2021年微生物无菌取样方法
微生物标本采集送检及处理原则
微生物标本采集送检及处理原则一、标本采集1.采集时机：采集标本应在疾病出现初期进行，避免开始使用抗生素治疗前采集。
2.采集部位选择：根据病情选择合适的部位进行采集，一般可根据症状、疾病类型和临床表现进行判断。
3.采集方法：采集标本时应采取无菌手法，使用无菌采样器材，避免污染和交叉感染。
4.标本储存条件：采集后的标本应立即送往实验室进行检测，若无法及时送达实验室，则应储存在合适的条件下，避免细菌的生长和繁殖。
二、标本送检1.标注采集信息：标本送检前应在标本瓶或容器上标注病人信息、采集时间和采集部位等必要的信息，确保标本的准确性和唯一性。
2.冷藏和运输：对于易变质的标本，如粪便、尿液等，应冷藏并尽早送达实验室；对于其他标本，应采取适当的保存和运输方式，避免温度过高或过低，影响细菌的生存和检测结果的准确性。
三、标本处理1.标本处理前的准备：在对标本进行处理前，必须进行准备工作，如标记标本编号、记录标本类型、检查标本的一致性和完整性等。
2.标本处理方法：根据标本类型的不同，采取相应的处理方法，如深部标本(如脑脊液、关节液等)应优先进行细菌涂片、培养等方法，浅部标本(如咽拭子、鼻拭子等)可直接进行细菌培养。
3.标本处理的时间：不同类型的标本处理时间有所不同，但一般应尽快进行处理，避免细菌在标本中的生长和污染。
四、标本保存1.标本封存：处理完的标本应在标本瓶或容器上进行标注，并进行封存，避免污染和交叉感染。
2.标本保存时间：保存标本的时间应根据实验室的需求和标本的特性来确定，如对于一些常见的标本，如尿液、粪便等，一般保存时间较短，而对于其他一些特殊标本，如组织标本等，可保存更长时间。
总之，微生物标本采集送检及处理原则的正确遵守可以确保实验结果的准确性和可靠性，为疾病的诊断和治疗提供有力的支持。
同时，医务人员在进行标本采集和处理过程中应加强无菌操作和个人防护，有效避免交叉感染的发生，保障自身和他人的健康安全。
微生物无菌取样方法
微生物无菌取样方法概述：微生物无菌取样是一种重要的实验操作，用于采集样品中的微生物，并保持其在取样和处理过程中的无菌状态。
本文将介绍几种常用的微生物无菌取样方法，以帮助实验人员正确进行无菌操作。
无菌取样方法：1. 火焰消毒法火焰消毒法是最常见的无菌取样方法之一。
首先，将待取样的工具（如镊子、培养皿等）放置在火焰中，直至工具表面完全变红；然后，将待取样的区域靠近工具焰口，让火焰的热量将其消毒。
在取样前后，务必将工具放回火焰中进行再次消毒，以确保无菌状态的维持。
2. 酒精消毒法酒精消毒法适用于对火焰敏感的材料。
首先，将待取样的工具浸泡在酒精中片刻，使其充分浸润；然后，将工具从酒精中取出，迅速挥发酒精。
在取样前，务必等待工具表面干燥，避免酒精残留对微生物生长的影响。
3. 紫外线消毒法紫外线消毒法利用紫外线的辐射杀灭微生物。
首先，将待取样的工具放置在已配备紫外线灯管的消毒设备中；然后，将设备关闭，开启紫外线灯管。
在一定时间内，让紫外线对工具表面进行照射，以杀灭潜在的微生物。
取样前后，务必使用前述火焰或酒精方法进行消毒。
4. 过滤法过滤法适用于液态样品的无菌取样。
首先，选用0.2微米的微孔过滤膜，将其装配在过滤器上；然后，将待取样的液态样品通过过滤器，使样品中的微生物被截留在过滤膜上。
取样后，将过滤膜移至培养基上，使截留的微生物在培养基上生长，并进行后续分析。
注意事项：1. 取样器具及培养皿等实验工具需提前进行高温高压灭菌，以确保其无菌状态。
2. 取样时要防止被周围空气中的微生物污染，避免把手触碰到取样区域。
3. 在无菌取样过程中，务必避免交叉污染，每次取样前后都要对工具进行消毒。
4. 注意避免取样过程中发生气溶胶扩散，防止微生物通过空气传播。
5. 紫外线辐射对人体有一定危害性，使用紫外线消毒法时要注意安全。
结语：微生物无菌取样是实验操作中的重要步骤，为了得到准确和可靠的实验结果，实验人员需要选择适合的无菌取样方法，并严格遵守操作规程。
微生物取样方法
微生物取样方法 It was last revised on January 2, 2021微生物取样方法举例一：一、空气采样及检验方法1培养基：普通营养琼脂平板，按中条配制2采样（空气沉降法）布点：面积小于30平方米的车间，设一对角线，在线上取3点，即中心一点，两端在距墙1米处各取一点；面积大于30平方米的车间，设东、西、南、北、中5个点，其中东、西、南、北点均距墙1米。
采样高度：与地面垂直高度80-150厘米。
采样方法；用直径为9厘米的普通营养琼脂平板在采样点上暴露20分钟盖上送检培养。
3培养：于37℃培养24小时。
4检测频率：每周空气质量标准：生车间、熟车间、成品车间：低于100个半成品库、成品库：低于10个二、设备的采样与检验方法根据生产过程所要求的重点卫生部位，实验室对其进行涂抹采样，进行细菌总数检验。
1采样方法涂抹法（适用于表面平坦的设备和工器具产品接触面）取经过灭菌的铝片框（框内面积为50平方厘米）放在需检查的部位上，用无菌棉球蘸上无菌生理盐水擦拭铝片中间方框部分，擦完后立即将棉球投入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。
贴纸法（适用于表面不平坦的设备和工器具接处面）将无菌规格纸（5×5厘米，纸质要薄而软）用无菌生理盐水泡湿后，于需测部分分别贴上两张，两张纸面积共50平方厘米，然后取下放入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。
2检验方法细菌总数的检验将上述样液充分振摇，根据卫生情况，相应地做10倍递增稀释，选择其中2-3个合适的稀释度作平皿倾注培养，培养基用普通营养琼脂，每个稀释度作2个平皿，每个平皿注入1毫升样液，于37℃培养24小时后计菌落数。
结果计算表面细菌总数（cfu/cm2）=平皿上菌落的平均数×样液稀释倍数/30×2致病菌的检验沙门氏菌，参照进行金黄色葡球菌，参照进行4.检验合格标准：细菌总数10－100个∕cm2，5.关键点：细菌总数≤10个∕cm2一般区域：细菌总数≤100个∕cm2三、人员手表面细菌污染情况的检验1. 采样方法：用一支蘸有无菌生理盐水的棉拭子涂擦被检对象手的全部，反复两次，涂擦的时候棉拭子要相应地转动，擦完后，将手接触部分剪去，将棉拭子放入装有10毫升无菌生理盐水的试管内送检培养。
微生物样品的取样方法及取样要求
微生物样品的取样方法及取样要求样品取样的要求1）在取样之前应确认货、证是否相符。
2）取样过程中应避免与水等环境的不良因素影响，防止样品被污染。
3）取样用具（如注射器、采血管、试管、探子、铲子、匙、取样器、剪子、样品袋等）必须是经过灭菌的。
4）对采集的样品一般要求随机取样。
若怀疑最有可能受病原体污染或者带有病原体的样品，可以进行选择取样。
5）根据样品种类（如盒装、袋装、瓶装和罐装），应取完整密封的样品。
如果样品很大，则需用无菌取样器取样；若样品是粉末，应边取边混合；若样品是液体的，通过振摇即可混匀；若样品是冷冻的，应保持冷冻状态（可放在冰内、冰箱的冷盒内或低温冰箱内保存），而非冷冻动物产品须保持在0℃~5℃中保存。
6）取样前或取样后应在盛装样品的容器或样品袋上立即贴上标签，每件样品必须标记清除（包括品名、来源、数量、取样地点、取样人及取样日期）。
7）获取有关取样产品的信息：如样品名称、批量大小、包装类型、包装容器体积、生产线、产品编号或控制号、批量号、标签内容、包装破损状况、产品存放地点或建筑物的基本情况等。
8）当客户对所规定的取样程序有偏离、添加或删节的要求时，应详细记录这些要求和相关的取样资料，并记入包含检测结果的所有文件中，同时告知相关人员。
9）当取样作为检测一部分时，实验室应有程序记录与取样有关的资料和操作。
这些纪录应包括所用的取样程序、取样人的识别、环境条件（如果相关）、必要时有抽样地点的图示或其他等效方法，如果合适，还应包括取样程序所依据的统计方法。
食品微生物学的取样点食品微生物的取样计划中常包括以下取样点：原料、生产线（半成品、环境）、成品、库存样品、零售商店、或批发市场、进口或出口口岸。
原料的取样包括食品生产所用的原始材料、添加剂、辅助材料及生产用水等。
生产线样品是指食品生产过程中不同加工环节所取的样品，包括半成品、加工台面、与被加工食品接触的仪器面以及操作器具等。
对生产线样品的采集能够确定细菌污染的来源，可用于食品加工企业对产品加工过程卫生状况的了解和控制，同时能够用于特定产品生产环节关键控制点的确定和HACCP的验证工作。
2021版药典微生物限度微生物无菌方法学验证流程
2021版药典微生物限度微生物无菌方法学验证流程微生物限度/无菌方法学验证流程1.购买：提交单位需要1.5个月的时间购买应用菌株单位介绍信证明工作用途等文件，并向中检院网站提交申请，接到申请后一个月后中检院会把有这些菌株经常缺货且不完整，因此不能一次性购买，2.每种从菌复活、分离、纯化复壮：共需要30天《药典》规定，药品检验所需的8种标准阳性菌，在购买中央检验所冻干菌粉后，应进行复活保存1大肠埃希菌2金黄色葡萄球菌3枯草芽孢杆菌4生孢梭菌5铜绿假单胞菌6沙门菌（从每个冻干菌粉复活到细菌分离、纯化和保存需要3-4天）7白色念珠菌8黑曲霉（霉菌酵母菌冻干菌粉从复活到分离纯化制备孢子菌悬液需要至少7天时间）3.中等适用性/敏感性验证：60-80天实验中使用的培养基需要进行与中检院提供的标准培养基进行培养基适用性验证每种培养基不同批号之间也需要进行验证之后方可以进行微生物检验用药检室有20多种培养基。
验证每种培养基需要3-4天，完成所有培养基的适用性验证需要60-80天。
恩替卡韦分散片微生物限度方法学适用性验证：1.回收率验证：回收率验证实验共需26天（若回收率达不到药典规定需要重新选用另一种方法进行验证）实验验证了五种细菌：1金黄色葡萄球菌2铜绿假单胞菌3枯草杆菌4白色念珠菌5黑曲霉五种阳性菌的回收率验证需使标准阳性菌回收率在阳性对照组计数达到50％-200％之间假设验证一次成功三种细菌的回收率分别为4天，两种霉菌和酵母菌的回收率分别为7天。
对照菌的适用性验证：共20天大肠埃希菌控制菌方法：需要5天时间对于其他制剂，含有原料药粉末的中药制剂需要检查沙门氏菌和耐胆盐革兰氏阴性菌，每个需要7天，总共1周。
实验室消毒、实验仪器灭菌、实验细菌培养物灭活、实验仪器清洗等方法学验证一次顺利完成共需要46天，验证方法过程需要重复一遍作为方法学适用性确认复方茵陈注射液无菌方法学验证：1.方法适用性验证：验证实验共需要30天（如果回收率未达到或未达到药典规定的回收率，需要重新选择方法进行验证）五种实验菌分别验证1金黄色葡萄球菌2大肠埃希菌菌3枯草芽孢杆菌4生孢梭菌5白色念珠菌6黑曲霉菌实验组中的六种阳性菌需要与对照组进行比较。
浅谈微生物样品的采集及送检
浅谈微生物样品的采集及送检微生物样品的采集及送检是微生物研究和检测的重要环节。
正确的采集方法和送检流程能够保证样品的质量，确保检测结果的准确性。
本文将从采集方法、送检标准和注意事项三个方面进行浅谈。
一、采集方法：1. 采集容器的选择：根据所需分析的微生物种类及特性，选择适当的采集容器。
对于液体样品，一般采用无菌的容器，如冷冻离心管；对于固体样品，可选择无菌的刮片、棉签等。
2. 采集工具的选择：采集工具应选择耐高温、高压、耐腐蚀的材质，如不锈钢、铝制材料。
应保证采集工具的无菌性。
3. 采集部位的选择：根据分析的目的和要求，选择合适的采集部位。
对于皮肤样品，应选择无伤口、无细菌污染的部位进行采集；对于环境样品，应选择代表性的采集点。
4. 采集方法的操作规范：严格按照操作规程进行采集，避免交叉污染。
如采集前应洗手，并戴上无菌手套；采集时应注意避免采集工具接触其他物体等。
二、送检标准：1. 送检要求的明确：在送检前，要明确研究或检测的目的和要求，以便选择合适的检测方法和方案。
2. 送检样品的标识：送检样品应有明确的标识，包括样品编号、采集日期、采集人员等信息。
在送检前，还需提供有关样品的详细信息，如采集部位、样品类型、存储条件等。
3. 送检样品的质量要求：送检的样品应具备一定的质量要求，如无污染、无损坏等。
特别是对于灭菌的样品，应注意保持其灭菌状态，防止二次污染。
三、注意事项：1. 采集和送检的时间和温度：采集后的样品应尽快送检，避免样品在过长时间内暴露在环境中。
对于某些需要在特定温度下进行分析的样品，如冷藏或冷冻样品，应在规定温度下送检。
2. 采集和送检的环境条件：采集和送检过程中，应保持清洁、无菌的环境条件，避免交叉污染。
对于一些环境样品，如空气、水等，还需注意样品的采集容器和送检容器的无菌性。
3. 送检单及其他材料的填写和附带：在送检时，须填写完整准确的送检单，将送检样品的相关信息填写清楚。
如果有其他相关材料或信息，如样品的处理方法、存储条件等，也应附带说明。
微生物无菌取样方法
微生物无菌取样方法在讨论无菌取样得原因与采集方法之前,必须要理解“无菌得”得这一术语,“无菌"一般用于取样中,意味着取样过程中,避免操作引起污染、一个无菌样品得采集,应该通过这样一种方式,即:在收集过程中,本身应避免污染,然后放入消毒容器中。
一、包装无菌取样得工具:拥有正确得采取产品或加工过程得无菌取样器械工具就是至关重要得得。
除非使用合适得采集工具,否则样品得完整性会被怀疑,甚至样品毫无意义。
为了避免没有合适得取样工具,建议建立一个无菌取样得分析清单,来收集取样工具。
如果可能盛样品得容器在最初进入加工区之前应当被预先标识,像样品号、取样日期、取样人等。
这样可以使在不同得工厂条件下得样品取样更为方便一些。
附加样品号码一般在样品采集中被正式确定下来,因此不用预先标明。
人员得工具设施,像工作服、发网或消毒处理过得清洁得鞋靴必须具备有助于证明采集者没有污染到食物产品或样品。
二、采样前准备1、干冰或冰袋:如果使样品在贮运过程中保持冷却,一些种类得制冷剂就是必需得。
检查观瞧干冰袋子就是否有接触,如果泄漏可能污染样品,您也可以用湿冰,湿冰可以由工厂提供,然而取样前必须清楚这一点,如果想保持样品冷冻,干冰应在检验前获得、2。
灭菌容器及器具:无菌采样袋,袋子必须购买灭菌得,使用时只需撕掉封头,用提供得地方法张开袋子,将样品放入,然后将袋子顶端卷起,并封口;必要时,取样用镊子,剪子等要灭菌处理。
３。
无菌手套:灭菌手套在采样中并非必须启用,如果一个产品在样品收集过程中必须被接触,那么最好让工人来做(加工处理产品得工人),将样品放入收集容器中,既然工人在生产过程中处理接触产品,那么我们就不能认为她们对产品又有附加得污染。
当用手套时必须用一种避免污染得方式戴上,手套得大小必须适合工作得需要、4、7５％酒精棉球以及7５％酒精喷壶,一次性帽子,口罩以及白大褂、当采集无菌样品时,一条最重要得规则就是:千万别污染样品。
微生物的取样方法
微生物的取样方法
常见的微生物取样方法包括：
1. 表面取样法：使用无菌棉签或无菌采样布，在被检测表面擦拭或拍取，将生物样品收集到无菌管中。
2. 空气取样法：通过空气采样器或空气压力采样器，收集空气中的微生物到无菌培养基上。
3. 液体取样法：对液体样品进行取样，包括悬浮液、沉淀液、过滤液等。
4. 直接取样法：直接从生物体内取样，包括血液、尿液、粪便等。
5. 环境土壤取样法：将土壤样品取样到无菌容器中，进行分离和培养。
6. 水体取样法：将水体样品收集到无菌容器中，进行分离和培养。
注：以上方法均需注意无菌操作，避免交叉污染。
如果需要进行纯培养，可以进行单个微生物的分离，采用接种环、压板等方法。
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微生物无菌取样方法
欧阳光明（2021.03.07）
在讨论无菌取样的原因和采集方法之前，必须要理解“无菌的”的这一术语，“无菌”一般用于取样中，意味着取样过程中，避免操作引起污染。
一个无菌样品的采集，应该通过这样一种方式，即：在收集过程中，本身应避免污染，然后放入消毒容器中。
一、包装无菌取样的工具：
拥有正确的采取产品或加工过程的无菌取样器械工具是至关重要的的。
除非使用合适的采集工具，否则样品的完整性会被怀疑，甚至样品毫无意义。
为了避免没有合适的取样工具，建议建立一个无菌取样的分析清单，来收集取样工具。
如果可能盛样品的容器在最初进入加工区之前应当被预先标识，像样品号、取样日期、取样人等。
这样可以使在不同的工厂条件下的样品取样更为方便一些。
附加样品号码一般在样品采集中被正式确定下来，因此不用预先标明。
人员的工具设施，像工作服、发网或消毒处理过的清洁的鞋靴必须具备有助于证明采集者没有污染到食物产品或样品。
二、采样前准备
1.干冰或冰袋：如果使样品在贮运过程中保持冷却，一些种类的制冷剂是必
需的。
检查观看干冰袋子是否有接触，如果泄漏可能污染样品，你也可以用
湿冰，湿冰可以由工厂提供，然而取样前必须清楚这一点，如果想保持样品冷冻，干冰应在检验前获得。
2.灭菌容器及器具：无菌采样袋，袋子必须购买灭菌的，使用时只需撕掉封
头，用提供的地方法张开袋子，将样品放入，然后将袋子顶端卷起，并封口；必要时，取样用镊子，剪子等要灭菌处理。
3.无菌手套：灭菌手套在采样中并非必须启用，如果一个产品在样品收集过
程中必须被接触，那么最好让工人来做（加工处理产品的工人），将样品放入收集容器中，既然工人在生产过程中处理接触产品，那么我们就不能认为他们对产品又有附加的污染。
当用手套时必须用一种避免污染的方式戴上，手套的大小必须适合工作的需要。
4.75%酒精棉球以及75%酒精喷壶，一次性帽子，口罩以及白大褂。
当采集无菌样品时，一条最重要的规则是：千万别污染样品。
三、采样
抽样必须遵循无菌操作程序，抽样工具如整套不锈钢勺子、镊子、剪刀等应当高压灭菌，防止一切可能的外来污染。
容器必需清洁、干燥、防漏、广口、灭菌，大小适合盛放检样。
抽样全过程中，应采取必要的措施防止食品中固有微生物的数量和生长能力发生变化。
确定检验批，应注意产品的均质性和来源，确保检样的代表性。
常见的抽样方法有：
1．直接食用的小包装食品：
尽可能取原包装，直到检验前不要开封，以防污染。
2．桶装或大容器包装的液体食品：
（1）．抽样前摇动或用灭菌棒搅拌液体，尽量使其达到均质；
（2）．抽样时应先将抽样用具浸入液体内略加漂洗，然后再取所需量的样品，装人灭菌盛样容器的量，不应超过其容量的四分之三，以便于检验前将样品摇匀；
（3）．取完样品后，应用消毒的温度计插入液体内测量食品的温度，并作记录。
尽可能不用水银温度计测量，以防温度计破碎后水银污染食品；
（4）．如为非冷藏易腐食品，应迅速将所抽样品冷却至0-4℃。
3．桶装或大容器包装的固体和固体食品：
（1）．每份样品应用灭菌抽样器由几个不同部位采取，一起放入一个灭菌容器内；
（2）．注意不要使样品过度潮湿，以防食品中固有的细菌增殖。
4．桶装或大容器包装的冷冻食品
（1）．对大块冷冻食品，应从几个不同部位用灭菌工具抽样，使之有充分的代表性。
（2）．在将样品送达实验室前，要始终保持样品处于冷冻状态。
样品一旦融化，不可使其再冻，保持冷却即可。
无菌采样操作步骤
1.穿白大褂，戴口罩帽子。
2.戴一次性无菌手套，穿戴过程中不能污染手套表面。
3.取样前，再用75%酒精对一次性无菌手套进行消毒处理，待手套表面干燥
后，方能取样。
4.撕开无菌袋封头，捏住张开装置，打开无菌袋。
5.采集样品，如工作人员有盛装工具，用现场的工具采样，如没有，用自备无
菌工具采样。
6.采样完毕，无菌袋封口，保证不泄露，不被污染。
7.冷藏或冷冻样品，要相应的保温处理。
采样器具汇总表。