CPP酪蛋白磷酸肽
高效液相色谱法检测婴幼儿配方乳粉中酪蛋白磷酸肽
高效液相色谱法检测婴幼儿配方乳粉中酪蛋白磷酸肽魏敏，李兴佳，柴艳兵，李飞，刘丽，张耀广*（石家庄君乐宝乳业有限公司，农业农村部乳品质量安全控制重点实验室，河北石家庄 050021）摘 要：建立一种高效液相色谱法检测婴幼儿配方乳粉中酪蛋白磷酸肽（casein phosphopeptides，CPP）含量的方法。
对3 种样品前处理方法及2 种上机条件进行优化，确定最优条件。
结果表明：最优前处理条件为用盐酸（1 mol/L）调节乳粉样品溶液pH 4.6后用水转移至50 mL容量瓶中，用滤纸过滤后作为待测液；上机检测时用0.05%三氟乙酸-0.05%乙腈作为流动相体系进行梯度洗脱；样品加标回收率为94.50%～95.45%，线性良好（R2=0.999 8），方法检出限为2.0 mg/100 g。
该方法样品前处理简单、稳定性和可靠性好，检测结果满足线性、精密度、准确度及检出限要求，可用于婴幼儿配方乳粉中CPP含量的测定。
关键词：婴幼儿配方乳粉；高效液相色谱法；酪蛋白磷酸肽Determination of Casein Phosphopeptides in Powdered Formulae for Infants and Young Children byHigh Performance Liquid ChromatographyWEI Min, LI Xingjia, CHAI Yanbing, LI Fei, LIU Li, ZHANG Yaoguang*(Key Laboratory of Dairy Quality and Safety Control, Ministry of Agriculture and Rural Affairs, Shijiazhuang Junlebao Dairy Co. Ltd.,Shijiazhuang 050021, China)Abstract: An analytical method was developed for the determination of casein phosphopeptides (CPP) in powdered formulae for infants and young children by high performance liquid chromatography. Three pretreatment methods and two operating conditions were optimized. The results showed that the optimal pretreatment conditions were as follows: transferring samples to a 50 mL volumetric flask after pH adjustment to 4.6 with 1 mol/L hydrochloric acid, and then filtering them through a filter paper. The chromatographic separation was carried out by gradient elution using 0.05% trifluoroacetic acid as mobile phase A and 0.05% acetonitrile as mobile phase B. The spiked recovery was between 94.50% and 95.45%, good linearity was observed with R2 = 0.999 8, and the detection limit was 2.0 mg/100 g. The method had the advantages of simple sample pretreatment as well as good stability and reliability, and the results from this method met the requirements in terms of linearity, recovery, accuracy, precision and detection limit. Thus it could be used to determine the content of CPP in powdered formulae for infants and young children.Keywords: powdered formulae for infants and young children; high performance liquid chromatography; casein phosphopeptidesDOI:10.15922/ki.jdst.2019.05.005中图分类号：TS252.7 文献标志码：A 文章编号：1671-5187（2019）05-0021-04引文格式：魏敏, 李兴佳, 柴艳兵, 等. 高效液相色谱法检测婴幼儿配方乳粉中酪蛋白磷酸肽[J]. 乳业科学与技术, 2019, 42(5): 21-24. DOI:10.15922/ki.jdst.2019.05.005. WEI Min, LI Xingjia, CHAI Yanbing, et al. Determination of casein phosphopeptides in powdered formulae for infants and young children by high performance liquid chromatography[J]. Journal of Dairy Science and Technology, 2019, 42(5): 21-24. DOI:10.15922/ki.jdst.2019.05.005. 收稿日期：2019-06-12基金项目：“十三五”国家重点研发计划重点专项（2018YFC1604302）第一作者简介：魏敏（1983—）（ORCID: 0000-0002-8753-8633），女，中级工程师，本科，研究方向为乳品质量与安全。
酪蛋白磷酸肽（CPP）对大鼠钙吸收利用的影响
酪蛋白磷酸肽（CPP）对大鼠钙吸收利用的影响张亚非;周羽并;吴凤兰;张明珠;张纫华;于江虹【期刊名称】《营养学报》【年(卷),期】1994(16)1【摘要】酪蛋白磷酸肽（ＣＰＰ）是从牛奶中提取出的一种多肽制品，在中性和弱碱性的环境下可提高钙的溶解度和钙溶液的稳定性。
将ＣＰＰ按０．５％和０．２％浓度分别加入大鼠基础饲料和低钙饲料中，并设一组含５％脱脂奶粉为阳性对照。
每组１０只断乳大鼠，进行四周生长试验和三天代谢试验。
结果表明，基础饲料添加０．５％ＣＰＰ组的大鼠钙吸收率和钙储留率比对照组升高６％左右，差别有显著性意义。
低钙饲料添加０．２％ＣＰＰ亦使钙吸收率和储留率增加５％～６％，差别有非常显著的意义（Ｐ＜０．０１）。
奶粉的钙吸收率和利用率在各组中最高。
ＣＰＰ作为促进钙吸收利用的食品添加剂有进一步研究应用的前景。
【总页数】5页(P73-77)【关键词】酪蛋白磷酸肽;钙代谢【作者】张亚非;周羽并;吴凤兰;张明珠;张纫华;于江虹【作者单位】暨南大学医学院营养学教研室,广州轻工研究所【正文语种】中文【中图分类】R151.2【相关文献】1.酪蛋白磷酸肽(CPP)对铁吸收影响的研究 [J], 牟光庆;鹿保鑫;王新;张丽萍2.酪蛋白磷酸肽(CPP)对生长期大鼠骨密度的影响 [J], 生庆海;耿倩;邱泉若3.使用酪蛋白磷酸肽-无定形磷酸钙(CPP-ACP)改良新型夜间牙齿漂白术的初步临床报告 [J], Boniek Castillo Dutra Borges;Adriana Alcantara Meira de Vasconselos;Ana Gabriela Gama Cunha;Fabio Henrique de Sa Leitao Pinheiro;Claudia Tavares Machado;Alex Jose Souzados Santos;刘若宇4.酪蛋白磷酸肽(CPP)对生长期大鼠骨密度及神经肽Y表达的影响研究 [J], 王素星; 魏金刚5.酪蛋白磷酸肽(CPP)与钙、铁营养研究进展 [J], 段俊红;王之盛;周安国因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
活性多肽及加工技术
酰半胱氨酸合成酶和谷胱甘肽合成酶的合成以及谷 氨酰转肽酶的降解，同时，构建高效的 ATP再生系 统 ， 实 现 GSH 合 成 –ATP 再 生 的 耦 合 ， 最 终 提 高 GSH的产率和质量。 三、谷胱甘肽在功能食品中的应用 ㈠、面制品加工中应用 加入面制品中，强化氨基酸作用；还原作用。 ㈡、奶制品、婴儿食品加工中应用 防止奶制品酶促和非酶促褐变；改善口味；提高 奶制品品质。 ㈢、肉制品、海鲜制品加工中应用：
二、谷胱甘肽的制备工艺 ㈠、萃取法 利用天然动植物组织细胞存在丰富的谷胱甘肽， 采用物理、化学、生物方法将其细胞壁破坏，使其 中的谷胱甘肽释放出来，再通过离子交换等技术将 其分离出来。 ㈡、发酵法 发酵法生产GSH可采用酵母发酵生产法、重组大 肠杆菌工程菌发酵生产法和固定化细胞 ( 或酶 ) 发酵 生产法。通过选育或构建GSH合成能力强、胞内含 量高的微生物菌种，筛选和优化培养基配方，建立 和优化发酵控制策略等，控制生产过程中γ–谷氨
动物原料经过脱脂、去糖后，得到含量较高的蛋白 质，然后加入特异性蛋白酶进行水解，分离得产物 ㈡、提取法 多肽在高浓度盐存在时发生凝聚并析出沉淀。利 用硫酸铵盐析作用有效性高、pH范围广、溶解度高、 溶液散热少等优点，选择硫酸铵盐析沉淀多肽，然 后进行超滤获得所需要的多肽。 ㈢、自溶法 动物原料在合适温度、pH等条件下，一定时间后 激活细胞内自溶酶系统，水解自身蛋白质产生具有 降血压活性的多肽。 三、降血压肽的功能食品中的应用
CPP在饮料中应用显示出其独特优点：可保持钙、 铁在饮料中的稳定性，有助于形成良好风味。在饮 料中多采用高纯度 CPP ，添加量为钙含量的 0.35 倍 以上。 ㈡、固体食物中应用： 应用：烘焙食品、儿童咖喱饭、口香糖等。 ㈢、其他方面应用： 用于制成胶囊、片剂等。
酪蛋白磷酸肽的结构特性及营养功能研究进展
酪蛋白磷酸肽的结构特性及营养功能研究进展>以植物性饲料为主的动物饲粮中含有大量的植酸、草酸等成分，在小肠下端pH7～8环境下易与钙结合生成难溶性沉淀，削减钙的汲取，导致各类动物缺钙的发生。
假如饲粮中钙的浓度过高，产蛋母鸡对其消化汲取（肯定与相对两者）降低。
协作饲料中添加过量钙不仅降低动物食欲，削减采食量，且过量钙可抑制微量元素（锌、锰、铁以及可能有铜）的汲取，并干扰磷的消化汲取［1］。
故导致动物钙缺乏的主要养分原因是汲取率低下，解决的主要途径是增加钙的汲取率，而不应盲目提高日粮中钙的含量。
增加钙的汲取率的关键在于增加肠道中离子态钙的数量，而来源于牛乳蛋白的酪蛋白磷酸肽(CaseinPhosphopeptides，CPPs)由于具有阻挡钙离子在肠道形成沉淀和促进钙及其它二价矿物离子汲取的功能而备受关注。
本文拟对酪蛋白磷酸肽(CPPs)的来源、分子结构、养分生理作用、作用机理及在动物养殖中的应用前景作一综述。
1酪蛋白磷酸肽(CPPs)的来源与结构酪蛋白占牛乳总蛋白的80％，含有αs1、αs2、β和к-酪蛋白四种主要成分，其比例为34：8：33：9，一级结构均已精确测定。
α和β酪蛋白含有高含量的磷酸丝氨酰残基，其中αs酪蛋白氨基酸残基数为199，含8个磷酸丝氨酰基，β-酪蛋白由209个氨基酸残基构成，含5个磷酸丝氨酰基。
Hiroshi等(1974)［2］用动物试验表明，酪蛋白可在动物肠道内形成CPPs并确定其结构为SerP-SerP-SerP-Glu-Ile-Pro-Asn。
Nicholas等(1974)［3］用胰蛋白酶水解酪蛋白，经过精制、纯化得到CPPs，其核心结构为：-SerP-SerP-SerP-Glu-Glu-。
CPPs结构中的磷酸丝氨酰残基(-Ser(P)-)成簇存在，在肠道pH弱碱性环境下带负电荷，可阻挡消化酶的进一步作用，使CPPs不会被进一步水解而在肠中稳定存在。
这些氨基酸的负电荷侧链，尤其是磷酸基团是矿物质结合的位点。
天然功能性食品添加剂——酪蛋白磷酸肽
天然功能性食品添加剂——酪蛋白磷酸肽
沈国强
【期刊名称】《中国高校科技与产业化》
【年(卷),期】2000(000)010
【摘要】酪蛋白磷酸肽(CPP)是由牛乳酪蛋白通过生物技术制得的一种新型功能性食品添加剂，它具有促进人体吸收钙的生理活性。
由于在人的小肠下部pH一般呈中性到弱碱性，在此条件下，矿物质不易溶解而产生沉淀，导致对钙的吸收率大大下降。
【总页数】1页(P45)
【作者】沈国强
【作者单位】无锡轻工业大学科技开发中心
【正文语种】中文
【中图分类】N09
【相关文献】
1.天然提取物和功能性食品添加剂 [J], 尤新
2.新型功能性食品添加剂--酪蛋白磷酸肽的结构、功能及应用 [J], 刘炜;冯凤琴;施林巍
3.天然功能性食品添加剂的开发动向及其应用 [J], 李英;杨明
4.新型功能性食品添加剂-酪蛋白磷酸肽（CPP） [J], 刘炜
5.功能性食品添加剂领域——天然食用色素的研究进展 [J], 尤诗莹
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天然功能性食品添加剂——酪蛋白磷酸肽研究进展
天然功能性食品添加剂——酪蛋白磷酸肽的研究进展摘要：酪蛋白磷酸肽( CPPs) 是含有成簇的磷酸丝氨酸的生物活性肽，现已证明，CPPs 具有重要生理功能。
本文就CPPs 的结构、理化性质、制备工艺、检测方法、生理功能及应用进行了系统的概述。
关键词：酪蛋白磷酸肽；结构；制备；生理功能；应用引言酪蛋白磷酸肽（Casein Phosphope Ptides，CPPs）是以牛奶酪蛋白为原料，经过单一或复合蛋白酶的水解，再对水解产物分离纯化后得到的含有磷酸丝氨酸簇的天然生理活性肽[1]。
CPPs能促进机体肠粘膜对钙、铁、锌和硒，尤其是钙的吸收和利用，被誉为“矿物质载体”。
CPPs是目前唯一促进钙吸收的活性肽，同时在提高机体免疫力、改善繁殖性能等方面也有重要作用。
日本、德国等国家已把CPPs定为功能性食品，与CPPs相关的研究越来越受到我国科学家和食品工作者的广泛关注。
1 CPPs的结构牛乳酪蛋白的主要成分为αs1、αs2、β和κ-酪蛋白，除κ一酪蛋白外，α和β一酪蛋白都具有成簇存在的磷酸丝氨酸残基(Ser一P)。
酪蛋白经体外酶水解后，产生CPPs，CPPs的核心部位是由3个磷酸丝氨酸残基组成的一个一Ser(P)一残基簇，后面紧接着2个一Glu一残基，即一serP一SerP一SerP一Glu一Glu一，现已证明这个结构是发挥其生物活性必不可少的。
Hiroshil等1974年用动物实验表明，酪蛋白可在动物体内形成CPPs，并确定其结构为serP一serP-SerP一Glu一Ile一Pro一Asn。
1996年Nieholasf 习等用胰蛋白酶水解酪蛋白，得到包含有一SerP一SerP一SerP-Glu一Glu一序列的CPPs，从而得知了CPPs实际上是一类含有磷酸丝氨酸和谷氨酸的短肽，其产品分子量不均一[2]。
2 CPPs的理化性质2.1 溶解性 CPPs 产品具有良好的溶解性，其pH值为2.0～10.0，其溶解性除在pH值4.0 约为90%外，其他均高于90%，且溶解性随 pH 值的增高而增大。
酪蛋白磷酸肽的生物学活性及应用
。
CPP s有良好的 加工 稳定 性。商品 CPP s在 5 和 25 保存 2 年后, 其防 止钙 沉淀 能力功 能指 标基 本无 变化。在酸化 条件 下, CPPs溶 解经 受 120 /15m in 处 理, 功能指 标仍 达 95% 以 上。说 明 CPPs 完全 适 合严 格的加工要求, 在酸 性条件 下更 为稳定。在 碱性 条件 下, 稳定性较差, 随受热 温度提 高和 受热 时间延 长, 脱 磷酸基反应会加剧, CPP s的功能会 受到影 响。在一般 使用条件下, CPP s的结构和功能都是稳定的。 4. 2 Cpps在药 物 中的 应用 由于 CPP s是 从天 然蛋 白中提取的多 肽, 具有 致敏 性小、 无 细胞 毒性、 安 全可 靠的优点, 因此 充分运 用这 些特点, 可用 于对佝 偻病, 牙科病和骨质疏松症等疾病的治疗; 制成 抗蛀牙牙膏, 漱口液或含片 等, 还制 成可促 进动 物体外 受精 和细胞 融合的生化制剂等
8
生物学教学
2011 年 (第 36卷 ) 第 6期
酪蛋白磷酸肽的生物学活性及应用
杨玉红
摘 要 ( 河南省鹤壁职业技术学院 458030 ) 酪蛋白磷酸肽具有促进钙、 铁和锌的吸收与利用、 增强精卵 结合、 增强机体免 疫力和促 肿瘤细胞 凋亡等作 用。本文介绍 酪蛋白磷酸肽 生理功能 应用 了酪蛋白磷酸肽的生理功能和作用机理 , 并简介了其在食品和药物方面的应用。 关键词
[ 4]
。用 CPPs制 成的抗 龋齿 添加剂 是目 前唯 动物 (猪, 牛 ) 体 外实 验证
。
一不同于氟化物的添加剂。 3. 3 促进动 物体 外受 精 明, CPP s可明显促进精子进 入卵细胞 和体外 精卵细胞 的融合, 含 CPPs培养液中的精子明显具有更高的穿透
活性多肽及其加工技术
(1)原料：植物种子胚芽、动物内脏、 酵母，以酵母作为原料居多。
(2)萃取：关键是使谷胱甘肽从细胞中释放出来。 ①酶溶解法 ②化学抽提法③机械破碎法
球 磨 机
均质机
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4．工艺说明
(3)分离：铜盐法沉淀分离 (5)水洗：用清水洗滤渣至无硫酸根离子 (6)脱盐：通入H2S除去铜离子，再通入H2或N2排去H2S (7)浓缩：蒸馏法浓缩滤液 (8)干燥: 喷雾干燥法、冷冻干燥法或电热真空干燥
氧化型谷胱甘肽(GSSG)
特殊结构： N末端肽键由谷氨酸的γ-羧基和 半胱氨酸的氨基构成，使得它在细胞内稳定。
巯基是GSH发挥生物学功能所必需的。
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(二)谷胱甘肽的生理功能及作用机理
1．清除自由基作用 2．参与解毒作用
3．维持红细胞的完整性
4．保护肝细胞、促进肝功能作用
5. 参与人体内代谢调节作用
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(二)提取法
1．原理：硫酸铵盐析沉淀多肽，然后超滤获得所需多肽 2．设备：离心机、离子交换设备、超滤机 3．工艺流程
收集发酵液→离心→上清液沉淀→离心→脱色→超滤→干燥→成品
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4．工艺说明
(1)离心：发酵液离心分离 (2)沉淀：硫酸铵盐析沉淀多肽 (3)脱色：DEAE-Sephacel （二乙氨乙基葡聚糖纤维素阴离子交换层析柱） (4)超滤：截留相对分子质量3000的中空纤维超滤
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三、降血压肽在功能食品中的应用
日本：沙丁鱼肽、玉米多肽混合物“缩氨酸”
我国：暂无产品上市
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本章总结
一
核心结构：成串的磷酸丝氨酸和谷氨酸簇
酪
蛋 白
主要功能：促进钙吸收
磷
酸
制备：先酶解，再沉淀或离子交换得到多肽
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CPP(酪蛋白磷酸肽)
英文名称：Casein phosphopeptides(CPP);Casein calcium peptide
中文名称：酪蛋白磷酸肽(酪蛋白钙肽)
化学名称：
化学分子式：
特性与用途：是富含磷酸丝氨酸的多肽。
由牛乳蛋白用胰蛋白
酶水解后精制而成。
当CPP进入小肠后，磷可与
小肠内的钙结合而使钙保持可溶状态，以促进钙
的吸收和骨质形成。
也有提高铁的吸收率的作
用。
用于强化营养，促进婴幼儿骨骼形成，预防
和改善骨质疏松。
质量标准：日本企标，1990
项目结果
CPP-I CPP-II CPP-III 外观白色粉末白色粉末白色粉末水分% ≤10 ≤10 ≤10
蛋白质(干基计)/% ≥90≥90≥78
酪蛋白磷酸肽(干基计)/% ≥12≥12≥85
灰份/% ≤7≤7≤18
As(As2O3计)/(mg/kg) ≤0.1 ≤0.1 ≤0.1 10%水溶液pH值7+1 7+1 7+1
异味有苦味无无
异物无无无
农药残留和抗生素检不出检不出检不出
功用：
1.促进小肠对钙的吸收。
人的饮食中的谷类食物含有大量的植酸、肌醇六磷酸等高磷成分，在小肠下端PH7～8环境下与钙结合而生成磷酸钙沉淀。
而CPP能抑制磷酸钙沉淀的形成，使游离钙保持较高的浓度，促进钙的被动吸收，成为维生素D作为钙吸收促进剂的又一途径。
2.促进骨骼对钙的利用。
动物实验表明，CPP能促进钙的吸收和利用，减弱破骨细胞作用及抑制骨的再吸收。
3.促进牙齿对钙的利用。
过去认为，餐后咀嚼乳酪能刺激唾液分泌，使碱性的唾液缓冲牙斑上的酸性物质对牙釉质的腐蚀，有助于防止龋齿的发生。
近年研究发现，乳酪中含有的CPP能将食物中的钙离子结合在龋齿处，减轻釉质的去矿物化，从而达到抗龋目的。
4.研究发现，在含有CPP的培养液中的精子，明显具有更高的穿透卵细胞的能力，还能减少精子的变异程度而使胚胎发育更加稳定。
CPP还能提高铁、锌、镁等金属离子的生物利用度，因而被称为具有金属载体功能的肽类物质。
目前，国外已将CPP应用于儿童咖喱饭、饮料、口香糖等食品和保健品中。
对儿童缺钙、老年人骨质疏松、不育症的治疗和牙齿保健方面的研究和应用也在进行之中。
因为CPP是从天然蛋白质中提取的多肽，具有不良反应小、安全可靠的优点，因而将会得到更广泛的应用。
国外研究了酪蛋白、脱脂乳蛋白和CPP的致敏反应，发现CPP的致敏性很小，表明它能够适用于对牛奶过敏的体质。
但也应注意到，影响CPP作用的因素非常复杂，在钙代谢过程中的作用还须进行深入的研究。
5.CPP除了促进钙吸收功能外，还可促进铁、锌等二价矿物营养素的吸收。
铁和锌是除了钙以外中国人最易缺乏的矿物质，若单纯、过度补钙，会对铁和锌的吸收造成一定的影响。
若将CPP添加于强化钙、铁、锌的营养食品或营养保健品中，则不仅可提高钙的吸收，同时还可提高铁和锌的吸收利用率。