【CN109757712A】一种高凝胶性大豆多肽酪蛋白非磷酸肽组装蛋白及其制备方法【专利】
一种高纯度酪蛋白磷酸肽制备方法[发明专利]
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(10)申请公布号 (43)申请公布日 2014.02.12C N 103571905A (21)申请号 201310523826.1(22)申请日 2013.10.30C12P 21/06(2006.01)C07K 1/36(2006.01)C07K 1/34(2006.01)C07K 1/18(2006.01)(71)申请人广州绿萃生物科技有限公司地址510663 广东省广州市广州科学城掬泉路3号广州国际企业孵化器A 区904房(72)发明人曹庸 李双祁 刘飞 彭维 郭斌吴成顺 黄慧明 王海波(54)发明名称一种高纯度酪蛋白磷酸肽制备方法(57)摘要一种高纯度酪蛋白磷酸肽制备方法，是将酪蛋白加水溶解，用胰蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、凝乳蛋白酶和木瓜蛋白酶任意四中组成的复合蛋白酶和胃蛋白酶进行二次酶解，经杀菌，过滤后再经阳离子交换树脂和阴离子交换树脂二次纯化处理，用水洗弃去水洗液后，再用浓度为0.5%-1%的盐酸洗脱，纳滤膜脱盐、干燥而成。
本发明可以有效提高酪蛋白磷酸肽的得率（≥17%）和纯度（≥90%），所制得的酪蛋白磷酸肽无苦味，水溶性好、20%CPP 的水溶液澄清透明，颜色为纯白色粉末。
本发明制备的乳源性酪蛋白磷酸肽的分子量主要在1000-5000之间，有利于人体吸收，是一种成本低，工艺简单的制备方法，适合工业化生产。
(51)Int.Cl.权利要求书1页 说明书4页 附图2页(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书4页 附图2页(10)申请公布号CN 103571905 A1/1页1.一种高纯度酪蛋白磷酸肽制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）加酪蛋白6-10倍质量的水，在40℃-50℃条件下搅拌溶解；（2）加入复合蛋白酶进行酶解，酶解条件为：加酶量为酪蛋白质量的0.05%-0.2%，反应温度40℃-50℃，反应时间1 h -2h ， pH 7.0-9.0，所述复合蛋白酶为胰蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、凝乳蛋白酶和木瓜蛋白酶中的任意四种的混合物，复合蛋白酶酶解之后，再添加酪蛋白质量的0.05%-0.1%的胃蛋白酶在温度40℃-50℃、pH 值4.0-5.0下再酶解1h-2h ；（3）将温度调节至80~90℃，保温20 min-30 min ，进行灭菌；（4）调pH 值4.0-5.0，过滤除去未酶解的大分子蛋白沉淀；（5）上清液调整pH 为4.0-5.0，使用阳离子交换树脂吸收纯化1h-4h ，过滤，滤液调整纯化液pH 为6.0-7.0，再使用阴离子交换树脂进行纯化1h-4h ，先用水洗，弃去水洗液后，再用浓度为0.5%-1%的盐酸洗脱；（6）洗脱液利用超滤膜分离出酪蛋白磷酸肽，再用纳滤膜脱盐，得到小于5000D 的酪蛋白磷酸肽液；（7）经过冷冻干燥、喷雾干燥、真空干燥的任意一种，对得到的产物进行干燥成粉。
大豆多肽的制备工艺探究
大豆多肽的制备工艺探究大豆多肽是一种重要的生物活性肽，在医药、保健品、化妆品等领域具有广泛的应用前景。
为了实现大豆多肽的商业化生产，需要开发和优化其制备工艺。
本文将探讨大豆多肽的制备工艺，包括原料准备、提取纯化、酶解及多肽纯化等环节。
一、原料准备大豆是制备大豆多肽的主要原料。
在大豆中，多肽主要存在于蛋豆蛋白中，因此需要先从大豆中提取蛋白质。
大豆蛋白主要包括大豆分离蛋白和大豆食品蛋白两种，可以根据需求选择合适的原料进行制备。
二、提取纯化大豆蛋白的提取可以采用代用水、酸或盐溶液等方法。
其中，代用水法是最常用的提取方法之一、具体操作步骤包括：将大豆粉加入适量的水中，与水搅拌均匀，过滤离心，得到大豆蛋白液。
为了提高大豆蛋白的纯度，可以采用脱色、去脂肪等方法进行进一步的纯化处理。
三、酶解酶解是将大豆蛋白中的多肽进行降解的过程。
常用的酶包括胰蛋白酶、链霉亲子酶、狄普西酶等。
酶解条件包括酶解剂质量浓度、反应时间、反应温度等。
一般来说，酶解剂质量浓度和反应时间较高，反应温度较低，可以得到较高的酶解率和多肽产率。
四、多肽纯化多肽纯化是将酶解产物中的多肽纯化为目标产物的过程。
常用的多肽纯化方法包括超滤、透析、离子交换色谱、凝胶渗透色谱等。
其中，超滤是最常见和简便的纯化方法。
超滤膜的孔径选择根据多肽分子量的大小，通常为1kDa左右。
在多肽纯化过程中，还可以通过中性洗脱、梯度洗脱等方法进一步提高纯化效果。
此外，还可以使用逆向高效液相色谱、薄层色谱等方法进行目标多肽的分离纯化。
综上所述，大豆多肽的制备工艺包括原料准备、提取纯化、酶解和多肽纯化等环节。
通过合理选择原料、优化工艺参数和选择合适的纯化方法，可以获得高纯度的大豆多肽产品。
对于大豆多肽的制备工艺的探究，有助于推动大豆多肽的商业化生产，并满足不同领域对大豆多肽的需求。
一种大豆蛋白肽及其制备方法和应用[发明专利]
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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810342079.4(22)申请日 2018.04.17(71)申请人 南京财经大学地址 210023 江苏省南京市仙林大学城文苑路3号(72)发明人 沈新春 冯晨 汪芳 隋慧琳 (74)专利代理机构 江苏圣典律师事务所 32237代理人 邓丽 王伟(51)Int.Cl.C12P 21/06(2006.01)C07K 1/34(2006.01)C07K 1/16(2006.01)C07K 1/14(2006.01)C07K 1/36(2006.01)(54)发明名称一种大豆蛋白肽及其制备方法和应用(57)摘要本发明涉及一种大豆蛋白肽及其制备方法和应用。
所述大豆蛋白肽采用如下步骤制备：（1）将大豆分离蛋白与超纯水混合，调节pH，添加碱性蛋白酶在一定条件下酶解获得粗大豆肽液；（2）使用超滤膜将粗大豆肽液进行超滤分离；（3）采用Sephadex G-15凝胶柱色谱分离；（4）最后进行冷冻干燥得到该大豆蛋白肽。
本发明还提供了大豆蛋白肽的用途。
本发明以大豆分离蛋白为原料，得到的大豆蛋白肽对成骨细胞具有显著的促进增殖作用。
权利要求书1页 说明书3页 附图2页CN 108531532 A 2018.09.14C N 108531532A1.一种大豆蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述方法步骤为：（1）原料预处理：将大豆分离蛋白溶于超纯水中，配制成3～7%的溶液，调节溶液pH 为7～9；（2）酶解：在步骤（1）所得溶液中加入碱性蛋白酶酶解，酶解结束后离心取上清液，所得上清液即为粗大豆肽液；（3）超滤分离：使用超滤膜对步骤（2）所得的大豆肽液进行超滤分离，收集滤出液，冷冻干燥，得到初步分离纯化的大豆蛋白活性肽；（4）葡聚糖凝胶柱层析：选用交联葡聚糖凝胶柱对步骤（3）所得的活性肽样品进行进一步分离，洗脱液为超纯水，检测波长为220 nm，对洗脱所得的蛋白质按出峰曲线合并收集，浓缩后真空冷冻干燥。
大豆蛋白肽-酪蛋白非磷酸肽组装产物的荧光光谱分析及抗氧化性研究
的3.34、1.12 倍和1.08 倍。 关键词：大豆蛋白肽；酪蛋白非磷酸肽；组装；荧光光谱；抗氧化性
Fluorescence Spectral Analysis and Antioxidant Effect of Soybean Ploypeptide-Casein Non-Phosphorylated Peptide Assembly
ZHANG Na1, GUO Qingqi2, HUANG Wenxiu3, SHI Yanguo1,* (1. Key Laboratory of Food Science and Engineering of Heilongjiang Province, School of Food Engineering, Harbin University of Commerce, Harbin 150076, China; 2. School of Forestry, Northeast Forestry University, Harbin 150040, China; 3. Shandong Yuwang Ecological Food Industry Co. Ltd., Dezhou 251200, China) Abstract: The fluorescence spectra and antioxidant properties of casein non-phosphopeptides-soybean peptide complex (CNPSPC) prepared under different pH conditions were analyzed. The results showed that with the increase of pH, the content of surface-exposed Trp residues buried in hydrophobic environment in CNPSPC was became lower than in the raw protein, and the microenvironment polarity of Trp residues was decreased. The results of thioflavin T (ThT) fluorescence assay showed that the fluorescence intensity of CNPSPC was maximum at pH 6.0, which represented β-sheet was the dominant secondary structure of CNPSPC. The microenvironment of Trp residues was changed by the assembly, thereby changing the molecular conformation of CNPSPC. Compared with casein non-phosphopeptides (CNPP) and soybean peptide (SP), the antioxidant capacity of CNPSPC was improved. The scavenging activities of CNPSPC against 1,1-diphenyl-2picrylhydrazyl (DPPH), superoxide anion and hydrolxyl radicals were maximum at pH 6.0, which increased by 3.34, 1.12 and 1.08 times compared to soybean protein respectively. Key words: soybean polypeptide; casein non-phosphorylated peptide; assembly; fluorescence spectrum; antioxidant activity DOI:10.7506/spkx1002-6630-201717008 中图分类号：TS 201.2 引文格式： 张娜, 郭庆启, 黄文秀, 等. 大豆蛋白肽-酪蛋白非磷酸肽组装产物的荧光光谱分析及抗氧化性研究[J]. 食品科学, 2017, 38(17): 42-46. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201717008. 收稿日期：2016-06-09 基金项目：“十三五”国家重点研发计划重点专项（2016YFD0400400）；黑龙江省博士后科研启动项目（LBH-Q15073）； 哈尔滨市科技局科技创新人才研究专项资金项目（2016RAQXJ146）； 中国食品科学技术学会食品科技基金项目（2016-002）；国家自然科学基金青年科学基金项目（31301602）； 黑龙江省应用技术研究与开发计划项目（GC13B215；GA14B201） 作者简介：张娜（1979—），女，教授，博士，研究方向为食品安全与食品化学。E-mail：foodzhangna@ *通信作者：石彦国（1960—），男，教授，硕士，研究方向为大豆科学。E-mail：yanguosh@ 文献标志码：A 文章编号：1002-6630（2017）17-0042-05
一种大豆多肽的合成方法及其应用[发明专利]
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专利名称：一种大豆多肽的合成方法及其应用专利类型：发明专利
发明人：程贤防
申请号：CN201810783562.6
申请日：20180717
公开号：CN108967649A
公开日：
20181211
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种大豆多肽的合成方法及其应用，涉及多肽领域；(1)将大豆磨粉，筛分去皮，得到大豆精粉，将大豆精粉溶于水中，加热到40‑50℃，在120‑150r/min转速下搅拌2‑3h，搅拌后离心，取沉淀物；(2)向沉淀物中加入蛋白酶、碘酸钾混合均匀，加入水中在28‑32℃下反应
50‑60min，反应后离心，取上清液；(3)将上清液和乙醇按照体积比1：1混合均匀，超声
30‑40min，离心，取下层液体，制得多肽溶液；(4)向多肽溶液中加入溶液质量0.5‑0.7％的氯化钠使多肽析出，完全析出后离心，收集沉淀物，制得大豆多肽；最终制备出纯净的抗氧化大豆多肽，除了具备抗氧化性外，还具有易消化吸收性，且在制备过程中没有采用高温制备，因此营养成分没有损失。
申请人：安徽天安生物科技股份有限公司
地址：237200 安徽省六安市霍山县衡山镇迎驾大道西路888号
国籍：CN
代理机构：合肥中博知信知识产权代理有限公司
代理人：徐俊杰
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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910105062.1
(22)申请日 2019.02.01
(71)申请人 哈尔滨商业大学
地址 150000 黑龙江省哈尔滨市南岗区通
达街138号
(72)发明人 张娜 杨杨 王冰 石彦国
朱秀清 郭庆启 刘琳琳 王立峰
侯俊才 刘晓飞 刘振 陈召剑
(74)专利代理机构 哈尔滨市阳光惠远知识产权
代理有限公司 23211
代理人 邓宇
(51)Int.Cl.
A23L 29/281(2016.01)
A23L 13/40(2016.01)
A23C 9/152(2006.01)
C12P 21/06(2006.01)
(54)发明名称
一种高凝胶性大豆多肽-酪蛋白非磷酸肽组
装蛋白及其制备方法
(57)摘要
本发明公开了一种高凝胶性大豆多肽-酪蛋
白非磷酸肽组装蛋白及其制备方法，属于蛋白制
备技术领域。
该制备方法是先制备大豆多肽和酪
蛋白非磷酸肽，然后将大豆多肽和酪蛋白非磷酸
肽混合成溶液，加入胃蛋白酶进行组装反应，经
灭酶后离心，收集沉淀，将沉淀进行干燥处理后
即得高凝胶性酪蛋白非磷酸肽大豆多肽组装蛋
白。
本发明制备方法具有高凝胶性、高产率、高氨
基酸含量、苦味少，按照该方法所制备的组装蛋
白可以用于肉制品，改善肉品组织结构，赋予肉
制品脆嫩的口感和切片弹性。
权利要求书1页 说明书9页CN 109757712 A 2019.05.17
C N 109757712
A
权 利 要 求 书1/1页CN 109757712 A
1.一种高凝胶性大豆多肽-酪蛋白非磷酸肽组装蛋白的制备方法，其特征在于，所述制备方法是先制备大豆多肽和酪蛋白非磷酸肽，然后将大豆多肽和酪蛋白非磷酸肽混合配置成溶液，加入胃蛋白酶，进行组装反应，经灭酶后离心，收集沉淀，将沉淀经过干燥处理后即得高凝胶性大豆多肽-酪蛋白非磷酸肽组装蛋白。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述大豆多肽和酪蛋白非磷酸肽的混合质量比为(1～5)：1；所述大豆多肽和酪蛋白非磷酸肽混合配置成质量浓度为20％～60％的溶液。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述胃蛋白酶与底物的酶底比为(500-3000)U/g，其中底物为大豆多肽和酪蛋白非磷酸肽。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述组装反应的条件为：组装反应温度为30℃～60℃，组装反应pH值为4～8，组装反应时间为5h-25h。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述大豆多肽和酪蛋白非磷酸肽的混合质量比为3:1，所述大豆多肽和酪蛋白非磷酸肽混合配置成质量浓度为40％的溶液；所述胃蛋白酶与底物的酶底比为2000U/g，其中底物为大豆多肽和酪蛋白非磷酸肽；所述组装反应的条件为：组装反应温度为50℃，组装反应pH值为5.0，组装反应时间为20h。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述大豆多肽的表面疏水性为136；所述酪蛋白非磷酸肽的表面疏水性为80-100。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述大豆多肽的制备方法为：将大豆蛋白配置成质量浓度为5％且pH为8.5的大豆蛋白溶液，置于沸水浴中热处理15min，然后按照酶底比为2000U/g加入Alcalase蛋白酶，其中底物为大豆蛋白，然后在pH值为8.5和55℃恒温条件下酶解4h，酶解结束后将水解液的pH值调节至4.5，灭酶后离心，收集上清液即得表面疏水性为136的大豆多肽溶液，经干燥得大豆多肽。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述酪蛋白非磷酸肽的制备方法为：将干酪素配制成质量浓度为5％的溶液，调节pH值至9.0，使酪蛋白完全溶解，然后加入Alcalase蛋白酶，在60℃恒温条件下水解2h，并将水解液pH值维持在9.0，水解结束后进行灭酶，然后将灭酶后的酪蛋白水解液冷却至室温，加入CaCl2，待CaCl2完全溶解后加入无水乙醇，静置后离心，收集上清液即得表面疏水性为90的酪蛋白非磷酸肽溶液，经干燥得酪蛋白非磷酸肽。
9.权利要求1-8任一所述制备方法制得的高凝胶性大豆多肽-酪蛋白非磷酸肽组装蛋白。
10.权利要求9所述高凝胶性大豆多肽-酪蛋白非磷酸肽组装蛋白在加工肉制品中的应用。
2。