浊法和化学发光法具有良好的相关性（r= 0.958），卡方检验P>0.05，两种方法结果无显著差异。
结论胶乳增强免疫比浊法测定肌钙蛋白I（TnI）是一种适用于临床实验室开展并且操作简便、结果准确可靠、成本低，同时能进行急诊、批量和自动化分析的方法。
【关键词】胶乳增强免疫比浊法化学发光法肌钙蛋白I 心肌肌钙蛋白I（cTnI）作为心肌损伤性疾病诊断的一项新指标，具有高度的敏感性和特异性。
心肌损伤后，cTnI在血液中出现时间早、持续时间长、浓度增长快，是一种理想的心肌损伤标志物。
cTnI测定方法比较多，目前还没有统一的标准测定方法。
我们对美国BECKMAN AU2700生化仪和美国BECKMANACCESS2发光仪应用相同的实验方案，利用相同的临床样本进行分析，对两种方法进行比较评估。
一、材料与方法1 病例分组1.1 健康对照组：正常者30例，男15例，女15例，平均年龄70岁（55～85岁），均为门诊各项指标正常者。
1.2 AMI组：我院心胸科确诊为AMI的住院患者30例，其中男20例，女10例，平均年龄68岁（57～79岁）2 仪器与试剂化学发光法所用仪器为美国贝克曼库尔特公司生产的化学发光免疫分析仪ACCESS2及配套试剂。
胶乳增强免疫比浊测定cTnI用AU2700全自动生化分析仪，试剂由太原市川至生物工程有限公司生产。
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12ml 1set 60x 15ml
注意事项: 1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室
温 20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。 2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入 HRP 或底物前确保尽量吸干孔内液体。温
育过程中不要让微孔干燥掉。 3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响 OD 值。 4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。 5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
（在厚叠吸水纸上拍干）；反复洗涤 3 次。 8. 每孔加入 100ul TMB 显色液， 轻轻混匀 10 秒，20-25°C 温育 20 分钟。 9. 每孔加入 100ul 终止液（Stop Solution）。轻轻混匀 30 秒；15 分钟内在 450nm 处读 OD
值。
以 OD 值为纵坐标，以标准品浓度为横坐标，绘制标准曲线。根据样品的 OD 值可在标准曲 线上查出其浓度。 TnI (ng/ml) = 标准曲线上查出的浓度
100ml
需要但未提供的材料 1. 可在 450nm 处进行读数的酶标仪； 2. 能精确吸取 10-200µL 的移液器； 3. 可调多道（8）移液器（50－200µL）； 4. 供可调多道移液器使用的试剂存放槽； 5. 洗瓶或洗板机； 6. 蒸馏水或去离子水； 7. 1 升的圆柱形量筒； 8. 血清移液器：1 和（10 或 25 mL）； 9. 移液器枪头； 10. 纸巾； 11. 计时器，用以监控温育步骤； 12. 处理池和消毒剂（例如：0.5% 次氯酸钠, 10% 家用漂白水）；
（在厚叠吸水纸上拍干）；反复洗涤 3 次。 4. 每孔加入 100ul Biotin anti rat TnI。轻轻混匀 30 秒，20-25°C 温育 20 分钟 5. 洗板：甩尽板内液体，用洗涤液洗涤反应板（每孔内加入 350ul 洗涤液），并去除水滴
（在厚叠吸水纸上拍干）；反复洗涤 3 次。 6. 每孔加入 100ul 1x HRP。轻轻混匀 30 秒，20-25°C 温育 10 分钟 7. 洗板：甩尽板内液体，用洗涤液洗涤反应板（每孔内加入 350ul 洗涤液），并去除水滴
将混匀液 10ul 加入 1000ul 样品稀释液中 （1: 100），混匀；这样总共稀释 50000 倍。 标准品已经稀释，不用再稀释。
操作步骤： 试剂盒应平衡至室温（20-25°C ）再试验。 取出所需反应板。 1. 加入 100ul 标准品(Standards)、100ul 已稀释标本于相应反应板孔中。 2. 轻轻混匀 30 秒， 20-25°C 温育 20 分钟。 3. 洗板：甩尽板内液体，用洗涤液洗涤反应板（每孔内加入 350ul 洗涤液），并去除水滴
试剂盒组成： 酶标板(Coated Wells) 浓缩洗涤液(50X)(Washing Concentrate) 显色液(TMB Substrate) 终止液(Stop Solution) 样品稀释液(Sample Diluent) 标准品已经稀释 50000 倍。
96wells Anti-rat TnI Biotin 15ml 标准品(Standards) 12ml 浓缩酶联物（HRP） 10ml 酶联物稀释液(HRP Diluent)
6. 在储存和温育时避免强光直接照射。 7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。 8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏
试剂盒中反应试剂的生物活性。 9. 不能使用过期产品。 10. 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。
保存： 贮藏于 2-8°C。
样品： 在此检测中，可使用血清、血浆样品。
准备工作： 1. 浓缩洗涤液(50X)用双蒸水稀释成 1X（至 750ml）。 2. 配制 1x HRP： HRP 用 酶联物稀释液稀释 60 倍，即 1 份浓缩 HRP 加入 59 份 HRP 稀
释液。即 50ul HRP 加入 2950ul HRP 稀释液。 3. 标本应稀释 50000 倍，即 10ul 血清/血浆 加入 5ml 生理盐水中，混匀（1:500）；然后
用途：
大鼠肌钙蛋白 I (TnI )ELISA
本试剂盒用于定量检测大鼠血清或血浆中的 TnI 的浓度。
原理： 本试剂盒采用双抗夹心 ELISA 法，用生物素技术提高灵敏度。抗大鼠 TnI 单抗包被于酶标 板上，大鼠标本中的 TnI 会与单抗结合。加入生物素化的抗大鼠 TnI（二抗），它将与结合 在单抗上的大鼠 TnI 结合而形成免疫复合物，未结合的将被洗去。辣根过氧化物酶标记的 Streptavidin 将与二抗的生物素结合，多余的物质会被洗掉。加入 TMB 显色。大鼠 TnI 的 浓度与 OD(450nm)成正比。
举例：
OD(450nm)
3
2.5
2
1.5
1
0.5
0
0
123源自4Conc. of rat TnI(ng/ml)
灵敏度： 本试剂盒的灵敏度：0.01ng/ml。