八体外哺乳动物细胞染色体畸变试验
遗传毒性试验-动物中心

致突变试验:根据受试物的化学结构、理化性质及对遗传物质作用终点(基因突变和染色体畸变)的不同。
要求新药必须做下列三项试验。
(1)微生物回复突变试验菌株:组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门氏菌(Styphimurium)四株(TA97、TA98、TA100、TA102),亦可采用大肠杆菌(E.Coli)WP2若干株(大肠杆菌试验)。
剂量:决定受试物最高剂量的标准是细菌毒性和溶解度。
一般最大剂量可达5mg/皿。
受试物至少应有五种不同剂量否则应说明选定剂量的理由。
代谢活化:应用诱导剂处理后的哺乳动物肝脏微粒体酶(S9)进行体外代谢活化试验,即在加S9混合物和不加S9混合物平行的条件下测试。
对照组:用溶媒作阴性对照,用已知突变原作阳性对照。
结果判定:受试物的回复突变菌落数的增加与剂量相关并有统计学意义,或至少某一测试点呈现可重复的并有统计学意义的阳性反应时记为阳性。
(2)哺乳动物培养细胞染色体畸变试验细胞:哺乳动物原代或传代培养细胞。
剂量:至少应用三种不同剂量,高剂量以50%细胞生长抑制浓度为基准,否则应说明选定剂量的理由。
标本制作时间:药物与细胞接触后应有适当时间最好包括整个细胞周期,通常在药物处理后24和48小时制作染色体标本。
代谢活化:应用适当的代谢活化法。
对照组:用溶媒作阴性对照,已知突变原作阳性对照。
镜检:每种浓度至少观察100个中期分裂相细胞的染色体结构的异常及多倍体的出现率。
结果判定:受试物诱发的染色体畸变的出现率较阴性对照有统计学意义的增加,并有剂量反应关系时记为阳性,同时标明异常细胞出现的频度和种类。
(3)体内试验一般选用微核试验,但作用于生殖系统的药物进行显性致死试验等。
a.啮齿类动物微核试验动物:一般用小鼠,每组10只性成熟动物(雌雄各半)或至少6只性成熟雄性动物。
给药剂量及途径:至少采用三种剂量,最高剂量从1/2LD50为基准,腹腔和/或口服一次给药,必要时可连续给药。
否则应说明选定剂量的理由。
药物遗传毒性研究技术指导原则

附件四药物遗传毒性研究技术指导原则药物遗传毒性研究技术指导原则一、概述遗传毒性研究(Genotoxicity Study)是药物非临床安全性评价的重要容,它与其他毒理学研究尤其是致癌性研究、生殖毒性研究有着密切的联系,是药物进入临床试验及上市的重要环节。
拟用于人体的药物,应根据受试物拟用适应症和作用特点等因素考虑进行遗传毒性试验。
遗传毒性试验是指用于检测通过不同机制直接或间接诱导遗传学损伤的受试物的体外和体试验,这些试验能检出DNA损伤及其损伤的固定。
以基因突变、较大围染色体损伤、重组和染色体数目改变形式出现的DNA损伤的固定,一般被认为是可遗传效应的基础,并且是恶性肿瘤发展过程的环节之一(这种遗传学改变仅在复杂的恶性肿瘤发展变化过程中起了部分作用)。
在检测此类损伤的试验中呈阳性的化合物为潜在致癌剂和/或致突变剂,即可能诱导癌和/或遗传性疾病。
由于在人体中已建立了某些化合物的暴露和致癌性之间的关系,而对于遗传性疾病尚难以证明有类似的关系,故遗传毒性试验主要用于致癌性预测。
但是,因为已经确定生殖细胞突变与人类疾病有关,所以对可能引起可遗传效应的化合物与可能引起癌症的化合物应引起同样的关注;此外,这些试验的结果可能还有助于解释致癌性的机制和试验结果。
因此,在药物开发的过程中,遗传毒性试验的目的是通过一系列试验来预测受试物是否有遗传毒性,在降低临床试验受试者和药品上市后使用人群的用药风险方面发挥重要作用。
本指导原则重点阐述遗传毒性试验体外试验的基本原则,并介绍标准试验组合方案,以及对试验结果的综合分析及评价。
本指导原则适用于中药、天然药物和化学药物的遗传毒性试验研究。
二、基本原则(一)实验管理药物的遗传毒性试验属于安全性评价研究,根据《中华人民国药品管理法》的规定,必须执行《药物非临床研究质量管理规》。
(二)具体问题具体分析遗传毒性试验的设计,应该在对受试物认知的基础上,遵循“具体问题具体分析”的原则。
产品送检资料要求

产品送检资料要求产品送检资料要求(⽣物性能评价)委托⽅送检材料说明我公司×××××××××××委托的产品×××××××××××,产品说明如下:1. 产品信息:合同编号:产品名称:2. 产品的分类、产品组成、材料组成和规格型号的描述。
组成较复杂的请提供结构⽰意图。
(说明:委托协议中应注明进⾏试验项⽬选择的实验对象是最终产品、取⾃最终产品中有代表性的样品或与最终产品以相同的⼯艺过程制得的材料,如需分部件进⾏试验,在试验合同中应分别进⾏规定。
)3. ⽤于试验的取样部位(配图说明⽤以测试部件)□各部件混合测试(单次收费)□各部件单独测试(按部件收费)□其他(附说明)(说明:若⽆注明试验选取部位,则由试验⼈员凭经验选取,由委托⽅承担责任。
)4. 产品的预期⽤途、管理类别。
5. 产品特性:吸⽔性:;溶解性:;产品PH值:6. 杀菌(抑菌)性能:□杀菌□抑菌□⽆杀菌(抑菌)性能7. 灭菌⽅式:□已灭菌□未灭菌,如试验需要将委托我中⼼以121℃,30min条件灭菌我公司承诺所选灭菌⽅式不会对样品特性产⽣影响。
8. 样品保存条件:温度:湿度:是否避光:9. 其他说明委托⽅:×××××××××(盖章)201×年×⽉×⽇××××××(产品)⽣物学试验⽅案(划横线处需企业⾃⾏根据产品情况选择填写)我公司×××××××××××委托的产品×××××××××××,按照下列⽅法进⾏⽣物学评价试验:1. 细胞毒性1)浸提液试验(显微镜观察法)取××产品/部件,按0.2g/mL 的⽐例,浸提介质为含⾎清培养基,(37±1)℃,(24±2) h制备试验液,取试验液按照GB/T16886.5-2017中8.2规定的浸提法进⾏。
采用体外染色体畸变试验检测锐钛型纳米二氧化钛的遗传毒性

收稿日期:2021-08-12;修订日期:2021-11-16作者信息:杜秀明,E-mail:**********。
*周庆云,E-mail:**********采用体外染色体畸变试验检测锐钛型纳米二氧化钛的遗传毒性杜秀明1,2,洪丽玲1,2,徐灵芝1,2,周庆云1,2,* (1.上海化工研究院有限公司,上海200062;2.上海化工院检测有限公司,上海200062)In vitro chromosome aberrationevaluation of anatase titaniumdioxide nanoparticlesDU Xiuming1,2,HONG Liling1,2,XU Lingzhi1,2,ZHOU Qingyun1,2,*(1.Testing Center,Shanghai Research Institute of Chemical IndustryCo.,Ltd.,Shanghai200062;2.Shanghai Institute of ChemicalIndustry Testing Co.,Ltd.,Shanghai200062,China)【摘要】目的:按《OECD化学品测试准则473:体外哺乳动物染色体畸变测试》的要求进行试验,检测锐钛型纳米二氧化钛诱发体外培养的哺乳动物细胞染色体畸变的能力,以评价其是否属于致突变物。
方法:试验组受试物终浓度分别设置为0.0078、0.0312、0.125、0.5和2mg/mL,同时设立溶剂对照组和阳性对照组。
试验分为有代谢活化系统短时处理组(+S9,4h)、无代谢活化系统短时处理组(-S9,4h)和无代谢活化系统连续处理组(-S9,24h)3种处理方式,将培养的中国仓鼠肺细胞(CHL)暴露于锐钛型纳米二氧化钛混悬液中,染毒相应时间后收获细胞,经低渗固定后,制片并染色。
每个浓度组选取300个分散良好的中期分裂相细胞进行染色体畸变分析。
体外哺乳动物细胞染色体畸变试验技术指导原则

体外哺乳动物细胞染色体畸变试验技术指导原则1.实验设计与样本准备在进行体外哺乳动物细胞染色体畸变试验前,需要进行实验设计和样本准备。
首先,选择一种适合的哺乳动物细胞系,如小鼠淋巴细胞、人类淋巴细胞等。
然后,根据实验目的和要求,确定所需的化学物质浓度和处理时间,并准备相应的实验组和阴性对照组。
2.处理和培养将待测化学物质按照预定浓度加入培养基中,与细胞混合后,将细胞培养在适当的培养条件下,如温度、湿度和CO2浓度等。
处理时间的选择应根据化学物质的毒性和实验要求,常用的处理时间为3-24小时。
3.收集细胞和染色处理时间结束后,将细胞进行收集,并根据需要制备适当的悬浮液。
通常,使用低渗透性溶液,如KCl或NaCl,进行细胞溶解或悬浮,然后用冷甲醇或乙醇定性和定量固定细胞。
4.制备染色板和染色将固定的细胞悬液倒入预先制备的染色板中,并进行染色处理。
常用的染色方法包括古德林染色法和雅司染色法等。
染色后,需要对细胞进行镜检,检查染色体形态和结构的异常情况,如染色体片段、缺失、畸形、染色体对不分离等。
5.统计和分析根据镜检结果,统计和分析染色体结构和功能的异常情况。
常用的分析方法包括计算细胞中染色体畸变率和细胞中染色体畸变类型的分布情况。
通过比较实验组和阴性对照组的差异性,可以评估其中一种化学物质对细胞染色体结构和功能的影响。
总结起来,体外哺乳动物细胞染色体畸变试验技术具有重要的遗传毒性评价意义,通过合理的实验设计和操作流程,可以评估其中一种化学物质对细胞染色体结构和功能的影响,为毒性评价提供科学的依据和参考。
染发剂二羟吲哚毒理学验证实验与分析

二羟吲哚合成应用在国外已有30多年历史。
国内外多年研究发现,二羟吲哚有天然黑色染发作用,还具有抗菌、清除自由基和抗紫外辐射等功效。
SCCP 早在18年前就公布了二羟吲哚的染发剂安全性评价结果和使用推荐浓度。
本文通过对国产二羟吲哚进行相关毒理学项目的重复验证,将实验结果同国际实验室相应项目的结果进行比较,为中国化妆品新原料的批准提供科学依据。
根据中国《化妆品新原料申报与审评指南》规定,本实验采用《化妆品技术规范2015版》中动物急性经口和经皮毒性、皮肤和眼刺激性/腐蚀性、皮肤变态反应性、皮肤光毒性、皮肤光变态反应性、基因突变、染色体畸变和90天经皮染毒实验方法,进行相关毒理学实验,对结果进行比较评价。
实验结果显示,小鼠经口急性毒性,雄性LD50>3.690g/kg BW,雌性LD50>3.160g/kg BW,毒性分级为低毒。
急性经皮毒性试验LD50>2.180g/kg BW,毒性分级为微毒性。
急性眼刺激性/腐蚀性试验反应分级为微刺激性。
皮肤变态反应试验致敏强度为轻致敏性。
皮肤刺激性/腐蚀性试验反应分级为轻刺激性。
基因突变和染色体畸变试验均为阴性。
皮肤光毒性和皮肤光变态反应均为阴性。
亚慢性经皮毒性最大无作用剂量为20 mg/kg bw/day。
所验项目同国际组织SCCP 公布的结果比较基本一致,大部分项目的结果优于国外。
实验结果显示,本土相关产品二羟吲哚在染发剂中以0.5%浓度添加使用是安全的。
染发剂二羟吲哚毒理学验证实验与分析文|李忠军 徐建人 李镇军 胡烨敏 樊丽妃 李 奇 焦 红*Hair dye ingredient氧化性染发剂”[2]。
欧盟委员会健康和消费者保护总局公共卫生及风险评估委员会(以下简称:“SCCP”)0952/05 《关于对二羟基吲哚的意见》报道了多个国际实验室依据GLP 程序和OECD 方法指南,对物质代码为P36和P39的二羟吲哚样品开展毒理学实验,据此做出安全性评估意见和推荐使用浓度[3]。
简述化妆品行业的三大标准(卫生标准、安全标准、生产和销售标准)

第四节化妆品卫生管理条例为了加倔刘化妆品灼卫件骋督瞥班,确深化妆品的卫生质量和使用文全,以保阵人比身体键康,我国政府制定了《化妆品卫生管理条例》。
达见概括地介绍化妆际的卫生标淮,化妆品生产和创伤的:P少要求,化妆品的安全评价和化妆品的卫生管理。
一、化妆品的卫生标准3E阶h妆品卫生贷邢条例中对化妆品的下生标沧作了如下规定:1.化:MrlJ必门K则7、‘1昧八人”2.化:比品不得刘皮肤和粘膜有刺激和损伤作用。
3.化:Lktl5必别无沤性,使用安全。
4.化妆1II r听仪用的原0:〔(丛抖和辅料),必须符合本条例所作的规出。
对I:化妆品市效旧的物匝绝对不能使用,限丛使用的物质要按所划定的量边用。
5.化:比风必须按们t妆品卫生指标标准检验法》进行卫生机油的机酚6.别化妆川酬!:版义产品必须技《化妆品安全性评价程序和方法》进行:入个汁评价。
7.化妆而的微生物学质鱼应符合下述规定:(1)眼部.门唇、口腔粘股用化妆品以及婴儿和儿童用化妆从细菌总数不协大丁500个/克或毫升。
(2)父他化妆怂细菌总数不得大于2000个/克或毫升。
(3);“品’It4\得合有大肠杆菌、沙门氏荫绿脓杆菌和金黄包预构球菌答致病雨。
(4>化:K汛少几小布襟物旧的控削标淮螟: 40I)[,m 汞 I pPn’砷 10FP m 甲醇 2000ppm制定化妆品的卫生标淮目的在于:为向5“大消费者提供符合卫生要求的化妆品.防止因使用化妆品引起不良反应和危害,保障人民身体健康。
二、化妆品的安全评价随着国民经济的发展和人民生活水平的提高,化妆品己逐渐成为人民生活的必需品。
据美国环保局统计,囚前市售化妆品品种已超过25000种,组合约4000种向广大消费者提供符合卫生要求的化妆品,防止化妆品对人体健康产生的近期或远期危咨,因此对化妆品的原料及其产品进行安全性评价是极为重要的b(一)化妆品安全性评价程序第一阶段急性毒性试验和过敏试验.急性皮肤毒性试验急性经口毒性试验。
体外哺乳动物细胞基因突变试验

十、体外哺乳动物细胞基因突变试验In Vitro Mammalian Cell Gene Mutation Test1 范围本规范规定了体外哺乳类细胞基因突变试验的基本原则、要求和方法。
本规范适用于检测化妆品原料及其产品的致突变性。
2 规范性引用文件OECD Guidelines for Testing of Chemicals (No. 476, 1997)3 试验目的该测试系统用于检测化妆品原料及其产品引起的突变,包括碱基对突变、移码突变和缺失等,从而评价受试物引起突变的可能性。
4 定义正向突变(Forward mutation):从原型至突变子型的基因突变,这种突变可引起酶和功能蛋白的改变。
突变频率(Mutant frequency):所观察到的突变细胞数与存活细胞数之比值。
5试验原理在加入和不加入代谢活化系统的条件下,使细胞暴露于受试物一定时间,然后将细胞再传代培养,突变细胞在含有6-硫代鸟嘌呤(6-thioguanine,6-TG)或三氟胸苷(trifluorothymidine,TFT)的选择性培养液中能继续分裂并形成集落。
基于突变集落数,计算突变频率以评价受试物的致突变性。
6 试验方法6.1 试剂和受试物制备6.1.1 受试物6.1.1.1 受试物的配制:固体受试物需溶解或悬浮于溶剂中,用前稀释至适合浓度;液体受试物可以直接加入试验系统/或用前稀释至适合浓度。
受试物应在使用前新鲜配制,否则就必须证实储存不影响其稳定性。
6.1.1.2 溶剂的选择:溶剂必须是非致突变物,不与受试物发生化学反应,不影响细胞存活和S9活性。
首选溶剂是水或水溶性溶剂。
二甲基亚砜(DMSO)也是常用溶剂,但使用时浓度不应大于0.5%。
6.1.1.3 受试物浓度设置6.1.1.3.1 最高浓度的选择:决定最高浓度的因素是细胞毒性、受试物在试验系统中的溶解度以及pH或渗克分子浓度(osmolality)的改变。
6.1.1.3.2 细胞毒性的确定:应使用指示细胞完整性和生长情况的指标,在活化系统存在或不存在两种条件下确定细胞毒性,例如相对集落形成率或相对细胞总生长情况(total growth)。
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九、体外哺乳动物细胞染色体畸变试验In Vitro Mammalian Cells Chromosome Aberration Test1 范围本规范规定了体外哺乳动物细胞染色体畸变试验的基本原则、要求和方法。
本规范适用于检测化妆品原料及其产品的致突变性。
2 规范性引用文件OECD Guidelines for Testing of Chemicals ( No.473, July 1997)3试验目的本试验是用于检测培养的哺乳动物细胞染色体畸变,以评价受试物致突变的可能性。
4 定义染色体型畸变(Chromosome-type aberration):染色体结构损伤,表现为在两个染色单体相同位点均出现断裂或断裂重组的改变。
染色单体型畸变(Chromatid-type aberration):染色体结构损伤,表现为染色单体断裂或染色单体断裂重组的损伤。
染色体数目改变(Numerical aberration):所用细胞株的正常染色体数目的变化。
结构畸变(Structural aberration):在细胞分裂的中期相阶段,用显微镜检出的染色体结构改变,表现为缺失、断片、互换等。
有丝分裂指数(Mitotic index):中期相细胞数与所观察的细胞总数之比值;是一项反映细胞增殖程度的指标。
5 试验基本原则在加入和不加入代谢活化系统的条件下,使培养的哺乳动物细胞暴露于受试物中。
用中期分裂相阻断剂(如秋水仙素或秋水仙胺)处理,使细胞停止在中期分裂相,随后收获细胞,制片,染色,分析染色体畸变。
6 试验方法6.1 试剂和受试物制备6.1.1 阳性对照物:可根据受试物的性质和结构选择适宜的阳性对照物,阳性对照物应是已知的断裂剂,能引起可检出的、并可重复的阳性结果。
当外源性活化系统不存在时,可使用甲磺酸甲酯(methyl methanesulphonate (MMS))、甲磺酸乙酯(ethyl methanesulphonate(EMS))、乙基亚硝基脲(ethyl nitrosourea)、丝裂霉素C(mitomycin C)、4-硝基喹啉-N-氧化物(4-nitroquinoline-N-oxide)。
当外源性活化系统存在时,可使用苯并(a)芘[benzo(a)pyrene]、环磷酰胺(cyclophosphamide)。
6.1.2 阴性对照物:应设阴性对照,即仅含和受试物组相同的溶剂,不含受试物,其它处理和受试物组完全相同。
此外,如未能证实所选溶剂不具有致突变性,溶剂对照与本实验室空白对照背景资料有明显差异,还应设空白对照。
6.1.3 受试物6.1.3.1 受试物的配制:固体受试物需溶解或悬浮于溶剂中,用前稀释至适合浓度;液体受试物可以直接加入试验系统和/或用前稀释至适合浓度。
受试物应在使用前新鲜配制,否则就必须证实贮存不影响其稳定性。
6.1.3.2 溶剂的选择:溶剂必须是非致突变物,不与受试物发生化学反应,不影响细胞存活和S9活性。
首选溶剂是培养液(不含血清)或水。
二甲基亚砜(DMSO)也是常用溶剂,使用时浓度不应大于0.5%。
6.1.3.3 受试物浓度设置(1)最高浓度的选择:决定最高浓度的因素是细胞毒性、受试物在试验系统中的溶解度以及pH或渗克分子浓度(osmolality)的改变。
(2)细胞毒性的确定:应使用指示细胞完整性和生长情况的指标,在活化系统存在或不存在的两种条件下确定细胞毒性,例如细胞覆盖程度(degree of confluency)、存活细胞计数(viable cell counts)或有丝分裂指数(mitotic index)。
应在预试验中确定细胞毒性和溶解度。
(3)剂量设置:①至少应设置3个可供分析的浓度。
当有细胞毒性时,其浓度范围应包括从最大毒性至几乎无毒性;通常浓度间隔系数不大于2 ~10。
②在收获细胞时,最高浓度应能明显降低细胞覆盖程度、细胞计数或有丝分裂指数(均应大于50%)。
③对于那些相对无细胞毒性的化合物,最高浓度应是5μl/mL,5mg/mL或0.01mol/L。
④对于相对不溶解的物质,当浓度低于不溶解浓度时仍无毒性,则最高剂量应是,当处理期结束时,在最终培养液中溶解度限值以上的一个浓度。
在某些情况下(即仅当高于最低不溶解浓度时才发生细胞毒性),应使用一个以上可看见沉淀的浓度。
最好在试验处理开始和结束时均评价溶解度,因为由于细胞、S9等的存在,在试验系统内在暴露过程中溶解度可能变化。
不溶解性可用肉眼鉴别,但沉淀不能影响观察。
6.1.4培养液:采用MEM(Eagle),并加入非必需氨基酸和抗菌素(青、链霉素,按100IU/mL),胎牛血清或小牛血清按10%加入。
也可选用其它合适的培养液。
6.1.5 活化系统通常使用的是S9混合物(S9 mix)。
S9是从经酶诱导剂(Aroclor 1254或苯巴比妥钠和β-萘黄酮联合使用)处理的啮齿动物肝脏获得的。
S9的制备同Ames试验。
S9的使用浓度为1%~10%(终浓度)。
S9 mix中所加辅助因子的量由各实验室自行决定,但需对S9mix的活性进行鉴定,必须能明显活化阳性对照物。
也可使用下述S90.125mlMgC12 (0.4 mol/L)0.02 mlKC1(1.65mol/L)0.02 ml葡萄糖-6-磷酸 1.791mg辅酶Ⅱ(氧化型,NADP) 3.0615mg用无血清MEM培养液补足至1mL.6.2 试验步骤6.2.1 细胞:使用中国地鼠卵巢(CHO)细胞株或中国地鼠肺(CHL)细胞株。
6.2.2 试验时,应同时设阳性对照物,阴性对照物和至少3个可供分析的受试物浓度组。
6.2.3 试验前一天,将一定数量的细胞接种于培养皿(瓶)中,放CO2培养箱内培养。
6.2.4 试验需在加入和不加入S9 mix的条件下进行。
试验时,吸去培养皿(瓶)中的培养液,加入一定浓度的受试物、S9 mix(不加S9 mix时,需用培养液补足)以及一定量不含血清的培养液,放培养箱中处理2h~6h。
结束后,吸去含受试物的培养液,用Hanks液洗细胞3次,加入含10%胎牛血清的培养液,放回培养箱,于24h内收获细胞。
于收获前2h~4h,加入细胞分裂中期阻断剂(如用秋水仙素,作用时间为4h,终浓度为1μg/mL)。
当受试物为原料时, 如果在上述加入和不加入S9 mix的条件下均获得阴性结果,则尚需补加另外的试验,即在不加S9 mix的条件下,使受试物与试验系统的接触时间延长至24h。
当难以得出明确结论时,应更换试验条件,如改变代谢活化条件、受试物与试验系统接触时间等重复试验。
6.2.5 收获细胞时,用0.25%胰蛋白酶溶液消化细胞,待细胞脱落后,加入含10%胎牛或小牛血清的培养液终止胰蛋白酶的作用,混匀,放入离心管以1000r/min~1200r/min的速度离心5min~7min,弃去上清液,加入0.075mol/L KC1溶液低渗处理,继而以新配制的甲醇和冰醋酸液(容积比为3:1)进行固定。
按常规制片,用姬姆萨染液染色。
6.2.6 作染色体分析时,对每一处理组选200个(阳性对照可选100个)分散良好的中期分裂相(染色体数为2n±2)进行染色体畸变分析。
在分析时应记录每一观察细胞的染色体数目,对于畸变细胞还应记录显微镜视野的坐标位置及畸变类型。
6.3 统计处理:对染色体畸变细胞率用X2检验,以评价受试物的致突变性。
6.4 结果评价:在下列两种情况下可判定受试物在本试验系统中具有致突变性:(1)受试物引起染色体结构畸变数的增加具有统计学意义,并有与剂量相关的增加。
(2)受试物在任何一个剂量条件下,引起具有统计学意义,并有可重复性的阳性反应。
在评价时应把生物学和统计学意义结合考虑。
7 试验报告试验报告应包括以下内容:(1)受试物名称、有关的理化性状、所用溶剂及其配制、剂量选择(应说明受试物对细胞毒性的测定方法、溶解情况等);(2)细胞株名称;(3)实验条件和方法①代谢活化系统:制备S9时所用酶的诱导剂、选用的动物品种和来源、S9mix的配方;②对照物:阳性对照物名称和选用浓度;阴性(溶剂)对照物名称及使用浓度。
③培养液:所用培养液名称、血清类别和使用浓度;④接种时的细胞密度以及所用培养皿(瓶)的规格;⑤中期分裂阻断剂:名称、所用浓度、作用时间;⑥处理时间:受试物与试验系统的接触时间;⑦简述制片方法、分析的中期分裂相数目、结果评价方法。
(4)结果①受试物最高剂量的确定及试验结果:细胞毒性的测定(建议的表格见表1);溶解情况(建议的表格见表2);对pH和渗克分子(osmolality)浓度的影响(如果有影响)。
②各处理组和对照组染色体畸变率(建议的表格见表3)。
③本实验室的阳性对照组和阴性对照组(常用溶剂,如DMSO)在本实验室历史上的染色体畸变率范围、均值和标准差(说明样品数)。
(5)结论。
表1 受试物对细胞的毒性表2 受试物在所选溶剂中溶解情况记录表3 受试物的检测结果组别终浓度μg/mL观察细胞数畸变细胞数畸变率(%)+S9-S9+S9-S9+S9-S9阴性对照受试物阳性对照8 结果解释阳性结果表明受试物引起培养的哺乳动物体细胞染色体结构畸变。
阴性结果表明在本试验条件下,受试物不引起培养的哺乳动物体细胞染色体结构畸变。