MTT法测定乳酸菌活菌数的研究
乳酸菌活菌数
乳酸菌活菌数乳酸菌活菌数是指在某一产品中存活的乳酸菌的数量。
乳酸菌是一种益生菌，具有很多益处。
乳酸菌活菌数直接影响产品的质量和功效。
本文将探讨乳酸菌活菌数的重要性以及如何保证其活菌数在产品中的稳定性。
乳酸菌是一种对人体有益的菌群，它可以促进肠道健康。
乳酸菌能够抑制有害菌的生长，维持肠道微生态平衡。
此外，乳酸菌还可以增强免疫系统的功能，提高人体抵抗力。
因此，乳酸菌活菌数的高低直接关系到产品的功效和效果。
乳酸菌活菌数的稳定性是产品质量的重要指标。
乳酸菌是一种活性菌种，其活性会随着时间的推移而下降。
因此，在生产过程中，要保证产品中乳酸菌的活菌数尽可能稳定。
为了实现这一目标，生产商需要采取一系列措施来保护乳酸菌的活性，例如控制产品的存储温度、使用合适的包装材料等。
乳酸菌活菌数的高低还与产品的储存时间有关。
乳酸菌在产品中的存活时间一般较短，因此产品的储存时间越长，乳酸菌活菌数就越低。
为了确保产品的质量，消费者在购买产品时需要留意产品的生产日期和保质期。
同时，消费者在使用产品时也要注意适当的保存方式，避免产品在储存过程中乳酸菌活菌数的下降。
乳酸菌活菌数的测试方法有很多种。
其中，最常用的方法是通过培养基培养菌落来计数。
这种方法可以直观地反映乳酸菌的活菌数。
另外，还可以使用分子生物学的方法来检测乳酸菌的活菌数。
这种方法可以检测到乳酸菌的DNA，从而精确计算活菌数。
无论使用哪种方法，都需要严格控制实验条件，确保测试结果的准确性。
乳酸菌活菌数的标准因国家和地区而异。
不同的国家和地区对乳酸菌活菌数都有相关的标准规定。
消费者在购买产品时可以根据这些标准来选择适合自己的产品。
同时，生产商也需要参考这些标准来确保产品的质量。
乳酸菌活菌数是乳酸菌产品质量的重要指标。
乳酸菌能够促进肠道健康，增强免疫系统功能。
为了保证产品质量，生产商需要采取措施来保护乳酸菌的活性。
消费者在购买产品时也要注意产品的生产日期和保质期。
乳酸菌活菌数的测试方法有多种，但都需要严格控制实验条件。
mtt评价法
mtt评价法摘要：1.MTT 评价法简介2.MTT 评价法的应用范围3.MTT 评价法的优缺点4.MTT 评价法在我国的发展正文：一、MTT 评价法简介MTT 评价法，全称为“最小总体培养时间法”（Minimum Total Time Method），是一种用于评估微生物生长速度的实验方法。
该方法通过比较不同条件下微生物生长至某一特定数量所需的最短时间，从而评估不同条件下微生物的生长速度。
这种方法被广泛应用于微生物学、生物技术、环境科学等领域。
二、MTT 评价法的应用范围MTT 评价法主要应用于以下几个方面：1.微生物生长速度的评估：通过比较不同条件下微生物生长至某一特定数量所需的最短时间，可以评估不同条件下微生物的生长速度。
2.抗生素敏感性测试：通过评估抗生素作用下微生物生长速度的变化，可以初步判断抗生素对微生物的敏感性。
3.生物降解能力评估：通过评估微生物降解有机污染物的速度，可以评估微生物的生物降解能力。
4.生物活性物质筛选：通过评估微生物在特定条件下的生长速度，可以筛选出具有潜在生物活性的物质。
三、MTT 评价法的优缺点1.优点：（1）操作简便：MTT 评价法操作简单，实验周期较短，适用于大规模筛选实验。
（2）结果直观：通过比较不同条件下微生物生长至某一特定数量所需的最短时间，结果直观且易于理解。
（3）适用范围广泛：MTT 评价法可用于评估微生物生长速度、抗生素敏感性、生物降解能力等，适用于多个领域。
2.缺点：（1）实验条件要求较高：MTT 评价法需要严格控制实验条件，如温度、湿度、培养基成分等，否则可能导致实验结果偏差。
（2）受主观因素影响较大：MTT 评价法评估结果依赖于实验者的观察和判断，可能存在主观差异。
四、MTT 评价法在我国的发展近年来，我国在MTT 评价法的研究和应用方面取得了显著进展。
利用MTT法检测活细胞数量和结果分析
1）对数生长期细胞 2）受试因素（药物或细胞） 3）Actinomycin D 4）MTT：以PBS配制成5mg/ml，抽虑除菌，避光 保存在4˚C 5）DMSO（二甲基亚砜） 6）96孔板 7）酶联免疫检测仪 8）细胞培养箱
三、实验步骤
1）收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度， 将待测细胞(L-929)调密度至3×105/ml，含 10% FCS的完全培养基，100l/孔，（边缘 孔用无菌水填充），5%CO2，37℃孵育， 至细胞单层铺满孔底（96孔平底板）。 2）置37℃、5%CO2温箱培养使细胞贴壁过 夜。
MTT法
一、原理
噻唑兰，简称MTT，可透过细胞膜进入细 胞内，活细胞线粒体中的琥珀脱氢酶能使 外源性MTT还原为难溶于水的蓝紫色的 Formazan结晶并沉积在细胞中，结晶物能 被二甲基亚砜（DMSO）溶解，用酶联免疫 检测仪在570nm波长处测定其光吸收值，可 间接反映细胞数量。
二、试剂材料准备与实验仪器
6）96孔板在培养箱中，由于湿度不够，而培养箱由于具 有一定的温度，使得边缘的孔水分蒸发较快，导致培养基 中各种成分浓度变化增大，导致细胞状态不同。对于这种 现象，边缘孔用无菌水填充并要保证培养箱中的湿度，减 少开关培养箱的次数和时间。 7）注意细胞悬液一定要混匀，以避免细胞沉淀下来，导 致每孔中的细胞数量不等，可以每接几个就要再混匀一下。 建议使用连续加样器。 8）没有去掉上清直接加DMSO，沉淀会很难溶解。加 DMSO前要把液体吸掉，但培养液里的紫色结晶可能会吸 去，也可在倒之前先用平板离心机离心96孔板，1000r，5 分钟，然后吸掉上清。 9）为了减少误差，培养板的四边孔只加培养基或只接种 细胞，而不作为指标检测孔。 10）除置摇床上低速振荡10 min，使结晶物充分溶解外， 可用枪头吹打，加快溶解，效果亦可；或放入37度放孵箱 15分钟溶解结晶。
ldh法和mtt法
ldh法和mtt法一、介绍在细胞实验研究中，细胞增殖和生长的检测是必不可少的。
而常用的细胞增殖和生长检测方法有许多种，其中较为常见的是LDH法和MTT法。
这两种方法都是通过细胞的代谢和细胞的状态来反映细胞的增殖和生长情况的。
二、LDH法LDH法全称为乳酸脱氢酶检测法，是利用乳酸脱氢酶的氧化还原作用来检测细胞增殖和生长的方法。
该方法基于细胞膜通透性的变化，当细胞膜发生损伤或破裂时，细胞内的乳酸脱氢酶会释放到培养基中。
而乳酸脱氢酶检测法就是通过检测培养基中乳酸脱氢酶含量的变化来判断细胞是否发生了损伤或破裂，以此来推测细胞的增殖和生长情况。
三、MTT法MTT法全称为四氮唑盐（3-（4,5-二甲基-2-噻唑）-2,5-二苯基-二氮杂烷）法，是利用MTT盐的还原作用来检测细胞增殖和生长的方法。
该方法的原理是将MTT盐加入细胞培养液中，MTT盐通过细胞中的酶反应还原成具有紫色的甲醛样代谢产物。
而这个代谢产物则会在细胞中不断积累，从而使细胞颜色越来越深。
最后，通过检测细胞的颜色深浅来推测细胞的增殖和生长情况。
四、LDH法和MTT法的比较1.优点与缺点LDH法的优点是可以反映细胞的状态和增殖情况，适用于不同种类的细胞；缺点是需要时间较长，对细胞损伤有一定影响。
而MTT法的优点是简单易行，可作为高通量筛选的快速方法；缺点则是对细胞形态和生长状态的要求较高，对于一些较小或幼稚的细胞不适用。
2.应用范围LDH法和MTT法都常用于评估各种细胞因素（如生长因子、激素、细胞毒性物质等）对细胞生长的影响；同时也受到在细胞增殖实验和细胞毒性实验中的广泛应用。
此外，LDH法和MTT法也可应用于肿瘤和炎症等疾病的研究。
3.实验难度和操作技巧LDH法和MTT法均需要一定的实验基础和耐心，但LDH法一般操作难度稍高些。
五、总结细胞增殖和生长检测方法是细胞实验研究中非常重要的组成部分。
LDH法和MTT法是两种常用的检测方法，不仅能反映细胞的增殖和生长情况，也广泛应用于肿瘤和炎症等疾病的研究。
MTT法在细菌活性检测及药敏试验中的应用
ｄ ｔ ｔ ｙｔｅｂｏｈｍｉ ｏｉ ｔｎｍ ｔｏ （ ｅｅ ｅ ｂ ｒｔ ｃ ｄｌ ｉ ｅｈｄ 尸＞００ ） Ｗｈ ｎｃｍ ａｅ ｉ ｅｓｍ ｏｃｎｒｔｎｏ ｔｅｄａ ａｔｒ ’ｏ— ｃｄ ｈ ｒ ｕｏ ．５ ； ｅ ｏ ｐ ｒｄｗｔ ｔ ｅｃｎｅ ｔ ｉ ｆｈ ｅｄｂｃｅ ａ ｐ ｈｈ ａ ａｏ ｉｓ
相比 ， Ｔ Ｍ Ｔ法检测 的活菌吸光度值明显增加 ，检验结果显示差 异均有统 计学意义 （ ０ ０ ） 用 微量 肉汤稀 释法 和 ｔ Ｐ＜ ． ５ ；
Ｍ ｒ Ｔ 法检测 的鲍曼不 动杆菌 对丁胺卡拉霉素和头孢他啶的敏感性均与临床药 敏结果一致 。结论
法一样 ， ｒｒ 可以用 于检测细菌活性和药 敏试验。 ＭＩ 法 Ｔ
ｃ ｎ ｒ ｔ ｎ ｏ ａ ｔ ｒ ｎ ｒ ａ ｉ ｇ ｔ ｅ ｏ ｔｃ ｌｄ ｎ ｉ ｆｅ ｅｙ ｇ ｏ ｐ ｄ ｔ ｃｅ ｙ ｔ ｅ ＭＴＩ ｓａ ｒｂ ｏｈ ｍｉｒ ｄ ｌ ｔｏ ｓ ｍ－ ｅ ｔａ ｉ ｆｂ ｃｅ ａ ｉ ｃ ｅ ｓｎ ｈ ｐ ｉａ ｅ ｓｔ ｏ ｖ ｒ ｒ ｕ ｅｅ ｔ ｄ ｂ ｈ ｏ ｉ ｙ ＂ａ ｓ ｙ ｏ ｒ ｔ ｃ ｏ ｉ ｉｎ ａ ｏ ｉ ｕ ｌ
Ｍ Ｔ 和微量 肉汤稀 释法 检测鲍 曼不动杆菌活性以及鲍曼 不动杆 菌对 丁胺卡拉 霉素和头 孢他 啶的敏感性 ， Ｔ 法 对两种 随着细菌浓度 增加 ， 微量 肉
汤稀 释法 和 Ｍ ｒ Ｔ 法检测 的活菌 或死菌 的吸光度值均增加 ， 但用微量 肉汤稀释法 检测的 同一浓度 的活菌和死 菌的 吸 光度 值之间差别不大 ，检验结果显示差异无统计学意 义 （ Ｏ ０ ） 而 与用 Ｍ Ｙ 检测 的同一浓 度死菌 吸光度 值 ｔ Ｐ＞ ．５ ； Ｔ 法
主国医堂剑逝
生 — — 鲞箜 ５ 期 Ｍ ｄ ａ Ｉ ｏａｏ ｈ ａＦｂ ａ ０ Ｖ １ ｏ５ ｅｉ ｌｎ ｖｔｎ ｆ ｉ ￣ ｅｒ ｒ ２１ ，ｏ ８Ｎ． ｃ ｎ ｉ ｏＣ ｎ ｕｙ １ ．
mtt实验报告
mtt实验报告MTT实验报告引言：MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物）是一种广泛应用于生物学实验中的化合物。
它具有一种特殊的性质，即可以通过还原型脱氢酶酶促反应，将Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide（MTT）还原为可溶性的紫色产物。
这一反应可以用来评估细胞的代谢活性和细胞存活率。
本实验旨在分析MTT实验的原理、操作步骤以及结果解读，并探讨其在生物学研究中的应用。
一、实验原理：MTT实验的原理基于细胞的代谢活性。
MTT溶液在细胞内被还原为可溶性的紫色产物，其浓度与细胞代谢活性成正比。
通过测量产物的吸光度，可以评估细胞的存活率和细胞毒性。
二、实验步骤：1. 细胞预处理：将需要研究的细胞培养在含有适当培养基的培养皿中，并在恒温恒湿的培养箱中孵育至细胞黏附于培养皿底部。
2. 添加MTT溶液：将MTT溶液加入培养皿中，使其与细胞接触。
MTT溶液的浓度和作用时间可以根据实验需要进行调整。
3. 细胞溶解：将MTT溶液去除，加入溶解剂（如DMSO）溶解细胞内的紫色产物。
4. 吸光度测量：将溶解后的细胞溶液转移到96孔板中，使用酶标仪测量吸光度。
吸光度越高，代表细胞的存活率越高。
三、结果解读：MTT实验的结果通常以吸光度值表示。
通过比较实验组与对照组的吸光度值，可以得出以下结论：1. 细胞存活率：实验组与对照组吸光度值的比较可以反映细胞的存活率。
如果实验组的吸光度值较高，说明细胞存活率较高；反之，说明细胞存活率较低。
2. 细胞毒性：若实验组的吸光度值明显低于对照组，说明实验物质对细胞产生了毒性作用。
3. 药物筛选：MTT实验可以用于药物的筛选。
通过比较不同药物处理组的吸光度值，可以评估药物的效果和毒性。
四、MTT实验的应用：1. 细胞增殖和生长研究：MTT实验可以用于评估细胞的增殖和生长情况，对于研究细胞周期和细胞增殖相关的疾病具有重要意义。
MTT法实验方案及结果
Data 10d 7d 14d 21d 28d1020304050NormalOrlistatA 组10μg/g/dB 组20μg/g/dC 组30μg/g/d******天数体重Data 10d7d14d21d28d1020304050Normal OrlistatA 组10μg/g/dB 组20μg/g/dC 组30μg/g/d天数体重MTT 原理、步骤、结果分析方法及注意事项 MTT 原理MTT 全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide ，汉语化学名为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。
是一种黄颜色的染料。
MTT 比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。
其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT 还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm 波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT 结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济。
缺点：由于MTT 经还原所产生的甲臜产物不溶于水，需被溶解后才能检测。
这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。
MTT 溶液的配制方法通常，此法中的MTT浓度为5mg/ml。
因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液(PBS)或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃避光保存即可。
在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。
实验一乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物检验
引言概述：乳酸菌饮料是一种富含乳酸菌的食品，乳酸菌在食品工业中广泛应用于酸奶、乳饮料等产品中。
本文将详细介绍乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物检验方法。
正文内容：一、样品采集和制备1.确定样品采集时机：乳酸菌饮料中的乳酸菌数量会随着储存时间的增加而增加或减少，因此需要在存储时间稳定的情况下进行采集。
2.采集样品方法：使用无菌技术采集样品，避免外部微生物的污染。
3.样品制备：将采集到的样品进行均匀搅拌，以保证样品的均匀性。
二、总菌数检验方法1.琼脂平板法：将样品制备成一定稀释倍数的悬浮液，在琼脂平板上涂布，经过一定孵育时间后，根据菌落的数量计算总菌数。
2.膜过滤法：将样品通过膜过滤器过滤，将过滤后的膜放置在琼脂平板上孵育，根据菌落的数量计算总菌数。
三、乳酸菌检验方法1.培养基选择：根据乳酸菌的生长特性选择适合的培养基，常见的培养基有MRS培养基、LBS培养基等。
2.乳酸菌的分离：将样品制备成一定稀释倍数的悬浮液，均匀涂布在选定的培养基上。
经过一定孵育时间后，可以观察到乳酸菌形成的菌落。
3.鉴定乳酸菌：使用形态学观察、生理生化试验和分子生物学方法等进行乳酸菌的鉴定。
四、活菌数检验方法1.孵育培养基法：将样品制备成一定稀释倍数的悬浮液，均匀涂布在含有乳酸菌生长所需营养物质的培养基上。
经过一定孵育时间后，观察活菌的生长情况，计算活菌数。
2.阻碍培养基法：将样品制备成一定稀释倍数的悬浮液，与含有抑制剂的培养基混合。
通过观察生长情况，计算活菌数。
五、质量指标评价方法1.pH值测定：使用pH计或试纸对乳酸菌饮料中的pH值进行测定，根据标准范围评价产品的质量。
2.乳酸浓度测定：使用乳酸测定仪器或化学试剂对乳酸菌饮料中的乳酸浓度进行测定，根据标准范围评价产品的质量。
3.品尝评价：通过专业的品尝人员进行品尝评价，评估乳酸菌饮料的口感和风味。
总结：乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物检验方法包括样品采集和制备、总菌数检验、乳酸菌检验、活菌数检验和质量指标评价方法。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
62MTT法测定乳酸菌活菌数的研究黄立坤，杜鹏2，霍贵成*乳品科学教育部重点实验室（东北农业大学） (哈尔滨 150030)摘要建立一种快速、稳定、灵敏并可反映细菌活性的细菌计数方法。
以乳酸菌中的保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌为研究对象，探讨MTT法用于细菌计数的可行性及测量细菌数量的范围、反应时间、MTT 的用量、是否加入溶解剂等实验条件。
结果：保加利亚乳杆菌在(1.0×105～2.18×107) cfu/mL内测出的OD 570值与细菌浓度呈良好的正相关，反应时间1.5 h，MTT添加量20 μL，测量前用DMSO溶解；嗜热链球菌在(2.0×105～5.12×107) cfu/mL范围内测出的OD 570值与细菌浓度呈良好的正相关，反应时间2.0 h，MTT添加量20 μL，可不添加溶解剂直接测量。
MTT比色分析法可用于检测乳酸菌活菌数量。
关键词MTT；保加利亚乳杆菌；嗜热链球菌；活菌计数Inquiring into the Method of Counting Live Germ with MTTAbstract To establish a rapid, steady and sensitive bacteria-counting method that could reflect the bacteria’s activity. Lactabacillus delbrueckii ssp. bulgaricus and St reptococcus thermophilus were employed to discuss the feasibility of application of MTT method to bacteria-counting and determine the conditions of the assay, including linear range, reaction time, MTT dosage and whether solvent is added etc.. Results: The optical density at 570 nm is positively related to the concentration of L.delbrueckii ssp. bulgaricus when the number of the bacteria is in the range of (1.0×105~2.18×107) cfu/mL, and reacting time is 1.5 h, MTT dosage is 20 μL, and DMSO is used as solvent before assay; For St.thermophilus , the optical density at 570 nm is positively related to the concentration of the bacteria when the number of the bacteria is in the range of (2.0×105~5.12×107) cfu/mL, and reacting time is 2.0 h, MTT dosage is 20 μL and solvent is not added.. Conclusion: MTT colorimetry could be used to measure the viability of lactic acid bacteria.Keywords MTT colorimetry ；lactobacillus bulgaricus ；Streptococcus thermophilus ；live germ counting 基金项目：国家科技基础条件平台项目（2005DKA21204-08）资助。
* 通讯作者活菌计数在科研生产中有着广泛的应用，用于细菌计数的常规方法有平板稀释计数法(SPC)，自动菌数测定仪法，浊度法，菌体干重法等。
SPC法为经典方法，但方法繁琐，耗时长，不能及时反映菌体生长情况，不适合于做大批量的实验；后几种方法不能区分细胞的死活，且测定结果受培养基、代谢产物的影响较大[1]。
试验用MTT快速活菌计数法，以克服上述缺点，且工作量小，操作简单，快速，重复性好，能区分死活菌等。
MTT是一种噻唑盐，化学名3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑，结构式如图1。
MTT法基本原理是活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性的MTT的四唑环还原为难溶性的蓝紫色结晶物甲臜（Fonmazan），而死细胞无此作用[2]。
形成的甲臜颗粒沉积于细胞内或细胞周围，在一定细胞浓度范围内，其生成量与细胞数目和/或细胞活性呈正相关，用二甲亚砜(DMSO)溶解所生成的甲臜，通过检测光密度值变化，可间接反映细胞生长及增殖活性[3]。
1 材料与方法1.1 材料图1 MTT的分子结构式1.1.1 菌种保加利亚乳杆菌（L . delbrukki subsp. bulgaricus ，L.b ）1.8501菌株和嗜热链球菌（S .thermophilus ，S.t ）3.8501菌株，均为乳品科学教育部重点实验室（KLDS ）提供。
1.1.2 试剂及溶液（1）试剂：MTT，二甲亚砜(DMSO)。
（2）MTT溶液配制：称取100 mg MTT (Amresco 分装)于小烧杯中。
加20 m L P B S (0.0l m o l /L ，pH=7.2)，使其充分溶解，用0.22 μm微孔过滤器除菌，分装于1.5 mL的EP管中，4℃避光保存。
两周内使用，时间过长，溶液中易进微生物起反应，改变MTT溶液的浓度。
63（3）PBS溶液配制（用于溶解MTT）：8 g氯化钠，1.15 g磷酸氢二钾，0.2 g磷酸二氢钾去离子水定容至1 000 mL，用精密pH计调节pH=7.2，溶液浓度为0.01 mol/L。
121℃灭菌15 min，室温保存。
（4）PBS溶液配制（用于稀释菌液）：8.5 g氯化钠，0.2 g氯化钾，2.85 g磷酸氢二钠，0.27 g磷酸二氢钾，去离子水定容至1 000 mL，pH值调至7.0，121℃灭菌15 min，室温保存。
（5）培养液的配制：保加利亚乳杆菌用液体MRS培养，嗜热链球菌用M17+1.5%乳糖培养。
1.1.3 设备BID-RAD 680全自动酶标仪：日本；HVE-50高温高压灭菌锅：HIRAYAMA，日本；DHP-9272电热恒温培养箱：上海一恒科技有限公司；VD-1320洁净工作台：北京东联哈尔滨仪器制造有限公司；METTLER-TOLEDO320pH计：瑞士；GL-21冷冻离心机：上海市离心机械研究所；芬兰可调式移液器：热电上海仪器有限公司。
1.2 方法1.2.1 乳酸菌的培养方法将500 mL的液体培养基装入三角瓶中，121℃灭菌15 min后，接入3％的种子培养液，1.8501菌株于37℃培养12 h~15 h，3.8501菌株于42℃培养14 h～16 h，然后收获菌体。
1.2.2 平板菌落计数法将不同稀释度的菌液0.1 mL加入到预先准备好的固体平皿培养基中，再用无菌玻璃刮棒将菌液在平板上涂布均匀，平放于实验台上20 min～30 min，使菌液渗透入培养基内，然后再倒置于37℃的温箱中培养，48 h后计数。
1.2.3 MTT比色实验（1）取发酵好的菌液，用灭好菌的PBS稀释液倍比稀释成10个浓度，分别对不同浓度的菌液做MTT比色实验，同时选择合适的稀释度，做平板菌落计数。
（2）用微量吸液器吸取不同浓度的发酵液100 μL，分别加入96孔酶标板中，每个样液做5个复孔，同时设阴性对照。
（3）用微量吸样器在96孔酶标板中含有样品的各孔分别加入10 μL或20 μL的MTT应用液，1.8501菌株于37℃、3.8501菌株于42℃恒温培养箱放置数小时后取出，向各孔分别加入100 μL的DMSO，用全自动酶标仪于570 nm处测定OD 570值，测量前振动60 s。
2 结果与讨论2.1 甲臜在DMSO溶剂中的光吸收值甲臜的DMSO溶液呈蓝紫色，不同的文献报道其吸收峰值有所差异，分别有在525 nm [3] ，550 nm [4]，570 nm [5]处的。
考虑到实验的具体影响因素不同，需具体测定实验中甲臜溶液的吸收光谱。
扫描范围为450 nm~650 nm，测量结果如图2所示，由图可知，甲臜的最大吸收峰在570 nm处。
⊶䭓 QP2'ؐ图2 甲臜最大吸收峰的确定2.2 最佳反应条件的确定不同菌种因活性不同其反应时间也不一样。
通过观察菌液颜色变化，分别设定三个反应时间：1.8501菌株为0.5 h，1.0 h，1.5 h；3.8501菌株为2.0 h，3.0 h，4.0 h。
加入MTT的量设为10 μL或20 μL两个梯度，反应结束后立即测定OD 570值，每孔加入100 μL 的DMSO后再测一次。
由测量结果可知，各孔OD 570值随反应时间的延长、MTT的量增加而有所增加，在测量范围内，细菌数与OD 570值均呈正相关。
但1.8501菌株在反应1.5 h，加入20 μL MTT，并且添加DMSO溶剂时，相关性最好，相关系数r＝0.997，P<0.01，差异极显著；3.8501菌株在反应2.0 h，加入20 μL MTT，不添加DMSO溶剂时，相关性最好，相关系数r＝0.987，P<0.01，也具有极显著的相关性。
不同条件下的线性相关分析如表1、表2所示。
表1 1.8501菌株活菌数与OD 570值线性相关结果反应时间 /h MTT添加量 /μL R 2（反应后直接测OD 570值）R 2（添加DMSO 后再测OD 570值）0.5100.9580.9681.0100.9430.8681.5100.9370.9270.5200.9610.9921.0200.9500.9131.5200.9570.997表2 3.8501菌株活菌数与OD 570值线性相关结果反应时间 /h MTT添加量 /μLR 2（反应后直接测OD 570值）R 2（添加DMSO后再测OD 570值）2.03.04.02.03.04.01010102020200.9620.9340.9540.9870.9780.9620.9590.9550.9170.9520.9730.9702.3 干扰物对测定结果的影响对实验过程所要接触到的介质作干扰实验，在这里以DMSO为参比，MTT溶液、PBS溶液、空白培养基，死菌体(将活菌液在100℃沸水浴煮30 min)作为干扰物，用上述的MTT测定方法分别测定吸光值，结果如表3所示。