凝胶层析分离蛋白质实验方法的优化

分， 每管 收集 ２— ． Ｌ 共 收集 １ ２５ｍ ， ２～１ 。 ８管
１ ５ 检 测 ．
１ １ 凝胶 的 制备 与装 柱 ．
观察 血红 蛋 白和溴 酚蓝在 层 析柱床 的色带位 置
及移 动 速 度 ， ４ ｍ 测 定 每 一 管 的 吸 光 值 （ ２ ． ５ ０ｎ ７ ２Ｇ
取 Ｇ ５凝 胶 常 规 溶胀 与装 柱 ， 高 ２ ｍ，内 ７ 柱 ０ｃ 径 １～１ ５ｃ 注 意 任何 时刻 柱 顶要 有 水 层 １５～２ ． ｍ， ．
均 用 生 理 盐 水 配 制 ； ．５ 溴 酚 蓝 溶 液 ， ０ ０５ ０２ ％ 用 ．０
ｍ ｌＬ的 Ｎ Ｏ 配 制 ； 氨 酸 １０ ｍ ／ ０ ， 取 ｏ ／ ａＨ 酪 ０ ｇ ２ ｍＬ 称
１０ｍ ０ ｇ酪 氨酸 ， 加入 少许 蒸馏水 ，５滴 １ｍ ｌＬＨ １ １ ｏ Ｃ ／
ｍＬ充 分混 合 ， 总体 积 ０２ ， 入 柱 顶并 打 开 下 ．０ｍＬ 加 口， 洗脱 液流 出 ， 样 品 渗入 层 析 柱 后 ， 蒸 馏 水 让 待 用
冲洗 柱壁 ２～ ３次并 回复 柱顶 水层 。
样 品 ２： 牛 血 清 蛋 白 ０ １ Ｌ 酪 氨 酸 ００ 取 ． ８ｍ ， ．２ ｍ ， 体 积 ０２ｍＬ 同 上 加 样 （ 入 另 一 层 析 柱 Ｌ 总 ． ， 加
ｃ 内径 １ ． ｍ， ｍ， ～１５ｃ 分离两组样 品 ： 血红 蛋 白与溴 酚蓝 ； 牛血 清蛋 白与酪氨 酸 ， 点样 ， 洗脱 并收 集。５ ０ｎ ４ ｍ和 ２０ ８
ｎ ｍ检测样品的吸光值 ， 绘制洗脱 曲线 。结幕 在层析 柱上出现明显移动速 度不 同的色带 ， 脱 曲线显 示每组样 品 洗 可呈现两个洗脱峰 。结论 本 实验 改变了以往的复杂处理操作程序 ， 适用于本科 生和研究 生进行科研训 练 的实验
凝 胶层 析技 术不 仅被 广泛 应用 于 科研 与 教学 ，同时
１３ 加 样 ．
常规操 作 ， 只保 留液 面 ２—３ｍｍ 时 开 始 加 样
（ 加样前应把洗脱速度调节好） 。
样 品 １ 取 牛 血 红 蛋 白 ０ １ Ｌ，溴 酚 蓝 ０ ０ ： ．８ｍ ．２
也 是 医学 和生 物技术 类 院校普 遍 安排 的对本 科生 和
方法。
［ 关键词 ］ 凝 胶层 析 ； 血红蛋 白与溴酚蓝 ； 牛血清蛋 白与酪氨酸 ； 洗脱 ； 分光光度法 ［ 中图分类号 ］ 一 １ Ｒ３ ３ ［ 文献标识码 ］ Ａ ［ 文章编号 ］０ ０—１０ （ ００ ０ ０ ２ ０ １０ ９ ５ ２ １ ） ６— ６ ７— ２
凝 胶层 析是 广泛 用 于分离 纯化 生物 大分 子 的技 术 方法 之一 ， 指待 分离混 合 物 的组 分 ， 是 由于 分子 量 大 小不 同 ， 层 析 柱 中 的 移 动 速 度 不 同而 被 分 离 。 在
研 究 生 的生化 实验 Ｈ 。作 为实 验 ， 目的是要 充分 其 了解 凝胶层 析 的工 作 原 理 、 法 及 观 察层 析 分 离 生 方 物大 分子 的实 验结 果 等 ， 在 实 验 过 程 中常 常 由于 但 各种 原 因如仪器 缺 乏 、 剂 昂贵 、 理 样 品复 杂 、 试 处 检
，
不断搅 拌 ， 定容 至 ２ Ｌ后 ，０℃磁力 搅拌 １ ｎ ０ｍ ８ ０ｍｉ
以管 号 为横坐 标 ， 吸光值 为 纵坐标 ， 制洗脱 曲 绘
线。 ２． 结果 与 日期 ］０９— ９ ０ ２０ ０ — ９ ［ 作者简介 ］ 金艳 （ ９ ０一） 女 ， 薛 １ ８ ， 山东 淄博 人 ， 实验 师 。 通 讯
中 ） 。
１４ 洗脱 与 收集 ．
测 手 段不 完善 等而使 实 验结果 不 理想 。 因此 ， 本
实验 拟建 立一 种经 济 、 捷 、 用并 可直 接 观察层 析 快 适 效果 、 复性好 的凝 胶层 析实 验 。 重
１ 材料 与方 法
自加样 起 即开 始 收 集洗 脱 液 ， 度 １ ２ 速 ８～ Ｏ滴／
型可 见分 光 光 度 计 ， 海 精 密 科 学 仪 器 有 限公 司 ） 上
以第 １或 第 ２管 ， １ 第 ９或第 ２ ０管 分 别作 为血 红 蛋
ｃ 柱 平衡 约通 过 ３～ ｍ， ４个 柱体 积后 即可使 用 。
１ ２ 样 品的 制备 ．
白和溴酚 蓝 的空 白管 。检测 牛血 清 白蛋 白和酪氨 酸
薛金 艳 李俏俏 王云 飞 王 爱 民 ， ， ，
（， １ 山东 万杰 医学院 生物化学教研 室 ， 山东 淄博 ２５ １ ； ． 尔滨 医科 大学 生物化学 ５２３ ２哈 与分子 生物学教研 室， 黑龙江 哈尔滨 １０ ８ ） ５０ １
［ 摘要 ］ 目的
建 立一 种简单 ， 操作 方便 ， 验结 果 可靠 且重 复性 好 的生化 实验 。方 法 用 Ｇ ５凝胶 ， 高 ２ 实 ７ 柱 Ｏ
第４ ４卷 第 ６期 ２１ ０ ０年 １ ２月
哈尔 滨 医科 大 学 学 报
Ｊ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＨＡＲＢＩ ＭＥＤＩ ＡＬ ＵＮＩ ＲＳｎＹ Ｎ Ｃ ＶＥ
Ｖ０ ． ＿ Ｎｏ ６ １４ ４． ．
Ｄｃ ． ００ ｅ． ２ １
６２ ７
凝 胶 层 析 分 离 蛋 白质 实 验 方 法 的优 化
的分 离效 果 ，８ ｍ 测 定 每 管 的 吸 光 值 （ ５ 一 型 ２０ｎ ７２Ｎ 紫 外 ． 见 分 光 光 度 计 ， 海 精 密 科 学 仪 器 有 限 公 可 上 司 ） 用蒸 馏水 调零 。 ，
１ ６ 绘 制 曲 线 ．
牛 血清 蛋 白 １ ｇ ｍＬ 牛 血红蛋 白 １ ｇ ｍＬ ０ｍ ／ ， ０ｍ／ ，
在加入血红蛋万方数据628哈尔滨医科大学学报第44卷白和溴酚蓝样品后几乎立即看到血红蛋白迅速下行在层析柱上出现两条色带上蓝下红而且其距离迅速拉大并很快收集到牛血红蛋白的洗脱峰管通常在第34管出现而当血红蛋白被洗出后溴酚蓝色带还在中部缓慢移动时实验再次只加018ml牛血红蛋白后可见其迅速穿过溴酚蓝色带层并快速下移
作 者
经 多次 重复 实验 ， 定 了该 实 验 的方 法 、 程 、 确 流 操作 步骤 ， 察 到可 靠 的实 验 结果 。在加 入 血 红 蛋 观